ЛЕЧЕНИЕ ПОВРЕЖДЕНИЙ, ИНДУЦИРОВАННЫХ ВИРУСОМ Российский патент 2014 года по МПК A61K31/216 A61P31/22 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение, в целом, относится к лечению кожных повреждений, содержащих клетки, инфицированные вирусом, а также к композициям для лечения таких повреждений. Более конкретно, изобретение относится к применению соединений ингенола, в частности, ангелатов ингенола, при лечении повреждений, вызванных инфекцией вирусом папилломы, в частности, вирусом папилломы млекопитающих, в особенности вирусом папилломы человека.

Предшествующий уровень техники изобретения

Ссылка в данном описании изобретения на любую предыдущую публикацию (или извлеченную из нее информацию) или на любой известный материал не является признанием или допущением, или любой формой предположения о том, что предыдущая публикация (или извлеченная из нее информация) или известный материал образуют часть общего известного уровня техники в той области ее развития, к которой относится настоящее изобретение, и не должна восприниматься таким образом.

Бородавки представляют собой контурированные кожные разрастания или повреждения кожи или слизистой, имеющие папулезную поверхность, причем они могут быть округлыми, плоскими, мягкими, твердыми, остроконечными или нитевидными. Они представляют собой исключительно частое явление и в той или иной форме возникают у большинства людей на определенной стадии жизни. Они вызываются инфекцией эпителиальных клеток (клеток, которые образуют наружные слои кожи или выстилку полостей тела) вирусом папилломы, и у людей - вирусом папилломы человека (HPV). Репликация вируса происходит в полностью дифференцированном эпителии, и последующая пролиферация приводит к развитию клинически очевидной папулы или бляшки. Пораженной может быть любая эпителиальная поверхность. Инфекция возникает при контакте с инфицированным субъектом или с предметом, к которому прикасался инфицированный субъект, причем частыми зонами передачи инфекции являются ванные комнаты и плавательные бассейны. Инфицированный субъект может разносить бородавки на неинфицированные участки тела при почесывании или потирании существующих бородавок и последующем прикосновении к другим участкам кожи или слизистой (аутоинокуляция). Вирус проникает в кожу или слизистую оболочку через порезы, ссадины или другие поверхностные нарушения. В коже вирус реплицируется главным образом в верхних солях эпидермиса в дифференцированных клетках. После латентного периода, который длится несколько месяцев, а иногда и до нескольких лет, на пораженных участках появляются крошечные бугорки. В коже они представляют собой гиперкератотические повреждения. Бугорки медленно растут и при самой обычной форме заболевания превращаются в сероватые, неровные, округлые структуры, хотя также встречаются и другие разновидности, различающиеся по форме и цвету.

Бородавки могут появляться на разных участках тела, чаще всего на коже, гениталиях и во рту, и их клиническое проявление в некоторой степени зависит от типа вовлеченного вируса и от анатомической локализации. У людей обыкновенные бородавки (verruca vulgaris) представляют собой гиперкератотические и куполообразные папулы или узелки, чаще всего локализованные на пальцах, кистях рук, коленях, локтях или в других подверженных травмам местах. Их поверхность обычно бывает грубой и в большинстве случаев трещиноватой и чешуйчатой. Несколько реже они могут иметь более сложную структуру, разветвленную или напоминающую цветную капусту. Две или более папулы, расположенные рядом друг с другом, иногда сливаются. Ровные или плоские бородавки (также известные как ювенильные бородавки, verruca plana juvenilis) представляют собой папулы с плоской верхушкой, минимальным изменением размеров и лишь небольшим возвышением (обычно их диаметр составляет приблизительно 2-4 мм). Плоские бородавки более гладкие и менее приподняты, чем обыкновенные бородавки. Они проявляют тенденцию к множественности и обилию, иногда образуя большие группы сливающихся повреждений. Бородавки типа myrmecia представляют собой большие, глубоко врастающие бородавки. Они проявляют тенденцию к тому, чтобы вызывать большее воспаление и боль по сравнению с другими разновидностями бородавок. На поверхности они обычно бывают округлыми и куполообразными. Они встречаются, главным образом, на подошвах стоп, на ладонях, вокруг ногтей или под ногтями либо, несколько реже, на лице или в других местах. Бородавки myrmecia гистологически характеризуются обилием эозинофильных включений. Подошвенные или роговые бородавки (verruca plantaris) могут быть болезненными из-за их мозолистых эндофитных папул, имеющих глубоко пенетрирующие наклонные стороны и центральное вдавление. Многочисленные сливающиеся бородавки на подошвенной поверхности образуют черепицеобразный рисунок, известный как мозаичные бородавки. Нитевидные бородавки чаще всего наблюдаются на лице с характерными, похожими на ветки выступами, которые проявляют быструю пролиферацию. Околоногтевые бородавки встречаются в любых местах по краям ногтей и впоследствии могут привести к ониходистрофии из-за повреждения матрицы ногтя и к онихолизу из-за бородавок ногтевого ложа. Бородавки по типу туберкулезных бугорков часто напоминают обыкновенные бородавки, но имеют более выраженную тенденцию к образованию сложных и напоминающих цветную капусту структур. Они особенно часто встречаются вблизи ногтей пальцев рук. Анально-генитальные бородавки (венерические или condyloma acuminate) встречаются в области промежности и на гениталиях или в половых путях. Бородавки половых путей представляют серьезный риск для здоровья женщин, поскольку они связаны с плоскоклеточным раком и аденокарциномами шейки матки. Оральные бородавки представляют собой маленькие розовые или белые папулы на слизистой полости рта (M.M. Lipke, Clinical Medicine & Research, 2006, 4, 273-293).

Было охарактеризовано 80 различных типов HPV и описано несколько других типов этого вируса. Самые частые инфекции на кистях рук и стопах (verruca vulgaris) чаще всего вызываются типами вируса 1, 2, 3, 4, 7, 26, 27, 29 и 57. Ровные или плоские бородавки, отличающиеся от обыкновенных бородавок, обычно бывают вызваны типами вируса 3, 10, 28 или возможно 41. Подошвенные бородавки обычно ассоциированы с типами вируса 1, 2 и 4. Бородавки типа myrmecia бывают вызваны, главным образом, вирусом типа 1 и, несколько реже, вирусами типов 2, 3, 4, 27, 29 и 57. Типы 6 и 11 ассоциированы с анально-генитальными бородавками низкого риска, и типы 16, 18, 31, 33, 35, 45, 58, 59 и 66 обычно ассоциированы с плоскоклеточным раком и аденокарциномами шейки матки.

Проявление бородавок, вызванных инфекцией вирусом папилломы, не ограничивается человеком. Коровий вирус папилломы (BPV) представляет собой группу вирусов, широко распространенных среди крупного рогатого скота и вызывающих бородавки кожи и пищеварительного тракта, а также сосков и вымени. Бородавки, вызванные BPV-1, 2 и 5, обычно имеют узловатый внешний вид, и бородавки, вызванные BPV-3, 4 и 6, как правило, напоминают по внешнему виду цветную капусту и чаще всего встречаются на голове, шее и плечах. Хотя обычно они безвредны, но достаточно уродливы, то есть, портят внешний вид животных, а крупные бородавки могут кровоточить, потенциально способствуя вторичным инфекциям. Цветущие бородавки сосков могут вызывать мастит и мешать кормлению (телят) и дойке. Передача вирусов между животными представляет собой обычное явление и происходит, например, через изгороди или поводы, и бородавки на сосках лактирующих коров легко передаются телятам через ссадины. Сходным образом, вирус лошадиной папилломы (EPV) вызывает разрастания, напоминающие цветную капусту, которые обычно развиваются на морде, губах, ноздрях, глазах или, изредка, на задних конечностях, и перекрестная инфекция легко происходит через изгороди, упряжь и бадьи для корма. Инфекция собачьим вирусом оральной папилломы (COPV) вызывает разрастания по типу цветной капусты вокруг губ и на морде у молодых животных и в редких случаях приводит к малигнизации. В результате также могут происходить вторичные бактериальные инфекции. Бородавки, вызванные инфекцией вирусом папилломы, наблюдаются и у многих других животных.

В настоящее время не существует способов лечения инфекции вирусом папилломы, и терапия нацелена на ослабление или исключение симптомов. Бородавки, не затрагивающие гениталии, для здоровых в остальных отношениях людей, как правило, безвредны и обычно разрешаются самостоятельно (в течение нескольких месяцев или лет) вследствие естественного иммунитета. Тем не менее, некоторые вирусные бородавки персистируют (сохраняются) многие годы и могут послужить источником дальнейшего инфицирования. В дополнение к этому, хотя бородавки, не затрагивающие гениталии, обычно безвредны, в зависимости от их локализации они могут рассматриваться как косметически нежелательные (особенно при расположении на лице и кистях рук) или быть болезненными (например, на подошвах стоп или около ногтей). Однако генитальные бородавки передаются половым путем и при отсутствии лечения могут вызывать рак шейки матки у женщин. У животных они могут стать помехой для дойки, разведения (селекции), кормления, запрягания и других видов активности.

Современные подходы к лечению бородавок варьируются в зависимости от всевозможных факторов, включая их размер, количество и природу, анатомическую локализацию, а также общее состояние здоровья и возраст пациента. Способы лечения включают: окклюзионную терапию с применением липкой ленты, хирургическое иссечение или прижигание, криотерапию, химиотерапию, например, местное наложение кантаридина, салициловой кислоты, глутарового альдегида, формальдегида, муравьиной кислоты или азотнокислого серебра, а также иммунотерапию (M.M. Lipke, Clinical Medicine & Research, 2006, 4, 273-293 and Gibbs, S. and Harvey, L, Topical Treatments for cutaneous warts (Review), The Cochrane Library, 2006, Issue 3). Однако ни один из способов лечения не является полностью эффективным для всех пациентов.

Сущность изобретения

Принимая во внимание частую встречаемость бородавок, а также их возможные вредные последствия для здоровья или неблагоприятные косметические эффекты, следует отметить сохраняющуюся потребность в новых альтернативных способах лечения бородавок. Настоящее изобретение основано на том открытии, что некоторые ангелатные соединения ингенола способны уменьшать, задерживать, устранять, очищать или исключать кожные повреждения или папулы, обусловленные инфекцией вирусом папилломы.

Таким образом, в первом аспекте настоящее изобретение предлагает способ лечения кожных повреждений у субъекта, если указанные повреждения вызваны вирусом, включающий введение указанному субъекту соединения ингенола или его фармацевтически приемлемой соли или его пролекарства.

Вирус может представлять собой вирус папилломы млекопитающих. Вирус может представлять собой HPV или не HPV. Субъектом может быть человек или животное, не являющееся человеком (например, млекопитающее, не являющееся человеком).

В некоторых вариантах осуществления изобретения вирус представляет собой HPV. В дальнейших вариантах осуществления изобретения субъектом является человек.

В дальнейших вариантах осуществления изобретения вирус выбирают из числа вирусов, вызывающих негенитальные повреждения, включая HPV 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9 10, 12, 14, 15, 17, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 36, 37, 38, 41, 46, 47, 49, 50, 57, 63 и 65.

В других вариантах осуществления изобретения вирус выбирают из числа вирусов, вызывающих генитальные повреждения, включая HPV 6, 11, 30, 42, 43, 44, 45, 51, 52 и 54.

Примеры повреждений, рассматриваемых изобретением, включают: обыкновенные бородавки (verruca vulgaris), ровные или плоские бородавки, бородавки типа myrmecia, подошвенные бородавки, бородавки типа туберкулезных бугорков, мозаичные бородавки, нитевидные бородавки, околоногтевые бородавки, анально-генитальные бородавки (венерические или condyloma acuminate), оральные бородавки, сенильные бородавки, бородавки с пальцевидными выпячиваниями и ладонные бородавки. В некоторых дальнейших вариантах осуществления изобретения бородавки представляют собой обыкновенные бородавки, подошвенные бородавки или плоские бородавки.

В других вариантах осуществления изобретения вирус представляет собой нечеловеческий вирус папилломы млекопитающих, такой как BPV, EPV, CRPV или COPV.

В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение выбирают из ингелол-3-ангелата, 20-O-ацетилингенол-3-ангелата и 20-дезоксиингенол-3-ангелата, а также из их фармацевтически приемлемых солей и пролекарств. В конкретном примере соединением является ингенол-3-ангелат.

В дальнейших аспектах изобретение также предлагает соединения ингенола для применения в лечении кожных повреждений, вызванных вирусом, и применение соединений ингенола в производстве лекарственного средства для этих целей, а также композиции и средства, содержащие соединения ингенола вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

Подробное описание изобретения

Формы единственного числа включают множественные аспекты, если из контекста явно не следует иное. Так, например, ссылка на "ангелоилзамещенный ингенан" или "ангелат ингенола" включает одно соединение, а также, при необходимости, два или более соединений.

Если в контексте не указано иное, то во всем тексте данного описания изобретения и следующих за ним пунктах формулы изобретения слово "включают" ("содержат") и такие его вариации, как "включает" ("содержит") и "включающий" ("содержащий") следует понимать, что они подразумевают включение определенного целого или стадии или группы целых, но не исключают любого другого целого или стадии или группы целых.

Как использовано в данном описании, термин "кожный" относится к эпителиальным слоям или клеткам кожи или полостей тела. Так, кожное повреждение включает повреждения, локализованные на наружном слое кожи (эпидермисе), а также на слизистых выстилках, например, в полостях тела (во рту и в половых путях), в промежности и на гениталиях.

Некоторые специфические, но не ограничивающие варианты осуществления настоящего изобретения, рассматривают повреждения, вызванные одним или более HPV типов 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 17, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 36, 37, 38, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 49, 50, 51, 52, 54, 57, 63 и 65.

Повреждения, вызванные нечеловеческими вирусами папилломы, например, собачьими, коровьими, лошадиными, кошачьими, оленьими, кроличьими и птичьими вирусами папилломы, рассматриваются в других вариантах осуществления изобретения.

Примеры кожных повреждений и обычно связанных с ними типов HPV, которые рассматриваются в настоящем изобретении, представлены ниже в таблице 1, хотя следует понимать, что один тип вируса может быть ответственным за различные типы повреждений или бородавок, и за один тип повреждения или бородавок могут отвечать HPV более одного типа.

Таблица 1
Повреждения и подтипы HPV, обычно связанные с ними Негенитальное кожное заболевание Тип HPV Обыкновенные бородавки (verrucae vulgaris) 1, 2, 4, 7, 26, 27, 29, 41, 57, 65 Подошвенные бородавки (myrmecias) 1, 2, 4, 63 Плоские бородавки (verrucae plana) 3, 10, 27, 28, 38, 41, 49 Бородавки типа туберкулезных бугорков 1, 2, 3, 4, 7, 10, 28 Мозаичные бородавки 2, 27, 57 Бородавчатая эпидермодисплазия (доброкачественная)
Бородавчатая эпидермодисплазия 2, 3, 10, 12, 15, 19, 36, 46, 47, 50 Бородавчатая эпидермодисплазия
(злокачественная или доброкачественная)
Epidermodysplasia Verruciformis 5, 8, 9, 10, 14, 17, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 37, 38 Небородавчатые кожные повреждения 37, 38 Негенитальное заболевание слизистой Тип HPV Респираторный папилломатоз
Рецидивирующий респираторный папилломатоз 6, 11 Папиллома гортани 6, 11, 30 Папиллома гайморовой пазухи 57 Конъюнктивальная папиллома 6, 11 Анально-генитальное заболевание Тип HPV Остроконечная кондилома (Condylomata acuminata) 6, 11, 30, 42, 43, 44, 45, 51, 52, 54 Гигантские кондиломы (опухоли Бушке-Левенштейна)
Гигантские остроконечные кондиломы Бушке-Левенштейна 6, 11

Конкретные примеры повреждений, вызванных HPV, которые рассматриваются настоящим изобретением, не являются раковыми и включают: обыкновенные бородавки (verruca vulgaris), ровные или плоские бородавки, бородавки типа myrmecia, подошвенные бородавки, бородавки типа туберкулезных бугорков (обычно наблюдаемые у лиц, регулярно контактирующих с сырыми мясом, рыбой или птицей), мозаичные бородавки, нитевидные бородавки, околоногтевые бородавки, анально-генитальные бородавки (венерические или condyloma acuminate), оральные бородавки, сенильные бородавки, пальцевидные бородавки и ладонные бородавки. В некоторых дальнейших вариантах осуществления изобретения бородавки представляют собой обыкновенные бородавки.

В некоторых вариантах осуществления изобретения рассматриваются кожные повреждения у человека, которые могут быть локализованы в любой другой части тела кроме анально-генитальной области, например, на лице, кистях рук, стопах, локтях или коленях. В других вариантах осуществления изобретения повреждение может локализоваться в анально-генитальной области, например, на пенисе, вульве или анусе. У животных повреждение может локализоваться на голове (например, на морде, в области рта, на носу, на губах), на туловище (например, на ногах, на спине, на шее, на плечах) или в анально-генитальной области.

Ссылка на "ингенол" включает соединения, имеющие C3, C4, C5-триокситрансбицикло[4.4.1]ундеканингенановый скелет. Такие соединения хорошо описаны и известны в литературе, они могут быть выделены из таких растений, как биологические виды семейства, либо быть полностью или частично синтезированными химически (см., например, Winkler et al, J. Am. Chem. Soc, 2002, 124, 9726 и Tanino et al, J. Am. Chem. Soc, 2003, 125, 1498- 1500). Синтетически полученные соединения ингенола могут включать стереоизомеры или природные ингенолы. Таким образом, здесь также рассматриваются рацематы и стереоизомерные смеси. Указанные соединения обычно находят в экстрактах растений семейства Euphorbiaceae. Следовательно, экстракт может содержать сок, жидкий или полужидкий материал, выделенный из листьев, стебля, цветков, семян, коры, ткани, расположенной между корой и стеблем или содержащийся в них. Наиболее предпочтительно, чтобы экстракт был выделен из сока растений. Кроме того, экстракт может содержать жидкий или полужидкий материал, локализованный во фракциях, экстрагированных из сока, листьев, стеблей, цветков, коры или другого растительного материала растения семейства Euphoriaceae. Например, растительный материал может быть подвергнут физическим манипуляциям для разрушения растительных волокон и материала внеклеточного матрикса, и внутри- и межтканевое содержимое может быть экстрагировано в растворитель, включая водную среду. Настоящее изобретение охватывает все источники указанных соединений, включая соединения, полученные путем химического синтеза.

Приведенная в данном описании ссылка на растения семейства Euphorbiaceae включает биологические виды растений из родов Acalypha, Acidoton, Actinostemon, Adelia, Adenocline, Adenocrepis, Adenophaedra, Adisca, Agrostistachys, Alchornea, Alchorneopsis, Alcinaeanthus, Alcoceria, Aleurites, Amanoa, Andrachne, Angostyles, Anisophyllum, Antidesma, Aphora, Aporosa, Aporosella, Argythamnia, Astrococcus, Astrogyne, Baccanrea, Baliospermum, Bernardia, Beyeriopsis, Bischofia, Blachia, Blumeodondron, Bonania, Bradleia, Breynia, Breyniopsis, Briedelia, Buraeavia, Caperonia, Caryodendron, Celianella, Cephalocroton, Chaenotheca, Chaetocarpus, Chamaesyce, Cheilosa, Chiropetalum, Choriophyllum, Cicca, Chaoxylon, Cleidon, Cleistanthus, Cluytia, Cnesmone, Cnidoscolus, Coccoceras, Codiaeum, Coelodiscus, Conami, Conceveiba, Conceveibastrum, Conceveϊbum, Corythea, Croizatia, Croton, Crotonopsis, Crozophora, Cubanthus, Cunuria, Dactylostemon, Dalechampia, Dendrocousinsia, Diaspersus, Didymocistus, Dimorphocalyx, Discocarpus, Ditaxis, Dodecastingma, Drypetes, Dysopsis, Elateriospermum, Endadenium, Endospermum, Erismanthus, Erythrocarpus, Erythrochilus, Eumecanthus, Euphorbia, Euphorbiodendron, Excoecaria, Flueggea, Calearia, Garcia, Gavarretia, Gelonium, Giara, Givotia, Glochidion, Clochidionopsis, Glycydendron, Gymnanthes, Gymnosparia, Haematospermum, Hendecandra, Hevea, Hieronima, Hieronyma, Hippocrepandra, Homalanthus, Hymenocardia, Janipha, Jatropha, Julocroton, Lasiocroton, Leiocarpus, Leonardia, Lepidanthus, Leucocroton, Mabea, Macaranga, Mallotus, Manihot, Mappa, Maprounea, Melanthesa, Mercurialis, Mettenia, Micrandra, Microdesmis, Microelus, Microstachy, Maocroton, Monadenium, Mozinna, Neoscortechinia, Omalanthus, Omphalea, Ophellantha, Orbicularia, Ostodes, Oxydectes, Palenga, Pantadenia, Paradrypeptes, Pausandra, Pedilanthus, Pera, Peridium, Petalostigma, Phyllanthus, Picrodendro, Pierardia, Pilinophytum, Pimeleodendron, Piranhea, Platygyna, Plukenetia, Podocalyx, Poinsettia, Poraresia, Prosartema, Pseudanthus, Pycnocoma, Quadrasia, Reverchonia, Richeria, Richeriella, Ricinella, Ricinocarpus, Rottlera, Sagotia, Sanwithia, Sapium, Savia, Sclerocroton, Sebastiana, Securinega, Senefeldera, Senefilderopsis, Serophyton, Siphonia, Spathiostemon, Spixia, Stillingia, Strophioblachia, Synadenium, Tetracoccus, Tetraplandra, Tetrorchidium, Thyrsanthera, Tithymalus, Trageia, Trewia, Trigonostemon, Tyria и Xylophylla.

Предпочтительным родом, который особенно пригоден для практической реализации настоящего изобретения, является род Euphorbia. Особенно полезные биологические виды данного рода включают Euphorbia aaron-rossii, Euphorbia abbreviata, Euphorbia acuta, Euphorbia alatocaulis, Euphorbia albicaulis, Euphorbia algomarginata, Euphorbia aliceae, Euphorbia alta, Euphorbia anacampseros, Euphorbia andromedae, Euphorbia angusta, Euphorbia anthonyi, Euphorbia antiguensis, Euphorbia apocynifolia, Euphorbia arabica, Euphorbia ariensis, Euphorbia arizonica, Euphorbia arkansana, Euphorbia arteagae, Euphorbia arundelana, Euphorbia astroites, Euphorbia atrococca, Euphorbia baselicis, Euphorbia batabanensis, Euphorbia bergeri, Euphorbia bermudiana, Euphorbia bicolor, Euphorbia biformis, Euphorbia bifurcata, Euphorbia bilobata, Euphorbia biramensis, Euphorbia biuncialis, Euphorbia blepharostipula, Euphorbia blodgetti, Euphorbia boerhaavioides, Euphorbia boliviana, Euphorbia bracei, Euphorbia brachiata, Euphorbia brachycera, Euphorbia brandegee, Euphorbia brittonii, Euphorbia caesia, Euphorbia calcicola, Euphorbia campestris, Euphorbia candelabrum, Euphorbia capitellata, Euphorbia carmenensis, Euphorbia carunculata, Euphorbia cayensis, Euphorbia celastroides, Euphorbia chalicophila, Euphorbia chamaerrhodos, Euphorbia chamaesula, Euphorbia chiapensis, Euphorbia chiogenoides, Euphorbia cinerascens, Euphorbia clarionensis, Euphorbia colimae, Euphorbia colorata, Euphorbia commutata, Euphorbia consoquitlae, Euphorbia convolvuloides, Euphorbia corallifera, Euphorbia creberrima, Euphorbia crenulata, Euphorbia cubensis, Euphorbia cuspidata, Euphorbia cymbiformis, Euphorbia darlingtonii, Euphorbia defoliata, Euphorbia degeneri, Euphorbia deltoidea, Euphorbia dentata, Euphorbia depressa Euphorbia dictyosperma, Euphorbia dictyosperma, Euphorbia dioeca, Euphorbia discoidalis, Euphorbia dorsiventralis, Euphorbia drumondii, Euphorbia duclowcii, Euphorbia dussii, Euphorbia eanophylla, Euphorbia eggersii, Euphorbia eglandulosa, Euphorbia elata, Euphorbia enalla, Euphorbia eriogonoides, Euphorbia eriophylla, Euphorbia esculaeformis, Euphorbia espirituensis, Euphorbia esula, Euphorbia excisa, Euphorbia exclusa, Euphorbia exstipitata, Euphorbia exstipulata, Euphorbia fendleri, Euphorbia filicaulis, Euphorbia filiformis, Euphorbia florida, Euphorbia fruticulosa, Euphorbia garber, Euphorbia gaumerii, Euphorbia gerardiana, Euphorbia geyeri, Euphorbia glyptosperma, Euphorbia gorgonis, Euphorbia gracilior, Euphorbia gracillima, Euphorbia gradyi, Euphorbia graminea, Euphorbia graminiea, Euphorbia grisea, Euphorbia guadalajarana, Euphorbia guanarensis, Euphorbia gymnadenia, Euphorbia haematantha, Euphorbia hedyotoides, Euphorbia heldrichii, Euphorbia helenae, Euphorbia helleri, Euphorbia helwigii, Euphorbia henricksonii, Euphorbia heterophylla, Euphorbia hexagona, Euphorbia hexagonoides, Euphorbia hinkleyorum, Euphorbia hintonii, Euphorbia hirtula, Euphorbia hirta, Euphorbia hooveri, Euphorbia humistrata, Euphorbia hypericifolia, Euphorbia inundata, Euphorbia involuta, Euphorbia jaliscensis, Euphorbia jejuna, Euphorbia Johnston, Euphorbia juttae, Euphorbia knuthii, Euphorbia lasiocarpa, Euphorbia lata, Euphorbia latazi, Euphorbia latericolor, Euphorbia laxiflora Euphorbia lecheoides, Euphorbia ledienii, Euphorbia leucophylla, Euphorbia lineata, Euphorbia linguiformis, Euphorbia longecornuta, Euphorbia longepetiolata, Euphorbia longeramosa, Euphorbia longinsulicola, Euphorbia longipila, Euphorbia lupulina, Euphorbia lurida, Euphorbia lycioides, Euphorbia macropodoides, macvaughiana, Euphorbia manca, Euphorbia mandoniana, Euphorbia mangleti, Euphorbia mango, Euphorbia marylandica, Euphorbia mayana, Euphorbia melanadenia, Euphorbia melanocarpa, Euphorbia meridensis, Euphorbia mertonii, Euphorbia mexiae, Euphorbia microcephala, Euphorbia microclada, Euphorbia micromera, Euphorbia misella, Euphorbia missurica, Euphorbia montana, Euphorbia montereyana, Euphorbia multicaulis, Euphorbia multiformis, Euphorbia multinodis, Euphorbia multiseta, Euphorbia muscicola, Euphorbia neomexicana, Euphorbia nephradenia, Euphorbia niqueroana, Euphorbia oaxacana, Euphorbia occidentalis, Euphorbia odontodenia, Euphorbia olivacea, Euphorbia olowaluana, Euphorbia opthalmica, Euphorbia ovata, Euphorbia pachypoda, Euphorbia pachyrhiza, Euphorbia padifolia, Euphorbia palmeri, Euphorbia paludicola, Euphorbia parciflora, Euphorbia parishii, Euphorbia parryi, Euphorbia paxiana, Euphorbia pediculifera, Euphorbia peplidion, Euphorbia peploides, Euphorbia peplus, Euphorbia pergamena, Euphorbia perlignea, Euphorbia petaloidea, Euphorbia petaloidea, Euphorbia petrina, Euphorbia picachensis, Euphorbia pilosula, Euphorbia pilulifera, Euphorbia pinariona, Euphorbia pinetorum, Euphorbia pionosperma, Euphorbia platysperma, Euphorbia plicata, Euphorbia poeppigii, Euphorbia poliosperma, Euphorbia polycarpa, Euphorbia polycnemoides, Euphorbia polyphylla, Euphorbia portoricensis, Euphorbia portulacoides Euphorbia portulana, Euphorbia preslii, Euphorbia prostrata, Euphorbia pteroneura, Euphorbia pycnanthema, Euphorbia ramosa, Euphorbia rapulum, Euphorbia remyi, Euphorbia retroscabra, Euphorbia revoluta, Euphorbia rivularis, Euphorbia robusta, Euphorbia romosa, Euphorbia rύbida, Euphorbia rubrosperma, Euphorbia rupicola, Euphorbia sanmartensis, Euphorbia saxatilis M. Bieb, Euphorbia schizoloba, Euphorbia sclerocyathium, Euphorbia scopulorum, Euphorbia senilis, Euphorbia serpyllifolia, Euphorbia serrula, Euphorbia setiloba Engelm, Euphorbia sonorae, Euphorbia soobyi, Euphorbia sparsiflora, Euphorbia sphaerosperma, Euphorbia syphilitica, Euphorbia spruceana, Euphorbia subcoerulea, Euphorbia stellata, Euphorbia submammilaris, Euphorbia subpeltata, Euphorbia subpubens, Euphorbia subreniforme, Euphorbia subtrifoliata, Euphorbia succedanea, Euphorbia tamaulipasana, Euphorbia telephioides, Euphorbia tenuissima, Euphorbia tetrapora, Euphorbia tirucalli, Euphorbia tomentella, Euphorbia tomentosa, Euphorbia torralbasii, Euphorbia tovariensis, Euphorbia trachysperma, Euphorbia tricolor, Euphorbia troyana, Euphorbia tuerckheimii, Euphorbia turczaninowii, Euphorbia umbellulata, Euphorbia undulata, Euphorbia vermiformis, Euphorbia versicolor, Euphorbia villifera, Euphorbia violacea, Euphorbia whitei, Euphorbia xanti Engelm, Euphorbia xylopoda Greenm., Euphorbia yayalesia Urb., Euphorbia yungasensis, Euphorbia zeravschanica и Euphorbia zinniflora.

Особенно предпочтительные биологические виды рода Synadenium включают Synadenium grantii и Synadenium compactum.

Особенно предпочтительные биологические виды рода Monadenium включают Monadenium lugardae и Monadenium guentheri.

Предпочтительным биологическим видом рода Endadenium является Endadenium gossweileni.

Особенно предпочтительным в практике настоящего изобретения, исходя из обеспечения источника получения ангелатов ингенола является Euphorbia peplus. Встречающаяся в данном описании ссылка на "Euphorbia peplus" или на аббревиатуру "E. peplus" включает различные разновидности, штаммы, линии, гибриды или производные данного растения, а также его ботанических или культивируемых в садоводстве родственников. Кроме того, настоящее изобретение может быть реализовано в практике с использованием целого растения Euphorbiaceae или его частей, включая сок, семена или другой репродуктивный материал. Как правило, при использовании семян или репродуктивного материала, прежде всего, требуется размножить растение или его всходы.

Встречающаяся в данном описании ссылка на растение Euphorbiaceae, биологический вид Euphorbia или E. peplus дополнительно охватывает генетически модифицированные растения. Генетически модифицированные растения включают трансгенные растения или растения, у которых был удален определенный признак или эндогенная генетическая последовательность была понижающим образом отрегулирована, мутирована либо изменена другим способом, включая альтерацию или введение генетического материала, который оказывает регуляторное воздействие на специфический ген.

Следовательно, растение, которое проявляет отличительный признак, отсутствующий у природного растения Euphorbiaceae или биологического вида Euphorbia или E. Peplus, все-таки рассматривается в настоящем изобретении и включено в объем приведенных выше терминов.

В одном из вариантов осуществления изобретения соединение ингенола имеет формулу:

где

R¹-R³ независимо друг от друга выбирают из водорода, необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкенила, необязательно замещенного алкинила, необязательно замещенного ацила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного арилалкила, S(O)₂R', S(O)₂OR', P(O)(OR')₂ (где R означает водород, алкил, алкенил, алкинил, ацил, арил или арилалкил) и гликозила, и

R⁴ выбирают из водорода, гидрокси, необязательно замещенного алкокси, необязательно замещенного алкенокси, необязательно замещенного алкинокси, необязательно замещенного ацилокси, необязательно замещенного арилалкокси, OS(O)₂R', OS(O)₂OR', OP(O)(OR')₂ (где R' означает водород, алкил, алкенил, алкинил, ацил, арил или арилалкил) и гликокси.

В одном из вариантов осуществления изобретения по меньшей мере один из радикалов R¹-R⁴ не является водородом. В особом примере такого рода R¹ не является водородом.

В одном из специфических вариантов осуществления изобретения R¹ представляет собой необязательно замещенную ацильную группу C(O)-R. В других вариантах осуществления R представляет собой необязательно замещенный алкил, алкенил или алкинил. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения R может представлять собой прямую или разветвленную цепь и иметь до 6 или до 10 атомов углерода. В одном из вариантов осуществления изобретения R является разветвленным.

В некоторых вариантах осуществления изобретения один из радикалов R¹-R³ представляет собой ангелоильную группу, как это отображено представленной ниже формулой, или R⁴ представляет собой O-ангелоильную группу. Такие соединения называются в данном описании как ангелаты ингенола. В особом предпочтительном варианте осуществления изобретения R¹ представляет собой ангелоильную группу.

В некоторых вариантах осуществления изобретения один или оба радикала R² и R³ представляют собой водород. R² и R³ также могут образовывать метилендиоксигруппу или этилендиоксигруппу.

В некоторых вариантах осуществления изобретения R⁴ представляет собой водород, гидрокси или алкокси, например, ацетокси.

В некоторых вариантах осуществления изобретения соединения для применения в описанных способах представляют собой ингелол-3-ангелат, 20-O-ацетилингенол-3-ангелат и 20-дезоксиингенол-3-ангелат, а также их фармацевтически приемлемые соли и пролекарства.

  R⁴=OH, ингенол-3-ангелат
R⁴=OAc, 20-O-ацетилингенол-3-ангелат
R⁴=H, 20-дезоксиингенол-3-ангелат  

В особом варианте осуществления настоящего изобретения соединение представляет собой ингенол-3-ангелат. Ссылка в данном описании на "ингенол-3-ангелат" включает как природные, так и химически синтезированные формы данного вещества.

Алкилирование, алкенилирование, алкинилирование, арилирование, арилалкилирование или ацилирование соединений ингенола могут быть осуществлены с применением способов, известных в области синтетической химии для алкилирования, алкенилирования, алкинилирования, арилирования, арилалкилирования или ацилирования свободных гидроксигрупп (см., например, работы Greene and Wutz, Protective Groups in Organic Synthesis, 1999; March, Advanced Organic Chemistry, 5^th Edition; Larock, Comprehensive Organic Transformations, 1999, содержания которых включены в данное описание посредством ссылки). Например, гидроксигруппы могут быть алкилированы (или арилалкилированы) с использованием алкил (или арилалкил) галогенидов, таких как метилиодид (или бензилбромид), или диалкилсульфатов, таких как диметилсульфат или диэтилсульфат. Ацилирование можно осуществить посредством обработки соответствующими карбоновыми кислотами, галогенангидридами кислот и ангидридами кислот в присутствии основания или агента сочетания. Образование гликозида можно осуществить химически, например, посредством взаимодействия соединения ингенола с защищенным соединением сахара, в котором C-1 был активирован галогенированием для сочетания с гидроксильными или карбоксильными группами, и гидроксильные группы сахара были блокированы защитными группами. В альтернативном варианте образование гликозида можно осуществить ферментативным способом, используя соответствующую гликозилтрансферазу, например, UDP-галактозозависимую гликозилтрансферазу и UDP-глюкозозависимую гликозилтрансферазу. Предпочтительными C-1 связанными сахаридами являются фуранозный или пиранозный сахарид (сахар), который присоединен к структуре ангелата ингенола через C-1 сахарида (общепринятая нумерация) с образованием ацетильной связи. Конкретные сахаридные группы включают такие редуцирующие сахара, как глюкоза, рибоза, арабиноза, ксилоза, манноза и галактозы, причем каждый из них связан с атомом кислорода соединения ингенола.

Сульфатные, сульфонатные и фосфатные группы можно получить способом, известным в данной области. Примеры R' включают водород, C_1-6алкил, фенил и бензил.

Как использовано в данном описании, термин "алкил" означает алкил с прямой или разветвленной цепью, предпочтительно, C_1-20алкил, например, C_1-10 или C_1-6. Примеры алкилов с прямой и разветвленной цепью включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, 1,2-диметилпропил, 1,1-диметилпропил, гексил, 4-метилпентил, 1-метилпентил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 1,1-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 1,2,2,-триметилпропил, 1,1,2-триметилпропил, гептил, 5-метилгексил, 1-метилгексил, 2,2-диметилпентил, 3,3-диметилпентил, 4,4-диметилпентил, 1,2-диметилпентил, 1,3-диметилпентил, 1,4-диметилпентил, 1,2,3-триметилбутил, 1,1,2-триметилбутил, 1,1,3-триметилбутил, октил, 6-метилгептил, 1-метилгептил, 1,1,3,3-тетраметилбутил, нонил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-метилоктил, 1-, 2-, 3-, 4- или 5-этилгепетил, 1-, 2- или 3-пропилгексил, децил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- и 8-метилнонил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5- или 6-этилоктил, 1-, 2-, 3- или 4-пропилгептил, ундецил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8- или 9-метилдецил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-этилнонил, 1-, 2-, 3-, 4- или 5-пропилоктил, 1-, 2- или 3-бутилгептил, 1-пентилгексил, додецил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9- или 10-метилундецил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-этилдецил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5- или 6-пропилнонил, 1-, 2-, 3- или 4-бутилоктил, 1-2-пентилгептил и т.п. В тех случаях, где алкильная группа, в целом, приведена как "пропил", "бутил" и т.д., следует понимать, что это по необходимости относится к любым прямым, разветвленным и циклическим изомерам. Алкильная группа необязательно может быть замещена одним или более необязательными заместителями, как определено в данном описании. "Циклоалкильная" группа представляет собой циклическую алкильную группу по меньшей мере из 3 атомов углерода, например, C₃-C₈, в частности, C₃, C₄, C₅ или C₆циклоалкил. Примеры "циклоалкилов" включают такие моно- или полициклические алкильные группы, как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклононил, циклодецил и т.п. Циклоалкильная группа необязательно может быть замещена одним или более необязательными заместителями, как определено в данном описании.

Термин "алкенил", как использовано в данном описании, означает группы, образованные из прямоцепочечных, разветвленных или циклических углеводородных остатков, содержащих по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь, включая этиленовые моно-, ди- или полиненасыщенные алкильные или циклоалкильные группы, как определено выше, предпочтительно, C_2-20алкенил (например, C_2-10 или C_2-6). Примеры алкенилов включают винил, аллил, 1-метилвинил, бутенил, изобутенил, 3-метил-2-бутенил, 1-пентенил, циклопентенил, 1-метилциклопентенил, 1-гексенил, 3-гексенил, циклогексенил, 1-гептенил, 3-гептенил, 1-октенил, циклооктенил, 1-ноненил, 2-ноненил, 3-ноненил, 1-деценил, 3-деценил, 1,3-бутадиенил, 1,4-пентадиенил, 1,3-циклопентадиенил, 1,3-гексадиенил, 1,4-гексадиенил, 1,3-циклогексадиенил, 1,4-циклогексадиенил, 1,3-циклогептадиенил, 1,3,5-циклогептадиенил и 1,3,5,7-циклооктатетраенил. Алкенильная группа необязательно может быть замещена одним или более необязательными заместителями, как определено в данном описании.

Как использовано в данном описании, термин "алкинил" означает группы, образованные из прямоцепочечных, разветвленных или циклических углеводородных остатков и содержащие по меньшей мере одну тройную углерод-углеродную связь, включая этиленовые моно-, ди- или полиненасыщенные алкильные или циклоалкильные группы, как определено выше. Если число атомов углерода не указано, термин, предпочтительно, относится к C_2-20алкинилу (например, C_2-10 или C_2-6). Примеры включают этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, а также изомеры бутинила и изомеры пентинила. Алкинильная группа необязательно может быть замещена одним или более необязательными заместителями, как определено в данном описании.

Термин "арил" означает любой из одиночных, полициклических, конъюгированных и конденсированных остатков кольцевых систем ароматических углеводородов. Примеры арилов включают фенил, бифенил, терфенил, кватерфенил, нафтил, тетрагидронафтил, антраценил, дигидроантраценил, бензантраценил, дибензантраценил, фенантренил, флуоренил, пиренил, иденил, азуленил, хризенил. Предпочтительные арилы включают фенил и нафтил. Арильная группа необязательно может быть замещена одним или более необязательными заместителями, как определено в данном описании.

Термин "ацил" означает группу C(O)-R, в которой R может представлять собой водород, остаток алкила, циклоалкила, алкенила, алкинила, арилалкила или арила. Примеры ацилов включают формил, алканоил с прямой или разветвленной цепью (например, C_1-20), в частности, ацетил, пропаноил, бутаноил, 2-метилпропаноил, пентаноил, 2,2-диметилпропаноил, гексаноил, гептаноил, октаноил, нонаноил, деканоил, ундеканоил, додеканоил, тридеканоил, тетрадеканоил, пентадеканоил, гексадеканоил, гептадеканоил, октадеканоил, нонадеканоил и икозаноил, циклоалкилкарбонилы, в частности, циклопропилкарбонил, циклобутилкарбонил, циклопентилкарбонил и циклогексилкарбонил, алкеноилы с прямой или разветвленной цепью (например, C_2-20), в частности, ангеноил, а также такие ароилы, как бензоил, толуоил и нафтоил. Как описано в данном описании, остаток R может быть необязательно замещенным.

Арилалкильная группа представляет собой алкильную группу, как определено в данном описании, замещенную арильной группой, как определено в данном описании. В одном из вариантов осуществления изобретения алкильная группа замещена арильной группой на конце. Примеры арилалкилов включают такой фенил C₁-C₂₀алкил, как бензил, фенилэтил, фенилпропил, фенилбутил, фенилпентил и фенилгексил. Одна или обе алкильные и арильные группы независимо друг от друга могут быть необязательно замещены одним или более необязательными заместителями, как описано в данном описании.

Термин "необязательно замещенный" означает, что группа может быть незамещенной или замещена одним или более заместителями, которые могут быть одинаковыми или различными. Необязательные заместители для алкила, алкенила, алкинила, арила, арилалкила, арила и ацила включают: галоген (хлор, бром, йод и фтор), гидрокси, C_1-6алкокси, C_1-6алкил, C_3-6циклоалкил, фенил, нитро, галогенметил (например, трибромметил, трихлорметил, трифторметил), галогенметокси (например, трифторметокси, трибромметокси), C(O)C_1-6алкил, амино (NH₂), C_1-6алкиламино, (например, метиламино, этиламино и пропиламино), ди- C_1-6алкиламино (например, диметиламино, диэтиламино и дипропиламино), CO₂H, CO₂C_1-6алкил, тио (SH) и C_1-6алкилтио. Необязательное замещение также включает замену группы CH₂ карбонильной группой (C=O), или заместителями также могут быть метилен или этилендиоксигруппа.

Следует понимать, что в ходе синтетических или полусинтетических процессов, связанных с получением соединений ингенола, рассматриваемых в настоящем изобретении, может оказаться необходимым или желательным защитить другие функциональные группы, которые могут быть реакционноспособными или чувствительными к проводимой реакции или условиям преобразования. Подходящие защитные группы для таких функциональных групп известны в данной области и могут быть использованы в соответствии со стандартной практикой. Как использовано в данном описании, термин "защитная группа" относится к введенной функциональной группе, которая временно приводит конкретную функциональную группу в неактивное состояние. Такие защитные группы, а также способы их введения и последующего удаления на соответствующей стадии хорошо известны (Greene and Wutz, 1999 выше).

Настоящее изобретение также относится к пролекарствам соединений ингенола. Любое соединение, которое является пролекарством соединения ингенола, входит в объем и сущность настоящего изобретения. Термин "пролекарство" использовано в данном описании в самом широком смысле и охватывает такие производные, которые преобразуются in vivo (ферментативно или гидролитически) в соединения настоящего изобретения. Такие производные вполне доступны специалисту в данной области и включают, например, соединения, в которых свободная тиольная или гидроксильная группа преобразуется в сложный эфир, например, ацетат или в тиоэфир, либо свободная аминогруппа преобразуется в амид. Методики ацилирования соединений настоящего изобретения, например, для получения эфирных и амидных пролекарств, хорошо известны в данной области и могут включать обработку соединения соответствующей карбоновой кислотой, ангидридом или хлоридом в присутствии подходящего катализатора или основания. Рассматриваются также эфиры карбоновой кислоты (карбоксигрупп). Подходящие сложные эфиры: C_1-6алкиловые эфиры, C_1-6алкоксиметиловые эфиры, например, метоксиметиловый или этоксиметиловый, C_1-6алканоилоксиметиловые эфиры, например, пивалоилоксиметилый, фталидиловые эфиры, C_3-8циклоалкилоксикарбонилC_1-6алкиловые эфиры, например, 1-циклогексилкарбонилокиэтиловый, 1,3-диоксолен-2-онилметиловые эфиры, например, 5-метил-1,3-диоксолен-2-онилметиловый, и C_1-6алкоксикарбонилоксиэтиловые эфиры, например, 1-метоксикарбонилоксиэтиловый. Пролекарства функциональных аминогрупп включают амиды (см., например, Adv. BioSci., 1979, 20, 369, Kyncl, J. et al), енамины (см, например, J. Pharm. Sci., 1971, 60, 1810, Caldwell, H. et al), основания Шиффа (см., например, патент США № 2923661 и Antimicrob. Agents Chemother., 1981, 19, 1004, Smyth, R. et al), оксазолидины (см., например, J. Pharm. Sci, 1983, 72, 1294, Johansen, M. et al), основания Манниха (см., например, J. Pharm. Sci. 1980, 69, 44, Bundgaard, H. et al и J. Am. Chem. Soc, 1959, 81, 1198, Gottstein, W. et al), производные гидроксиметила (см., например, J. Pharm. Sci, 1981, 70, 855, Bansal, P. et al), производные и карбаматы N-(ацилокси)алкила (см., например, J. Med. Chem., 1980, 23, 469, Bodor, N. et al, J. Med. Chem., 1984, 27, 1037, Firestone, R. et al, J. Med. Chem., 1967, 10, 960, Kreiger, M. et al, патент США № 5684018 и J. Med. Chem., 1988, 31, 318-322, Alexander, J. et al). Другие общепринятые методы выбора и получения подходящих пролекарств известны в данной области и описаны, например, в ссылках WO 00/23419, Design of Prodrugs, H. Bundgaard, Ed., Elsevier Science Publishers, 1985; Methods in Enzymology, 42: 309-396, K. Widder, Ed, Academic Press, 1985; A Textbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Eds, Chapter 5, pp 113-191 (1991); Advanced Drug Delivery Reviews, 8; 1-38 (1992); Journal of Pharmaceutical Sciences, 77;285 (1988), H. Bundgaard, et al; Chem Pharm Bull, 32692 (1984), N. Kakeya et al и The Organic Chemistry of Drug Desig and Drug Action, Chapter 8, pp 352-401, Academic press, Inc., 1992.

Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений включают, но, не ограничиваясь ими, соли фармацевтически приемлемых неорганических кислот, в частности, хлористоводородной, серной, фосфорной, азотной, угольной, борной, сульфаминовой и бромистоводородной кислот, или соли фармацевтически приемлемых органических кислот, в частности, уксусной, пропионовой, масляной, винной, малеиновой, гидроксималеиновой, фумаровой, лимонной, молочной, муциновой, глюконовой, бензойной, янтарной, щавелевой, фенилуксусной, метансульфоновой, толуолсульфоновой, бензолсульфоновой, салициловой, сульфаниловой, аспарагиновой, глутаминовой, этилендиаминтетрауксусной, стеариновой, пальмитиновой, олеиновой, лауриновой, пантотеновой, дубильной, аскорбиновой и валериановой кислот. Основные соли включают, но, не ограничиваясь ими, соли, образованные с фармацевтически приемлемыми катионами, в частности, натрия, калия, лития, кальция, магния, аммония и алкиламмония. Основные азотсодержащие группы могут быть кватернизированы такими средствами, как низший галоидалкил, в частности, метил, этил, пропил и бутилхлориды, бромиды и йодиды, диалкилсульфаты, например, диметил и диэтилсульфат, и т.д.

Соединения настоящего изобретения, могут быть представлены в кристаллической форме или как свободные соединения, или как сольваты (например, водные, т.е., гидраты, или общепринятых органических растворителей, например, спиртов), и считается, что обе формы входят в объем настоящего изобретения. Способы сольватации, например, перекристаллизация из заданного растворителя, широко известны в данной области.

Как использовано в данном описании, термин "обработка" или "лечение" относится к регрессии, элиминации, частичному или полному удалению или отделению, расчистке, уменьшению размеров (например, площади поверхности или объема), а также любому другому желательному уменьшению повреждения (повреждений) в размере, численности или по скорости роста.

Таким образом, в одном или более вариантах осуществления изобретения применение соединений ингенола для лечения повреждений (бородавок) может преимущественно стимулировать или улучшить скорость, степень, меру или время, необходимые для исключения, удаления, расчистки, уменьшения в размерах или любого иного снижения размеров, скорости роста или числа повреждений у пациента. В других вариантах осуществления изобретения бородавки могут регрессировать или подвергнуться удалению без остаточных рубцовых или пигментных изменений. В дальнейших вариантах осуществления изобретения после излечения и удаления повреждения последующая реинфекция причинным вирусом (вирусами) повреждения не приводит к образованию новых повреждений. В других вариантах осуществления изобретения может быть необходимым подвергнуть лечению только одно повреждение или небольшое число повреждений, чтобы достичь желаемого общего лечебного эффекта, то есть, исключению всех повреждений. Уменьшение размера повреждений или скорости их роста можно определить количественно, измеряя площадь поверхности повреждений. Площадь поверхности можно определить по формуле: длина×ширина×π.

Наряду с тем, что повреждения, подлежащие лечению, могут иметь любой размер (площадь поверхности), например, иметь площадь поверхности приблизительно более 500 или даже 1000 мм², в некоторых вариантах осуществления изобретения повреждения, подлежащие лечению, преимущественно, имеют площадь поверхности приблизительно 250 мм² или менее. В дальнейших вариантах осуществления изобретения повреждение (повреждения) имеет площадь поверхности приблизительно 150 или 100 мм² или менее. В последующих вариантах осуществления изобретения повреждение (повреждения) имеет площадь поверхности приблизительно 75, 50, 25 или 10 мм² или менее.

Вирус, вызывающий повреждения у субъекта, может быть человеческим или нечеловеческим вирусом папилломы.

Таким образом, субъекты, которые могут получать лечение в соответствии с настоящим изобретением, включают субъектов-млекопитающих: человека, приматов, хозяйственный скот (включая коров, лошадей, овец, свиней и коз), домашних животных (включая собак, кошек, кроликов, морских свинок), а также содержащихся в неволе диких животных. Рассматриваются также такие лабораторные животные как кролики, мыши, крысы, морские свинки и хомяки, поскольку они могут послужить удобной системой для тестирования. В некоторых вариантах осуществления изобретения могут также рассматриваться биологические виды животных, не относящиеся к млекопитающим, например, птицы, амфибии и рыбы. Под субъектом в данном описании также может подразумеваться индивид, пациент, животное или реципиент. Субъекты могут быть поражены вирусом папилломы, происходящим от другого биологического вида. Например, межвидовая передача была документирована для коровьего вируса папилломы.

Соединения папилломы вводят субъекту в терапевтически (или лечебно) эффективных количествах. Подходящие эффективные количества для введения (дозы) и режимы дозирования, которые может определить лечащий врач, зависят от конкретной анатомической локализации, природы, размера или числа повреждений, подлежащих лечению, а также от возраста и общего состояния здоровья субъекта.

Хотя применительно к соединениям ингенола возможно введение активного ингредиента в чистом виде, более предпочтительно, чтобы он был представлен в виде композиции, предпочтительно, фармацевтической композиции с одним или более фармацевтически приемлемыми адъювантами. Таким образом, настоящее изобретение также относится к применению соединения ингенола или его фармацевтически приемлемой соли или его пролекарства при получении лекарственного средства для лечения кожных повреждений, вызванных HPV.

Лекарственные средства или композиции, пригодные для применения в изобретении, могут содержать такое соединение как ангелат ингенола в количестве приблизительно от 0,0001% до 100% по массе. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения композиция содержит соединение ингенола в количестве приблизительно от 0,0001% до 10% по массе, например, приблизительно от 0,0005, 0,001, 0,0025, 0,005, 0,01, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,125, 0,15, 0,2, 0,25 или 0,5% до 0,5, 1,0, 2,5 или 5,0%. В одном из вариантов осуществления изобретения соединение ингенола представляет собой ингенол-3-ангелат, и его количественное содержание составляет приблизительно от 0,001 до 1%. В следующих вариантах осуществления изобретения соединение ингенола, например, ингенол-3-ангелат, представлено в количестве приблизительно от 0,01 до 0,2%. В следующем варианте осуществления изобретения соединение ингенола, например, ингенол-3-ангелат, может быть представлено в количестве от 0,05 до 0,15%, например, приблизительно 0,1%.

Соединения ингенола можно вводить в любой подходящей форме, например, местно, то есть, посредством местного наложения на повреждение и/или на окружающую его область, либо посредством направленной инъекции в повреждение. В конкретных примерах осуществления изобретения соединение ингенола вводят посредством местного (топического) наложения на повреждение.

Способ доставки активного агента может варьироваться, но обязательно включает наложение лекарственного препарата настоящего изобретения на тот участок поверхности тела, который поражен одним или более повреждениями и/или поблизости от данного участка. Например, подходящий лекарственный препарат, например, крем, водный гель, мазь, паста, пластырь или лосьон, может быть распределен на основание повреждения и/или вокруг него, а также (необязательно) осторожно растерт на нем. Сходным образом, полимерные или другие биоадгезивные препараты можно распределять по повреждению или прикладывать к нему. Еще в одном варианте осуществления изобретения активный агент можно доставлять в виде спрея, например, аэрозольного или иным образом распыленного спрея. Такими же способами можно наносить растворы, но в более конкретных вариантах их наносят при помощи пипетки, тампона и подобных приспособлений, аккуратно распределяя по поверхности повреждения и/или вокруг него. Альтернативно, соединением ингенола можно пропитать окклюзионную повязку или нанести его на такую повязку и затем наложить эту повязку на пораженный участок. Для того чтобы защитить участок кожи, окружающий повреждение, от возможного раздражения во время лечения, его можно смазать вазелином. Если имеется более одного повреждения, может оказаться необходимым вводить (наносить) соединение ингенола только на одно повреждение или немногие повреждения, но не на все участки повреждений.

Режим дозирования будет зависеть от множества факторов, легко поддающихся определению, например, от размера повреждения (повреждений) и/или числа повреждений, а также от чувствительности повреждений к лечению, но обычно он заключается во введении одной или более доз в день, причем курс лечения длится от нескольких дней до нескольких месяцев или до тех пор, пока не будет достигнут намеченный результат или не произойдет значительное уменьшение размера и/или числа повреждений. Обычно предполагается, что лекарственный препарат будет применяться от одного до четырех раз в день ежедневно. При помощи чрескожного пластыря или окклюзионной повязки лекарственное приспособление обычно фиксируют на месте (на поверхности тела) на тот период времени, в течение которого должно действовать лекарственное средство, обычно в диапазоне от 8 до 72 часов, и заменяют по мере необходимости.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединения ингенола вводят, т.е. накладывают местно на место повреждения, например, на всю поверхность или на часть поверхности, занимаемой повреждением. Соединения ингенола можно местно накладывать в любой подходящей форме, включая растворы, эмульсии (масло в воде, вода в масле, аэрозоли или пенки), мази, пасты, лосьоны, порошки, лекарственные вещества в вязком носителе (наносимые кисточкой), гели, гидрогели, гидроколлоиды и кремы, причем их можно приготовить таким образом, чтобы они содержали липосомы, мицеллы и/или микросферы. Подходящие носители или добавки включают минеральное масло, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропилен, эмульгирующий воск, сорбитмоностеарат, полисорбат 60, воск на основе цетиловых эфиров, цетиариловый спирт, 2-октилдодеканол, циклодекстрин, изопропиловый спирт, этанол, бензиловый спирт и воду. Альтернативно, соединения ингенола могут применяться в виде активных окклюзионных повязок, т.е. таких повязок, которые пропитаны соединением ингенола или на которые нанесено соединение ингенола. Это могут быть, например, бинты, марлевые салфетки, ленты, сетки, лейкопластыри, пленки, мембраны или бляшки.

Рассматриваемые в данном описании препараты композиций и повязок хорошо известны специалистам в данной области (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^th Edition, Mack Publishing, 1990). Композиции могут содержать любые приемлемые носители, разбавители или эксципиенты. Они включают все традиционные растворители, дисперсионные среды, наполнители, твердые носители, покрытия, противогрибковые и противомикробные средства, усилители вязкости, пленкообразующие вещества, средства для проникновения через кожу, поверхностно-активные вещества, изотонические и абсорбирующие средства и т.п. Носитель для композиций настоящего изобретения должен быть фармацевтически приемлемым в смысле его совместимости с другими ингредиентами композиции и безвредным для субъекта.

Препараты настоящего изобретения необязательно могут содержать фармацевтически приемлемый усилитель вязкости и/или пленкообразователь. Усилитель вязкости повышает вязкость препарата с тем расчетом, чтобы воспрепятствовать его распространению за пределами места наложения. Пленкообразователь при высушивании образует защитную пленку над местом наложения препарата. Пленка препятствует смещению активного ингредиента и удерживает его в контакте с местом повреждения, подлежащим лечению. Растворы, которые при высыхании образуют пленку, иногда называются лекарственными средствами в вязком составе, наносимыми кисточкой.

Мази, хорошо известные в области фармацевтических препаратов, представляют собой полутвердые препараты, обычно на основе вазелина или других производных нефтепродуктов. Специфическая мазевая основа для практического применения, как хорошо известно специалисту в данной области, представляет собой такую мазевую основу, которая способна обеспечивать оптимальную доставку лекарственного средства и, предпочтительно, обладает другими желаемыми характеристиками, например, смягчающим действием и т.п. Точно так же, как и для других носителей или сред, мазевая основа должна быть инертной, стабильной, нераздражающей и несенсибилизирующей. Эмульгируемые мазевые основы, также известные как абсорбирующие мазевые основы, содержат мало или вообще не содержат воды и включают, например, гидроксистеаринсульфат, безводный ланолин и гидрофильный вазелин. Эмульсионные мазевые основы представляют собой или эмульсии типа вода в масле (W/O), или эмульсии типа масло в воде (O/W) и включают, например, цетиловый спирт, глицеринмоностеарат, ланолин и стеариновую кислоту. Предпочтительные водорастворимые мазевые основы получают из полиэтиленгликолей различного молекулярной массы.

Кремы, которые также хорошо известны в данной области, представляют собой вязкие жидкости или полутвердые эмульсии типа масло в воде или вода в масле. Кремовые основы могут смываться водой и содержат масляную фазу, эмульгатор и водную фазу. Масляная фаза, также носящая название "внутренняя" фаза, обычно состоит из вазелина и жирного спирта, например, цетилового или стеарилового спирта. Водная фаза обычно, хотя и необязательно, превышает по объему масляную фазу и, как правило, содержит гигроскопическое вещество. Эмульгатор в составе крема обычно представляет собой неионное, анионное, катионное или амфотерное поверхностно-активное вещество.

Как будет понятно специалистам, работающим в области фармацевтических технологий, гели представляют собой полутвердые системы типа суспензий. Однофазные гели содержат агенты, в достаточной степени, равномерно распределенные в жидком носителе, который в конкретном случае имеет водную природу, но также, предпочтительно, содержит спирт, например, изопропиловый спирт и необязательно масло.

Лосьоны, которые предпочтительны для доставки косметических средств, представляют собой препараты, наносимые на поверхность кожи без трения, которые в конкретном случае являются жидкими или полужидкими препаратами, где твердые частицы, включая активный агент, смешаны с водной или спиртовой основой. Лосьоны обычно представляют собой суспензии твердых веществ и для достижения настоящей цели, предпочтительно, содержат жидкую масляную эмульсию типа масло в воде. Как правило, необходимо, чтобы нерастворимый материал в лосьоне был тонко диспергирован. Конкретные лосьоны содержат суспендирующий агент для получения дисперсий лучшего качества, а также соединения, полезные для локализации активного агента и его удержания в контакте с кожей.

Пасты представляют собой полутвердые дозированные формы, в которых активный агент суспендирован в подходящей основе. В зависимости от природы основы пасты подразделяются на жирные и полученные из однофазных жидких гелей. Основой в жирных пастах обычно является вазелин или гидрофильный вазелин и т.п. Пасты, изготовленные из однофазных водных гелей, обычно включают в состав основы карбоксиметилцеллюлозу или подобные вещества.

В одном из вариантов осуществления изобретения соединение ингенола накладывают местно в виде геля на основе изопропилового спирта. Один удобный препарат включает изопропиловый спирт, бензиловый спирт, полимер целлюлозы, например, гидроксиметилцеллюлозу, и буфер (например, цитрат) при pH <3. Еще в одном варианте осуществления изобретения соединение ингенола для местного применения имеет форму крема на основе макроцетилового эфира, например, содержащего эмульгирующий воск Cetomacrogel, мягкий белый парафин и жидкий парафин.

Препараты также могут быть получены с липосомами, мицеллами и микросферами. Липосомы представляют собой микроскопические везикулы с липидной стенкой, содержащей двойной слой липидов, а также могут быть использованы в настоящем изобретении как системы доставки лекарственных средств. Обычно липосомные препараты предпочтительны для доставки малорастворимых или нерастворимых фармацевтических агентов. Липосомные препараты для применения в настоящем изобретении включают катионные (положительно заряженные), анионные (отрицательно заряженные) и нейтральные препараты.

Мицеллы, известные в данной области, состоят из молекул поверхностно-активного вещества, упорядоченных таким образом, что их полярные головные группы образуют наружную сферическую оболочку, тогда как гидрофобные углеводородные цепи, ориентированные по направлению к центру сферы, образуют сердцевину. Мицеллы образуют водный раствор, содержащий поверхностно-активное вещество в достаточно высокой концентрации, что позволяет мицеллам формироваться естественным образом. Препараты с мицеллами можно использовать в настоящем изобретении, либо заключая их в резервуар системы местной или трансдермальной доставки, либо вводя в препарат, который накладывается на поверхность тела.

Подобным образом в описанные в данном описании препараты и системы доставки лекарственных средств можно включать микросферы. Подобно липосомам и мицеллам микросферы, по существу, инкапсулируют лекарственное средство или содержащий лекарственное средство препарат. Обычно, хотя и необязательно, микросферы образуются из синтетических или природных биологически совместимых полимеров, но могут также состоять из заряженных липидов, например, фосфолипидов. Получение микросфер хорошо известно в данной области и описано в соответствующих текстах и литературе.

Следует понимать, что настоящее изобретение также может быть практически осуществлено с применением других дополнительных способов терапии, таких, которые приведены в данном описании выше или в следующей ссылке: (M.M. Lipke, Clinical Medicine & Research, 2006, 4, 273-293). Соответствующие дополнительные агенты могут быть введены в композицию или повязку вместе с соединением ингенола, но могут быть использованы и по отдельности.

Композиции для ректального введения могут иметь форму суппозиториев с подходящей основой, содержащей, например, масло какао, глицерин, желатин или полиэтиленгликоль.

Композиции, пригодные для вагинального введения, могут иметь форму пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пенок или спреев, содержащих в дополнение к активному ингредиенту такие носители, которые известны как пригодные в данной области.

Соединения настоящего изобретения также могут быть представлены в композициях для ветеринарного применения. Они могут быть получены с применением любых подходящих способов, известных в данной области. Примеры таких композиций включают композиции, адаптированные для местного применения, например, кремы, мази, гели, лосьоны и т.д., как описано выше.

Далее изобретение будет описано со ссылкой на следующие примеры, которые включены в данное описание в целях иллюстрации определенных вариантов его осуществления, то есть, не должны рассматриваться как ограничение описанных выше общих принципов.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

Эффективность геля для местного применения ингенол-3-ангелата (PEP005) на модели кожных бородавок, вызванных вирусом папилломы жесткошерстного американского кролика (CRPV) у новозеландских белых кроликов Hra(NZW)SPF.

Методы

Новозеландский белый кролик [Hra(NZW)SPF] был выбран в качестве испытательной системы потому, что: 1) данный биологический вид восприимчив к трансфекции плазмидной ДНК CRPV, и 2) было продемонстрировано, что у данного биологического вида в ответ на инокуляцию развиваются кожные бородавки (Christensen ND, Kreider JW. Animal models of papillomavirus infections. Ch 25. In: Zak O, Sande MA, editors. Handbook of animal models of infection. New York: Academic Press; 1999. p. 1039-47). Концентрации инокулята (прививочного материала) подбирали эмпирически на основе опубликованной информации по модели CRPV с индукцией кожных папиллом (бородавок) у кроликов (Christensen ND. Cottontail rabbit papillomavirus (CRPV) model system to test antiviral and immunotherapeutic strategies. Antiviral chemistry & chemotherapy 2005;16(6):355-62). Чрескожный способ заражения выбирали потому, что данный способ был успешно применен для того, чтобы индуцировать образование кожных папиллом (бородавок) у кроликов после инокуляции ДНК CRPV.

Десять самок новозеландского белого кролика Hra:(NZW)SPF были случайным образом распределены на четыре группы дозирования (по три животных на группу в группах 1-3 и одно животное в группе 4).

За четыре дня до инокуляции (4-й день) спины кроликов наголо выстригали над областью, охватывающей все восемь участков контакта, с использованием электрической машинки для стрижки волос со специально подобранным лезвием. После стрижки проводили химическую депиляцию кожи с использованием средства Veet^® (поставляемого компанией Reckitt Benckiser Inc., Parsippany, NJ, USA). Выстриженная область (приблизительно 10 см×20 см) простиралась от плечевых до бедренных суставов каждого животного и имела ширину приблизительно 10 см (распространяясь вентролатерально от дорсальной срединной линии приблизительно на 5 см в каждую сторону). При любых проявлениях роста волос в данной области по мере необходимости проводили тщательные повторные стрижки на всем протяжении исследования.

За три дня до инокуляции кроликам проводили анестезию изофлураном/кислородом и места контакта у каждого животного татуировали (пигментом Aims Black #242, AIMS Inc, Piscataway, NJ, USA, номер партии F0707A, срок годности 30 июня 2008 г.) на каждой стороне каждого места инокуляции. Каждое место контакта тщательно скарифицировали лезвием скальпеля (#60), чтобы создать повреждение типа ожоговой ссадины от трения для стимуляции роста бородавок после инокуляции. Осуществляли постоянный мониторинг состояния кроликов, следя за регулярностью дыхания и общим комфортом в период анестезии и вплоть до полного выхода из наркоза.

Инокуляции были подвергнуты восемь приблизительно одинаковых по размерам участков на спине животных (A, B, C, D, E, F, G и H: участки A и B расположены ближе к плечам, участки C, D, E и F посередине, и участки G и H ближе к хвосту). Инокуляцию всем десяти самкам кроликов проводили в 1-й день. Животным давали наркоз изофлураном/кислородом и чрескожно вводили по одной дозе плазмидной ДНК CRPV в восемь независимых участков кожи на каждое животное. Вирусные инокуляции проводили посредством царапанья кожи, нанося приблизительно 16,7 мкл инокулята на скарифицированный участок (приблизительно 15 царапин на участок) иглой калибра 25.

После инокуляции каждый из восьми обработанных участков наблюдали на развитие бородавок один раз в неделю в течение трех недель. Ежедневное наблюдение за развитием бородавок начинали на 4-й неделе исследования и продолжали до первого дня введения испытуемого лекарственного средства или плацебо. Начиная с первого дня наблюдений и вплоть до конца исследования записывали длину и ширину каждой кожной бородавки.

Введение доз геля для местного применения PEP005 или плацебо начинали в 50-й день исследования. За день до начала введения доз у каждого кролика выбирали четыре бородавки одинакового размера (места лечения), причем 3 места были предназначены для введения геля для местного применения PEP005, а 1 место было использовано для контроля (плацебо). Площадь лечения в каждом месте введения доз определяли по последним результатам измерения длины и ширины каждой бородавки (мм²). Концентрации геля для местного применения PEP005 0 (плацебо), 0,01, 0,1 или 0,25% вводили в постоянном объеме 0,5 мкл/мм² (0, 0,05, 0,5 или 1,25 мкг/мм²). Сводные данные по режиму дозирования представлены в таблице 1.

Таблица 1 Дозовая группа Доза (мкг/мм ² ) Концентрация (%) Объем наложения (мкл/мм ² ) Число кроликов Номера кроликов по распределению 1 0/0,05 0/0,01* 0,5 3 7591-7593 2 0/0,5 0/0,1^a 0,5 3 7594-7596 3 0/1,25 0/0,25^a 0,5 3 7597-7599 4 0/0,05/0,5/1,25 0/0,01/0,1/0,25^b 0,5 1 323 a. Одно место для плацебо и три места на одну концентрацию испытуемого лекарственного средства. b. Одно место для плацебо и по одному из трех мест на одну концентрацию испытуемого лекарственного средства.

В группах 1-3 одну концентрацию геля для местного применения PEP005 использовали в двух местах в течение трех дней (с 50-го по 52-й), в третьем месте такую же концентрацию геля для местного применения PEP005 использовали в течение пяти дней (с 50-го по 54-й). Гель плацебо использовали в отдельном контрольном месте в течение пяти дней (с 50-го по 54-й). В группе 4 каждую концентрацию геля для местного применения PEP005 использовали в одном месте в течение пяти дней (с 50-го по 54-й) у одного кролика. Гель плацебо использовали в отдельном контрольном месте в течение пяти дней (с 50-го по 54-й). При каждом наложении дозы в каждом месте лечения гель равномерно распределяли по поверхности кожи вокруг основания бородавки при помощи калиброванной пипетки.

Каждое из четырех мест введения доз лекарственного средства у каждого кролика ежедневно обследовали в течение всего периода лечения (непосредственно перед применением каждой очередной дозы), а также в течение двух недель по окончании лечения. Затем обследования проводили по понедельникам, средам и пятницам. В каждом случае измеряли и записывали длину и ширину каждой бородавки.

Подвергнутые лечению участки кожи наблюдали ежедневно (непосредственно перед наложением каждой дозы), обследуя их на признаки раздражения (эритема, отек, струп) в течение всего периода лечения, а также по меньшей мере четырех последующих недель. Раздражение кожи оценивали в баллах по следующим критериям:

Балльные оценки эритемы/струпа Степень Отсутствие эритемы ^a 0 Очень легкая эритема (едва заметная) 1 Четко выраженная эритема 2 Эритема, выраженная от средней до тяжелой степени 3 Тяжелая эритема (свекольная краснота) вплоть до образования легкого струпа (развитие повреждения в глубину) 4

Балльные оценки отека Степень Отсутствие отека ^a 0 Очень легкий отек (едва заметный) 1 Легкий отек (края области четко определяются за счет четко выраженного поднятия) 2 Умеренный отек (края приподняты приблизительно на 1 мм) 3 Тяжелый отек (приподнятый более чем на 1 мм и распространяющийся за пределы участков кожного теста) 4

Площадь поверхности каждой бородавки, отобранной для лечения, вычисляли как площадь стандартного эллипса (длина×ширина×π) на основе ежедневных измерений, начатых за неделю до лечения и продолжавшихся весь период лечения. Для каждой отдельной бородавки вычисляли еженедельный средний показатель площади. Начиная с первой недели по окончании лечения для каждой бородавки у каждого кролика в каждой группе дозирования при лечении гелем для местного применения PEP005 или плацебо вычисляли процентное изменение площади по сравнению со средним показателем до начала лечения.

Соответствующие композиции геля PEP005 в дозе 0,25% (масс./масс.), 0,10% (масс./масс.), 0,01% (масс./масс.) и геля плацебо представлены ниже в таблице 2:

Таблица 2
Рецептурные составы геля   0,25% 0,10% 0,01% Плацебо PEP005 0,25 0,10 0,01 - Бензиловый спирт 0,90 0,90 0,90 0,90 Цитратный буфер, pH 2,75 67,35 67,50 67,59 67,60 Изопропиловый спирт 30,00 30,00 30,00 30,00 Гидроксиэтилцеллюлоза (класса HX) 1,50 1,50 1,50 1,50 Итого 100 100 100 100

Результаты

В каждой группе две из четырех выбранных бородавок у каждого кролика ежедневно обрабатывали гелем для местного применения PEP005 в течение 3 дней (3D), одну бородавку обрабатывали 5 дней подряд (5D), и четвертую бородавку, служившую контролем, 5 дней подряд обрабатывали гелем плацебо. Результаты отображены ниже: текстовые таблицы описывают еженедельное среднее процентное изменение (±стандартное отклонение) площади поверхности бородавок в результате лечения по сравнению с начальной площадью поверхности (за неделю до начала лечения) у каждого кролика.

Гель PEP005 0,01%

Кролик 7591

Лечение: 3D (дни 50-52) участки B и E

5D (дни 50-54) участок A, участок F (плацебо)

На участке, обработанном плацебо, каких-либо кожных реакций не наблюдалось.

На всех трех участках, обработанных гелем для местного применения PEP005, наблюдалась эритема 1 степени с 52-го по 54-й день.

Среднее процентное изменение размера бородавки в участке A (5D) в течение недели введения дозы было несколько меньше по сравнению с бородавкой, обработанной плацебо (участок F). В остальной период оценки для данной бородавки была выявлена тенденция к замедлению роста (средний процентный показатель изменений) по сравнению с бородавкой, обработанной плацебо, и с бородавками, обработанными другими дозами геля для местного применения PEP005. Результаты отображены в таблице 3, где данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 3   Кролик 7591 (группа I, 0,01%) Дни* Участок F (5D) плацебо Участок B (3D) Участок E (3D) Участок A (5D) 51-57 0,3±15,1 36,1±47,2 12,0±11,7 -1,7±19,0 58-64 27,9±28,0 86,0±99,7 17,9±12,6 24,9±16,5 66-72 86,0±13,4 128,4±48,3 69,9±41,1 49,2±9,1 74-81 309,4±122,7 337,7±98,8 350,0±131,9 125,7±61,0 84-95 286,7±76,1 713,6±221,5 328,4±52,0 133,8±48,1 *Число дней после вирусной инокуляции

Кролик 7592

Лечение: 3D (дни 50-52) участки E и F

5D (дни 50-54) участок G, участок A (плацебо)

На участке, обработанном плацебо, каких-либо кожных реакций не наблюдалось.

Все три участка, обработанные гелем для местного применения PEP005, демонстрировали эритему и отек 1 степени с 51-го по 57-й день.

Среднее процентное изменение размера бородавки в участке G (5D) в течение недели введения дозы было несколько меньше по сравнению с бородавкой, обработанной плацебо (участок A). Результаты отображены в таблице 4, где данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 4   Кролик 7592 (группа I, 0,01%) Дни* Участок A (5D) плацебо Участок E (3D) Участок F (3D) Участок G (5D) 51-57 14,9±11,7 14,4±6,8 10,5±27,7 2,5±5,94 58-64 -2,6± 11,6 46,9±10,2 18,8±10,7 18,0±10,4 66-72 38,0±4,4 95,6±17,3 48,3±0,7 67,6±10,8 74-81 43,8±13,0 134,9±15,4 74,2±28,0 92,6±6,7 84-95 98,4±26,8 120,8±13,7 103,6±36,5 104,8±21,3 * Число дней после вирусной инокуляции

Кролик 7593

Лечение: 3D (дни 50-52) участки A и D

5D (дни 50-54) участок F, участок E (плацебо)

На участке, обработанном плацебо, каких-либо кожных реакций не наблюдалось.

Все три участка, обработанных гелем для местного применения PEP005 демонстрировали эритему и отек 1 степени с 51-го по 57-й день. На участке D балльная оценка эритемы повысилась до 2 степени в дни с 52-го по 54-й, а также 56 и 57.

Среднее процентное изменение размера бородавок на участках D и A (5D) в течение недели введения дозы было несколько меньше по сравнению с бородавкой, обработанной плацебо (участок E). На участке D рост бородавки замедлился (по среднему процентному показателю изменения) через неделю после начала лечения. Результаты отображены в таблице 5, где данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 5   Кролик 7593 (группа I, 0,01%) Дни* Участок E (5D) плацебо Участок D (3D) Участок F (3D) Участок A (5D) 51-57 31,4±29,2 -0,7±7,4 33,0±32,4 11,5±24,4 58-64 83,6±14,5 13,2±11,5 69,3±28,1 76,4±22,3 66-72 128,9±11,4 94,5±47,0 169,0±55,2 214,0±52,5 74-81 190,2±50,4 190,0±55,5 275,9±87,3 354,4±125,4 84-95 328,5±106,3 206,3±52,7 291,6±35,3 627,2±119,6 * Число дней после вирусной инокуляции

Гель PEP005 0,1%

Кролик 7594

Лечение: 3D (дни 50-52) участки A и С

5D (дни 50-54) участок E, участок B (плацебо)

На участке, обработанном плацебо, каких-либо кожных реакций не наблюдалось.

Все три участка, обработанные гелем для местного применения PEP005, на первой неделе исследования демонстрировали эритему и отек 1 степени. В участке A, а также на участке C эритема увеличилась до 2 степени в 53-й и 54-й день. Через две недели после начала лечения (с 65-го по 67-й день) на участках, обработанных гелем для местного применения PEP005, наблюдалось шелушение кожи 1 или 2 степени.

Среднее процентное изменение размера бородавок на участках A и E (5D) в течение недели после введения дозы было несколько меньше по сравнению с бородавкой, обработанной плацебо. Результаты отображены в таблице 6, где данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 6   Кролик 7594 (группа II, 0,1%) Дни* Участок B (5D) плацебо Участок A (3D) Участок C (3D) Участок E (5D) 51-57 15,5±9,9 5,4±10,9 14,2±11,7 17,0±19,4 58-64 36,3±4,3 -9,3±19,4 28,3±10,9 -1,0±34,1 66-72 39,2±33,3 59,7±43,9 64,6±26,0 53,8±51,2 74-81 40,0±11,9 102,3±67,2 129,2±46,0 77,0±39,0 * Число дней после вирусной инокуляции

Кролик 7595

Лечение: 3D (дни 50-52) участки F и G

5D (дни 50-54) участок H, участок D (плацебо)

На участке, обработанном плацебо, наблюдалось шелушение кожи (1 степени) с 69-го по 74-й день исследования.

Все три участка, обработанные гелем для местного применения PEP005 демонстрировали эритему 1 степени в первые два-три дня лечения, и в остальные дни недели лечения и/или следующей недели (по окончании лечения) наблюдалась эритема 2 степени. В течение 3-й недели после лечения тяжесть эритемы уменьшилась до 1 степени. Во всех трех местах, обработанных гелем для местного применения PEP005, на первой неделе лечения также наблюдался отек 1 степени, и в участке H (5D) такой отек сохранялся до 58-дня исследования. На участке G (3D) начальный отек 1 степени увеличился до 3 степени в 54-й день исследования, и затем он уменьшился до 1 степени и сохранялся до 58-го дня исследования. Шелушение (1 или 2 степени) наблюдалось в участках G и H через две недели после окончания лечения (как правило, от 65-го до 74-го дня исследования).

Средний процентный показатель изменения размера бородавки на участке G был уменьшен по сравнению с группой плацебо в течение недели лечения и следующей за ней недели. Средний процентный показатель изменения размера бородавки на участке H был снижен в течение недели применения лекарственного средства. Результаты отображены в таблице 7, где данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 7   Кролик 7595 (группа II, 0,1%) Дни* Участок D (5D) плацебо Участок F (3D) Участок G (3D) Участок H (5D) 51-57 -1,1±10,3 10,6±11,6 -16,6±8,0 -14,5±28,7' 58-64 15,4±11,8 55,3±42,5 -22,1±10,2 12,6±25,0 66-72 43,4±11,1 203,5±40,2 47,9±35,9 132,0±53,9 74-81 69,9±34,3 327,5±106,9 123,9±67,7 271,0±91,9 84-95 161,5±20,9 340,0±82,3 179,9±26,2 355,8±28,9 * Число дней после вирусной инокуляции

Кролик 7596

Лечение: 3D (дни 50-52) участки B и F

5D (дни 50-54) участок C, участок D (плацебо)

На участке, обработанном плацебо, наблюдалась эритема 1 степени с 50-го по 52-й день исследования и отек 1 степени с 69-го по 74-й день исследования.

Эритема 1 степени наблюдалась на всех трех участках, обработанных гелем для местного применения PEP005, в течение трех первых дней применения препарата, и ее тяжесть возросла до 2 степени в 53-й и 54-й день исследования. Эритема 1 степени наблюдалась и сохранялась до 82-го дня исследования на участке B (3D), причем в период от 64-го до 72-го дня исследования тяжесть эритемы возрастала до 2 степени. Отек 1 степени наблюдался на всех участках, обработанных гелем для местного применения, начиная с 52-го или 53-го дня до 82-го дня исследования, и отек 2 степени на участке B был отмечен в 69-й день исследования. Шелушение 1 степени наблюдалось на всех участках, обработанных гелем для местного применения PEP005 через неделю после окончания лечения. В дополнение к этому, на участке C (5D) в 59-й день исследования наблюдалось образование струпа после исчезновения бородавки.

Бородавка, обработанная плацебо, исчезла (спонтанно отделилась) в 53-й день исследования после применения трех доз препарата. Бородавки на участках, обработанных гелем для местного применения PEP005 в течение трех дней (участки B и F) и 5 дней (участок C), отделились в 60-й, 64-й и 59-й день, соответственно. Особо следует отметить, что начальный размер данных бородавок был меньше по сравнению с бородавками у других кроликов за исключением кролика 323. Исходные площади поверхности бородавок, вычисленные как стандартный эллипс, составляли 6,3, 84,8, 75,5 и 25,1 мм² для участков D (плацебо), B, F и C, соответственно. Результаты отображены в таблице 8, где данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 8   Кролик 7596 (группа II, 0,1%) Дни* Участок D (5D) плацебо Участок B (3D) Участок F (3D) Участок C (5D) 51-57 -25,0±35,6 7,9±31,2 -9,1±16,8 49,9±47,8 58-64 Lost -48,1±10,5 -32,0±39,6 0,0±0,0 66-72 N/A Отделилась Отделилась Отделилась * Число дней после вирусной инокуляции

Среднее изменение размера бородавок по сравнению с неделей перед началом лечения при их лечении препаратом PEP005 0,1% в течение 3 и 5 дней или при обработке плацебо в сводном виде показано в таблице 9. Данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 9
Среднее процентное изменение площади бородавок при их обработке плацебо или лечении препаратом PEP005 0,1% в течение 3 дней и 5 дней Дни Плацебо 3-й день 5-й день 51-57 8,1 2,1 17,5 56-64 25,8 -4,7 3,9

Гель PEP005 0,25%

Кролик 7597

Лечение: 3D (дни 50-52) участки E и F

5D (дни 50-54) участок C, участок G (плацебо)

Шелушение 1 степени или 2 степени наблюдалось на участке, обработанном плацебо с 61-го по 73-й день исследования, кроме того наблюдались эритема 2 степени (с 52-го по 54-й и с 56-го по 58-й день исследования), эритема 1 степени (с 59-го по 65-й день исследования) и отек 2 степени (с 52-го по 54-й день исследования).

В первый день введения дозы лекарственного средства (50-й день исследования) эритема 1 степени была отмечена после контакта с лекарственным средством на всех трех участках, обработанных гелем для местного применения PEP005. Эритема 2 степени наблюдалась на всех трех участках, обработанных гелем для местного применения на первой неделе применения лекарственного средства [с 51-го по 54-1 и с 56-го по 57-й день исследования (только участок C)]. На участке F (3D), эритематозная реакция 2 степени сохранялась с 58-го по 62-й день исследования, тогда как на всех остальных участках, включая плацебо, как правило, наблюдалась эритема 1 степени. Отек 1 степени был отмечен на всех трех участках, обработанных гелем для местного применения PEP005, в первый и/или во второй день применения лекарственного средства. Отек 2 степени наблюдался на участке E (3D), и отек 3 степени на участках F (3D) и C (5D) в остальной период применения лекарственного средства. Шелушение 1 или 2 степени наблюдалось на всех трех участках, обработанных гелем для местного применения PEP005 в промежутке времени между одной и двумя неделями по окончании лечения (обычно с 61-го по 73-й день исследования).

Среднее процентное изменение размеров бородавок на участках, обработанных гелем для местного применения PEP005 обычно было снижено по сравнению с участком, обработанным плацебо, в течение недели применения лекарственного средства, а также трех недель по окончании лечения. Результаты отображены в таблице 10, где данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 10 Кролик 7598 (группа III, 0,25%) Дни* Участок G (5D) плацебо Участок E (3D) Участок F (3D) Участок C (5D) 51-57 27,6±42,7 -3,9±9,9 -27,6±13,7 -21,5±11,9 58-64 25,3±31,1 -11,1±33,8 -5,2±43,9 -19,9±29,8 66-72 175,5±57,6 123,7±20,7 136,6±41,1 110,0±48,6 74-81 434,3±203,7 281,6±113,7 252,2±93,5 175,5±62,9 84-95 Слияние с E 786,3±315,8 311,6±38,4 249,9±22,4 * Число дней после вирусной инокуляции

Кролик 7598

Лечение: 3D (дни 50-52) участки E и H

5D (дни 50-54) участок C, участок G (плацебо)

На участке, обработанном плацебо, в 64-й и 65-й дни исследования наблюдалась эритема 1 степени.

Все три участка, обработанных гелем для местного применения PEP005, реагировали эритемой 1 или 2 степени в течение недели применения лекарственного средства и следующей недели после окончания лечения [58-й и 59-й дни, а также с 60-го по 62-й день исследования (только участок C)]. Отек 2 или 3 степени также наблюдался на 53-й и/или 54-й день исследования с последующим понижением степени отека (до 1 или 2) и сохранением таких явлений до 59-го дня исследования на участке C (5D).

Среднее процентное изменение размеров бородавок, в группах, получавших лечение гелем для местного применения PEP005, было увеличено по сравнению с группой плацебо на всем протяжении исследования. Результаты отображены в таблице 11, где данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 11   Кролик 7598 (группа III, 0,25%) Дни* Участок G (5D) плацебо Участок E (3D) Участок H (3D) Участок C (5D) 51-57 -23,7±13,2 -21,7±23,4 18,4±31,2 13,1±16,5 58-64 -15,5±4,5 0,1±32,1 115,9±110,3 92,1±47,3 66-72 5,9±18,5 152,9±83,5 503,4±153,2 274,0±107,8 74-81 28,6±41,2 295,4±124,8 848,6±292,5 379,7±100,6 84-95 95,8±48,7 748,6±180,3 1718,1±292,4 577,9±105,0 * Число дней после вирусной инокуляции

Кролик 7599

Лечение: 3D (дни 50-52) участки D и E

5D (дни 50-54) участок H, участок B (плацебо)

На участке, обработанном плацебо, каких-либо кожных реакций не наблюдалось.

Все три участка, обработанных гелем для местного применения PEP005, демонстрировали эритему 1 или 2 степени в течение недели применения лекарственного средства и отек 1 или 2 степени с 52-го по 54-й день исследования. На бородавке на участке D (3D) также наблюдалось шелушение 2 степени с 69-го по 73-й день исследования. Результаты отображены в таблице 12, где данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 12   Кролик 7599 (группа III, 0,25%) Дни* Участок B (5D) плацебо Участок D (3D) Участок E (3D) Участок H (5D) 51-57 32,9±29,7 3,6±57,6 8,2±57,7 60,0±36,2 58-64 35,6±27,6 2,0±26,4 64,3±116,5 140,8±86,0 66-72 -6,3±51,9 69,8±15,0 410,5±125,2 432,4±42,9 74-81 32,5±60,5 171,3±77,5 660,1±229,2 673,2±149,7 84-95 113,1±48,4 355,1±47,7 779,0±254,5 837,9±76,4 * Число дней после вирусной инокуляции

Гель PEP0005 0,05, 0,1 и 0,25%

4.5.1. Кролик 323

Лечение: 5 дней на всех участках (дни 50-54)

плацебо - участок G, 0,01% - участок B, 0,1% - участок F, 0,25% - участок H

На участке, обработанном плацебо, на 63-й день исследования наблюдалась эритема 1 степени.

Эритема 2 степени была отмечена на всех трех участках, обработанных гелем для местного применения PEP005 в течение недели применения лекарственного средства. Эритема 1 степени наблюдалась на участках F и H (0,1% и 0,25%, соответственно) на 51-й день исследования и в течении недели по окончании лечения, и на участке B (0,01%) в 69-й и 73-й день исследования. На всех трех участках, обработанных гелем для местного применения PEP005, также наблюдался отек 1 степени на 52-й день и с 56-го по 58-й день исследования и отек 2 степени с 53-го по 54-й день исследования. Результаты отображены в таблице 13, где данные представлены в виде процентного изменения площади бородавки по сравнению с 50-м днем.

Таблица 13   Кролик 323 Дни* Участок G (5D) плацебо Участок B (3D) 0,01% Участок F (3D) 0,1% Участок H (5D) 0,25% 51-57 -38,1±23,0 -42,9±23,5 9,5±51,1 128,6±90,6 58-64 73,8±93,7 117,9±92,0 557,1±493,6 864,3±736,4 66-72 333,3±91,3 450,0±52,3 1864,4±230,2 2955,0±491,9 74-81 691,7±453,9 1071,9±533,2 3233,3±1986,8 4906,3±1197,1 84-95 1358,3±165,6 1803,1±158,7 5494,4±754,3 7133,3±378,0 * Число дней после вирусной инокуляции

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может применяться для лечения кожных повреждений у субъекта, где указанные повреждения вызваны вирусом. Для этого субъекту вводят соединения ингенола или его фармацевтически приемлемую соль. Способ обеспечивает эффективное лечение за счет направленного действия соединения ингенола на клетки, содержащие вирус. 18 з.п. ф-лы, 13 табл.

1. Способ лечения кожных повреждений у субъекта, где указанные повреждения вызваны вирусом, включающий введение указанному субъекту соединения ингенола или его фармацевтически приемлемой соли.

2. Способ по п.1, где вирус представляет собой вирус папилломы человека.

3. Способ по п.2, где вирус выбирают из HPV 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 15, 17, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 36, 37, 38, 41, 46, 47, 49, 50, 57, 63 и 65.

4. Способ по п.2, где вирус выбирают из HPV 6, 11, 30, 42, 43, 44, 45, 51, 52 и 54.

5. Способ по п.2, где повреждение выбирают из группы, состоящей из обыкновенных бородавок, ровных или плоских бородавок, бородавок типа myrmecia, подошвенных бородавок, бородавок типа туберкулезных бугорков, мозаичных бородавок и нитевидных бородавок.

6. Способ по п.2, где повреждение представляет собой генитальную бородавку.

7. Способ по п.1, где вирус представляет собой нечеловеческий вирус папилломы.

8. Способ по п.7, где вирус представляет собой коровий, лошадиный, собачий, кошачий, кроличий, олений или птичий вирус папилломы.

9. Способ по любому из пп.1-8, где соединение выбирают из ингенол-3-ангелата, 20-О-ацетилингенол-3-ангелата и 20-дезоксиингенол-3-ангелата.

10. Способ по п.9, где соединение представляет собой ингенол-3-ангелат.

11. Способ по п.1, где соединение ингенола наносят местно на повреждение.

12. Способ по п.1, где соединение ингенола является выделенным или полностью или частично синтезированным химически.

13. Способ по п.12, где соединение ингенола выделяют из биологического вида семейства Euphorbiaceae.

14. Способ по п.1, где соединение ингенола вводят в виде фармацевтической композиции с одним или более фармацевтически приемлемыми адъювантами.

15. Способ по п.1, где соединение ингенола вводят в гель на основе изопропилового спирта или в крем на основе макроцетилового эфира.

16. Способ по п.1, где субъектом является человек.

17. Способ по п.16, где повреждение локализовано на лице, кистях рук, стопах, коленях или локтях.

18. Способ по п.16, где повреждение локализовано в области гениталий или ануса.

19. Способ по п.1, где субъекта выбирают из приматов, коров, лошадей, овец, свиней, коз, собак, кошек, кроликов, морских свинок и содержащихся в неволе диких животных.