СРЕДСТВО ПЕПТИДНОЙ СТРУКТУРЫ, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМ, АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ, РАНОЗАЖИВЛЯЮЩИМ, РЕГЕНЕРАТИВНЫМ, АНАЛЬГЕТИЧЕСКИМ, ПРОТИВООЖОГОВЫМ ДЕЙСТВИЕМ И ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ НА ЕГО ОСНОВЕ Российский патент 2014 года по МПК A61K38/05 A61P29/00 A61P31/04 

Изобретение относится к области биологически активных соединений и может быть использовано для получения ранозаживляющих лекарственных препаратов для лечения повреждения кожи, ран, ожогов и кожных заболеваний, способа его получения.

Проблема лечения ран, ожогов и других повреждений кожи, несмотря на большое разнообразие предлагаемых методов и препаратов, остается актуальной. В большинстве случаев при лечении ран предпочтение отдается местному медикаментозному лечению ((Гаврилюк Б.К. Нанокомпозитные регенерационные системы для лечения ран/ Б. К. Гаврилюк, В. Б. Гаврилюк. - (Биофизика сложных систем) //Биофизика. - 2011. - Т. 56, №6. - С.1138-1141; Lloyd ЕС, Rodgers ВС, Michener М, Williams MS. Outpatient burns: prevention and care. Am Fam Physician. 2012 Vol.85(1), P.25-32; Profyris C, Tziotzios C, Do Vale I. Cutaneous scarring: Pathophysiology, molecular mechanisms, and scar reduction therapeutics Part I. The molecular basis of scar formation. J Am Acad Dermatol. 2012, Vol.66(1), P.1-12; Elliot D, Sierakowski A. The surgical management of painful nerves of the upper limb: a unit perspective. J Hand Surg Eur Vol.2011 Vol.36(9), P.760-770). Однако следует отметить, что эффективность предлагаемой терапии зависит в этом случае не только от правильного выбора лекарственного средства, но и формы, в которой оно должно быть применено (Endorf FW, Ahrenholz D. Burn management. Curr Opin Crit Care. 2011 Vol.17(6), P.601-605). Широко применяют противовоспалительные лекарственные средства, которые подразделяются на стероидные и нестероидные. Нестероидные противовоспалительные средства уменьшают экссудацию, тормозят пролиферацию тканей, обезболивают и снижают температуру. Их недостатком является высокая токсичность. Стероидные противовоспалительные средства являются аналогами глюкокортикоидов. По силе антиэкссудативного действия превосходят нестероидные противовоспалительные средства в несколько раз, но не обладают анальгезирующим и жаропонижающим действием и при длительном применении вызывают нарушение гормонального фона в организме. Также применяют противомикробные препараты, однако они способствуют аллергизации организма, развитию устойчивой раневой микрофлоры и дисбактериозу. Применение препаратов ферментов (протеаз, трипсина, хемотрипсина, аминокислот и другие) ограничено их эффективностью только в первой фазе раневого процесса и необходимостью их сочетать с другими ранозаживляющими лекарственными средствами. Комплексное действие на рану оказывают лекарственные средства растительного происхождения благодаря содержанию комплекса флавоноидных соединений и витаминов, однако они не обладают обезболивающим действием (Mendonca Machado N, Gragnani A, Masako Ferreira L. Bums, metabolism and nutritional requirements. Nutr Hosp.2011 Aug; 26(4):692-700; Lloyd EC, Rodgers ВС, Michener M, Williams MS. Outpatient burns: prevention and care. Am Fam Physician. 2012 Vol.85(1), P.25-32). Известны ранозаживляющие и противовоспалительные препараты в виде кремов и мазей, содержащие активное вещество, жирную основу (смесь ланолина и вазелина) и добавки. Однако вазелино-ланолиновая основа в этих лекарственных препаратах препятствует нормальному газообмену, что снижает ранозаживляющую активность препарата, особенно при вялотекущих процессах (Profyris С, Tziotzios С, Do Vale I. Cutaneous scarring: Pathophysiology, molecular mechanisms, and scar reduction therapeutics Part I. The molecular basis of scar formation. J Am Acad Dermatol. 2012, Vol.66(1), P.1-12.).

Эффективными формами ранозаживляющих средств являются гели. В качестве гелеобразователя могут быть использованы полисахариды: галактоманнан, или глюкоманнан, или альгиновые кислоты, или соли альгиновых кислот, или агар-агар, или гиалуроновая кислота, или желатин, или пектин, или аэросил, или цеолиты, или коллодий или 1,2 пропиленгликоль (Elliot D, Sierakowski A. The surgical management of painful nerves of the upper limb: a unit perspective. J Hand Surg Eur Vol.2011 Vol.36(9), P.760-770).

Известен ранозаживляющий лекарственный препарат "Линимент метилурацила" (патент РФ N 2007997, приор, от 08.07.92 г., А61К 9/06), содержащий в качестве активного вещества β-форму метилурацила, а качестве основы - касторовое масло. Препарат обладает повышенной ранозаживляющей активностью за счет высокой биодоступности лекарственной формы. Однако в данном лекарственном препарате активное вещество не обладает противоинфекционными и интерфероногенными свойствами, что не позволяет лечить инфицированные раны.

Задачей настоящего изобретения является создание средства, лишенного вышеперечисленных недостатков, при этом технический результат, достигаемый при реализации такой задачи, состоит в получении эффективного противовоспалительного, ранозаживляющего и обезболивающего средства для наружного применения.

Указанный технический результат достигается тем, что в качестве активного вещества используется оригинальное вещество пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅ в следующих видах лекарственных форм: мази, гели, линименты, спреи, суппозитории, пластыри, орально-дезинтегрируемые таблетки и капли.

В частности, заявлено применение дипептида общей формулы Tyr-Pro-Х, где Х-ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, в качестве противовоспалительного, антибактериального, ранозаживляющего, регенеративного, анальгетического и противоожогового средства, а также лекарственная форма, содержащая в качестве действующего вещества дипептид общей формулы Tyr-Pro-X, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, применяемая в качестве противовоспалительного, антибактериального, ранозаживляющего, регенеративного, анальгетического и противоожогового средства;

предпочтительные, но не обязательные варианты исполнения лекарственной формы предполагают ее исполнение в виде одной из следующих лекарственных форм: мазь, гель, линимент, спрей, суппозитории, пластырь, орально-дезинтегрируемые таблетки, капли.

Пептидные соединения согласно настоящей заявке, их свойства и способ получения в литературе не описаны.

Синтез соединений. Tyr-Pro-Х синтезировали с применением тетрабутиламмонийных солей (ТБА) и пивалоил хлорида (PivCL). Для синтеза использовали производные D; L; DL аминокислот. Упаривание растворов проводили на вакуумном испарителе при 40°С. Температуры плавления, определенные на столике для плавления Boetiys, даны без исправления. Контроль над синтезом и индивидуальность полученных соединений проверяли с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках с силикагелем фирмы Silufol (ЧСФР) при опрыскивании раствором нингидрина в системах растворителей:

1 - гексан: ацетон (3:2);

2 - этилацетат:ацетон:50% уксусная кислота (2:1:1);

3 - бензол:этанол (8:2);

4 - хлороформ:метанол:аммиак (7:2.5:0.5);

5 - хлороформ:метанол:аммиак (6:4:1);

6 - хлороформ:метанол:уксусная кислота (42:7:1);

7 - ацетон:бензол:уксусная кислота (2:1:1);

8 - хлороформ:метанол:аммиак (8:1.75:0.25);

9 - хлороформ.метанол (9:1);

10 - этанол:аммиак (7:3).

11 - изо-пропанол:муравьиная кислота:вода (20:1:5).

Далее по тексту в скобках после Rf указана система растворителей.

Все растворители абсолютировали соответствующим образом. Точки плавления не корректировали. Колоночную хроматографию проводили с использованием носителей Силикагель L-40/100 m и Silasorb 600 [LC] фирмы Chemapol (ЧСФР).

Принятые сокращения: Ас - ацетат; Вос - трет-бутилоксикарбонильная группа; ОБТ - I-оксибензтриазол; ДМФА - диметилформамид; ДЦГК дициклогексилкарбодиимид; PivCI - пивалоил хлорид; ТБА - тетрабутиламмоний; ТЭА - триэтиламин; OSu - N-оксисукцинимидный эфир; ДЦГК - N,N-дициклогексикарбодиимид; ОМе - метиловый эфир; DiBoc - трет-бутилоксикарбонил; ТСХ - тонкослойная хроматография.

Получение дипептида Tyr-Pro.

1. К Pro 150 мг (1.326 ммоль) добавляли 2.83 мл (1.326 моль) 13% ТБА, упаривали 1 раз с этанолом, 1 раз с изо-пропанолом, 1 раз с бензолом, охлаждали до 0°С.

2. К охлажденному раствору ТБА Pro в 10 мл абс. этилацетата при охлаждении добавляли в сухом виде DiBoc-Tyr-OSu 634.5 мг (1.326 моль), перемешивали 1 час при комнатной температуре на магнитной мешалке, за ходом реакции следили по ТСХ в системе (7).

По окончании реакции растворитель упаривали, добавляли воду, подкисляли NaHSO₄ (пятикратный избыток) до рН 3, экстрагировали 5 раз по 50 мл этилацетатом. Объединенные фракции этилацетата промывали водой, 10% раствором KHSO₄, водой, сушили над MgSO₄, упаривали, высаждали из эфира гексаном (дважды). Осадок в виде порошка сушили в вакууме.

Выход 1.32 г (2.76 ммоль).

Rf=0.382 (7).

Нижеследующие примеры иллюстрирую эффективность применения заявленного нового пептидного соединения в качестве действующего вещества в противовоспалительных, ранозаживляющих и обезболивающих средствах для наружного применения, а также варианты получения таких средств. Подразумевается, что хотя в подробном описании и конкретных примерах раскрыты предпочтительные варианты осуществления изобретения, они приведены лишь для наглядности, поскольку из описания, а также формулы изобретения для специалиста в данной области техники станут очевидными различные изменения и усовершенствования, не выходящие за пределы существа и объема изобретения.

Пример 1. На 100 суппозиториев: в раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, с концентрацией с=1-50 мг/мл вводят 55,0 г расплава смеси ПЭГ 1500 и ПЭГ 400 с 5,0 г эмульгатора, затем перемешивают 10 минут. К смеси постепенно прибавляют 275 г предварительно расплавленной гидрофобной основы (витепсол) с 15,0 г стабилизатора (нипагин) и перемешивают 30 минут. Полученную взвесь разливают в предварительно охлажденные суппозиторные формы и помещают в холодильник при -4°С. Препарат используют в качестве суппозиториев. В 1 суппозитории содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅.

Пример 2. На 100 суппозиториев: в раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, с концентрацией с=1-50 мг/мл постепенно прибавляют 275 г предварительно расплавленной дифильной основы (Suppocire АР) с 15,0 г стабилизатора (нипагин) и перемешивают 30 минут. Полученную взвесь разливают в предварительно охлажденные суппозиторные формы и помещают в холодильник при -4°С. Препарат используют в качестве суппозиториев. В 1 суппозитории содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X -ОН, NH₂₎ ОСН₃, ОС₂Н₅.

Пример 3. На 100 г мази: раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, с концентрацией с=1-50 мг/мл вводят в 85,0 г расплава смеси ПЭГ 1500 и ПЭГ 400 с 5,0 г стабилизатора (нипазол), перемешивают 30 минут. Препарат используют в виде мази, в которой содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅.

Пример 4. На 100 г мази: раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, с концентрацией с=1-50 мг/мл вводят в 40,0 г расплава смеси ПЭГ 1500 и ПЭГ 40 с 5,0 г эмульгатора, затем перемешивают 10 минут. К смеси постепенно прибавляют 45 г предварительно расплавленной гидрофобной основы (силоксановая основа) с 5,0 г стабилизатора (нипагин) и перемешивают 30 минут. Препарат используют в виде мази, в которой содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅.

Пример 5. На 100 г геля: раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, с концентрацией с=1-50 мг/мл вводят в 85,0 г расплава смеси ПВП 12600 и ПВП 8000 с 5,0 г стабилизатора (нипазол), перемешивают 30 минут. Препарат используют в виде геля, в котором содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅.

Пример 6. На 100 мл спрея: раствор вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, с концентрацией с=1-50 мг/мл вводят в смесь, содержащую 20 мг пропиленгликоля, 20 мг ПЭГ 1000 цетостеарилового эфира, 5 мл воды очищенный и 50 мл этанола ректифицированного, перемешивают в течение 10 минут и заправляют в полипропиленовый флакон с дозирующим насосом и насадкой. Препарат используют в виде спрея, в котором содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅.

Пример 7. На 100 пластырей: 5 г вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, вводят в смесь, состоящую из 9,72 г поли(DL-лактид) и/или поли(DL-лактид-согликолид) с молекулярной массой 50000 Да и соотношением 50:50 с 1,0 г стабилизатора (бензоат натрия) в 60 мл хлороформа. Смесь тщательно перемешивают и разливают тонким слоем, после чего сушат теплым воздухом до полного удаления органического растворителя. Полученную пленку соединяют с тканной основой. Препарат используют в виде пластыря, в котором содержится 1-50 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅.

Пример 8. На 100 орально дезинтегрируемых таблеток: таблетки получали методом прямого прессования на таблеточном прессе смеси, содержащей 1 г вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, и 20 г комбинированного наполнителя "Ludiflash".

Пример 9. На 100 орально дезинтегрируемых таблеток: таблетки получают методом влажной грануляции таблеточной смеси, содержащей 1 г вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, и 20 г комбинированного наполнителя "Ludiflash".

Пример 10. На 100 орально дезинтегрируемых таблеток: таблетки получают методом сухой грануляции таблеточной смеси, содержащей 1 г вещества пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, и 20 г комбинированного наполнителя "Ludiflash".

Пример 12. На 1 мл раствора для капель раствор вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, с концентрацией с=0,01-10 мг вводят в смесь, содержащую натрия гидрофосфат 0,1-5,0 мг, натрия дигидрофосфат 1,0-10,0 мг, сорбитол 1,0-25,0 мг, бензалкония хлорид 0,1-3,0 мг, масло лавандовое 1,0-30,0 мг, вода очищенная до 1,0 мл. Препарат используют в виде назальных капель, в котором содержится 0,01-10 мг вещества пептидной природы Tyr-Pro-Х, где

Х-ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅.

Пример 13. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, в тесте формалиновой боли для выявления анальгетической и противовоспалительной активности.

Самцов беспородных крыс помещали в индивидуальные пластиковые боксы. Острую воспалительную реакцию (отек) вызывали субплантарным (под подошвенный апоневроз) введением 50 мкл 5% формалина. Регистрировали число болевых реакций (постукивание лапой об пол, грызение лапы и т.д.) в первые 5-10 минут - I фаза (воздействие на первичные афференты боли) и с 30-50 минуту - II фаза (боль, возникающая в результате воспалительной реакции) (Bannon et al., 1998). Критерием анальгетического эффекта считали достоверное уменьшение числа болевых реакций в опытной группе относительно контрольной группы.

Исследуемые образцы (образец 1 - мазь 5%, образец 2 - гель 10%) наносили на лапу одновременно с введением формалина самцам нелинейных белых крыс весом 200-300 г. Контрольным животным наносили наружное средство без активного вещества. Полученные результаты приведены в таблице 1.

Таблица 1 Испытуемый образец I фаза II фаза Контроль (без активного вещества) 6,2±1,2 9,8±4,1 Образец 1 (мазь 5%) 5% 3,5±1,8* 4,9±2,7* Образец 2 (гель 10%) 10% 1,1±0,4* 0,9°±0,3*

* - достоверность по сравнению с контролем при Р<0,05.

Из таблицы 1 видно, что средство наружного применения, содержащее оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, уменьшает болевую чувствительность в I фазу формалиновых болей, характеризующую воздействие на первичные афференты, и оказывает противовоспалительное действие во II фазу, вызванную развитием воспаления.

Таким образом, средство наружного применения, содержащее оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, обладает анальгетическим и противовоспалительным действием в тесте формалиновых болей.

Пример 14. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, при моделировании термического ожога.

Для моделирования термического ожога использовали стандартный метод (Кочетыгов Н.И. О способах воспроизведения термических ожогов. Л.: Медицина, 1964, стр.86) на кроликах породы шиншилла весом 2,8-3,2 кг. Ожоги наносились на боковую поверхность бедра. С участка боковой поверхности бедра животного удаляли шерсть и прикладывали к коже керамический тигель диаметром 1,5 см, нагретый в муфельной печи до 600°С, а течение 5 сек. После этого осуществляли исследование в трех группах животных. В первой (контрольной) группе лечение не проводили. Во второй (опытной) группе лечение проводили средством наружного применения в виде мази без активного вещества, изготовленной согласно прототипу. В третьей (опытной) группе лечение проводили средством наружного применения в виде мази с концентрацией активного вещества 5,0 мас.%. В четвертой (опытной) группе лечение проводили заявляемым средством наружного применения с концентрацией активного вещества в виде геля 10,0 мас.%.

Животных ежедневно осматривали, определяли состояние и размер ожоговой раны. На 7, 14 и 28 сутки ожоговые раны тотально вырезали вместе с участком здоровой кожи и подвергали гистологическому исследованию.

В контрольной группе на месте термического ожога сразу после его нанесения формировался участок сухого коагуляционного некроза, четко ограниченного от окружающей здоровой ткани. Через 1 сутки вокруг этой зоны образовалась демаркационная линия поврежденного эпидермиса размером 3-4 мм. Начиная со 2-го дня, на поверхности ожоговой раны образовалась фибриновая пленка, которая утолщалась и становилась более темной в течение первой недели. В последующие 7 дней по периферии ожога наблюдалась гиперимия и образовался воспалительный валик. При этом размеры очага поражения значительно уменьшались. К 14-му дню от начала опыта очаг уменьшился за счет врастания в него с периферии эпидермиса в виде языков. К 28-му дню ожоговая рана полностью заживилась.

Во 2-й группе кроликов (использование средства наружного применения без активного вещества) заживление ожоговой раны происходило в более короткие сроки, чем в 1-й группе, однако в течение всего срока лечения было значительно выражено местное воспаление. Форма ожоговой раны менялась за счет неравномерного врастания эпидермиса. К 21-му дню рана полностью эпителизовалась с краев, а к 28-му дню полностью зажила.

В 3-й группе (наружное применение лечебного средства с концентрацией активного вещества 5,0 мас.%.) были отмечены хорошие результаты. В течение первых семи дней наблюдалась интенсивная местная воспалительная реакция, однако уже на 14-е сутки воспаление полностью исчезло и ожоговая рана эпителизировалась за счет наползания регенерирующего эпителия с краев. Полное сращивание эпителия заживления раны наступило на 21-й день лечения, что на 7 дней раньше, чем во 2-й группе (прототип), и на две недели раньше, чем в контрольной группе. Не наблюдалось образование шрамов и рубцов.

В 4-й группе (наружное применение лечебного средства с концентрацией активного вещества 10,0 мас.%.) были отмечены наилучшие результаты. В течение только первых пяти дней наблюдалась интенсивная местная воспалительная реакция, однако уже на 10-е сутки воспаление полностью исчезло и ожоговая рана эпителизировалась. Полное сращивание эпителия заживления раны наступило на 18-й день лечения, что на 10 дней раньше, чем во 2-й группе (прототип) и контрольной группах. Не наблюдалось образование шрамов и рубцов.

Таким образом, средство наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, проявляет высокую ранозаживляющую, противовоспалительную и противоинфекционную эффективность и сокращает сроки лечения инфицированных ран и ожогов.

Пример 15. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, при моделировании кожной раны.

Кожную рану моделировали на кроликах породы шиншилла весом 2,8-3,2 кг. Для моделирования раны у кроликов выбривали область мягких тканей бедренной части и скальпелем делали разрез глубиной 1 см и длиной 5 см. После этого осуществляли исследование в трех группах животных. В первой (контрольной) группе лечение не проводили. Во второй (опытной) группе лечение проводили средством наружного применения в виде мази без активного вещества, изготовленной согласно прототипу. В третьей (опытной) группе лечение проводили средством наружного применения в виде мази с концентрацией активного вещества 5,0 мас.%.

Эффективность препаратов в опытных и контрольной группах оценивали по срокам отторжения струпа, очищению ран от гнойно-некротических масс, времени появления грануляционной ткани в ране и началу краевой эпителизации по динамике регресса воспалительного процесса, а также по динамике бактериологической обсемененности раны.

В контрольной группе образовался гнойник с инфильтрацией в окружающую ткань. На 6 день появилось отторжение струпа и краевая грануляционная ткань, а к 12-му дню курса лечения - первые признаки эпителизации. Полная санация раны наступила к 21-му дню.

Во второй группе кроликов наблюдалось отсутствие гнойного серозного отделяемого раны. Первичный струп на ране не препятствовал образованию грануляции. Отторжение струпа и первые признаки грануляции были отмечены на 6-й день от начала лечения. Появление краевой эпителизации раны отмечено на 12-й день курса лечения, а полная санация раны наступила к 21-му дню курса лечения.

В третьей группе (средство наружного применения, содержащее 5% вещества) были отмечены наилучшие результаты лечения. Не наблюдалось ни гнойного, ни серозного отделяемого из раны, отсутствовало воспаление, рана "сухая", наблюдалось формирование и рост грануляционной ткани (активной на периферии и островковой в центре раны). Опережающее развитие грануляционной ткани способствует более ранней эпителизации и полной санации раны, которая наступила в данной группе к 9-му дню от начала лечения, а полное излечение раны уже к 15-му дню курса лечения. Не наблюдалось образование шрамов и рубцов.

Таким образом, средство наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, обладает ранозаживляющим действием.

Пример 16. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, в тесте нейрогенного болевого синдрома, вызванного перерезкой седалищного нерва, как модели нейропатической боли для выявления анальгетической и противовоспалительной активности.

Эксперименты проводили на самцах нелинейных белых крыс весом 200-250 г. Нейрогенный болевой синдром у самцов беспородных крыс создавали перерезкой седалищного нерва на уровне подколенной ямки выше места его трифуркации на n.tibialis, n.peroneus и n.suralis и последующим его лигированием для предотвращения регенерации. Развитие болевого синдрома определяли по появлению признаков аутотомий на оперированной лапке. Интенсивность аутотомий оценивали по 11-балльной шкале: 1 балл - повреждение 1-го когтя; 2, 3, 4 и 5-ть баллов - повреждение 2-х, 3-х, 4-х и 5-ти когтей; 6 баллов - повреждение фаланги одного пальца; 7, 8, 9 и 10 баллов - повреждение фаланг соответственно на 2-х, 3-х, 4-х и 5-ти пальцах; 11 баллов повреждение плюсневых костей. Динамику развития болевого синдрома у крыс опытных и контрольной групп наблюдали в течение 25 дней (Крыжановский Г.Н. и др. 1991).

Животным контрольной группы в день перерезки седалищного нерва и последующие 10 дней после операции наносили средство наружного применения в виде мази без активного вещества, а животным опытной группы в те же сроки наносили средство наружного применения в виде мази с активным веществом в дозе 10 мг/кг.

В контрольной группе крыс развитие аутотомий после перерезки седалищного нерва появилось у 50% животных на 6 день после операции. Интенсивность болевых реакций составила 3.2±0.9 балла. На 9 день введения болевая реакция наблюдалась у 60% животных, соответствующая интенсивности 4.5±2.4 балла. На 18 сутки болевые реакции развивались у 70% и составили 6.5±3.1 балла.

Нанесение средства наружного применения без активного вещества не препятствовало развитию аутотомий после перерезки седалищного нерва (40% животных на 6 день после операции). Интенсивность болевых реакций составила 2.7±1.9 балла. На 9 день введения болевая реакция наблюдалась у 50% животных, соответствующая интенсивности 3.6±2.6 балла. На 18 сутки болевые реакции развивались у 60% и составили 5.2±2.4 балла.

Нанесение средства наружного применения с активным веществом препятствовало развитию болевого синдрома. На 6 и 9 день болевые реакции не наблюдались. На 13 сутки эксперимента на 5 день после отмены введения соединения появилась болевая реакция у 10% животных средней интенсивности 1.0+1.0 балл, а на 18 день - у 10% животных, средняя интенсивность реакции составила 2.0±1.0 балла.

Таким образом, средство наружного применения, содержащее оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, проявляет анальгетическое и противовоспалительное действие в тесте нейрогенного болевого синдрома, вызванного перерезкой седалищного нерва.

Пример 17. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, у больной Е., 68 лет. У больной диагностированы гнойные прыщи на лице в районе носа. На все пораженные участки накладывалось средство наружного применения в виде мази. На следующие сутки после однократного применения образовывалась светлая корочка, которая легко удалялась. На лице не оставалось следов от ран.

Пример 18. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, у больной А., 58 лет, с ожогом. У больной диагностирован ожог I, II степеней двух пальцев (среднего - площадью 1,5 см и безымянного площадью - 1 см) левой руки в районе ногтевого ложа раскаленным подсолнечным маслом. Травма бытовая. Наблюдалась гиперемия, отек кожи, большие сплошные пузыри с содержимым. После аппликации средства наружного применения в виде геля на следующие сутки наблюдалось значительное уменьшение гиперемии, практически полное отсутствие отека и содержимого пузырей. Средство применяли на протяжении 5 дней. На 5-й день наблюдалось отслоение тонкого слоя эпидермиса раневой поверхности, под которым образовалась молодая кожа без рубцов и воспаления. Через 14 дней наблюдалось полное восстановление поврежденной поверхности.

Пример 19. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, у больной Т., 56 лет, с ожогом. У больной диагностирован ожог I, II степеней тыльной стороны левого предплечья в области запястья - площадью 20 см² горячим паром. Травма бытовая. Наблюдалась гиперемия, отек кожи, большие мелкие пузыри с содержимым. Средство применяли на протяжении 3 дней. После аппликации средства наружного применения в виде мази на следующие сутки наблюдалось значительное уменьшение гиперемии, практически полное отсутствие отека и содержимого пузырей. На 5-й день наблюдалось отслоение тонкого слоя эпидермиса раневой поверхности, под которым образовалась молодая кожа без рубцов и воспаления. Через 14 дней наблюдалось полное восстановление поврежденной поверхности.

Пример 20. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, у больного ребенка С., 6 лет. На правом бедре ребенка в районе соприкосновения с резинкой диагностировано гиперемированное шероховатое пятно размером 1 см², которое не проходило в течение 7 дней. После аппликации средства наружного применения в виде мази на следующие сутки пятно исчезло и больше не появлялось.

Пример 21. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅. Больная Г., 33 года. На левом боку в районе соприкосновения с резинкой находилось гиперемированное пятно размером 1,5 см², которое не проходило в течение 10 дней. После аппликации средства наружного применения в виде спрея на следующие сутки пятно исчезло и больше не появлялось.

Пример 22. Изучение средства наружного применения, содержащего оригинальное вещество пептидной структуры Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅. Больная К., 45 лет. На левом локте больной находилось гиперемированное пятно площадью 3 см², которое не проходило в течение длительного времени. Больная неоднократно обращалась в лечебные учреждения, но результатов не было. После однократной аппликации средства наружного применения в виде пластыря через двое суток пятно исчезло и больше не появлялось.

Группа изобретений относится к фармакологии и медицине и касается применения дипептида общей формулы Tyr-Pro-Х, где X - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, в качестве противовоспалительного, антибактериального, ранозаживляющего, регенеративного, анальгетического и противоожогового средства при наружном применении, а также лекарственная форма для наружного применения, содержащая такой дипептид. Группа изобретений обеспечивает получение эффективного средства для наружного применения без побочных эффектов. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 22 пр.

1. Применение дипептида общей формулы Tyr-Pro-Х, где Х - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, в качестве противовоспалительного, антибактериального, ранозаживляющего, регенеративного, анальгетического и противоожогового средства при наружном применении.

2. Лекарственная форма для наружного применения, содержащая в качестве действующего вещества дипептид общей формулы Tyr-Pro-Х, где Х - ОН, NH₂, ОСН₃, ОС₂Н₅, применяемая в качестве противовоспалительного, антибактериального, ранозаживляющего, регенеративного, анальгетического и противоожогового средства.

3. Форма по п.2, в виде одной из следующих лекарственных форм: мазь, гель, линимент, спрей, пластырь.