СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИРОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ А, D2, Е И В-КАРОТИНА ПРИ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ Российский патент 2014 года по МПК G01N30/90 G01N33/15 G01N33/02 

Описание патента на изобретение RU2530620C1

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, биологически активных добавок, премиксов, лекарственного растительного сырья, растительных масел, масляных экстрактов, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию основных жирорастворимых витаминов и может быть использовано в фармацевтической, химической, косметологической и пищевой отраслях промышленности для определения подлинности и степени чистоты жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в одно- и многокомпонентных препаратах.

Известны способы идентификации, разделения и количественного определения жирорастворимых витаминов в субстанции, одно- и многокомпонентных лекарственных формах, премиксах, биологически активных добавках, культурах микроорганизмов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Недостатком ВЭЖХ является нехватка квалифицированных кадров, дорогостоящего оборудования, реактивов и материалов, а также стандартных образцов. Одним из главных недостатков при определении витаминов с помощью ВЭЖХ остается подготовка образца для количественного определения, занимающая часто до 90% затрат времени анализа. В известных методах определения жирорастворимых витаминов методом ВЭЖХ подготовка образца к анализу остается такой же, как и в физико-химических методах, включая щелочной гидролиз или обработку раствора препарата диметилсульфоксидом при нагревании, четырехкратную экстракцию эфиром или гексаном, промывку водой, сушку натрием сернокислым, отгонку экстракта до сухого остатка и растворение его в соответствующем растворителе для получения необходимой концентрации для проведения анализа. Все эти операции значительно затрудняют и удлиняют время проведения анализа, снижают его точность [Козлов Э.И., Солунина И.А., Любарева М.Л., Надточий М.А., Хим. - фарм. журн., №10, Том 37, 50-53 (2003)].

Нашли широкое применение также спектральные методы анализа, такие как фотоэлектроколориметрия, прямая и дифференциальная спектрофотометрия, основанные на измерении оптической плотности исследуемых растворов после добавления каких-либо цветореагентов [Мелентьева Г.А. Фармацевтическая химия некоторых природных веществ с сильным биологическим действием, Изд-во мед. института им. И.М. Сеченова, Москва (1984), сс. 48-56; Экспериментальная витаминология, под ред. Ю.М. Островского, «Наука и техника», Минск (1979), сс. 80-129; «Раствор Ретинола ацетата в масле 33000 ME в капсулах». ФС 42-7811-97; Государственная фармакопея XI изд. Медицина, Москва (1990), Вып. 2; Государственная фармакопея СССР, 10-е изд., Медицина, Москва (1968); Государственная фармакопея Российской Федерации XII изд. - Часть 1. - М.: Изд-во: Научный центр экспертизы средств медицинского назначения, 2008. - 704 с.; ФС 42-2798-99. Таблетки «Глутамевит», покрытые оболочкой; ГОСТ 30417-98. «Растительные масла. Методы определения массовых долей витаминов А и Е», сс. 102-109; «Эргокальциферол раствор в масле 0,5%». ФСП 42-0008018000; ВФС 42-3128-98. «Драже бета-каротина 0,0025»].

Недостатками указанных спектральных способов являются: громоздкость и длительность определений, нестабильность окрашенных продуктов цветных реакций, недостаточная чувствительность и селективность, невозможность определения витаминов A, E, D2 и β-каротина при совместном присутствии, а также большие ошибки определения.

Известно использование тонкослойной хроматографии (ТСХ), которая, обладая всеми преимуществами хроматографических методов, находит широкое применение ввиду своей экспрессности, доступности, достаточной чувствительности, селективности, малой стоимости и простоты выполнения анализа [Ю. Кирхнер. Тонкослойная хроматография. Мир, Москва (1981), сс. 402-407; М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии. Мир, Москва (1980), Т. 2, с. 610; Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии. Мир, Москва (1999), 405 с.; О.Б. Рудаков, И.А. Востров, С.В. Федоров и др. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии. «Водолей», Воронеж (2004), 528 с.].

Известен способ определения витамина Е и β-каротина в плодах облепихи методом ТСХ [Биологически активные вещества лекарственных растений / Георгиевский В.П., Комисаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. // Новосиб.: Наука, 1990. 333 с.; Богачева Н.Г., Кокушкина Н.П., Сокольская Т.А. Стандартизация лекарственного сырья облепихи крушиновидной, Фармация. 2001. №1. С.27-29], согласно которому точную навеску высушенных плодов 2-5 г растирают в сухой ступке с 10% раствором КОН в 96%-ном этаноле, переносят в колбу, добавляя 100 мг пирогаллола, ставят на 1 ч на горячую водяную баню при 80°C; экстрагируют токоферолы и каротиноиды петролейным эфиром; извлечение повторяют 4-5 раз; промытую эфирную фракцию обезвоживают прокаленным сернокислым натрием до получения прозрачного раствора, после чего петролейный эфир отгоняют в роторном вакуум-испарителе при температуре 40°C и разрежении 600-650 мм рт.ст.; сухой остаток растворяют в 3-5 мл бензола; бензольный раствор используют для хроматографирования; пластинку делят на две части, на левую половину наносят полоской 1-2 мл бензольного раствора неомыляемых веществ облепихи, на правую - бензольный раствор α-токоферола, растворитель - хлороформ, разделение веществ производят в темноте; продолжительность хроматографирования около 2 часов; левую половину каждой пластинки закрывают бумагой, а правую опрыскивают 0,5%-ным спиртовым раствором o-фенантролина и 0,2%-ным спиртовым раствором хлорного железа.

Недостатком известных способов определения жирорастворимых витаминов при совместном присутствии методом ТСХ является длительность процесса в связи с проведением нескольких аналитических процедур - идентификация витаминов проводится в различных хроматографических системах с использованием различных проявителей по отдельности, что значительно увеличивает время анализа, а также затраты на реактивы и материалы.

В методе фронтальной ТСХ применяется двукратное элюирование одной хроматографической пластинки в разных по составу подвижных фазах с разной величиной пробега элюентов, таким образом, на хроматограмме получают две или более (в зависимости от количества использованных систем) линий фронта растворителя [Карцова Л.А. Совместное определение водо- и жирорастворимых витаминов высокоэффективной тонкослойной хроматографией с использованием водно-мицеллярной подвижной фазы / Л.А. Карцова, О.А. Королева // Журн. Аналитической химии. - 2007. - Т. 62. - №3. - с.281-286].

В научной фармацевтической и медицинской литературе способов, позволяющих идентифицировать и количественно определять жирорастворимые витамины при совместном присутствии методом фронтальной ТСХ, не выявлено.

Задачей настоящего изобретения является разработка способа определения подлинности, степени чистоты и количественного содержания жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в сложных смесях за одну аналитическую процедуру методом фронтальной ТСХ.

Технический результат заключается в упрощении и ускорении процесса определения жирорастворимых витаминов в лекарственных препаратах, лекарственном растительном сырье при совместном присутствии с достаточной чувствительностью.

Технический результат достигается тем, что в способе определения жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии методом тонкослойной хроматографии, включающем выделение жирорастворимых витаминов из субстанции экстракцией 96%-ным этанолом, отделение спиртового экстракта витаминов с помощью делительной воронки, последовательное хроматографирование с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil» ПТСХ-П-А на полимерной подложке при участии двух элюентов с различной величиной пробега, время насыщения камеры парами элюента - 20 мин, время элюирования - 55 мин; высушивание при температуре не менее 80°C пластин в термостате в течение 3-5 мин, обработку пластины проявителем - 5% спиртовым раствором кислоты фосфорномолибденовой, согласно изобретению в качестве элюентов использованы гексан:хлороформ (19:1) и гексан:хлороформ (3:1), а детектирование хроматографической зоны β-каротина проводят до обработки пластины проявителем при дневном свете.

На фиг.1 представлены зависимости величины Rf токоферола ацетата, ретинола ацетата, эргокальциферола и β-каротина от полярности элюента.

На фиг.2 представлена таблица значений величин Rf стандартных образцов витаминов A, E, D2 и β-каротина.

На фиг.3 представлены линейные зависимости величины Rf жирорастворимых витаминов от значения полярности элюента.

На фиг.4 представлен вид хроматограммы 3 мкл спиртового раствора «Аекол» при фронтальном хроматографировании в системе №1 гексан-хлороформ (19:1) и системе №2 гексан-хлороформ (3:1).

На фиг.5 представлена таблица с параметрами хроматографического разделения витаминов A, E и β-каротина в препарате «Аекол».

На фиг.6 представлен вид хроматограммы раствора содержимого одной капсулы «Аевит» в 10 мл спирта (точка 1 - 0,5 мкл) и смеси стандартных образцов (0,5 мкл) ретинола ацетата и (0,5 мкл) токоферола ацетата (точка 2) в системе гексан-хлороформ (3:1).

На фиг.7 приведена таблица параметров хроматографического разделения витаминов А и Е в препарате «Аевит».

На фиг.8 представлен вид хроматограммы 5 мкл спиртового раствора облепихового масла при фронтальном хроматографировании в системах №1 гексан-хлороформ (19:1) и №2 гексан-хлороформ (3:1).

На фиг.9 приведена таблица параметров хроматографического разделения витаминов D2, E и β-каротина в препарате «Облепиховое масло».

На фиг.10 приведена таблица с указанием пределов определения исследуемых витаминов с помощью выбранных детектирующих реагентов.

Согласно заявленному способу, навеску исследуемого препарата растворяют в этаноле с последующим хроматографированием с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil» 5×10 см с полимерной подложкой ПТСХ-П-А; элюент 1 - гексан:хлороформ (19:1) - пробег 8 см; элюент 2 - гексан:хлороформ (3:1) - пробег 6 см; проявитель - 5%-ный спиртовый раствор кислоты фосфорномолибденовой; время насыщения камеры парами элюентов 1 и 2 - 20 мин; общее время элюирования - 55 мин; время выдерживания пластинки в термостате при t°≥80°C - 3-5 минут.

Оптимальный объем пробы - 10 мкл спиртового раствора β-каротина с содержанием 1 мг/мл, по 0,5 мкл спиртовых растворов витаминов A, E и D2 с содержанием 1 мг/мл, 10 мг/мл и 0,035 мг/мл соответственно.

Для выбора оптимальных условий хроматографического разделения эргокальциферола (витамин D2), β-каротина, ретинола ацетата (витамин Е) и токоферола ацетата (витамин А) было исследовано влияние полярности элюентов на хроматографическую подвижность витаминов в тонком слое. В эксперименте изучено более десяти типов элюирующих систем с различными значениями полярности. Для каждой элюирующей системы рассчитаны полярность P` по известной методике [Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии. Мир, Москва (1999), 405 с.; О.Б. Рудаков, И.А. Востров, С.В. Федоров и др. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии. «Водолей», Воронеж (2004), 528 с.] и величина Rf (отношение расстояния, пройденного пятном, к расстоянию, пройденному растворителем). Как видно из данных, представленных на фиг.1 и фиг.2, для достижения оптимальных величин Rf β-каротина необходимо использовать элюенты с малыми значениями полярности P` (до 0,3 ед.). Тогда как витамины A, E и D2 при таких значениях полярности прочно удерживаются сорбентом, оставаясь на линии старта. Для них оптимальные величины Rf достигаются в системах гексан-хлороформ (5:1), гексан-хлороформ (4:1), гексан-хлороформ (3:1), когда полярность P` подвижной фазы находится в интервале 0,73-1,1. Это означает, что за одну процедуру хроматографирования разделить данные витамины не представляется возможным. Однако предлагаемый способ разделения и определения жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии с использованием фронтального элюирования позволяет решить данную задачу.

Был выбран интервал значений P` элюента, в котором данные зависимости приобретают линейный характер (от 0 до 0,2 ед. полярности системы для β-каротина; от 0,4 до 1,1 ед. для витамина Е (ретинола ацетата); от 0,58 до 1,47 ед. для эргокальциферола и от 0,7 до 1,5 для витамина А (токоферола ацетата)). Уравнения и коэффициенты корреляции приведены на фиг.3. С помощью предложенных зависимостей можно подбирать различные системы для разделения изучаемых жирорастворимых витаминов в тонком слое сорбента при совместном присутствии, чтобы величина Rf укладывалась в оптимальные значения. Таким образом, интервал полярностей P` элюента может варьировать в достаточно узком диапазоне от 0,05 до 0,168 ед. (для β-каротина); от 0,62 до 0,93 ед. (для витамина Е); от 0,76 до 1,07 ед. (для эргокальциферола) и от 0,95 до 1,26 (для витамина А) при совместном определении. Предлагаемый способ разделения жирорастворимых витаминов методом фронтальной ТСХ позволяет не только разделять смесь, но и достигать на хроматограммах оптимальных величин Rf.

Заявленный способ позволяет достичь четких зон округлой формы на хроматограммах жирорастворимых витаминов с оптимальным значением величины Rf, обеспечивает возможность разделения сложных смесей данных витаминов между собой и с другими биологически активными веществами.

Заявленный способ отличается достаточной чувствительностью (1·10-8 г для витамина А; 1·10-6 г для витамина Е; 7·10-9 г для витамина D2 и 1·10-5 г для β-каротина), что сопоставимо по чувствительности с определением данных витаминов на приборе ВЭЖХ, а также экономичностью, доступностью и экспрессностью.

Пример 1

Заявленный способ определения жирорастворимых витаминов был апробирован на витаминном лекарственном препарате «Аекол», содержащем витамины A, E и β-каротин (ФС 42-3182-95). Выделение жирорастворимых витаминов из препарата осуществляли методом реперколяции, который заключается в следующем: навеску препарата 1,26 г (точная навеска) делили на три части по 0,42 г. Первую порцию препарата обрабатывали 96%-ным этанолом в количестве 10 мл. Смесь энергично встряхивали в течение пяти минут, добиваясь тонкого эмульгирования масляного препарата в этаноле, а затем оставляли на сутки в прохладном, защищенном от света месте в плотно укупоренном виде. Спиртовой экстракт жирорастворимых витаминов отделяли с помощью делительной воронки. Каждую последующую порцию препарата экстрагировали вытяжкой, полученной из предыдущей. При этом максимально используется растворяющая способность экстрагента, так как слабые вытяжки имеют ее запас и могут извлекать действующие вещества из необработанного материала. Полученную суммарную вытяжку в количестве 3 мкл наносили на стартовую линию хроматографической пластинки и хроматографировали в системе №1 гексан-хлороформ (19:1) (пробег 8 см), а затем в системе №2 (пробег 6 см). Затем сначала проводили детектирование хроматографической зоны β-каротина при дневном свете, а потом пластину обработали проявителем - 5%-ным спиртовым раствором кислоты фосфорномолибденовой. Вид хроматограммы представлен на фиг. 4. Для каждой хроматографической зоны на хроматограмме были рассчитаны параметры хроматографического разделения: величина селективности сорбции (L) и коэффициент распределения (К). Параметры хроматографического разделения приведены на фиг.5. Результаты свидетельствуют об удовлетворительном разделении хроматографических зон на хроматограмме (так как критерием эффективного разделения является величина L>1) и правомерности использования данной методики.

Пример 2

Разработанный способ разделения и определения витаминов А и Е был апробирован на витаминном лекарственном препарате «Аевит» (ФС 42-1699-95). Так как заранее известно, что в препарате отсутствует каротин, то нет необходимости проводить фронтальное элюирование. Достаточно проводить определение в системе №2. «Аевит» содержит значительное количество изучаемых витаминов и они хорошо извлекаются при однократной экстракции. Поэтому содержимое одной капсулы растворяли в 10 мл 96%-ного этанола, хроматографировали в системе гексан-хлороформ (3:1), обрабатывали проявителем. Высота пробега растворителя - 9 см. Вид хроматограммы раствора «Аевит» и смеси стандартных образцов ретинола ацетата и токоферола ацетата представлен на фиг.6. Для каждой хроматографической зоны на хроматограмме были рассчитаны параметры хроматографического разделения: величина селективности сорбции (L) и коэффициент распределения (К). Параметры хроматографического разделения приведены на фиг.7. Результаты свидетельствуют об удовлетворительном разделении хроматографических зон на хроматограмме (так как критерием эффективного разделения является величина L>1) и правомерности использования данной методики.

Пример 3

Заявленный способ определения жирорастворимых витаминов был апробирован на растительном масле плодов облепихи, содержащем витамины D2, E и β-каротин (ФС 42-3873-99). Выделение витаминов из масла осуществляли методом реперколяции, как описано в примере 1. Навеску препарата 1,26 г (точная навеска) делили на три части по 0,42 г. Первую порцию масла обрабатывали 96%-ным этанолом в количестве 10 мл. Смесь энергично встряхивали в течение пяти минут, добиваясь тонкого эмульгирования масляного препарата в этаноле, а затем оставляли на сутки в прохладном, защищенном от света месте в плотно укупоренном виде. Спиртовой экстракт жирорастворимых витаминов отделяли с помощью делительной воронки. Каждую последующую порцию препарата экстрагировали вытяжкой, полученной из предыдущей. Полученную суммарную вытяжку из масла в количестве 5 мкл наносили на стартовую линию хроматографической пластинки и хроматографировали в системе №1 гексан-хлороформ (19:1) (пробег 8 см), а затем в системе №2 (пробег 6 см). Затем сначала проводят детектирование хроматографической зоны β-каротина при дневном свете, а потом пластину обрабатывают проявителем - 5%-ным спиртовым раствором кислоты фосфорномолибденовой. Вид хроматограммы представлен на фиг.8. Для каждой хроматографической зоны на хроматограмме были рассчитаны параметры хроматографического разделения: величина селективности сорбции (L) и коэффициент распределения (К). Параметры хроматографического разделения приведены на фиг.9. Результаты свидетельствуют об удовлетворительном разделении хроматографических зон на хроматограмме (так как критерием эффективного разделения является величина L>1) и правомерности использования данной методики.

Похожие патенты RU2530620C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ 2014
  • Тринеева Ольга Валерьевна
  • Сафонова Елена Федоровна
  • Сафонова Ирина Игоревна
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Назарова Александра Александровна
  • Синкевич Анастасия Вячеславовна
RU2581456C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА К В ПРОДУКТАХ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ 2017
  • Рахманов Рофаиль Салыхович
  • Крылова Ирина Владимировна
  • Потапова Ирина Александровна
  • Белоусько Николай Иванович
RU2647451C1
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ 2014
  • Тринеева Ольга Валерьевна
  • Сафонова Елена Федоровна
  • Сафонова Ирина Игоревна
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Назарова Александра Александровна
  • Синкевич Анастасия Вячеславовна
RU2581727C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ МЕТОДОМ СТУПЕНЧАТОГО ЭЛЮИРОВАНИЯ В ТОНКОМ СЛОЕ СОРБЕНТА 2015
  • Тринеева Ольга Валерьевна
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Сафонова Елена Федоровна
  • Назарова Александра Александровна
  • Шикунова Нина Сергеевна
RU2597661C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИТАМИНА Е ИЗ ГЕКСАНОВОЙ ФРАКЦИИ НАТИВНОГО САПРОПЕЛЯ 1998
  • Карелина О.А.
RU2139710C1
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИНЕБА В КОРМОВЫХ КОРНЕПЛОДАХ 1991
  • Халиулин Г.Л.
  • Студенцов Ю.В.
  • Марушкин Е.А.
  • Сметов П.К.
RU2013771C1
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ РУТИНА МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 2011
  • Чечета Ольга Валерьевна
  • Сафонова Елена Федоровна
  • Сливкин Алексей Иванович
  • Сафонова Ирина Игоревна
RU2469316C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕНЗОКСАЗОЛОНА-2 И 6-ХЛОРБЕНЗОКСАЗОЛОНА-2 В ПРОИЗВОДСТВЕ ПЕСТИЦИДОВ, ОТНОСЯЩИХСЯ К ПРОИЗВОДНЫМ БЕНЗОКСАЗОЛОНА-2, ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ 1991
  • Савчук А.С.
  • Изотова Н.Г.
RU2018825C1
СПОСОБ ОЦЕНКИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ АНТОЦИАНОВОГО КРАСИТЕЛЯ, ПОЛУЧЕННОГО БЕСКИСЛОТНЫМ СПОСОБОМ 2006
  • Селеменев Владимир Федорович
  • Ломова Татьяна Сергеевна
  • Болотов Владимир Михайлович
  • Рудаков Олег Борисович
  • Назарова Александра Александровна
RU2329284C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕИНОКСАНТИНА - КАРОТИНОИДА МИКРООРГАНИЗМА Deinococcus radiodurans 2011
  • Сазыкин Иван Сергеевич
  • Сазыкина Марина Александровна
  • Чистяков Владимир Анатольевич
RU2475541C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 530 620 C1

Реферат патента 2014 года СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИРОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ А, D2, Е И В-КАРОТИНА ПРИ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, биологически активных добавок, премиксов, лекарственного растительного сырья, растительных масел, масляных экстрактов, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию основных жирорастворимых витаминов и может быть использовано в фармацевтической, химической, косметологической и пищевой отраслях промышленности для определения подлинности и степени чистоты жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в одно- и многокомпонентных препаратах. Способ определения жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии включает выделение жирорастворимых витаминов из субстанции экстракцией 96%-ным этанолом, отделение спиртового экстракта витаминов с помощью делительной воронки, последовательное хроматографирование с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil» ПТСХ-П-А на полимерной подложке при участии двух элюентов с различной величиной пробега, время насыщения камеры парами элюента - 20 мин, время элюирования - 55 мин; высушивание при температуре не менее 80°C пластин в термостате в течение 3-5 мин, обработку пластины проявителем - 5%-ным спиртовым раствором кислоты фосфорномолибденовой, согласно изобретению в качестве элюентов использованы гексан:хлороформ (19:1) и гексан:хлороформ (3:1), а детектирование хроматографической зоны β-каротина проводят до обработки пластины проявителем при дневном свете. Способ обеспечивает упрощение и ускорение процесса определения жирорастворимых витаминов. 10 ил., 3 пр.

Формула изобретения RU 2 530 620 C1

Способ определения жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии методом тонкослойной хроматографии, включающий выделение жирорастворимых витаминов из субстанции экстракцией 96%-ным этанолом, отделение спиртового экстракта витаминов с помощью делительной воронки, последовательное хроматографирование с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil» ПТСХ-П-А на полимерной подложке при участии двух элюентов с различной величиной пробега, время насыщения камеры парами элюента - 20 мин, время элюирования - 55 мин; высушивание при температуре не менее 80°C пластин в термостате в течение 3-5 мин, обработку пластины проявителем - 5%-ным спиртовым раствором кислоты фосфорномолибденовой, отличающийся тем, что в качестве элюентов использованы гексан : хлороформ (19:1) и гексан : хлороформ (3:1), а детектирование хроматографической зоны β-каротина проводят до обработки пластины проявителем при дневном свете.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2014 года RU2530620C1

Хмельницкий Иван Константинович
Совершенствование электрофоретического и хроматографического определения водо- и жирорастворимых витаминов
Пресс для выдавливания из деревянных дисков заготовок для ниточных катушек 1923
  • Григорьев П.Н.
SU2007A1
Прибор для нагревания перетягиваемых бандажей подвижного состава 1917
  • Колоницкий Е.А.
SU15A1
Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов 1917
  • Гордон И.Д.
SU2A1

RU 2 530 620 C1

Авторы

Тринеева Ольга Валерьевна

Сафонова Елена Федоровна

Сливкин Алексей Иванович

Даты

2014-10-10Публикация

2013-07-30Подача