Изобретение относится к области медицины, а именно к способу дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента и может быть использовано в дифференциальной диагностике воспалительных заболеваний и злокачественных новообразований органов полости рта в условиях стоматологических, онкологических и хирургических лечебных заведений.
Известен способ прогнозирования и диагностики плоскоклеточного рака головы и шеи по содержанию матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в плазме крови пациента, включающий исследования плазмы венозной крови, при этом сыворотку крови забирали стандартным способом у больных плоскоклеточным раком головы и шеи после постановки диагноза до начала лечебных процедур. Сыворотку хранили при температуре -50°С не более 10 месяцев и размораживали не более 1 раза для иммуноферментного определения содержания матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов с использованием наборов для твердофазного иммуноферментного анализа на ИФА-анализаторе (см. Клишо Е.В., Матриксные металлопротеиназы и их тканевые ингибиторы при плоскоклеточном раке головы и шеи, автореферат диссертации д.м.н., Томск, 2011 г., с. 43).
Однако известный способ при своем использовании имеет следующие недостатки:
- обладает недостаточной точностью дифференциальной диагностикой образований слизистой оболочки языка в день обращения пациента,
- обладает недостаточной чувствительностью дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка,
- недостаточность вероятности выявления процессов воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки полости рта в организме пациента, как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних,
- сложность подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала,
- возможность инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала,
- сложность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей).
Задачей изобретения является создание способа дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента.
Техническим результатом является достижение значительного повышения диагностической точности дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка, достижение высокой вероятности выявления процесса воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка в организме пациента, как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, значительное упрощение подготовки пациента к определенным временным рамкам для забора и хранения диагностического материала, отсутствие инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала, а также возможность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей).
Технический результат достигается тем, что предложен способ дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, включающий исследования ротовой жидкости пациента, выполнение забора ротовой жидкости у пациента производится до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований, при этом ротовую жидкость забирают у пациента для дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, в качестве биомаркера при определении воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют их количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 2,32-3,38 нг./мл., а матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) группы клинического контроля принимают уровень 61,86-91,40 нг./мл., при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 115,52-185,86 нг./мл. и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 5,53-7,07 нг./мл., то диагностируют воспаление слизистой оболочки языка, при этом если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 8,89-19,75 нг./мл. и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1441,07-1848,89 нг./мл., то диагностируют плоскоклеточный рак слизистой оболочки языка при определении стоматологического здоровья, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента. При этом при необходимости долговременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, забирают супернатант в количестве 300 мкл., помещают в пробирку «salicaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С.
Способ осуществляют следующим образом. Ротовую жидкость забирают у пациента для дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка. Выполняют забор ротовой жидкости пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациента центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, разбавляют ротовую жидкость физиологическим раствором в соотношении 1: 100 и повторно центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещают в кювету и выполняют метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител. При этом при необходимости долговременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, забирают супернатант в количестве 300 мкл., помещают в пробирку «salicaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С.
В качестве биомаркера для дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют их количественное содержание в ротовой жидкости пациента. При этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 2,32-3,38 нг./мл., а матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) группы клинического контроля принимают уровень 61,86-91,40 нг./мл.
Если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 115,52-185,86 нг./мл. и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 5,53-7,07 нг./мл., то диагностируют воспаление слизистой оболочки языка.
Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 8,89-19,75 нг./мл. и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1441,07-1848,89 нг./мл., то диагностируют плоскоклеточный рак слизистой оболочки языка.
Среди существенных признаков, характеризующих предложенный способ дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, отличительными являются:
- отсутствие выполнения забора венозной крови у пациента для исследований новообразований слизистой оболочки языка,
- выбор в качестве биомаркера для дифференциальной диагностики слизистой оболочки языка по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определение его количественного содержания в ротовой жидкости пациента,
- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 2,32-3,38 нг./мл. отсутствие образования слизистой оболочки языка у пациента,
- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 115,52-185,86 нг./мл. воспаление слизистой оболочки языка пациента,
- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 8,89-19,75 нг./мл. плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка пациента,
- выбор в качестве биомаркера для дифференциальной диагностики слизистой оболочки языка по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определение его количественного содержания в ротовой жидкости пациента,
- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 61,86-91,40 нг./мл. отсутствие образования слизистой оболочки языка у пациента,
- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 5,53-7,07 нг./мл. воспаление слизистой оболочки языка пациента,
- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1441,07-1848,89 нг./мл. плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка пациента,
- выполнение при необходимости долговременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугирования при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, забора супернатанта в количестве 300 мкл., помещения в пробирку «salicaps» и немедленной заморозки в морозильной камере при температуре минус 80°С.
Экспериментальные исследования предложенного способа дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента в клинических условиях показали его высокую эффективность. Способ дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента при своем использовании обеспечивает достижение значительного повышения точности дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка, достижение высокой вероятности выявления процесса воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка в организме пациента, как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала, отсутствие инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала, а также возможность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей). Кроме того, предложенный способ дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента при практическом использовании значительное повышение качества жизни пациентов.
Реализация предложенного способа дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента иллюстрируется следующими клиническими примерами.
Пример 1. Пациент Е., 32 года, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «образование слизистой оболочки языка слева».
Ротовую жидкость забирали у пациента для дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка.
Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1: 100 и повторное центрифугирование при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований.
В качестве биомаркера для дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирали матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяли их количественное содержание в ротовой жидкости пациента.
В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 158,37 нг./мл. и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 6,74 нг./мл.
На основании полученных результатов диагностировали воспаление слизистой оболочки языка слева. Клинический диагноз также подтверждали клиническим обследование полости рта пациента.
Пример 2. Пациентка Я., 72 года, поступила в отделение с предположительным диагнозом: «образование слизистой оболочки языка справа».
Ротовую жидкость забирали у пациентки для дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка. Выполняли забор ротовой жидкости у пациентки до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациенткой, центрифугировали ротовую жидкость пациентки при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, разбавлением ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об./мин. в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациентки в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований.
В качестве биомаркера для дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирали матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяли их количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.
В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 16,35 нг./мл. и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1624,22 нг./мл.
На основании полученных результатов диагностировали рак слизистой оболочки языка справа. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости.
Установленные клинические диагнозы впоследствии подтвердились результатами выполненной морфологической верификации предварительно взятого у всех пациентов биопсийного материала из очага поражения.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента. Осуществляют забор ротовой жидкости пациента. Применяют метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований. В качестве биомаркеров выбирают матриксную металлопротеиназу 2 (ММП 2) и матриксную металлопротеиназу 8 (ММП 8), определяют их количественное содержание в ротовой жидкости пациента. За количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости ММП 2 группы клинического контроля принимают уровень 2,32-3,38 нг/мл, а ММП 8 группы клинического контроля принимают уровень 61,86-91,40 нг/мл. При определении содержания ММП 2 в количестве 115,52-185,86 нг/мл и ММП 8 в количестве 5,53-7,07 нг/мл диагностируют воспаление слизистой оболочки языка. При определении содержания ММП 2 в количестве 8,89-19,75 нг/мл и ММП 8 в количестве 1441,07-1848,89 нг/мл диагностируют плоскоклеточный рак слизистой оболочки языка. Способ обеспечивает повышение чувствительности и точности дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка, достижение высокой вероятности выявления процесса воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, значительное упрощение подготовки пациента к определенным временным рамкам для забора и хранения диагностического материала, отсутствие инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала, а также возможность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением за счет определения количества ММП 2 и ММП 8 в ротовой жидкости пациента. 1 з.п. ф-лы, 2 пр.
1. Способ дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки языка по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, включающий исследования ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента производится до или не ранее чем через 30 мин после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об/мин в течение 15 мин с охлаждением до плюс 5°С, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 мин с охлаждением до плюс 5°С, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований; в качестве биомаркеров выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8), определяют их количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 2,32-3,38 нг/мл, а матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) группы клинического контроля принимают уровень 61,86-91,40 нг/мл, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 115,52-185,86 нг/мл и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 5,53-7,07 нг/мл, то диагностируют воспаление слизистой оболочки языка, при этом если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 8,89-19,75 нг/мл и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1441,07-1848,89 нг/мл, то диагностируют плоскоклеточный рак слизистой оболочки языка.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при необходимости долговременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин с охлаждением до плюс 5°С, забирают супернатант в количестве 300 мкл, помещают в пробирку «salicaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С.
