СПОСОБ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ КРИТИЧЕСКОЙ ИШЕМИИ СКЕЛЕТНОЙ МЫШЦЫ КОМБИНАЦИЕЙ СИМВАСТАТИНА И МОНОНУКЛЕАРНОЙ ФРАКЦИЕЙ АУТОЛОГИЧНОГО КОСТНОГО МОЗГА Российский патент 2020 года по МПК G09B23/28 A61K31/22 A61K35/28 A61P9/10 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и хирургии, может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции ишемии конечности с помощью трентала (пентоксифиллин), относящегося к препаратам улучшающим микроциркуляцию, описанный Савельевым B.C., Кошкиным В.М. "Критическая ишемия нижних конечностей". Глава 7. Лечение больных с хроническими облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей. Москва, 1997 г. Издательство "Медицина", который заключается во внутриартериальном, внутривенном, внутримышечном и пероральном приеме этих препаратов у больных для коррекции нарушения периферического кровообращения .

Основным недостатком способа является ограниченная патогенетическая направленность, связанная с отсутствием эндотелий-зависимого вазодилятирующего эффекта на фоне приема трентала. В основе механизма действия трентала лежит уменьшение вязкости крови и повышение эластичности эритроцитов, улучшение микроциркуляции и увеличение концентрации кислорода в тканях. Повышение эластичности эритроцитов, по-видимому, обусловлено ингибированием фосфодиэстеразы и повышением в результате этого содержания цАМФ в эритроцитах. Понижение вязкости крови может быть следствием уменьшения концентрации фибриногена в плазме и подавления агрегации эритроцитов и тромбоцитов.

Тогда как статины действую сразу на несколько звеньев патогенеза, при любом исходном уровне холестерина статины приводят к его снижению, важно отметить и тот факт, что для них характерны не только гиполипидемические, но и нелипидные (плейотропные) эффекты. Так, они улучшают функцию эндотелия, обладают антитромботическим действием, снижают активность воспалительных процессов, угнетают процессы фиброза, усиливают перфузию и ангиогенез. Таким образом, вполне обоснованным является применение при критической ишемии конечности симвастатина.

С целью регенерационной клеточной терапии в настоящее время используются стволовые клетки костного мозга в силу их плюрипотентности. Стволовые клетки (гемопоэтические и мезенхимальные) содержатся в мононуклеарной фракции клеток костного мозга. Обладая мультипотентными свойствами, эти клетки могут способствовать замещению дефектов тканей и неоангиогенезу. Кроме того, лимфоидные клетки фракции в силу своих морфогенетических способностей могут принимать участие в процессах восстановительной регенерации поврежденных органов и тканей

Комбинированная терапия симвастатином и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга позволяет уменьшить не только суточную дозу симвастатина до 0,86 мг/кг, но и курсовую дозу.

Таким образом, вполне обоснованным является комбинированное применение при ишемии конечности симвастатина и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга, которые действуют на разные звенья патогенеза. Такое неконкурентное взаимодействие позволяет достичь максимального физиологического ответа, обеспечить хороший реологический эффект в очаге ишемии и уменьшить дозу симвастатина в предложенной нами комбинации, что в свою очередь увеличивает безопасность данной комбинации с точки зрения возникновения побочных эффектов, а также является фармакоэкономически более выгодным.

Техническим результатом изобретения является разработка способа коррекции ишемии скелетной мышцы симвастатином и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга в условиях комбинированной терапии.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования ишемии скелетной мышцы проводится ее коррекция путем внутрижелудочного введения симвастатина в дозе 0,86 мг/кг 1 раз в сутки ежедневно в течение 14 дней и однократным параэнтеральным введением мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга на 7-е сутки после моделирования критической ишемии по 50 мкл в 4 точки (паравазально над паховой связкой в место отхождения от внутренней подвздошной артерии латеральной артерии, огибающие бедренную кость; под паховой связкой в область поверхностной артерии, огибающей подвздошную кость; в область отхождения мышечной ветви бедренной артерии r. muscularis, место прикрепления гребенчатой и длинной приводящей мышц бедра; в верхнюю треть икроножной мышцы).

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах линии Wistar массой 220-250 г.

Экспериментальные животные были разделены на следующие группы:

1) интактные (n=30);

2) ложнооперированные животные (разрез кожи вдоль бедра по внутренней поверхности с выделением сосудисто-нервного пучка бедра и ушивание раны непрерывным швом) (n=30);

3) моделирование критической ишемии мышц голени (удаление бедренной, подколенной, передней и задней большеберцовой артерии и вены, а также седалищный нерв) (n=30);

4) моделирование критической ишемии мышц голени и ее коррекция симвастатином и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга (n=30).

Моделирование критической ишемии мышц левой голени осуществляли под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно), оперативным удалением участка магистральных сосудов, включающего бедренную, подколенную, переднюю и заднюю большеберцовые артерии и вены, а также седалищный нерв.

Коррекция критической ишемии мышц конечностей проводилась симвастатином в дозе 0,86 мг/кг, внутрижелудочно 1 раз в сутки ежедневно в течение 14 дней и однократным параэнтеральным введением мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга (из большеберцовой кости посредством пункции костномозговой полости и выделением по методу Boyum) на 7-е сутки после моделирования критической ишемии по 50 мкл в 4 точки (паравазально над паховой связкой в место отхождения от внутренней подвздошной артерии латеральной артерии, огибающие бедренную кость; под паховой связкой в область поверхностной артерии, огибающей подвздошную кость; в область отхождения мышечной ветви бедренной артерии r. muscularis, место прикрепления гребенчатой и длинной приводящей мышц бедра; в верхнюю треть икроножной мышцы).

Уровень микроциркуляции в мышцах голени определяли при помощи оборудования производства компании Biopac systems: полиграфа МР100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии LDF100C и инвазивного игольчатого датчика TSD144 на 10, 21 и 28 сутки. Регистрацию и обработку результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) производили с помощью программы AcqKnowledge версии 3.8.1., значения микроциркуляции выражали в перфузионных единицах (ПЕ). Запись кривой уровня микроциркуляции осуществляли в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой) в течение 30 секунд в каждой точке. Из полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в мышцах голени у данного животного. Из 10 полученных значений рассчитывали среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования. Регистрация уровня микроциркуляции проводится в всех экспериментальных группах.

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при р<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных опытных групп представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты оценки уровня микроциркуляции в мышцах голени животных опытных групп (M ± m) в перфузионных единицах 10 сутки (n=10) 21 сутки (n=10) 28 сутки (n=10) Интактные 528,6±11,04 531,6±12,08 533,4±11 Ложнооперированные животные 521,4±11,46 523±13,79 524,1±15,1 Моделирование критической ишемии мышц голени 160,5±3,28* 249,1±7,31* 302,9±6,46* Моделирование критической ишемии мышц голени и ее коррекция симвастатином и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга 283,8±17,52 439,6±9,14 540,1±15,26 Примечание: * - р<0,05 в сравнении с интактной группой животных; ** - р<0,05 в сравнении с группой животных с критической ишемией мышц голени

Среднее значение уровня микроциркуляции в интактной мышце голени крыс составило 531±12 ПЕ (перфузионных единиц).

В группе ложнооперированных животных среднее значение уровня микроциркуляции в мышцах левой голени на всех сроках не имеет достоверных отличий от показателей в группе интактных животных (523 ± 13 ПЕ). В группе моделирования критической ишемии мышц голени уровень микроциркуляции на всех сроках приводило к достоверному снижению уровня регионарного кровотока в ишемизированной мышце голени крыс (10-е сутки р<0,05, 21-е сутки р<0,05; 28-е сутки р<0,05).

Коррекция симвастатином и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга способствовала достоверному повышению уровня регионарного кровотока в ишемизированной мышце голени крыс по сравнению с показателями группы животных с критической ишемией мышц голени на соответствующем сроке (10-е сутки р<0,05, 21-е сутки р<0,05; 28-е сутки р<0,05). Уровень микроциркуляции в данной группе на 28-е сутки приближается к показателю в группе интактных животных.

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию ишемии скелетной мышцы комбинацией симвастатина и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга за счет стимуляции неоангиогенеза.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и хирургии, может быть использовано для моделирования критической ишемии скелетной мышцы. Способ фармакологической коррекции экспериментальной критической ишемии скелетной мышцы комбинацией симвастатина и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга, заключающийся в экспериментальном моделирование на крысах критической ишемии скелетной мышцы и проводении ее коррекции путем внутрижелудочного введения симвастатина в дозе 0,86 мг/кг 1 раз в сутки ежедневно в течение 14 дней и однократным параэнтеральным введением мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга на 7-е сутки после моделирования критической ишемии по 50 мкл в 4 точки: паравазально над паховой связкой в место отхождения от внутренней подвздошной артерии латеральной артерии, огибающих бедренную кость, под паховой связкой в область поверхностной артерии, огибающей подвздошную кость, в область отхождения мышечной ветви бедренной артерии r. muscularis, место прикрепления гребенчатой и длинной приводящей мышц бедра, в верхнюю треть икроножной мышцы. Вышеописанный способ позволяет корректировать ишемию скелетной мышцы симвастатином и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга в условиях комбинированной терапии. 1 табл., 1 пр.

Способ фармакологической коррекции экспериментальной критической ишемии скелетной мышцы комбинацией симвастатина и мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга, включающий экспериментальное моделирование ишемии мышц голени, отличающийся тем, что на крысах моделируется критическая ишемия скелетной мышцы и проводится ее коррекция путем внутрижелудочного введения симвастатина в дозе 0,86 мг/кг 1 раз в сутки ежедневно в течение 14 дней и однократного параэнтерального введения мононуклеарной фракцией аутологичного костного мозга на 7-е сутки после моделирования критической ишемии по 50 мкл в 4 точки: паравазально над паховой связкой в место отхождения от внутренней подвздошной артерии латеральной артерии, огибающих бедренную кость, под паховой связкой в область поверхностной артерии, огибающей подвздошную кость, в область отхождения мышечной ветви бедренной артерии r. muscularis, место прикрепления гребенчатой и длинной приводящей мышц бедра, в верхнюю треть икроножной мышцы.