СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ УГРОЖАЮЩИХ ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫХ РОДОВ У ЖЕНЩИН С УГРОЗОЙ НЕВЫНАШИВАНИЯ РАННИХ СРОКОВ Российский патент 2009 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования угрожающих преждевременных родов у женщин с угрозой невынашивания ранних сроков.

Актуальность заявляемого способа определяется тем, что невынашивание беременности остается одной из ведущих проблем в современном акушерстве, оказывающей отрицательное воздействие на здоровье женщин и новорожденных. Развитие данной акушерской патологии, особенно в ранние сроки, происходит на фоне выраженных изменений в продукции различных цитокинов (Wegmann Т.О., Lin Н., Guilbert L., Mosmann T.R. Bidirectional cytokine interactions in the maternal-fetal relationship: is successful pregnancy a Th2 phenomenon? // Immunol. Today. - 1993. - Vol.14. - P.353-356., Chaouat G., Meliani A.A., Martal J. et al. IL-10 prevents naturally occurring fetal loss in the CBAxDBA/2 mating combination, and local defect in IL-10 production in this abortion-prone combination is corrected by in vivo injection of IFN-Y // J.Immunol. - 1995. - Vol.154. - P.4261-4268).

Прогнозирование угрожающих преждевременных родов, особенно на ранних сроках беременности, представляет сложную клиническую проблему (Сидельникова В.М. Невынашивание беременности.- М.: Медицина, 2001. - С.3).

Известен способ прогнозирования исходов беременности, отличающийся тем, что предварительно методом двухмерного ультразвукового сканирования определяют сторону преимущественного расположения плаценты, производят забор капиллярной крови, подсчитывают процентное содержание лимфоцитов и при наличии левостороннего расположения плаценты и содержания лимфоцитов в формуле крови 20% и менее прогнозируют неблагоприятный исход беременности (патент №2268466. Способ прогнозирования исходов беременности. / Орлов А.В., Боташева Т.Л., Железнякова Е.В., Имиева Т.Б., Мелконян О.Т. // Изобретения. Полезные модели. - 2006. - №2).

Способ имеет недостатки:

- способ чрезвычайно трудоемок, так как требует одновременного применения нескольких методов клинической и лабораторной диагностики;

- показатель формулы крови является довольно лабильным, и на его значение могут оказывать влияние различные факторы, не связанные с развитием данной акушерской патологии;

- не указано, с каких сроков беременности прогнозируется ее исход.

Наиболее близким по техническому решению является способ прогнозирования угрозы прерывания беременности с ранних сроков гестации, отличающийся тем, что у беременных определяют концентрацию эстриола, плацентарного лактогена и уровень интерлейкина 6 в сыворотке крови, вычисляют диагностический показатель (D) по формуле:

D=0,05·Х₁+0,07·Х₂-0,18·Х₃-0,37,

где X₁ - концентрация эстриола, нг/мл;

Х₂ - уровень интерлейкина 6, нг/мл

Х₃ - количество плацентарного лактогена, мг/л,

и при D менее 0 делают заключение об отсутствии лабораторных признаков развития угрозы прерывания беременности, а при D более 0, диагностируют наличие лабораторных признаков, характерных для развития данной патологии (патент №2285926. Способ прогнозирования угрозы прерывания беременности с ранних сроков гестации. / Чистякова Г.Н., Черданцева Г.А. // Изобретения. Полезные модели. - 2006 г., №29).

Данный способ был выбран нами в качестве прототипа. Однако он имеет ряд недостатков:

- метод ИФА, используемый для определения выбранных показателей, характеризуется низкой воспроизводимостью, так как чувствительность тест-систем различных фирм производителей колеблется в достаточно широких пределах;

- предложенный способ является дорогостоящим, так как требует одновременного определения трех различных показателей;

- интерпретация результатов по предложенному способу затруднительна, так как требует многочисленных математических вычислений;

- для проведения анализа требуется достаточно много времени - от 3-х до 5-ти часов, в зависимости от используемой тест-системы;

- не указаны точные сроки проведения обследования, а как известно уровень плацентарного лактогена и эстриола значительно колеблется в различные сроки беременности (Шмагель К.В., Черешнев В.А. Иммунитет беременной женщины. - М.: Медицинская книга, Н.Новгород: Изд-во НГМА, 2003. - 226 с.);

- низкая специфичность способа, поскольку уровень эстриола и плацентарного лактогена в сыворотке крови беременной женщины меняется при различной соматической патологии, хромосомных аномалиях плода, зависит от массы плода и плаценты (Шмагель К.В., Черешнев В.А. Иммунитет беременной женщины. - М.: Медицинская книга, Н.Новгород: Изд-во НГМА, 2003. - 226 с.; Ширшев С.В. Механизмы иммуноэндокринного контроля процессов репродукции. В 2 т. T.1. Екатеринбург: УрО РАН, 2002. - 430 с.).

Указанные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в 6-12 недель гестации в периферической венозной крови беременных женщин с угрозой невынашивания определяют соотношение показателей относительного содержания CD25+ к IL-2+ лимфоцитам и при его значении, равном или более 1,0, прогнозируют развитие угрозы преждевременных родов с точностью 82,6%, чувствительностью 90,0% и специфичностью 76,9%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать развитие угрозы преждевременных родов по определению индекса соотношения CD25+ к IL-2+ лимфоцитов (CD25+/IL-2+) в периферической венозной крови у беременных женщин с угрозой невынашивания в 6-12 недель беременности.

Показатель соотношения CD25+ к IL-2+ лимфоцитам в периферической крови ранее для прогнозирования развития угрожающих преждевременных родов не использовался. В литературе отсутствуют данные об изменении содержания IL-2+ лимфоцитов при угрозе невынашивания беременности и угрожающих преждевременных родах. В работе Левкович М.А. (2004) было показано увеличение общего содержания CD25+ лимфоцитов в периферической крови беременных женщин до 12 недель с клиническими признаками угрозы прерывания беременности, наиболее выраженные у женщин, беременность которых впоследствии досрочно прервалась. Однако в данной работе проводилось обследование женщин, имевших активную урогенитальную инфекцию (Левкович М.А. Роль иммунологических факторов в прогнозировании исхода беременности при урогенитальной инфекции. // Медицинская иммунология. - 2004. - Том 6. - №3-5. - С.382).

Молекула CD25+ является рецептором для IL-2 и экспрессируется различными популяциями иммунных клеток. Основная функция IL-2 заключается в стимуляции роста пула Т-лимфоцитов и естественных киллеров (Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология: Учебник.- М.: Медицина, 2000. - 432 с.). Увеличение соотношения CD25+/IL-2+ лимфоцитам в периферической крови женщин с развившейся угрозой преждевременных родов, вероятно, отражает повышенную пролиферацию Т-клеток и, возможно, ЕК, что может вести к усилению их эффекторного потенциала. Повышение функциональной активности Т-клеток и ЕК в свою очередь может вести к досрочному прерыванию беременности.

Способ осуществляется следующим образом:

1) К 3 мл гепаринизированной крови из кубитальной вены добавляют 3 мл Среды 199 и выделяют обогащенную популяцию мононуклеарных клеток стандартным методом скоростного центрифугирования. Скорость центрифугирования - 1500 оборотов/мин в течение 40 мин. Boum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood and bone marrow. // Scand. J. Clin. Invest - 1968. - v.21. - N97. - p.77).

2) Суспензию мононуклеарных клеток дважды отмывают физраствором, доводят концентрацию клеток до 1×10⁶ кл/мл.

3) В одной пробирке к 0,05 мл полученной суспензии добавляют 20 мкл моноклональных антител анти-CD25, конъюгированных с флюоресцеинизотиоцианатом (ООО «Сорбент», г.Москва, регистрационное удостоверение 29/2403 0301/1104-01 от 24 сентября 2001 г.). Клетки инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре в темноте, отмывают и фиксируют в 0,5 мл фиксирующего раствора CellFix™ (BD Biosciences, Belgium).

4) Параллельно во второй пробирке проводят процедуру внутриклеточного окрашивания с моноклональными антителами к IL-2 в соответствии с инструкциями фирмы-производителя, используя коммерческий набор FIX & PERM cell permeabilization kit (CALTAG Laboratories, США) для пермеабилизации клеточной мембраны. К 0,05 мл клеточной суспензии добавляют 100 мкл фиксирующего буфера А из набора FIX & PERM cell permeabilization kit и инкубируют в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте. Далее клетки отмывают от фиксирующего буфера и добавляют 100 мкл пермеабилизирующего буфера В и 1 мкл моноклональных антител к IL-2, меченных фикоэритрином, для внутриклеточного окрашивания (CALTAG Laboratories, США). Инкубируют в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте, отмывают и фиксируют в 0,5 мл фиксирующего раствора CellFix™ (BD Biosciences, Belgium).

5) Определяют относительное (процентное) количество CD25+ и IL-2+ лимфоцитов в лимфоцитарном гейте на проточном цитометре и вычисляют индекс соотношения CD25+ к IL-2+. При его значении, равном или большем 1,0, прогнозируют развитие угрожающих преждевременных родов с точностью 82,6%, чувствительностью 90,0% и специфичностью 76,9%.

Отличительными признаками заявленного способа являются:

- предложен новый прогностический параметр относительного содержания CD25+ к IL-2+ лимфоцитам (CD25+/IL-2+), при значении которого, равном или более 1,0, у женщин с угрозой невынашивания в 6-12 недель беременности прогнозируют развитие угрожающих преждевременных родов.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1. Пациентка С., 23 лет, беременность вторая, желанная. Первая беременность закончилась медицинским абортом в сроке 8 недель, без осложнений. В анамнезе: хр. аднексит, кольпит, хр.пиелонефрит, НЦД по гипотоническому типу. Течение настоящей беременности осложнилось угрозой прерывания во всех трех триместрах. По поводу чего в сроке 7-10, 22-24 и 34-36 недель находилась на стационарном лечении в НИИ МиД.

В сроке 7-8 недель поступила с диагнозом: угроза самопроизвольного выкидыша. При поступлении предъявляла жалобы на тянущие боли внизу живота. По УЗИ: гипертонус нижних отделов тела матки.

Было проведено обследование по заявленному способу:

содержание CD25+ составило 12,0%;

содержание IL25+ составило 7,0%;

отношение CD25+ к IL25+ равно 1,6 (>1.0).

Заключение: прогнозируются угрожающие преждевременные роды.

Проводилась сохраняющая терапия с эффектом. Симптомы угрозы прерывания беременности при выписке отсутствовали.

В сроке 23-24 недели повторная госпитализация с угрожающими преждевременными родами. Жалобы на тянущие боли внизу живота, отмечается повышенный тонус матки. По УЗИ: повышение тонуса матки по передней стенке.

При влагалищном исследовании: наружные половые органы развиты правильно, влагалище узкое, шейка матки несколько отклонена кзади, длиной 2,5 см, неоднородно размягчена. Наружный зев пропускает кончик пальца. Контуры таза не изменены. Выделения слизистые, умеренные.

Проводилась сохраняющая терапия гинипралом, а также терапия, улучшающая маточно-плацентарный кровоток и метаболизм, с эффектом. На момент выписки симптомы угрозы прерывания беременности купированы.

В сроке 34 недели вновь поступила на лечение в НИИ МиД с угрозой прерывания беременности. При поступлении предъявляет жалобы на тянущие боли внизу живота и пояснице. При наружном осмотре: матка при пальпации возбудима, безболезненна во всех отделах. Положение плода продольное, предлежание головное. Сердцебиение плода ясное, ритмичное, до 146 ударов в 1 мин.

При влагалищном исследовании: наружные половые органы развиты правильно, влагалище узкое, шейка матки несколько отклонена кзади, длиной 2,0 см, неоднородно размягчена. Цервикальный канал проходим для 1 исследующего пальца до внутреннего зева, последний сомкнут. Контуры таза не изменены. Выделения слизистые, умеренные. По данным УЗИ: беременность 34-35 недель. Повышен тонус по передней стенке матки.

Диагноз: Беременность 34-35 недель. Головное предлежание плода. Угрожающие преждевременные роды. Хроническая внутриутробная гипоксия плода.

Проводилась стандартная сохраняющая терапия, улучшение маточно-плацентарного кровотока и метаболизма. В сроке 36-37 недель беременности произошло дородовое излитие околоплодных вод. Беременность завершилась первыми преждевременными родами в сроке 36-37 недель и рождением недоношенного ребенка массой 2600 г, ростом 46 см, оценкой по шкале Апгар 7-8 баллов.

Прогноз угрожающих преждевременных родов подтвердился.

Пример 2. Пациентка X., 27 лет. Беременность первая, желанная. В анамнезе: эрозия шейки матки, миопия слабой степени, диффузное увеличение щитовидной железы 1 степени. Течение настоящей беременности осложнилось угрозой ее прерывания.

В сроке 8-10 недель стационарное лечение по поводу угрозы самопроизвольного выкидыша. Предъявляла жалобы на тянущие боли внизу живота, однократные мажущие кровянистые выделения. По данным УЗИ: умеренный гипертонус по передней стенке.

Проведено обследование по заявленному способу

содержание CD25+ составило 8,7%;

содержание IL25+ составило 3,6%;

отношение CD25+ к IL25+ равно 2,4 (>1.0).

Заключение: прогнозируются угрожающие преждевременные роды.

Проводилась сохраняющая терапия, с эффектом. При выписке симптомов угрозы прерывания беременности не было.

В сроке 33-34 недель вновь госпитализирована в отделение патологии беременности с угрозой преждевременных родов. Предъявляла жалобы на повышение тонуса матки.

По данным УЗИ в 33-34 недели: фетометрия соответствует сроку, гипертонус по передней стенке.

При наружном обследовании: матка при пальпации в повышенном тонусе, безболезненна во всех отделах. Положение плода продольное, предлежание головное. Сердцебиение плода ясное, ритмичное до 146 ударов в 1 минуту.

При влагалищном исследовании: наружные гениталии развиты правильно, влагалище узкое. Шейка матки отклонена кзади длиной 2,5 см, неравномерно размягчена. Цервикальный канал проходим для фаланги пальца до середины. Выделения слизистые, умеренные.

Диагноз: Беременность 33-34 недели. Головное предлежание плода. Угрожающие преждевременные роды. Миопия слабой степени. Диффузное увеличение щитовидной железы 1 ст. Эутиреоз.

Поводилась сохраняющая терапия, улучшение маточно-плацентарного кровотока. Беременность завершилась первыми своевременными родами в сроке 39 недель в головном предлежании и рождением ребенка массой 3450 г и ростом 54 см, с оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов.

Прогноз угрожающих преждевременных родов подтвердился.

Пример 3. Пациентка Е., 27 лет. Беременность первая, желанная. В анамнезе первичное бесплодие в течение 4-х лет, диффузное увеличение щитовидной железы 1 степени.

Течение данной беременности осложнилось угрозой самопроизвольного выкидыша в раннем сроке по поводу чего находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении НИИ МиД. При поступлении в 11-12 недель гестации отмечала тянущие боли внизу живота. По данным УЗИ - умеренный гипертонус по задней стенке.

Проведено обследование по заявленному способу:

содержание CD25+ составило 3,7%;

содержание IL25+ составило 5,4%;

отношение CD25+ к IL25+ равно 0,7 (<1.0).

Заключение: Прогнозируется течение беременности без угрозы преждевременных родов.

Проводилась сохраняющая терапия с эффектом. На момент выписки симптомы угрозы прерывания беременности отсутствовали. В дальнейшем беременность протекала без признаков угрозы прерывания беременности.

В сроке 38 недель поступила на дородовую госпитализацию с диагнозом: Беременность 38 недель. Головное предлежание плода. Сочетанный гестоз (водянка I ст.) на фоне анемии I ст. Зоб I ст. Эутиреоз. Хроническая внутриутробная гипоксия плода.

При наружном обследовании: матка при пальпации в нормотонусе, безболезненна во всех отделах, возбудима. Положение плода продольное, предлежание головное. Сердцебиение плода ясное, ритмичное, до 140 ударов в 1 минуту.

При влагалищном исследовании: наружные гениталии развиты правильно, влагалище узкое. Шейка матки отклонена кзади длиной 2,5 см, размягчена. Цервикальный канал проходим для 1 исследующего пальца. Складка перехода выражена умеренно. Выделения слизистые, умеренные.

Беременность завершилась первыми своевременными родами в сроке 39 недель в головном предлежании. Родился живой доношенный ребенок массой 3500 г, ростом 51 см, оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 4. Пациентка К., 23 лет. Беременность вторая, желанная. Первая беременность закончилась самопроизвольным выкидышем в ранние сроки (5-6 недель), без осложнений. В анамнезе: хр.аднексит, хроническая венозная недостаточность I степени. На учете в женской консультации состоит с 5-6 недель беременности, посещала регулярно. Течение настоящей беременности осложнилось угрозой ее прерывания, в связи с чем проводилась сохраняющая терапия в условиях стационара. Первая госпитализация проводилась в сроке 6-9 недель с угрозой самопроизвольного выкидыша. При поступлении предъявляла жалобы на тянущие боли внизу живота, мажущие кровянистые выделения из половых путей. По данным УЗИ: гипертонус по передней стенке матки.

Обследование по заявленному способу:

содержание CD25+ составило 5,3%;

содержание IL25+ составило 5,2%;

отношение CD25+ к IL25+ равно 1,0 (=1.0).

Заключение: прогнозируются угрожающие преждевременные роды.

В отделении проводилась сохраняющая терапия, с эффектом. Выписана с отсутствием жалоб, клинических признаков прерывания беременности.

В сроке 33 недели вновь поступила на стационарное лечение в ОПБ НИИ МиД с угрозой прерывания. Диагноз на момент поступления: Беременность 33-34 недели. Головное предлежание плода. Угроза преждевременных родов. При поступлении предъявляет жалобы на периодические тянущие боли внизу живота. При наружном осмотре: матка легко возбудима, безболезненна во всех отделах. Положение плода продольное, предлежит головка, неплотно прижата ко входу в малый таз. Сердцебиение плода ясное, ритмичное, до 146 ударов в минуту.

При влагалищном исследовании: наружные гениталии развиты правильно, влагалище узкое, шейка матки несколько отклонена кзади, неравномерно размягчена. Цервикальный канал проходим для 1 исследующего пальца. Плодный пузырь цел. Предлежит головка плода, прижата ко входу в малый таз. Контуры таза не изменены. Выделения слизистые, умеренные.

По данным УЗИ: повышен тонус передней стенки матки. Плацента толщиной 35 мм, расширены междолевые МВП.

Диагноз: Беременность 33-34 недели. Головное предлежание плода. Угроза преждевременных родов. Проводилась интенсивная сохраняющая терапия: (3 миметики внутривенно, а затем перорально, а также терапия, улучшающая маточно-плацентарный кровоток и метаболизм).

При беременности 38-39 недель произошли первые своевременные роды в головном предлежании. Родилась живая доношенная девочка весом 3400 г, ростом 52 см, с оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов. Прогноз угрожающих преждевременных родов подтвердился.

Результаты исследований сведены в таблицу.

ТаблицаПоказательКоличество обследованныхВсего женщин23Истинно-положительный результат9Ложно-положительный результат3Истинно-отрицательный результат10Ложно-отрицательный результат1Итого: точность заявляемого способа - 82,6%чувствительность заявляемого способа - 90,0%специфичность заявляемого способа - 76,9%

Преимущества заявляемого способа:

1) высокая точность - 82,6%, чувствительность - 90,0%, специфичность - 76,9%;

2) хорошая воспроизводимость метода;

3) простота и доступность выполнения методики;

4) длительность проведения методики определения индекса соотношения относительного содержания CD25+/IL-2+ лимфоцитов не превышает 2-х часов;

5) простота в интерпретации результатов обследования;

6) способ позволяет с ранних сроков гестации прогнозировать развитие угрожающих преждевременных родов, что дает возможность своевременно провести лечебно-профилактические мероприятия и предотвратить рождение недоношенных детей;

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования развития угрожающих преждевременных родов у женщин с угрозой невынашивания ранних сроков. Для осуществления способа в периферической крови женщин с угрозой невынашивания в 6-12 недель гестации определяют соотношение показателей относительного содержания CD25+ к IL-2+ лимфоцитам. При его значении, равном или более 1,0, прогнозируют развитие угрожающих преждевременных родов. Предлагаемый способ прост в исполнении и позволяет с высокой точностью, чувствительностью и специфичностью прогнозировать с ранних сроков беременности развитие угрожающих преждевременных родов, что позволит выбрать правильную тактику ведения женщин с риском развития данной акушерской патологии и будет способствовать снижению частоты преждевременных родов, материнской и перинатальной смертности. 1 табл.

Способ прогнозирования угрожающих преждевременных родов у женщин с угрозой невынашивания ранних сроков путем исследования периферической венозной крови, отличающийся тем, что в 6-12 недель гестации определяют соотношение показателей относительного содержания CD25+ к IL-2+ лимфоцитам и при значении соотношения равном или более 1,0 прогнозируют развитие угрожающих преждевременных родов.