СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ МИКОТОКСИКОЗОВ ЛОШАДЕЙ Российский патент 2014 года по МПК A61K35/74 C12N1/20 C12R1/25 

Изобретение относится к области ветеринарной микологии и санитарии, в частности к профилактике алиментарных микотоксикозов животных.

Аналоги изобретения. Для профилактики и лечения микотоксикозов предложены препараты Полисорб ВП (Ж. Комбикорма, 2003. №3, с.68), Микросорб - П (Ж. Ветеринария, 2001, №11, с.15-17), цеолит (ж. Ветеринария, 2002, №9, с.3-8), которые проявляют выраженную адсорбирующую способность по отношению к микотоксинам.

Известен профилактический препарат «Субалин», изготовленный из штамма Bacillus subtilis ВКПМ В-4759 и обладающий антибактериальной и антивирусной активностью патент РФ на изобретение №2035185 С1, опубл. 20.05.1995). Предложены генно-модифицированные бактерии Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis, используемые в качестве компонентов препарата против вирусных и бактериальных инфекций (№2142287, С1, опубл. 10.12.1999).

Однако препарат Субалин, а также штаммы бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-7092, ВКПМ В-7048 и штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В-7038 не обладают активностью против плесневых токсинообразующих грибов, таких как Penicillium, Aspergillus, Stachybotrus, т.е. наиболее распространенных возбудителей микотоксикозов животных.

Известен способ биологической борьбы с плесневением сена путем обработки сена штаммами бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП (патент РФ на изобретение №2292132 С2 AOF 25/00, А23К 1/100, опуб. 10.07.2006, бюл. №3). Однако способ применяется только для снижения пораженности сена плесневыми грибами родов Penicillium, Aspergillus и Stachybotrus. Известен способ профилактики микотоксикозов животных путем назначения препарата «Сахабактисубтил» вовнутрь (патент РФ на изобретение №2297842 С2 А61К 35/66, опуб. 20.07.2006, бюл. №12). Однако способ разработан для профилактики отравления микотоксинами крупного рогатого скота только Penicillium, Stachybortus и Аpergillus.

Нет сведений об использовании штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП для профилактики микотоксикозов лошадей, вызываемых грибами родов Mucor, Candida и Fusarium.

Известно использование пробиотика «Сахабактисубтил» с овсом для коррекции кишечного микробиоценоза при дегельминтизации (ГАВРИЛЬЕВА Л.Ю. Коррекция энтеробиоценоза жеребят, зараженных кишечными нематодозами, пробиотиком «Сахабактисубтил» при дегельминтизации. Ветеринарная медицина, №3-4, 2012, стр. 65-66).

Ближайшим аналогом является пробиотик «Лактобифадол», содержащий в своем составе смесь живых лактобактерий и бифидобактерий, высушенных сорбционным методом на естественном растительном носителе (мука или отруби), используемый, в том числе и для профилактики и лечения микотоксикозов лошадей. (См. интернет: http:www.bf-component.ru/products_horses.php., 2011 год/ Субботин В.В., Данилевская Н.В. Применение пробиотического препарата латкобифадол в птицеводстве и промышленном животноводстве. Актуальные проблемы инфекционной поталогии и иммунологии животных. М., 2006, с. 370-373).

В основу изобретения положена задача профилактики отравления лошадей токсинами грибов с использованием пробиотика на адсорбенте.

Технический результат изобретения - профилактика микотоксикозов лошадей путем применения препарата «Сахабактисубтил», адсорбированного на овсе, снижающего пораженность сена плесневыми и токсигенными грибами Aspergillus, Mucor и Fusarium, нормализующего кишечный микробиоценоз, исключающего тем самым отравление лошадей микотоксинами.

Для профилактики микотоксикозов, вызываемых токсинами плесневых грибов, используют препарат «Сахабактисубтил», представляющий собой суспензию штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в равных соотношениях, адсорбированных на овсе. Лошадям, в рацион которых включаются корма, пораженные токсигенными грибами, дают препарат «Сахабактисубтил» с овсом перорально, 1 раз в сутки в течение 10 дней из расчета 50×10⁹ КОЕ на 1 голову. Препарат сохраняет выраженную антагонистическую активность по отношению к токсинообразующим грибам родов Mucor, Fusarium, Aspergillus, в течение 10 месяцев (срок наблюдения), повышает иммунобиологическую реактивность организма, нормализует кишечный микробиоценоз.

Препарат «Сахабактисубтил» изготовляют из штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в равных соотношениях, депонированных в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного института контроля стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) (справки о депонировании штаммов от 6 февраля 2001 г., №180/15 и №181/15).

Штаммы могут быть получены в лаборатории по разработке микробных препаратов ГНУ Якутский научно - исследовательский институт сельского хозяйства РАСХН и ВГНКИ.

Изготовление, контроль и испытание препарата «Сахабактисубтил» проводят согласно Техническим условиям «Препарат «Сахабактисубтил» для профилактики и лечения диареи новорожденных телят» №9383-003-00670203-06 от 2006 г.

Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП выращивают в мясопептонном агаре рН 7,0-7,2 в течение 5-7 суток при 37°C, затем суспензируют в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 5×10⁹ КОЕ/мл.

Антагонистическую активность штаммов бактерий Bacillus subtilis в отношении токсинообразующих плесневых грибов определяют методом диффузии в агар на средах Чапека и МПА. Для этого штаммы бактерий высевают сплошным газоном на поверхность среды в чашках. В качестве тест-культур используют токсигенные грибы Aspergillus niqer, Mucor ramosissimus, Fusarium semitectum, Candida albicans. Микологической иглой осторожно захватывают кусочек мицелия (инокулят) и помещают на поверхность среды. Посевы культивируют при температуре 22-25°С, через 10-15 дней ведут учет по зоне задержки роста вокруг инокулята. Для контроля используют среду без штаммов бактерий. Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП проявляют выраженную антагонистическую (фунгицидную) активность по отношению к токсигенным грибам родов Aspergillus, Mucor, Fusarium и Candida.

Результаты в таблице Результаты изучения фунгицидных свойств штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП Сроки наблюдения (дни) Штаммы бактерий Тест - культуры Aspergillus niqer Fusarium semitectum Mucor ramosissimus Candida albicans 1 Вас.subtilis ТНП-3 Вас.subtilis ТНП-5 1 - 1 8 8 - - 1 3 Вас.subtilis ТНП-3 Вас.subtilis ТНП-5 2 - - - 2 - - 1 Примечание: «-» - отсутствие роста «1-8» - размеры колоний в мм

Для адсорбции 10 мл пробиотика «Сахабактисубтил» (с содержанием 50×10⁹ КОЕ), обрабатывают 1 кг овса путем опрыскивания и выдерживают 24 ч при температуре 18-22°С. Затем обработанный пробиотиком овес выдерживают при колебании температуры от -47 до +32°С в течение 10 месяцев, с января по октябрь (срок наблюдения). В течение срока наблюдения штаммы бактерий Bacillus subtilis сохраняются стабильно в количестве от 1,8×10⁸ до 1,0×10⁹ КОЕ/г.

Микробиологические исследования овса, обработанного пробиотиком «Сахабактисубтил», показывают снижение количества колоний плесневых и токсинообразующих грибов в 40 раз по сравнению с контролем (овес с пробиотиком - опыт - 2,5·10⁴ КОЕ/г, овес без обработки - 1,0·10⁶ КОЕ/г).

Таким образом, овес, который является основным для подкормки, можно использовать в качестве адсорбента штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в борьбе с микотоксикозами лошадей.

Для определения профилактической эффективности препарата «Сахабактисубтил», адсорбированного на овсе при микотоксикозах, отбирают 20 голов лошадей в возрасте 6-8 месяцев. Первой группе (10 голов) скармливают «Сахабактисубтил» индивидуально 1 раз в сутки из расчета 10 мл на 1 кг овса, в течение 10 дней.

Контрольная группа (10 голов) не получает препарат.В рацион обеих групп животных включают сено, контаминированное токсинообразующими плесневыми грибами родов Aspergillus, Mucor, Fusarium. До и после применения препарата проводят иммунобиологические и бактериологические исследования. Опыт проводят 60 дней.

Применение препарата «Сахабактисубтил» на овсе повышает лизоцимную активность, содержание лейкоцитов, общего белка, глобулиновой фракции сыворотки крови, что свидетельствует о повышении иммунологической реактивности.

При скармливании сена неудовлетворительного качества в контрольной группе отмечается нарушение микробиоценоза кишечника с явлениями дисбактериоза, в которой доминируют токсигенные грибы.

У молодняка, получавшего препарат «Сахабактисубтил» на овсе, отмечается повышение лактобактерий в 4 раза (до 6,2×10⁴ КОЕ/г) и снижение лактозоотрицательных эшерихий в 4 раза (до 1×10² КОЕ/г), повышение спорообразующих аэробных бактерий в 5 раз (до 5,8×10⁵ КОЕ/г), отсутствие роста грибов родов Mucor, Aspergillus по сравнению с контролем.

Применение в рационе молодняка лошадей пробиотика, адсорбированного на овсе, обеспечивает повышение прироста живой массы в 3,4 раза по сравнению с контролем (опыт - 6,6 кг, контроль - 1,9 кг).

Таким образом, применение препарата «Сахабактисубтил» на овсе молодняку лошадей подавляет негативное влияние на организм токсинообразующих плесневых грибов, нормализует кишечный микробиоценоз и может быть использован в качестве способа профилактики микотоксикозов животных.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ предназначен для профилактики микотоксикозов лошадей. Он предусматривает адсорбцию препарата «Сахабактисубтил», представляющего собой суспензию штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в равных соотношениях, адсорбированного на овсе, и скармливание его животным с овсом 1 раз в сутки из расчета 10 мл на 1 кг овса, в течение 10 дней. Изобретение позволяет нормализовать кишечный микробиоценоз и повысить прирост живой массы животного. 1 табл.

Способ профилактики алиментарных микотоксикозов лошадей путем назначения микробного препарата вовнутрь, отличающийся тем, что в качестве микробного препарата используют препарат «Сахабактисубтил» на овсе, представляющий собой суспензию штаммов Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в равных соотношениях, адсорбированных на 1 кг овса.