СПОСОБ ПРОГНОЗА АНЕМИИ У БЕРЕМЕННЫХ Российский патент 2014 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования, развития анемии у беременных.

Среди экстрагенитальных заболеваний, осложняющих течение беременности и родов анемия занимает ведущее место. Около 90% всех анемий у беременных приходится на долю железодефицитной анемии (ЖДА) [Шехтман, М.М. Железодефицитная анемия и беременность // Гинекология. - 2006. - №6. - С.164-170]. Анемия приводит к плацентарной недостаточности, задержке развития плода, а также к высокому проценту преждевременных родов [Сидорова И.С., Унанян А.Л. Невынашивание беременности: нарушение антиоксидантной защиты и ее коррекция//Российский вестник акушера-гинеколога. - 2009. - №1. - С.14-16].

Известен способ диагностики ЖДА путем определения концентрации ферритина в сыворотке крови иммуноферментным методом [Lee М., Burgett M.W. A solid phase enzyme immunoassay for the quantitation of serum ferritin // Clin. Chim. Acta. - 1981. - Vol.112 (2). - P.241-246]. При концентрации сывороточного ферритина менее 15 мкг/л диагностируют железодефицитное состояние. Недостатками данного способа являются: неспецифичность (увеличение концентрации сывороточного ферритина при любых инфекционных и воспалительных процессах); на поздних сроках беременности способ не информативен; высокая себестоимость метода; из-за высокой себестоимости и сложности диагностики предложенный способ не используют в клинической практике женских консультаций и родильных домов.

Известен способ диагностики скрытого дефицита железа путем определения концентрации трансферриновых рецепторов в плазме крови [Carriaga M. Serum transferrin receptor for detection of iron deficiency in pregnancy // Am. J. Clin. Nutr. - 1991. - Vol.54. - P.1077-1081]. Повышение уровня более 13,5 мг/л является ранним признаком дефицита железа при беременности. Недостатком предложенного способа является низкая его специфичность. Показатель уровня трансферриновых рецепторов может повышаться при увеличении образования эритроцитов, что снижает специфичность данного способа.

Известен способ диагностики дефицита железа путем исследования морфологии эритроцитов в фиксированных мазках периферической крови [Гребенникова Л.Г. Диагностика ранней стадии дефицита железа // ИнВестРегион. - 2008. - №1. - С.57-59]. Данный способ выбран нами в качестве прототипа. Способ имеет существенные недостатки: отсутствие достоверных параметров измерения формы эритроцитов; невозможность применения в клинической практике из-за субъективизма в определении морфологии эритроцитов; результат диагностики зависит от качества приготовления препаратов.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка технически более простого и точного способа прогноза анемии у беременных.

Технический результат - простой, не требующий больших материальных затрат способ, основанный на выявлении неэффективного эритропоэза в результате снижения активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ).

Технический результат предложенного нами способа достигается на основании выявления неэффективного эритропоэза и образования низкоактивных эритроцитов. Г-6-ФДГ - основной энзим пентозофосфатного пути превращения глюкозы, единственного источника восстановленной формы никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ) для адекватной антиоксидантной защиты эритроцитов. При дефиците Г-6-ФДГ в эритроцитах нарушается способность превращения окисленного глутатиона в восстановленный, в результате чего подавляется глутатионпероксидазная антиоксидантная активность эритроцитов. В результате этого эритпоциты легко поддаются гемолизу под влиянием окисляющих агентов с развитием анемии [Kozar R.A., Weibel C.J., Cipolla J. et al. Antioxidant enzymes are induced during recovery from acute lung injuri. - Critical Care Medicine. - 2000. - №28(7). - P.86-91]. Снижение активности Г-6-ФДГ в эритроцитах, определяемое по интенсивности образования гранул формазина в эритроцитах, позволяет оценить степень неэффективного эритропоэза и на основании этого прогнозировать развитие анемии.

Технический результат достигается тем, что согласно изобретения при увеличении в периферической крови до 25-40% количества эритроцитов, содержащих не более 5 гранул формазана в одном эритроците по результатам цитохимического определения активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, прогнозируют развитие анемии.

Предложенный способ осуществляют следующим образом.

Пробирки для отбора крови предварительно нагревают при температуре 37°C. У обследуемых пациентов берут кровь из пальца в количестве 0,05 мкл, переносят в пробирки и смешивают с 0,1 мкл буферного раствора, состоящего из глюкозо-6-фосфат динатриевой соли - 40 мг, НАДФ - 15 мг, MgCl₂ - 200 мг, n-нитротетразолий фиолетового 20 мг, метиленовой сини 10 мг, гепарина «Рихтер» 25000 МЕ - 0,5 мг в 10 мл и трис-буфера с pH=8,0. Кровь в буферном растворе выдерживают в термостате при 37°C в течение 30 минут. Затем готовят мазок крови, высушивают и микроскопируют, используя окуляр с увеличением на 10 и объектив - ×90. При микроскопии мазков подсчитывают количество гранул формазана в каждом из 100 эритроцитов. Определяют процент низкоактивных эритроцитов, в которых содержится 5 и менее гранул формазана. При 25-40% низкоактивной популяции эритроцитов прогнозируют развитие анемии у беременных.

Низкое количество гранул формазана в эритроцитах свидетельствует об неэффективном эритропоэзе, срыве адаптивных механизмов в организме, что позволяет прогнозировать у пациентов развитие анемии.

Примеры практического использования предлагаемого способа.

Пример 1.

Беременная В., 25 лет (индивидуальная карта беременной №683, история родов 213), встала на учет в женскую консультацию в сроке 8 недель. Из анамнеза известно, что менструальная функция у женщины с 13 лет, установилась сразу. Менструации по 4 дня, через 29 дней, регулярные, безболезненные. Последняя менструация 14.05.2010 г. Гинекологически здорова. Половая жизнь с 18 лет. В зарегистрированном браке. Настоящая беременность вторая. Предыдущая беременность закончилась срочными родами в 2010 году, родился мальчик весом 3450, ростом 50 см. Беременность протекала на фоне анемии, роды осложнились ранним излитием околоплодных вод, послеродовой период осложнился гипогалактией.

На основании анамнеза женщина относится к группе риска развития анемии. Женщине проведено исследование активности Г-6-ФДГ. Пробирки для отбора крови предварительно нагревали при температуре 37°C. У пациентки взяли кровь из пальца в количестве 0,05 мкл, перенесли в пробирку и смешали с 0,1 мкл буферного раствора, состоящего из глюкозо-6-фосфат динатриевой соли - 40 мг, НАДФ - 15 мг, MgCl₂ - 200 мг, n-нитротетразолий фиолетового 20 мг, метиленовой сини 10 мг, гепарина «Рихтер» 25000 м.е. - 0,5 мг в 10 мл и 0,02 мкл трис-буфера с pH=8,0. Кровь в буферном растворе выдерживали в термостате при 37°C в течение 30 минут. Затем готовили мазок крови, высушивали и микроскопировали, используя окуляр с увеличением на 10 и объектив - ×90. При микроскопии мазка подсчитывали количество гранул формазана в каждом из 100 эритроцитов. Определили процент низкоактивных эритроцитов, в которых содержалось 5 и менее гранул формазана. Популяция низкоактивных эритроцитов составила 33%. Предложенный способ позволил прогнозировать развитие анемии.

Через 3 недели проведенное лабораторное исследование показало: OAK (эритроциты 3,0×1012/л, Нв - 105 г/л, сывороточное железо 11,3 мкмоль/л, популяция низкоактивных эритроцитов - 38%. У больной зарегистрирована анемия.

Роды раньше срока (36 недель), осложнились вторичной слабостью родовой деятельности, по поводу чего проводилось родоусиление окситоцином. Родоразрешилась живым недоношенным ребенком весом 2600 г, ростом 45 см с оценкой по шкале Апгар 7/7 баллов. Послеродовый период осложнился гипогалактией.

Пример 2.

Беременная В., 30 лет (индивидуальная карта беременной №1023, история родов 108), встала на учет в женскую консультацию в сроке 9 недель. Из анамнеза известно, что менструальная функция у женщины с 15 лет, установилась сразу. Менструации по 5 дней, через 30 дней, регулярные, безболезненные. Гинекологически здорова. Половая жизнь с 18 лет. В зарегистрированном браке. Настоящая беременность первая, желанная. Профессия - продавец. Экологический фон места жительства неблагоприятный. Из экстрагенитальных заболеваний отмечает хронический пиелонефрит.

На основании анамнеза женщина относится к группе риска развития анемии.

Женщине проведено исследование активности Г-6-ФДГ в эритроцитах. Пробирки для отбора крови предварительно нагрели при температуре 37°C. У пациентки взяли кровь из пальца в количестве 0,05 мкл и смешали с 0,1 мкл буферного раствора, состоящего из глюкозо-6-фосфат динатриевой соли - 40 мг, НАДФ - 15 мг, MgCl₂ - 200 мг, n-нитротетразолий фиолетового 20 мг, метиленовой сини 10 мг, гепарина «Рихтер» 25000 м.е. - 0,5 мг в 10 мл и 0,02 мкл трис-буфера с pH=8,0. Кровь в буферном растворе выдержали в термостате при 37°C в течение 30 минут. Затем приготовили мазок крови, высушили и микроскопировали, используя окуляр с увеличением на ×10 и объектив - ×90. При микроскопии мазка подсчитывали количество гранул формазана в каждом из 100 эритроцитов. Определили процент низкоактивных эритроцитов, в которых содержалось 5 и менее гранул формазана. Популяция низкоактивных эритроцитов составила 14%. Прогноз беременности благоприятный, без развития анемии.

Роды закончились в срок, без осложнений. Родился живой доношенный ребенок весом 3500 г ростом 52 см с оценкой по шкале Апгар 8/8 баллов.

Пример 3. Беременная С., 33 года (индивидуальная карта беременной №1083, история родов 413), встала на учет в женскую консультацию в сроке 6 недель. Из анамнеза известно, что менструальная функция у женщины с 14 лет, установилась сразу, менструации по 5 дней, через 30 дней, регулярные, обильные, безболезненные. Гинекологические заболевания - миома тела матки. В зарегистрированном браке. Настоящая беременность вторая, желанная. Предыдущая беременность закончилась срочными родами в 2005 году, родился мальчик весом 3750, ростом 52 см. Беременность протекала на фоне анемии, роды осложнились дискоординацией родовой деятельности, послеродовый период осложнился ранним гипотоническим кровотечением.

На основании анамнеза женщина относится к группе риска развития анемии. Проведено лабораторное исследование: эритроциты 3,5×1012/л, Нв - 123 г/л, сывороточное железо 18,2 мкмоль/л.

Женщине проведено исследование активности Г-6-ФДГ в эритроцитах. Пробирки для отбора крови предварительно нагрели при температуре 37°C. У пациентки взяли кровь из пальца в количестве 0,05 мкл и смешали с 0,1 мкл буферного раствора, состоящего из глюкозо-6-фосфат динатриевой соли - 40 мг, НАДО - 15 мг, MgCl₂ - 200 мг, n-нитротетразолий фиолетового 20 мг, метиленовой сини 10 мг, гепарина «Рихтер» 25000 м.е. - 0,5 мг в 10 мл и 0,02 мкл трис-буфера с pH=8,0. Кровь в буферном растворе выдержали в термостате при 37°C в течение 30 минут. Затем приготовили мазок крови, высушили и микроскопировали, используя окуляр с увеличением на ×10 и объектив - ×90. При микроскопии мазка подсчитывали количество гранул формазана в каждом из 100 эритроцитов. Определили процент низкоактивных эритроцитов, в которых содержалось 5 и менее гранул формазана. Популяция низкоактивных эритроцитов составила 36%. Прогноз неблагоприятный, возможно развитие анемии. Полученные показатели указывают на активацию неэффективного эритропоэза, что является предиктором развития анемии. В связи с этим начата селективная профилактика дефицита железа путем назначения витаминно-минерального комплекса («Витрум Пренатал») в дневное время и 100 мг элементарного железа («Сорбифер Дурулес») в вечернее время [Серов В.П., Бурлев В.А., Коноводова Е.Н. Лечение манифестного дефицита железа у беременных и родильниц (медицинская технология). М.: МедЭкспертПресс, 2010. - 28 с]. Лабораторное исследование через 3 недели: эритроциты 3,6×10¹²/л, Нв - 128 г/л, сывороточное железо 20,3 мкмоль/л, популяция низкоактивных эритроцитов - 17,2%. Полученные показатели указывают на снижение доли неэффективного эритропоэза, что определяет положительный эффект от проводимой терапии. У больной анемии не отмечено.

Роды закончились в срок, без осложнений. Родился живой доношенный ребенок весом 3800 г ростом 54 см с оценкой по шкале Ангар 8/8 баллов.

Предлагаемый способ прогноза и ранней диагностики анемии внедрен на базе ГБУЗ ТО «Перинатальный центр» города Тюмени. Под наблюдением находилось 79 пациенток. В таблице 1 представлены результаты проведенных обследований.

Предложенный способ легко воспроизводим, не требует больших материальных затрат, позволяет прогнозировать развитие заболевания, сокращает время проведения лабораторных исследований по сравнению с прототипом и выполним в условиях медицинских учреждений. Предложенный способ позволяет прогнозировать анемию у беременных в 90% случаев. Общий экономический эффект на обследование 100 больных по сравнению с прототипом составляет 11370 рублей.

Способ прогноза анемии у беременных

Таблица 1 Результаты прогноза анемии у беременных по предложенному способу Номер группы обследованных беременных Количество обследованных беременных Популяция низкоактивных эритроцитов в переферической крови
(в %) Развитие анемии у беременных
(в %) 1 10 10-15 2 2 15 16-24 5 3 25 25-30 80 4 25 31-35 90 5 25 36-40 100

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования развития анемии у беременных. Способ характеризуется тем, что в забранной периферической крови определяют количество эритроцитов, содержащих не более 5 гранул формазана в одном эритроците по результатам цитохимического определения активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы. При увеличении их количества до 25-40% прогнозируют развитие анемии. Предложенный способ легко воспроизводим, не требует больших материальных затрат, позволяет прогнозировать развитие анемии, сокращает время проведения лабораторных исследований и выполним в условиях медицинских учреждений. Способ позволяет прогнозировать анемию у беременных в 90% случаев. 3 пр.

Способ прогноза анемии у беременных, отличающийся тем, что при увеличении в периферической крови до 25-40% количества эритроцитов, содержащих не более 5 гранул формазана в одном эритроците по результатам цитохимического определения активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, прогнозируют развитие анемии.