ФИКСИРУЮЩАЯ СМЕСЬ ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ НЕМАТОД Российский патент 2014 года по МПК G01N33/48 A01N25/02 A01N59/08 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, и биологии в частности к гистологической технике, и может быть использовано для изготовления гистологических препаратов нематод (круглых гельминтов) при проведении научных морфологических исследований в ВУЗах и НИИ ветеринарного и биологического профиля.

Фиксация обеспечивает стабилизацию тканевых структур и их уплотнение, прекращает аутолиз, стабилизирует локализацию структур. Механизм действия фиксаторов основан на коагуляции белков и стабилизации липидов.

Известна фиксирующая смесь, например Солевой формол, состоящий из следующих компонентов - нейтрального 40% формалина 100 мл, хлорида натрия 8,5 г и водопроводной воды 900 мл. Продолжительность фиксации 48 ч при 20°C с последующей промывкой в проточной воде в течение 6-12 ч (www.forens-med.ru/book Фиксация гистологического и биопсийного материала. Общие принципы фиксации).

Известна также сложная фиксирующая смесь, наиболее распространенная - это спирт-формол по Шаферу, содержащая 10% нейтральный формалин, который готовят из 1 части нейтрального 40% формалина и 2-3 частей 96% спирта. Продолжительность фиксации 24-48 ч. Дальнейшая промывка в воде не требуется, и материал сразу же помещают в 96% спирт (www.forens-med.ru/book Фиксация гистологического и биопсийного материала. Общие принципы фиксации).

Наиболее близкой по технической сущности является смесь Шаффера во второй модификации В.В. Виноградова: 10-12% раствор нейтрального формалина - 1 часть и этанол 96% - 9 частей (Кононский А.И. Гистохимия, изд-во «Высшая школа», 1976 г., с.31). Продолжительность фиксации 1-2 и более суток с последующей промывкой в 96% этаноле.

Общими недостатками известных фиксирующих смесей является длительный процесс фиксации и низкий эффект фиксации тканей насыщенных жидкостью, например у нематод, которые после фиксации получаются набухшие или сморщенные, в результате срезы получаются не качественные.

Техническим результатом является сокращение срока фиксации и повышение качества фиксации тканей насыщенных жидкостью, например нематод.

Технический результат достигается тем, что фиксирующая смесь для гистологических исследований нематод, включающая 9 частей этилового спирта и 1 часть 10% раствора нейтрального формалина, согласно изобретению дополнительно содержит хлорид натрия в количестве не более 1 г на 100 мл смеси, при этом используют 70% этиловый спирт.

Новизна заявляемого предложения заключается в использовании новой совокупности признаков, а именно: фиксирующая смесь, содержащая 9 частей 70% этилового спирта и 1 часть 10% раствора нейтрального формалина и хлорид натрия в количестве не более 1 г на 100 мл смеси, которая обеспечивает гораздо короткий срок фиксации 3-4 часа и повышение качества подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования за счет исключения набухания и сморщивания тканей исследуемого материала, а также увеличение срока хранения без изменения гистологических структур исследуемого материала.

Предлагаемая фиксирующая смесь воспроизводима и эффективно используется на кафедре анатомии Кубанского агроуниверситета и в лаборатории гистологии Краснодарского ветеринарного НИИ для морфологического и гистологического исследования нематод, что отвечает критерию охраноспособности «промышленная применимость».

По данным научно-технической и патентной литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, позволяющая достигать технический результат, получаемый заявленной фиксирующей смесью, что позволяет утверждать о наличии «изобретательского уровня».

Поскольку основными признаками в заявляемой фиксирующей смеси является наличие хлорида натрия в количестве не более 1 г на 100 мл раствора, то в приведенных примерах натрий хлорид взят в следующих количествах: 0,5; 1,0; 1,5 г.

Добавление в фиксирующую смесь хлорида натрия в количестве 1 г обеспечивает равномерную диффузию этанола с формалином в толщу материала, обеспечивая осмотическое давление, аналогичное прижизненному, сохраняя при этом физико-химические свойства ткани.

При использовании 70% этилового спирта происходит не такое резкое сжатие белковых молекул и количество не восстановленных молекул белков меньше, чем при использовании 96% этилового спирта.

Пример 1. Фиксацию нематод проводили в 100 мл смеси, содержащей 9 частей 70% этилового спирта, 1 часть 10% раствора нейтрального формалина и 0,5 г хлорида натрия, и выдерживали 3,5 часа. В результате недостаточности хлорида натрия диффузия смеси в толщу материала была слабая, а следовательно, не обеспечивалось необходимое осмотическое давление, аналогичное прижизненному, поэтому не которые физико-химические свойства ткани были утрачены, что повлияло на качество ткани нематод, они получились сморщенные.

Пример 2. Фиксацию нематод проводили в 100 мл смеси, содержащей 9 частей 70% этилового спирта, 1 часть 10% раствора нейтрального формалина и 1 г хлорида натрия, и выдерживали 3,5 часа. В результате наблюдалась равномерная диффузия этанола с формалином в толщу материала, обеспечивая осмотическое давление, аналогичное прижизненному, сохраняя при этом физико-химические свойства ткани.

Пример 3. Фиксацию нематод проводили в 100 мл смеси, содержащей 9 частей 70% этилового спирта, 1 часть 10% раствора нейтрального формалина и 1,5 г хлорида натрия, и выдерживали 3,5 часа. Наблюдалась интенсивная диффузия этанола с формалином в толщу материала, осмотическое давление не соответствовало прижизненному, ткани получились набухшими.

Таким образом, оптимальным количеством хлорида натрия является 1 г на 100 мл фиксирующей смеси.

Изобретение относится к ветеринарной медицине и биологии, в частности к гистологической технике, и может быть использовано для изготовления гистологических препаратов нематод (круглых гельминтов) при проведении научных морфологических исследований в ВУЗах и НИИ ветеринарного и биологического профиля. Фиксирующая смесь для гистологических исследований нематод, включающая 9 частей этилового спирта и 1 часть 10% раствора нейтрального формалина, согласно изобретению дополнительно содержит хлорид натрия в количестве не более 1 г на 100 мл смеси, при этом используют 70% этиловый спирт. Изобретение обеспечивает сокращение срока фиксации и повышения качества фиксации тканей нематод. 3 пр.

Фиксирующая смесь для гистологических исследований нематод, включающая 9 частей этилового спирта и 1 часть 10% раствора нейтрального формалина, отличающаяся тем, что дополнительно содержит хлорид натрия в количестве не более 1 г на 100 мл смеси, при этом используют 70% этиловый спирт.