СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ НОВООБРАЗОВАНИЙ ОКОЛОУШНОЙ СЛЮННОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПО СОДЕРЖАНИЮ БИОМАРКЕРОВ В РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ ПАЦИЕНТА Российский патент 2014 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента и может быть использовано в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных новообразований органов полости рта в условиях стоматологических, онкологических и хирургических лечебных заведений.

Известен способ прогнозирования и диагностики плоскоклеточного рака головы и шеи по содержанию матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в плазме крови пациента, включающий исследования плазмы венозной крови, при этом сыворотку крови забирали стандартным способом у больных плоскоклеточным раком головы и шеи после постановки диагноза до начала лечебных процедур. Сыворотку хранили при температуре -50°С не более 10 месяцев и размораживали не более 1 раза для иммуноферментного определения содержания матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов с использованием наборов для твердофазного иммуноферментного анализа на ИФА-анализаторе (см. Клишо Е.В. Матриксные металлопротеиназы и их тканевые ингибиторы при плоскоклеточном раке головы и шеи, автореферат диссертации д.м.н., Томск, 2011 г., с.43).

Однако известный способ при своем использовании имеет следующие недостатки:

- обладает недостаточной точностью дифференциальной диагностики новообразований околоушной слюнной железы в день обращения пациента,

- обладает недостаточной чувствительностью дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований околоушной слюнной железы,

- недостаточность вероятности выявления процесса доброкачественных и злокачественных новообразований околоушной слюнной железы в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних,

- сложность подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала,

- возможность инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала,

- сложность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей).

Задачей изобретения является создание способа качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента.

Техническим результатом является достижение значительного повышения точности дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований околоушной слюнной железы, достижение высокой вероятности выявления процесса доброкачественных и злокачественных новообразований околоушной слюнной железы в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала, отсутствие инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала, а также возможность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей).

Технический результат достигается тем, что предложен способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, включающий исследования ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента производится до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований, при этом ротовую жидкость забирают у пациента для качественных экспресс-исследований новообразований околоушной слюнной железы, в качестве биомаркера при качественной дифференциальной экспресс-диагностике новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) группы клинического контроля принимают уровень 23,85-39,65 нг/мл, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 611,32-792,00 нг/мл, то диагностируют аденому околоушной слюнной железы пациента, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 496,86-570,33 нг/мл, то диагностируют рак околоушной слюнной железы пациента, в качестве биомаркера для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) и определяют ее количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) группы клинического контроля принимают уровень 108,14-180,47 нг/мл, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 326,43-458,23 нг/мл, то диагностируют аденому околоушной слюнной железы пациента, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 782,13-906,60 нг/мл, то диагностируют рак околоушной слюнной железы пациента, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента. При этом при необходимости кратковременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут, забирают поверхностную часть в виде надосадочной жидкости в количестве 1 мл, помещают в пробирку «salicaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С. При этом в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациента, дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Способ осуществляют следующим образом. Ротовую жидкость забирают у пациента для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы. Выполняют забор ротовой жидкости пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациента центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляют ротовую жидкость физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторно центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещают в кювету и выполняют метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител. При этом при необходимости кратковременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут, забирают поверхностную часть в виде надосадочной жидкости в количестве 1 мл, помещают в пробирку «salicaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента. При этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) группы клинического контроля принимают уровень 23,85-39,65 нг/мл.

Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 611,32-792,00 нг/мл, то диагностируют аденому околоушной слюнной железы пациента.

Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 496,86-570,33 нг/мл, то диагностируют рак околоушной слюнной железы пациента.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) группы клинического контроля принимают уровень 108,14-180,47 нг/мл.

Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 326,43-458,23 нг/мл, то диагностируют аденому околоушной слюнной железы пациента.

Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 782,13-906,60 нг/мл, то диагностируют рак околоушной слюнной железы пациента.

Затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента.

При этом в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациента дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Среди существенных признаков, характеризующих предложенный способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, отличительными являются:

- отсутствие выполнения забора венозной крови у пациента для качественных экспресс исследований новообразований околоушной слюнной железы,

- выбор в качестве биомаркера для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определение его количественного содержания в ротовой жидкости пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 23,85-39,65 нг/мл отсутствие новообразования околоушной слюнной железы у пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 611,32-792,00 нг/мл аденомы околоушной слюнной железы пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 496,86-570,33 нг/мл рака околоушной слюнной железы пациента,

- выбор в качестве биомаркера для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) и определение его количественного содержания в ротовой жидкости пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 108,14-180,47 нг/мл отсутствие новообразования околоушной слюнной железы у пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 326,43-458,23 нг/мл аденомы околоушной слюнной железы пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 782,13-906,60 нг/мл рака околоушной слюнной железы пациента,

- прогнозирование по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента тактики его лечения,

- выполнение при необходимости кратковременного хранения ротовой жидкости пациента перед проведением анализа ее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут, забирают поверхностную часть в виде надосадочной жидкости в количестве 1 мл, помещают в пробирку «salicaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С,

- дополнительное осуществление в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациента контрольного определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Экспериментальные исследования предложенного способа качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента в клинических условиях показали его высокую эффективность. Способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента при своем использовании обеспечивает достижение значительного повышения точности дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований околоушной слюнной железы, достижение высокой вероятности выявления процесса доброкачественных и злокачественных новообразований околоушной слюнной железы в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала, отсутствие инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала, а также возможность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей). Кроме того, предложенный способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента обеспечил при практическом использовании значительное повышение качества жизни пациентов.

Реализация предложенного способа качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациент Г., 54 года, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование околоушной слюнной железы слева».

Ротовую жидкость забирали у пациента для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 662,00 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 362,70 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали аденому левой околоушной слюнной железы. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными пациенту было назначено хирургическое лечение: резекция околоушной слюнной железы.

Пример 2. Пациентка С., 84 года, поступила в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование околоушной слюнной железы справа».

Ротовую жидкость забирали у пациентки для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы. Выполняли забор ротовой жидкости у пациентки до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациентки центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. При этом в связи с преклонным возрастом пациентки возникла необходимость кратковременного хранения ее ротовой жидкости, поэтому перед выполнением анализа ее центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, забирали поверхностную часть в виде надосадочной жидкости в количестве 1 мл, помещали в пробирку «salicaps» и сразу замораживали в морозильной камере при температуре минус 80°С. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациентки размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 792,00 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациентки матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 432,90 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали аденому околоушной слюнной железы справа. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными пациентке было назначено хирургическое лечение: резекция околоушной слюнной железы.

Пример 3. Пациент Д., 49 лет, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование околоушной слюнной железы слева».

Ротовую жидкость забирали у пациента для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 693,20 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 397,50 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали аденому левой околоушной слюнной железы. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными пациенту было назначено хирургическое лечение: резекция околоушной слюнной железы.

Пример 4. Пациентка В., 55 лет, поступила в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование околоушной слюнной железы слева».

Ротовую жидкость забирали у пациентки для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы. Выполняли забор ротовой жидкости у пациентки до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи. Ротовую жидкость пациентки центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациентки размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 523, 50 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациентки матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 886,90 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали рак левой околоушной слюнной железы. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными, пациентке было назначено комбинированное лечение: предоперационная лучевая терапия на опухоль и пути регионарного метастазирования на 1-м этапе, лимфодиссекция шеи на стороне поражения с резекцией околоушной слюнной железы на 2-м этапе.

Пример 5. Пациентка М., 65 лет, поступила в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование околоушной слюнной железы справа».

Ротовую жидкость забирали у пациентки для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы. Выполняли забор ротовой жидкости у пациентки до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи. Ротовую жидкость пациентки центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли ротовую жидкость физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациентки размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 570,33 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 782,13 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали рак правой околоушной слюнной железы. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными пациентке было назначено комбинированное лечение: предоперационная лучевая терапия на опухоль и пути регионарного метастазирования на 1-м этапе, лимфодиссекция шеи на стороне поражения с резекцией околоушной слюнной железы на 2-м этапе.

Пример 6. Пациент Ф., 57 лет, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование околоушной слюнной железы справа».

Ротовую жидкость забирали у пациента для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1: 100 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 526,20 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксную металлопротеиназу 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в количестве 897,50 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали аденому (доброкачественное новообразование) левой околоушной слюнной железы. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными пациенту было назначено комбинированное лечение:

предоперационная лучевая терапия на опухоль и пути регионарного метастазирования на 1-м этапе, лимфодиссекция шеи на стороне поражения с резекцией околоушной слюнной железы на 2-м этапе.

Установленные клинические диагнозы впоследствии подтвердились результатами выполненной морфологической верификации предварительно взятого у всех пациентов биопсийного материала из очага поражения.

При этом в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациентов, дополнительно осуществляли контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациентов, по результатам которых судили об эффективности выбранного лечения у пациентов.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу качественной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости. Способ включает исследование ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента производится до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител, с последующим анализом результатов исследований, при этом ротовую жидкость забирают у пациента для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости, в качестве биомаркера выбирают матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера ММП 8 в ротовой жидкости группы клинического контроля принимают уровень 23,85-39,65 нг/мл, и при содержании ММП 8 в количестве 611,32-792,00 нг/мл диагностируют аденому околоушной слюнной железы пациента, а при содержании ММП 8 в количестве 496,86-570,33 нг/мл диагностируют рак околоушной слюнной железы пациента, также определяют количественное содержание матриксной металлопротеиназы 9 / matrix metalloproteinase 9 (ММП 9 / ММР 9) в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера ММП 9 группы клинического контроля принимают уровень 108,14-180,47 нг/мл, и при содержании ММП9 в количестве 326,43-458,23 нг/мл диагностируют аденому околоушной слюнной железы пациента, а при содержании ММП 9 в количестве 782,13-906,60 нг/мл диагностируют рак околоушной слюнной железы пациента, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента. Способ обеспечивает значительное повышение точности, чувствительности дифференциальной экспресс-диагностики, достижение высокой вероятности выявления процессов доброкачественных и злокачественных новообразований в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, а также значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала. 2 з.п. ф-лы, 6 пр.

1. Способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, включающий исследования ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента производится до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований, отличающийся тем, ротовую жидкость забирают у пациента для исследований новообразований, в качестве биомаркера при качественной дифференциальной экспресс-диагностике новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 8/matrix metalloproteinase 8 (ММП 8/ММР 8) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 8/matrix metalloproteinase 8 (ММП 8/ММР 8) группы клинического контроля принимают уровень 23,85-39,65 нг/мл, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 8/matrix metalloproteinase 8 (ММП 8/ММР 8) в количестве 611,32-792,00 нг/мл, то диагностируют аденому околоушной слюнной железы пациента, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8/matrix metalloproteinase 8 (ММП 8/ММР 8) в количестве 496,86-570,33 нг/мл, то диагностируют рак околоушной слюнной железы пациента, в качестве биомаркера для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований околоушной слюнной железы по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 9/matrix metalloproteinase 9 (ММП 9/ММР 9) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 9/matrix metalloproteinase 9 (ММП 9/ММР 9) группы клинического контроля принимают уровень 108,14-180,47 нг/мл, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 9/matrix metalloproteinase 9 (ММП 9/ММР 9) в количестве 326,43-458,23 нг/мл, то диагностируют аденому околоушной слюнной железы пациента, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 9/matrix metalloproteinase 9 (ММП 9/ММР 9) в количестве 782,13-906,60 нг/мл, то диагностируют рак околоушной слюнной железы пациента, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при необходимости кратковременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут, забирают поверхностную часть в виде надосадочной жидкости в количестве 1 мл, помещают в пробирку «salicaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациента, дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.