СПОСОБ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ ИШЕМИИ СКЕЛЕТНОЙ МЫШЦЫ РЕСВЕРАТРОЛОМ Российский патент 2014 года по МПК G09B23/28 A61K31/05 A61P9/10 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и хирургии, и может быть использовано для коррекции ишемии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ Elmali N, et al. Effects of resveratrol on skeletal muscle in ischemia-reperfusion injury Ulus Travma Acil Cerrahi Derg. 2007 Oct; 13 (4): 274-80. В данном экспериментальном исследовании ишемию скелетной мышцы у крыс воспроизводили 4-часовым наложением жгута на артерию, кровоснабжающую конечность, затем осуществляли 4- и 8-часовую реперфузию и оценивали степень ишемических и реперфузионных повреждений в икроножной и передней большеберцовой мышцах. Ресвератрол вводили в дозе 10 мг/кг внутрибрюшинно, растворив его в 0,5% растворе этилового спирта. Ресвератрол в данном исследовании можно рассматривать как препарат для фармакологического прекондиционирования, исследуется его цитопротекторная роль. Известно, что в процессе прекондиционирования не только снижается объем некротической зоны, но и активизируются процессы восстановления. Важную роль в регенерации тканей после их ишемического повреждения играет ангиогенез, являющийся основой репаративных и регенеративных процессов. Однако в данном исследовании оценка влияния ресвератрола на неоангиогенез не проводилась. Кроме того, недостатком способа является то, что ресвератрол растворяли в 0,5% растворе этилового спирта, тогда как известно, что этиловый спирт в минимальных концентрациях сам способен стимулировать процесс прекондиционирования.

Основным преимуществом предлагаемого способа является то, что в применяемой модели ишемии единственным способом восстановления микроциркуляции в ишемизированной скелетной мышце является неоангиогенез. Препарат вводится в чистом виде, внутрижелудочно каждые 46 часов (учитывая то, что именно через 46 часов эффект прекондиционирования ослабевает), первые 7 суток эксперимента, так как именно на данном этапе наиболее эффективна активация неоангиогенеза в ишемизированной мышце.

Техническим результатом изобретения является разработка способа фармакологической коррекции ишемии скелетной мышцы посредством стимуляции неоангиогенеза, включающего применение ресвератрола.

Технический результат достигается тем, что моделируется ишемия мышц голени оперативным удалением участка магистральных сосудов, включающего бедренную, подколенную, переднюю и заднюю большеберцовые артерии на вторые сутки эксперимента; лабораторному животному внутрижелудочно вводят ресвератрол в суточной дозе 2,0 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента; уровень микроциркуляции в мышцах оценивается на 28 сутки ишемии посредством лазерной допплеровской флоуметрии.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ.

Опыты проводят на белых крысах линии Wistar массой 220-250 г.

Ишемия моделируется на вторые сутки на мышцах правой голени крысы оперативным удалением участка магистральных сосудов, включающего бедренную, подколенную, переднюю и заднюю большеберцовые артерии.

Уровень микроциркуляции в мышцах голени определяется при помощи оборудования производства компании Biopac systems: полиграфа MP 100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии LDF100C и инвазивного игольчатого датчика TSD144. Регистрация и обработка результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) производится с помощью программы AcqKnowledge версии 3.8.1., значения микроциркуляции выражют в перфузионных единицах (ПЕ). Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой).

Регистрация уровня микроциркуляции проводится на 28 сутки после операции в группах ложнооперированных животных, с моделированием ишемии мышц голени и в группе животных, которым вводился ресвератрол.

Ресвератрол вводят внутрижелудочно в суточной дозе 2,0 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента.

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Экспериментальные животные были разделены на следующие группы:

1. ложнооперированные животные (n=10);

2. моделирование ишемии мышц голени (n=10);

3. моделирование ишемии мышц голени+ресвератрол (n=10).

Моделирование ишемии мышц правой голени осуществляли на вторые сутки под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно), оперативным удалением участка магистральных сосудов, включающего бедренную, подколенную, переднюю и заднюю большеберцовые артерии. Коррекцию ишемии мышц проводили у животных 3-й группы внутрижелудочным введением ресвератрола в суточной дозе 2,0 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента.

Уровень микроциркуляции в мышцах голени определяли при помощи оборудования производства компании Biopac systems: полиграфа MP 100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии LDF100C и инвазивного игольчатого датчика TSD144 на 28 сутки. Регистрацию и обработку результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) производили с помощью программы AcqKnowledge версии 3.8.1., значения микроциркуляции выражали в перфузионных единицах (ПЕ). Запись кривой уровня микроциркуляции осуществили в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой) в течение 30 секунд в каждой точке. Из полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в мышцах голени у данного животного. Из 10 полученных значений рассчитывали среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования.

Таблица 1 Результаты оценки уровня микроциркуляции в мышцах голени животных опытных групп (M±m) в перфузионных единица: на 28 сутки после операции Группы 28 сутки (n=10) Ложнооперированные животные 532±33 Ишемия мышц голени 361±8* Ишемия мышц голени+ресвератрол 701±26** Примечание. * - p<0,05 в сравнении с группой интактных животных; ** -p<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией мышц голени; ресвератрол внутрижелудочно в суточной дозе 2,0 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента.

Среднее значение уровня микроциркуляции в интактной мышце голени крыс составляет 526±34 ПЕ. Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных опытных групп представлены в таблице 1.

В группе ложнооперированных животных среднее значение уровня микроциркуляции в мышцах правой голени не имеет достоверных отличий от показателей в группе интактных животных (526±34 ПЕ) (p=0,19). В группе моделирования ишемии мышц голени уровень микроциркуляции достоверно ниже значения в интактной мышце (p<0,05).

Введение ресвератрола способствовало достоверному повышению уровня регионарного кровотока в ишемизированной мышце голени крыс по сравнению с показателями в контрольной группе (p<0,05).

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать фармакологическую коррекцию ишемии скелетной мышцы ресвератролом.

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам с ишемией мышц голени, моделируемой на вторые сутки эксперимента, внутрижелудочно вводят ресвератрол в суточной дозе 2,0 мг/кг, каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента. Уровень микроциркуляции в мышце голени оценивают на 28 сутки создания ишемии. Способ обеспечивает эффективное лечение ишемии скелетной мышцы в эксперименте за счет стимуляции неоангиогенеза. 1 пр., 1 табл.

Способ фармакологической коррекции ишемии скелетной мышцы, включающий введение ресвератрола лабораторному животному, отличающийся тем, что моделирование ишемии мышцы голени осуществляют оперативным удалением участка магистральных сосудов, включающего бедренную, подколенную, переднюю и заднюю большеберцовые артерии, на вторые сутки эксперимента, при этом ресвератрол вводят внутрижелудочно в суточной дозе 2,0 мг/кг, каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента, уровень микроциркуляции в мышце голени оценивают на 28 сутки создания ишемии посредством лазерной допплеровской флоуметрии.