СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ НОВООБРАЗОВАНИЙ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ДНА ПОЛОСТИ РТА ПО СОДЕРЖАНИЮ БИОМАРКЕРОВ В РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ ПАЦИЕНТА Российский патент 2014 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, и может быть использовано в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных новообразований органов полости рта в условиях стоматологических, онкологических и хирургических лечебных заведений.

Известен способ прогнозирования и диагностики плоскоклеточного рака головы и шеи по содержанию матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в плазме крови пациента, включающий исследования плазмы венозной крови, при этом сыворотку крови забирали стандартным способом у больных плоскоклеточным раком головы и шеи после постановки диагноза до начала лечебных процедур. Сыворотку хранили при температуре -50°C не более 10 месяцев и размораживали не более 1 раза для иммуноферментного определения содержания матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов с использованием наборов для твердофазного иммуноферментного анализа на ИФА-анализаторе (см. Клишо Е.В. Матриксные металлопротеиназы и их тканевые ингибиторы при плоскоклеточном раке головы и шеи, автореферат диссертации д.м.н., Томск, 2011 г., с.43).

Однако известный способ при своем использовании имеет следующие недостатки:

- обладает недостаточной точностью дифференциальной диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта в день обращения пациента,

- обладает недостаточной чувствительностью дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки дна полости рта,

- недостаточность вероятности выявления процесса доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки дна полости рта в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних,

- сложность подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала,

- возможность инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала,

- сложность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей).

Задачей изобретения является создание способа качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента.

Техническим результатом является достижение значительного повышения точности дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки дна полости рта, достижение высокой вероятности выявления процесса доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки дна полости рта в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала, отсутствие инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала, а также возможность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей).

Технический результат достигается тем, что предложен способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, включающий исследования ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента производится до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований, при этом ротовую жидкость забирают у пациента для качественных экспресс-исследований новообразований слизистой оболочки дна полости рта, в качестве биомаркера при качественной дифференциальной экспресс-диагностике новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 1,7-2,9 нг/мл, при этом если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 42,5-70,9 нг/мл, то диагностируют папиллому слизистой оболочки дна полости рта пациента, при этом если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 5,98-9,98 нг/мл, то диагностируют рак слизистой оболочки дна полости рта пациента, в качестве биомаркера для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают тканевой ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости тканевого ингибитора металлопротеиназы 2 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) группы клинического контроля принимают уровень 70,2-195,6 нг/мл, при этом если определяют содержание в ротовой жидкости пациента тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 218-313 нг/мл, то диагностируют папиллому слизистой оболочки дна полости рта пациента, при этом если определяют содержание в ротовой жидкости пациента тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 325,5-532,9 нг/мл, то диагностируют рак слизистой оболочки дна полости рта пациента, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента. При этом при необходимости кратковременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут, забирают поверхностную часть в виде надосадочной жидкости в количестве 1 мл, помещают в пробирку «salicaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°C. При этом в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациента дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Способ осуществляют следующим образом. Ротовую жидкость забирают у пациента для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта. Выполняют забор ротовой жидкости пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациента центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляют ротовую жидкость физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторно центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещают в кювету и выполняют метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител. При этом при необходимости кратковременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут, забирают поверхностную часть в виде надосадочной жидкости в количестве 1 мл, помещают в пробирку «salicaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°C.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента. При этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 1,7-2,9 нг/мл.

Если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 42,5-70,9 нг/мл, то диагностируют папиллому слизистой оболочки дна полости рта пациента.

Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 5,98-9,98 нг/мл, то диагностируют рак слизистой оболочки дна полости рта пациента.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают тканевой ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента. При этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) группы клинического контроля принимают уровень 70,2-195,6 нг/мл.

Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 218-313 нг/мл, то диагностируют папиллому слизистой оболочки дна полости рта пациента.

Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 325,5-532,9 нг/мл, то диагностируют рак слизистой оболочки дна полости рта пациента.

Затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента.

При этом в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациента дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Среди существенных признаков, характеризующих предложенный способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, отличительными являются:

- отсутствие выполнения забора венозной крови у пациента для качественных экспресс-исследований новообразований слизистой оболочки дна полости рта,

- выбор в качестве биомаркера для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определение его количественного содержания в ротовой жидкости пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 1,7-2,9 нг/мл отсутствие новообразования слизистой оболочки дна полости рта у пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 42,4-70,9 нг/мл папилломы слизистой оболочки дна полости рта пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2)в количестве 5,98-9,98 нг/мл рака слизистой оболочки дна полости рта пациента,

- выбор в качестве биомаркера для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) и определение его количественного содержания в ротовой жидкости пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 70,2-195,6 нг/мл отсутствие новообразования слизистой оболочки дна полости рта у пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 218-313 нг/мл папилломы слизистой оболочки дна полости рта пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 325,5-532,9 нг/мл рака слизистой оболочки дна полости рта пациента,

- прогнозирование по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента тактики его лечения,

- выполнение при необходимости кратковременного хранения ротовой жидкости пациента перед проведением анализа ее центрифугирования при 3000 об/мин в течение 15 минут, забора поверхностной части в виде надосадочной жидкости в количестве 1 мл, помещения в пробирку «salicaps» и сразу замораживания в морозильной камере при температуре минус 80°C,

- дополнительное осуществление в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациента контрольного определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Экспериментальные исследования предложенного способа качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента в клинических условиях показали его высокую эффективность. Способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента при своем использовании обеспечивает достижение значительного повышения точности дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки дна полости рта, достижение высокой вероятности выявления процесса доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки дна полости рта в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала, отсутствие инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала, а также возможность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей). Кроме того, предложенный способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента обеспечил при практическом использовании значительное повышение качества жизни пациентов.

Реализация предложенного способа качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациент С., 66 лет, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование слизистой оболочки дна полости рта слева».

Ротовую жидкость забирали у пациента для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 62,8 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациента ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 220 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали папиллому слизистой оболочки дна полости рта слева. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными пациенту было назначено хирургическое лечение: иссечение папилломы слизистой оболочки дна полости рта.

Пример 2. Пациентка Н., 91 год, поступила в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование слизистой оболочки дна полости рта справа».

Ротовую жидкость забирали у пациентки для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта. Выполняли забор ротовой жидкости у пациентки до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациентки центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. При этом в связи с преклонным возрастом пациентки возникла необходимость кратковременного хранения ее ротовой жидкости, поэтому перед выполнением анализа ее центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, забирали поверхностную часть в виде надосадочной жидкости в количестве 1 мл, помещали в пробирку «salicaps» и сразу замораживали в морозильной камере при температуре минус 80°C. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациентки размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 54,3 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациентки ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 276,5 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали папиллому слизистой оболочки дна полости рта справа. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными пациентке было назначено хирургическое лечение: иссечение папилломы слизистой оболочки дна полости рта.

Пример 3. Пациент К., 49 лет, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование слизистой оболочки дна полости рта слева».

Ротовую жидкость забирали у пациента для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 70,9 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациента ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 236,4 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали папиллому слизистой оболочки дна полости рта слева. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными пациенту было назначено хирургическое лечение: иссечение папилломы слизистой оболочки дна полости рта.

Пример 4. Пациентка Е., 36 лет, поступила в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование слизистой оболочки дна полости рта слева».

Ротовую жидкость забирали у пациентки для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта. Выполняли забор ротовой жидкости у пациентки до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи. Ротовую жидкость пациентки центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациентки размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 5,98 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациентки ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 439,1 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали рак слизистой оболочки дна полости рта слева. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными, пациентке было назначено комбинированное лечение: на 1-м этапе - иссечение новообразования слизистой оболочки дна полости рта и лучевая терапия на опухоль и пути регионарного метастазирования на 2-м этапе.

Пример 5. Пациентка X., 52 года, поступила в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование слизистой оболочки дна полости рта справа».

Ротовую жидкость забирали у пациентки для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта. Выполняли забор ротовой жидкости у пациентки до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи. Ротовую жидкость пациентки центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли ротовую жидкость физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациентки размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 8,76 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациента ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 325,5 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали рак слизистой оболочки дна полости рта справа. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными, пациентке было назначено комбинированное лечение: на 1-м этапе - иссечение новообразования слизистой оболочки дна полости рта и лучевая терапия на опухоль и пути регионарного метастазирования на 2-м этапе.

Пример 6. Пациент О., 62 года, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «новообразование слизистой оболочки дна полости рта справа».

Ротовую жидкость забирали у пациента для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациента центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут, разбавляли физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторно центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещали в кювету и выполняли метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 6,8 нг/мл, а также установили содержание в ротовой жидкости пациента ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 493,08 нг/мл. На основании полученных результатов диагностировали рак слизистой оболочки дна полости рта слева. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными, пациенту было назначено комбинированное лечение: на 1-м этапе - иссечение новообразования слизистой оболочки дна полости рта и лучевая терапия на опухоль и пути регионарного метастазирования на 2-м этапе.

Установленные клинические диагнозы впоследствии подтвердились результатами выполненной морфологической верификации предварительно взятого у всех пациентов биопсийного материала из очага поражения.

При этом в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациентов, дополнительно осуществляли контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациентов, по результатам которых судили об эффективности выбранного лечения у пациентов.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу качественной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки дна полости рта. Способ осуществляют путем определения содержания биомаркеров - матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в ротовой жидкости пациента, забранной до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. На основании полученных значений диагностируют папиллому или рак слизистой оболочки дна полости рта пациента. Применение изобретения обеспечивает достижение значительного повышения точности дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований слизистой оболочки дна полости рта в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной экспресс-диагностики, достижение высокой вероятности выявления процессов доброкачественных и злокачественных новообразований в организме пациента как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, а также значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала. 2 з.п. ф-лы, 5 пр.

1. Способ качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, включающий исследования ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента производится до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об./мин. в течение 15 минут, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:10 и повторное центрифугирование при 3000 об./мин. в течение 15 минут, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение стандартного метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований, отличающийся тем, ротовую жидкость забирают у пациента для исследований новообразований, в качестве биомаркера при качественной дифференциальной экспресс-диагностике новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 1,7-2,9 нг./мл., при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 42,5-70,9 нг./мл., то диагностируют папиллому слизистой оболочки дна полости рта пациента, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 5,98-9,98 нг./мл., то диагностируют рак слизистой оболочки дна полости рта пациента, в качестве биомаркера для качественной дифференциальной экспресс-диагностики новообразований слизистой оболочки дна полости рта по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают тканевой ингибитор металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) и определяют его количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) группы клинического контроля принимают уровень 70,2-195,6 нг./мл., при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 218-313 нг./мл., то диагностируют папиллому слизистой оболочки дна полости рта пациента, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости пациента тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 / tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (ТИМП 1 / TIMP 1) в количестве 325,5-532,9 нг./мл., то диагностируют рак слизистой оболочки дна полости рта пациента, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при необходимости кратковременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 15 минут, забирают поверхностную часть в виде надосадочной жидкости в количестве 1 мл., помещают в пробирку «salicaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в процессе до выполнения или после окончания оперативного вмешательства с предоперационным, в том числе химиолучевым лечением пациента дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.