Данная заявка на изобретение представляет собой международную заявку, в которой заявлен приоритет в соответствии с 35 U.S.С. §119(е) по предварительной заявке на патент США №61/121345, поданной 10 декабря 2008 года, и заявлен приоритет в соответствии с 35 U.S.C. §120 по заявке на патент США №12/331816, поданной 10 декабря 2008 года, каждая из которых полностью включена здесь путем ссылки.

Фармацевтическая композиция представляет собой композицию, содержащую по меньшей мере один активный ингредиент и по меньшей мере один инертный ингредиент, называемый эксципиентом, используемым в качестве разбавителя или носителя для активного ингредиента. Эксципиент полезен в одном или более чем одном из следующих применений в качестве стабилизатора, поверхностно-активного вещества, наполнителя, криопротектора, лиопротектора, консерванта и буфера. Фармацевтическая композиция может быть получена в твердой форме, такой как, например, лиофилизированный (высушенный замораживанием) или высушенный в вакууме порошок, который может быть растворен подходящей жидкостью, такой как физиологический раствор или вода, перед введением пациенту. С другой стороны, фармацевтическая композиция может быть приготовлена в виде водного раствора или суспензии.

Подавляющее большинство фармацевтических композиций включает небольшую молекулу (или химический объект) в качестве активного ингредиента. Недавно с появлением биотехнологической промышленности разработаны или разрабатываются фармацевтические композиции, содержащие белковый активный ингредиент. К сожалению, белковый активный ингредиент может быть очень сложно стабилизируемым (т.е. поддерживаемым в состоянии, при котором минимизирована утрата биологической активности), таким образом приводя в результате к утрате белка и/или утрате белковой активности во время приготовления, растворения (при необходимости) и хранения фармацевтической композиции перед применением. Проблемы, связанные со стабильностью, могут возникать вследствие поверхностной адсорбции белкового активного ингредиента, физической нестабильности, такой как, например денатурация или агрегация, или химической нестабильности, такой как, например перекрестное связывание, деамидирование, изомеризация, окисление, образование кислотных или основных частиц, реакция Мэйлларда и фрагментация. Для предотвращения такой нестабильности различные белковые эксципиенты, такие как альбумин и желатин, используются для стабилизации белкового активного ингредиента, представленного в фармацевтической композиции.

К сожалению, несмотря на свои известные стабилизирующие действия, значительные отрицательные последствия существуют в отношении применения белковых эксципиентов, таких как альбумин или желатин, в фармацевтической композиции. Например, альбумин и желатин дорогие, и их все труднее получать. Кроме того, кровяные продукты или продукты животного происхождения, такие как альбумин и желатин, при введении пациенту могут создавать у последнего потенциальный риск получения пребывающих в крови патогенов или инфекционных агентов. Таким образом, известно, что существует возможность того, что присутствие белкового эксципиента животного происхождения в фармацевтической композиции может приводить в результате к ненамеренному включению инфекционных элементов в фармацевтическую композицию. Например сообщалось о том, что применение человеческого сывороточного альбумина может привносить в фармацевтическую композицию прионы. Таким образом, желательно найти подходящие небелковые эксципиенты, такие как, например, стабилизаторы, криопротекторы и лиопротекторы, которые можно было бы использовать для стабилизации белкового активного ингредиента, присутствующего в фармацевтической композиции.

Уникальные характеристики клостридиальных токсинов дополнительно ограничивают и затрудняют выбор подходящих небелковых эксципиентов для фармацевтической композиции, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. Например, клостридиальные токсины представляют собой крупные белки, имеющие среднюю молекулярную массу приблизительно 150 кДа, и дополнительно образующие комплексы с нетоксиновыми ассоциированными белками, которые увеличивают размер до приблизительно 300-900 кДа. Размер комплекса с клостридиальным токсином делает его гораздо более хрупким и лабильным по сравнению с более маленькими, менее сложными белками, таким образом, усложняя изготовление и обработку в том случае, если необходимо поддержание стабильности клостридиального токсина. Следовательно, применение небелковых эксципиентов, таких как, например, стабилизаторы, криопротекторы и лиопротекторы, должно дать возможность для взаимодействия с клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента таким образом, который не приводит к денатурации, фрагментации или иной инактивации токсина или не вызывает диссоциацию нетоксиновых ассоциированных белков, представленных в токсиновом комплексе.

Еще одна проблема, ассоциирующаяся с клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, заключается в исключительной безопасности, точности и аккуратности, которые необходимы на всех стадиях способа изготовления. Таким образом, небелковый эксципиент сам по себе не должен быть токсичным или сложным в обработке, таким образом, чтобы не ужесточать и так чрезвычайно строгие требования, существующие в настоящее время для изготовления фармацевтической композиции, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента.

Еще одна сложность, связаная с клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, заключается в исключительно низких количествах клостридиального токсина, которые используются в фармацевтической композиции. Как и в общем случае с ферментами, биологические активности клостридиальных токсинов зависят по меньшей мере частично от их трехмерной конформации. Таким образом, клостридиальный токсин обезвреживается при тепловой обработке, под действием различных химических соединений, поверхностного напряжения и высыхания поверхности. Кроме того, известно, что разведение комплекса с клостридиальным токсином, полученным при помощи известных способов культивирования, ферментации и очистки, до гораздо меньшей концентрации, используемой в фармацевтической композиции, приводит в результате к быстрой инактивации токсина. Чрезвычайно низкое количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, которое используется в фармацевтической композиции, приводит к сильной склонности этого активного ингредиента к адсорбции, например на поверхностях лабораторной посуды, сосудов, ампул, в которых растворяют фармацевтическую композицию, и на внутренней поверхности шприца, используемого для инъекции фармацевтической композиции. Такая адсорбция клостридиального токсина в качестве активного ингредиента на поверхностях может привести к утрате активного ингредиента и к денатурации оставшегося клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, что уменьшает общую активность активного ингредиента, присутствующего в фармацевтической композиции. Следовательно, применение небелковых эксципиентов, таких как, например, стабилизаторы, криопротекторы и лиопротекторы, может действовать как блокаторы поверхности для предупреждения адсорбции клостридиального токсина в качестве активного ингредиента на поверхности. В настоящее время единственный успешный стабилизатор для этой задачи представляет собой белки животного происхождения, такие как, например, человеческий сывороточный альбумин и желатин.

Еще одна проблема, связанная с клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, заключается в чувствительности к рН, ассоциирующейся с образованием комплекса. Например, известно, что комплекс BoNT/A массой 900 кДа растворим в разбавленных водных растворах при рН 3,5-6,8. Тем не менее, при рН выше приблизительно 7 нетоксичные ассоциированные белки диссоциируют от нейротоксина массой 150 кДа, что приводит в результате к утрате токсичности, в частности, при увеличении рН выше рН 8,0. Смотри Edward J. Schantz et al., pp.44-45, Preparation and characterization of botulinum toxin type A for human treatment, в Jankovic, J., et al., therapy with botulinum toxin (Marcel Dekker, Inc., 1994). Поскольку нетоксичные ассоциированные белки, как полагают, защищают или помогают стабилизировать вторичную и третичные структуры, от которых зависит токсичность, диссоциация этих белков приводит в результате к более нестабильному клостридиальному токсину в качестве активного ингредиента. Таким образом, небелковые эксципиенты, полезные для приготовления фармацевтической композиции, содержащей клостридиальный токсин, в качестве активного ингредиента, должны обладать способностью функционировать в пределах уровня рН, необходимого для поддержания активности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента.

В свете уникальной природы клостридиальных токсинов и изложенных выше требований достаточно проблематично найти подходящие небелковые эксципиенты, полезные для приготовления фармацевтической композиции, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. До настоящего изобретения только белковые эксципиенты животного происхождения, такие как, например, человеческий сывороточный альбумин и желатин, успешно использовали в качестве стабилизаторов. Таким образом, альбумин сам по себе или с одним или более чем одним дополнительным веществом, таким как фосфат натрия или цитрат натрия, как известно, дает возможность для высокого восстановления токсичности ботулинического токсина типа А после лиофилизации. К сожалению, как уже излагалось, человеческий сывороточный альбумин, будучи объединенным продуктом из крови, может по меньшей мере потенциально нести инфекционные или вызывающие заболевание элементы, будучи представленным в фармацевтической композиции. Действительно, любой животный продукт или белок, такой как человеческий сывороточный альбумин или желатин, также может потенциально содержать пирогенные или другие вещества, которые могут вызывать неблагоприятные реакции при инъекции пациенту.

Таким образом, необходима фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, где клостридиальный токсин (такой как ботулинический токсин) стабилизирован небелковым эксципиентом. Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, где в фармацевтической композиции присутствует один или более чем один небелковый эксципиент, функция которого заключается в том, чтобы стабилизировать клостридиальный токсин.

Таким образом, в аспекте настоящего изобретения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит небелковый эксципиент животного происхождения и клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. В еще одном аспекте фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит по меньшей мере два небелковых эксципиента животного происхождения и клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. В еще одном аспекте фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит по меньшей мере три небелковых эксципиента животного происхождения и клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. Клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента может представлять собой комплекс с клостридиальным токсином, содержащий клостридиальный токсин массой приблизительно 150 кДа и другие белки, в совокупности называемые нетоксиновые ассоциированные белки (NAP), только клостридиальный токсин массой приблизительно 150 кДа или модифицированный клостридиальный токсин, такой как, например, перенацеленный клостридиальный токсин.

Таким образом, в аспекте настоящего изобретения, фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит небелковый эксципиент и клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. В еще одном аспекте фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит по меньшей мере два небелковых эксципиента и клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. В еще одном аспекте фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит по меньшей мере три небелковых эксципиента и клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. Клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента может представлять собой комплекс с клостридиальным токсином, содержащий клостридиальный токсин массой приблизительно 150 кДа и другие белки, в совокупности называемые нетоксиновые ассоциированные белки (NAP), только клостридиальный токсин массой приблизительно 150 кДа или модифицированный клостридиальный токсин, такой как, например, перенацеленный клостридиальный токсин.

В еще одном аспекте настоящего изобретения фармацевтическая композиция на основе ботулинического токсина содержит небелковый эксципиент животного происхождения и ботулинический токсин в качестве активного ингредиента. В еще одном аспекте фармацевтическая композиция на основе ботулинического токсина содержит по меньшей мере два небелковых эксципиента животного происхождения и ботулинический токсин в качестве активного ингредиента. В еще одном аспекте фармацевтическая композиция на основе ботулинического токсина содержит по меньшей мере три небелковых эксципиента животного происхождения и ботулинический токсин в качестве активного ингредиента. Ботулинический токсин в качестве активного ингредиента может представлять собой комплекс с ботулиническим токсином, содержащий ботулинический токсин массой приблизительно 150 кДа и NAP, только ботулинический токсин массой 150 кДа или модифицированный ботулинический токсин, или нацеленный белок, модулирующий везикулярный экзоцитоз (TVEMP), такой как, например перенацеленный клостридиальный токсин.

В еще одном аспекте настоящего изобретения фармацевтическая композиция на основе ботулинического токсина содержит небелковый эксципиент и ботулинический токсин в качестве активного ингредиента. В еще одном аспекте фармацевтическая композиция на основе ботулинического токсина содержит по меньшей мере два небелковых эксципиента и ботулинический токсин в качестве активного ингредиента. В еще одном аспекте фармацевтическая композиция на основе ботулинического токсина содержит по меньшей мере три небелковых эксципиента и ботулинический токсин в качестве активного ингредиента. Ботулинический токсин в качестве активного ингредиента может представлять собой комплекс с ботулиническим токсином, содержащий ботулинический токсин массой приблизительно 150 кДа и NAP, только ботулинический токсин массой 150 кДа или модифицированный ботулинический токсин, такой как, например перенацеленный ботулинический токсин.

Клостридиальные токсины, продуцируемые Clostridium botulinum, Clostridium tetani, Clostridium baratii и Clostridium butyricum, наиболее широко используются в терапевтических и косметических способах лечения людей и других млекопитающих.

Штаммы С. botulinum продуцируют семь антигенно отличающихся типов ботулинических токсинов (BoNT), которые идентифицируют путем исследования вспышек ботулизма у людей (BoNT/A, /В, /Е и /F), животных (BoNT/C₁ и /D) или в изолятах почвы (BoNT/G). BoNT обладают приблизительно 35% идентичностью по аминокислотам друг с другом и имеют одинаковую организацию функциональных доменов и общую структурную архитектуру. Специалисту в данной области техники понятно, что в каждом типе клостридиального токсина могут иметься подтипы, которые в некоторой степени отличаются по своей аминокислотной последовательности, и также по нуклеиновым кислотам, кодирующим эти белки. Например, в настоящее время существует пять подтипов BoNT/A: BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/А3, BoNT/A4 и BoNT/A5, причем конкретные подтипы демонстрируют приблизительно 89% идентичность по аминокислотам при сравнении с другим подтипом BoNT/A. Хотя все семь серотипов BoNT обладают похожей структурой и фармакологическими свойствами, каждый из них также демонстрирует гетерогенные бактериологические свойства. Наоборот, столбнячный токсин (TeNT) продуцируется однородной группой С.tetani. Два других вида клостридий: С.baratii и С.butyricum, также продуцируют токсины, BaNT и BuNT соответственно, которые соответственно напоминают BoNT/F и BoNT/E.

Клостридиальные токсины вырабатываются бактерией Clostridium в виде комплексов, содержащих только клостридиальный токсин массой приблизительно 150 кДа с нетоксиновыми ассоциированными белками (NAP). Идентифицированные NAP включают белки, обладающие гемагглютининовой активностью, такие как, например, гемагглютинин с массой приблизительно 17 кДа (НА-17), гемагглютинин с массой приблизительно 33 кДа (НА-33) и гемагглютинин с массой приблизительно 70 кДа (НА-70); а также нетоксический не гемагглютинин (NTNH), представляющий собой белок массой приблизительно 130 кДа, смотри, например Eric A. Johnson and Marite Bradshaw, Clostidial botulinum and its Neurotoxins: A Metabolic and Cellular Perspective, 39 Toxicon 1703-1722 (2001); и Stephanie Raffestin etal., Organization and Regulation of the Neurotoxin Genes in Clostridium botulinum and Clostridium tetani, 10 Anaerobe 93-100 (2004). Таким образом, комплекс ботулинического токсина типа А может продуцироваться бактерией Clostridium в виде форм с массой 900 кДа, 500 кДа и 300 кДа. Ботулинический токсин типы В и C₁, по-видимому, продуцируются в виде исключительно комплекса массой 500 кДа. Ботулинические токсины типа D продуцируется в виде комплексов массой 300 кДа и 500 кДа. Наконец, ботулинические токсины типов Е и F продуцируются в виде только комплексов с массой приблизительно 300 кДа. Различия по молекулярной массе комплексов возникают вследствие различных соотношений между NAP. Токсиновый комплекс важен для процесса интоксикации, поскольку он обеспечивает защиту от неблагоприятных факторов окружающей среды, резистентность к разрушению протеазой и по-видимому облегчает интернализацию и активацию токсина.

Каждый из клостридиальных токсинов транслируется в виде одноцепочечного полипептида, который затем расщепляется путем протеолитического разрезания по дисульфидной петле природной протеазой. Это разрезание происходит в дискретной двухцепочечной петлевой области, возникающей между двумя цистеиновыми остатками, образующими дисульфидный мостик. Этот посттрансляционный процессинг приводит к образованию двухцепочечной молекулы, содержащей легкую цепь массой приблизительно 50 кДа (LC) и тяжелую цепь массой приблизительно 100 кДа (НС), удерживаемые вместе при помощи одной дисульфидной связи и нековалентных взаимодействий между двумя цепями. В настоящее время не известна природная протеаза, используемая для превращения одноцепочечной молекулы в двухцепочечную. В некоторых серотипах, таких как, например, BoNT/А, природная протеаза продуцируется эндогенно серотипом бактерии и расщепление происходит в клетке перед высвобождением токсина в окружающую среду. Тем не менее, в других серотипах, таких как, например BoNT/E, бактериальный штамм по-видимому не продуцирует эндогенную протеазу, способную превращать одноцепочечную форму токсина в друхцепочечную форму. В этих ситуациях токсин высвобождается из клетки в виде одноцепочечного токсина, который затем превращается в двухцепочечную форму под действием природной протеазы, обнаруженной в окружающей среде.

Таблица 1 Референсные последовательности и области клостридиального токсина Токсин SEQ ID NO: LC H_N H_C H_CN H_CC ВоМТУА 1 M1-K448 A449-I873 I874-P1110 Y1111-L1296 ВоМТ/В 2 M1-K441 A442-I860 L861-E1097 Y1098-E1291 BoNT/C1 3 M1-K449 T450-I868 N869-E1111 Y1112-E1291 BoNT/D 4 M1-R445 D446-I864 N865-E1098 Y1099-E1276 BoNT/E 5 M1-R422 K423-I847 K848-E1085 Y1086-K1252 BoNT/F 6 M1-K439 A440-I866 K867-K1105 Y1106-E1274 BoNT/G 7 M1-K446 S447-I865 S866-Q1105 Y1106-E1297 TeNT 8 M1-A457 S458-L881 K882-E1127 Y1128-D1315 BaNT 9 M1-K431 N432-1857 I858-K1094 Y1095-E1268 BuNT 10 M1-R422 K423-I847 K848-E1085 Y1086-K1251

Каждая зрелая двухцепочечная молекула содержит три функционально отличающихся домена: 1) ферментативный домен, располагающийся в LC, который включает металлопротеазную область, обладающую зависимой от цинка эндопротеазной активностью, которая специфически направлена на коровые компоненты аппарата высвобождения нейромедиатора; 2) домен транслокации, содержащийся в N-концевой половине НС (H_N), который облегчает высвобождение LC из внутриклеточных везикул в цитоплазму и клетку-мишень; и 3) связывающий домен, обнаруженный в С-концевой половине НС (H_C), который определяет связывающую активность и связывающую специфичность токсина в отношении рецепторного комплекса, располагающегося на поверхности клетки-мишени. Домен Н_с содержит две отдельные структурные области приблизительно одинакового размера, которые указывают на функцию и обозначаются как субдомены H_CN и H_CC. В Таблице 1 приведены приблизительные связывающие области для каждого домена и субдомена, обнаруженного в примере клостридиальных токсинов.

Связывающая, транслоцирующая и ферментативная активность этих трех функциональных доменов необходимы для токсичности. Хотя подробная информация об этом процессе не известна точно, но механизм общей клеточной интоксикации, посредством которого клостридиальные токсины проникают в нейрон и ингибируют высвобождение нейромедиатора, похож независимо от типа. Хотя авторы изобретения не желают быть связанными следующим описанием, механизм интоксикации может быть описан, как включающий по меньшей мере четыре стадии: 1) связывание рецептора, 2) интернализацию комплекса, 3) транслокацию легкой цепи и 4) ферментативную модификацию мишени. Процесс инициируется тогда, когда домен Н_с клостридиального токсина связывается с токсин-специфичным рецепторным комплексом, располагающимся на поверхности цитоплазматической мембраны клетки-мишени. Полагают, что связывающая специфичность рецепторного комплекса достигается, в частности, путем специфических комбинаций ганглиозидов и белковых рецепторов, которые по-видимому несомненно содержат каждый рецепторный комплекс клостридиального токсина. После связывания комплексы токсин/рецептор интернализуются путем эндоцитоза и интернализованные везикулы сортируются специфическими внутриклеточными путями. Стадия транслокации по-видимому запускается путем закисления полости везикулы. Этот процесс по-видимому инициирует две важных рН-зависимые структурные перегруппировки, которые увеличивают гидрофобность и способствуют образованию двухцепочечной формы токсина. После активации эндопептидаза легкой цепи токсина высвобождается из внутриклеточной везикулы в цитозоль, где она специфически воздействует на один из трех коровых компонентов аппарата высвобождения нейромедиатора. Эти коровые белки, ассоциированный с везикулой мембранный белок (VAMP)/синаптобревин, ассоциированный с синаптосомой белок массой 25 кДа (SNAP-25) и синтаксин, необходимы для синаптического захвата везикул и слияния с нервным окончанием, и составляют члены семейства растворимого N-этилмалеимид-чувствительного белкового рецептора присоединения фактора (SNARE). BoNT/A и BoNT/E расщепляют SNAP-25 по области С-конца, высвобождая аминокислотный фрагмент длиной девять или двадцать шесть аминокислот, соответственно, и BoNT/d также расщепляет SNAP-25 около С-конца. BuNT расщепляет по консервативному фрагменту SNAP-25 около С-конца. Серотипы ботулина BoNT/B, BoNT/D, BoNT/F и BoNT/G, TeNT и BaNT действуют в отношении консервативного центрального фрагмента VAMP и высвобождают N-концевой фрагмент VAMP в цитозоль, BoNT/C₁ расщепляет синтаксин по одному сайту около поверхности цитоплазматической мембраны. Избирательный протеолиз синаптических SNARE отвечает за блокировку высвобождения нейромедиатора, вызываемого клостридиальными токсинами in vivo. Белок SNARE, воздействующий на клостридиальные токсины, является обычным для экзоцитоза в различных не нейрональных типах; в этих клетках, как в нейронах, пептидазная активность легкой цепи ингибирует экзоцитоз, смотри, например Yann Humeau etal., How Botulinum and Tetanus Neurotoxins Block Neurotransmitter Release, 82(5) Biochimie. 427-446 (2000); Kathryn Turton et al., Botulinum and Tetanus Neurotoxins: Structure, Function and Therapeutic Utility, 27(11) Trends Biochem. Sci. 552-558. (2002); Giovanna Lalli et al., The Journey of Tetanus and Botulinum Neurotoxins in Neurons, 11 (9) Trends Microbiol. 431-437, (2003).

Способность клостридиальных токсинов, таких как, например, BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C₁, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F и BoNT/G, TeNT, BaNT и BuNT, ингибировать нейрональную трансмиссию используется в широком разнообразии терапевтических и косметических применений, смотри, например William J. Lipham, cosmetic and clinical applications of botulinum toxin (Slack, Inc., 2004). Клостридиальные токсины, имеющиеся в продаже в виде фармацевтических композиций, включают композиции BoNT/A, такие как, например, ВОТОХ® (Allergan, Inc., Irvine, CA), DYSPORT®/RELOXIN®, (Beaufour Ipsen, Porton Down, England), NEURONOX® (Medy-Tox, Inc., Ochang-myeon, South Korea), BTX-A (Lanzhou Institute Biological Products, China) и XEOMIN® (Merz Фармацевтичестез, GmbH., Frankfurt, Germany); и композиции BoNT/B, такие как, например, MYOBLOC™/NEUROBLOC™ (Solstice Neurosciences, Inc., South San Francisco, California). В качестве примера ВОТОХ® в настоящее время одобрен в одной или более чем одной стране при следующих показаниях: ахалазия, спастичность у взрослых, анальная трещина, боль в спине, блефароспазм, бруксизм, дистония шейки матки, эссенциальный тремор, глабеллярные морщины или гиперкинетические морщины на лице, головная боль, гемифасциальный спазм, гиперактивность мочевого пузыря, гипергидроз, детский церебральный паралич, рассеянный склероз, миоклонические расстройства, назально-губные линии, спастическая дисфония, косоглазие и нервное расстройство VII типа.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматриваются, в частности, фармацевтическими композициями на основе клостридиального токсина. Используемый здесь термин "фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина" относится к композиции, в которой активный ингредиент представляет собой клостридиальный токсин. Используемый здесь термин "композиция" означает, что имеется по меньшей мере один дополнительный ингредиент в фармацевтической композиции помимо клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Таким образом, фармацевтическая композиция представляет собой композицию, которая подходит для диагностического или терапевтического введения субъекту, такому как пациент-человек. Фармацевтическая композиция может представлять собой твердую композицию, такую как, например лиофилизированная (высушенная замораживанием) или высушенная в условиях вакуума или водная композиция. Составляющие ингредиенты фармацевтической композиции могут быть включены в одну композицию (то есть все составляющие ингредиенты за исключением любой требующейся жидкости для разведения представлены на момент исходного смешивания фармацевтической композиции) или в виде двухкомпонентной системы, например высушенной в вакууме композиции, разведенной в разбавителе, таком как физиологический раствор, где разбавитель содержит ингредиент, не представленный на момент исходного смешивания фармацевтической композиции. Двухкомпонентная система обеспечивает преимущество включения ингредиентов, которые не достаточно совместимы с первым компонентом двухкомпонентной системы для длительного периода хранения. Например, растворитель или разбавитель могут включать консервант, который обеспечивает достаточную защиту против микробного роста в течение периода использования, например одной недели хранения при охлаждении, но не представлен во время двухлетнего хранения при замораживании, в течение которого токсин может подвергаться разрушению. Другие ингредиенты, которые могут быть несовместимы с клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, или другие ингредиенты для длительных периодов времени могут быть включены таким образом; то есть добавлены во втором разбавителе (т.е. в жидкости для разбавления) в момент использования.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, не содержащую животный белок фармацевтическую композицию на основе клостридиального токсина. Используемый здесь термин "не содержащая животный белок" относится к отсутствию продуктов или соединений, происходящих из крови, возникающих в результате сбора крови, и других продуктов животного происхождения. Используемый здесь термин "животное" относится к млекопитающему, птице, амфибии, рептилии, рыбе, членистоногому или другим видам животных. "Животное" исключает растения и микроорганизмы, такие как, например дрожжи и бактерии. Например, не содержащая животный белок фармацевтическая композиция может представлять собой фармацевтическую композицию, которая в основном не содержит или преимущественно не содержит или полностью не содержит альбумин сыворотки крови, желатин и другие белки животного происхождения, такие как, например, иммуноглобулины. Используемый здесь термин "полностью не содержит" (или термин "состоящий из") означает, что в диапазоне детекции используемого прибора или способа вещество не может быть обнаружено или его присутствие не может быть подтверждено. Используемый здесь термин "преимущественно не содержит" (или "по существу состоящий из") означает, что только следовые количества вещества могут быть обнаружены. Используемый здесь термин "в основном не содержащий" означает представленный на уровне меньше чем один процент по массе фармацевтической композиции. Используемый здесь термин "животного происхождения" относится к любому соединению или продуктам, очищенным непосредственно из животного источника. Сам по себе животный белок, рекомбинантно продуцируемый из микроорганизма, исключается из термина " продукт или соединение животного происхождения". Таким образом, не содержащие животный белок фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина могут включать любой из активных ингредиентов клостридиального нейротоксина, раскрытых в настоящем описании. В качестве не ограничивающего объем изобретения примера не содержащей животный белок фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина можно привести фармацевтическую композицию, содержащую токсин BoNT/A в качестве активного ингредиента, и подходящий сахар и поверхностно-активное вещество в качестве эксципиентов. В качестве еще одного не ограничивающего объем изобретения примера не содержащей животный белок фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина можно привести фармацевтическую композицию, содержащую комплекс токсина BoNT/A массой 900 кДа в качестве активного ингредиента, и подходящий сахар и поверхностно-активное вещество в качестве эксципиента. В качестве еще одного не ограничивающего объем изобретения примера не содержащей животный белок фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина можно привести фармацевтическую композицию, содержащую модифицированный токсин BoNT/A, включающий дополнительный двухлейциновый мотив, в качестве активного ингредиента, и подходящий сахар и поверхностно-активное вещество в качестве эксципиентов. В качестве еще одного не ограничивающего объем изобретения примера не содержащей животный белок фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина можно привести фармацевтическую композицию, содержащую перенацеленный BoNT/A, включающий нацеливающую группировку - опиоидный пептид, в качестве активного ингредиента, и подходящий сахар и поверхностно-активное вещество в качестве эксципиентов.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. Используемый здесь термин "клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента" относится к терапевтически эффективной концентрации клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, такой как, например, комплекс с клостридиальным токсином, клостридиальный токсин, модифицированный клостридиальный токсин или перенацеленный клостридиальный токсин. Используемый здесь термин "терапевтически эффективная концентрация" является синонимом "терапевтически эффективное количество", "эффективное количество", "эффективная доза", и "терапевтически эффективная доза", и относится к минимальной дозе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, необходимой для достижения желаемого терапевтического эффекта, и включает дозу, достаточную для уменьшения симптома, ассоциирующегося с расстройством, которое лечат. В аспектах этого воплощения терапевтически эффективная концентрация клостридиального токсина в качестве активного ингредиента уменьшает симптом, ассоциирующийся с расстройством, которое лечат, например, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 100%. В других аспектах этого воплощения терапевтически эффективная концентрация клостридиального токсина в качестве активного ингредиента уменьшает симптом, ассоциирующийся с расстройством, которое лечат, например, максимально на 10%, максимально на 20%, максимально на 30%, максимально на 40%, максимально на 50%, максимально на 60%, максимально на 70%, максимально на 80%, максимально на 90% или максимально на 100%.

Предполагается, что любое количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента может быть добавлено в приготавливаемые фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, раскрытые в настоящем описании, при условии, что достигается терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. В аспектах этого воплощения количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, добавляемого к композиции, составляет по меньшей мере 0,001 Е/кг, по меньшей мере 0,01 Е/кг, по меньшей мере 0,1 Е/кг, по меньшей мере 1,0 Е/кг, по меньшей мере 10 Е/кг, по меньшей мере 100 Е/кг или по меньшей мере 1000 Е/кг. В других аспектах этого воплощения количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, добавляемого к композиции, составляет максимально 0,001 Е/кг, максимально на 0,01 Е/кг, максимально на 0,1 Е/кг, максимально на 1,0 Е/кг, максимально на 10 Е/кг, максимально на 100 Е/кг или максимально на 1000 Е/кг. В других аспектах этого воплощения количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, добавляемого к композиции, составляет от приблизительно 0,001 Е/кг до приблизительно 1000 Е/кг, от приблизительно 0,01 Е/кг до приблизительно 1000 Е/кг, от приблизительно 0,1 Е/кг до приблизительно 1000 Е/кг или от приблизительно 1,0 Е/кг до приблизительно 1000 Е/кг. В других аспектах этого воплощения количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, добавляемого к композиции, составляет от приблизительно 0,001 Е/кг до приблизительно 100 Е/кг, от приблизительно 0,01 Е/кг до приблизительно 100 Е/кг, от приблизительно 0,1 Е/кг до приблизительно 100 Е/кг или от приблизительно 1,0 Е/кг до приблизительно 100 Е/кг. Используемый здесь термин "единица" или "Е" относится к дозе LD₅₀, которую определяют, как количество клостридиального токсина, комплекса с клостридиальным токсином или модифицированного клостридиального токсина, которое убивает 50% мышей, инъецированных клостридиальным токсином, комплексом с клостридиальным токсином или модифицированным клостридиальным токсином. Используемый здесь термин "приблизительно", когда характеризует величину указываемой единицы, количество, процент или период, относится к диапазону плюс или минус десять процентов от величины, указанной единицы, процента, параметра или периода.

В других аспектах этого воплощения количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, добавляемого к композиции, составляет по меньшей мере 1,0 пг, по меньшей мере 10 пг, по меньшей мере 100 пг, по меньшей мере 1,0 нг, по меньшей мере 10 нг, по меньшей мере 100 нг, по меньшей мере 1,0 мкг, по меньшей мере 10 мкг, по меньшей мере 100 мкг, или по меньшей мере 1,0 мг. В других аспектах этого воплощения, количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, добавляемого к композиции, составляет максимально 1,0 пг, максимально 10 пг, максимально 100 пг, максимально 1,0 нг, максимально 10 нг, максимально 100 нг, максимально 1,0 мкг, максимально 10 мкг, максимально 100 мкг, или максимально на 1,0 мг. В других аспектах этого воплощения, количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, добавляемого к композиции, составляет от приблизительно 1,0 пг до приблизительно 10 мкг, от приблизительно 10 пг до приблизительно 10 мкг, от приблизительно 100 пг до приблизительно 10 мкг, от приблизительно 1,0 нг до приблизительно 10 мкг, от приблизительно 10 нг до приблизительно 10 мкг или от приблизительно 100 нг до приблизительно 10 мкг. В других аспектах этого воплощения количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, добавляемого к композиции, составляет от приблизительно 1,0 пг до приблизительно 1,0 мкг, от приблизительно 10 пг до приблизительно 1,0 мкг, от приблизительно 100 пг до приблизительно 1,0 мкг, от приблизительно 1,0 нг до приблизительно 1,0 мкг, от приблизительно 10 нг до приблизительно 1,0 мкг или от приблизительно 100 нг до приблизительно 1,0 мкг. В других аспектах этого воплощения количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, добавляемого к композиции, составляет от приблизительно 1,0 пг до приблизительно 5,0 мкг, от приблизительно 10 пг до приблизительно 5,0 мкг, от приблизительно 100 пг до приблизительно 5,0 мкг, от приблизительно 1,0 нг до приблизительно 5,0 мкг, от приблизительно 10 нг до приблизительно 5,0 мкг или от приблизительно 100 нг до приблизительно 5,0 мкг. В других аспектах этого воплощения количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, добавляемого к композиции, составляет от приблизительно 1,0 пг до приблизительно 10 мкг, от приблизительно 10 пг до приблизительно 10 мкг, от приблизительно 100 пг до приблизительно 10 мкг, от приблизительно 1,0 нг до приблизительно 10 мкг, от приблизительно 10 нг до приблизительно 10 мкг или от приблизительно 100 нг до приблизительно 10 мкг.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, клостридиальный токсин как клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. Используемый здесь термин "клостридиальный токсин" относится к любому нейротоксину, продуцируемому штаммом клостридий, который может осуществлять общий клеточный механизм, посредством которого клостридиальный токсин интоксицирует клетку и охватывает связывание клостридиального токсина с низко- или высокоаффинным рецептором клостридиального токсина, интернализацию комплекса токсин/рецептор, транслокацию легкой цепи клостридиального токсина в цитоплазму и ферментативную модификацию клостридиального токсина как субстрата. Не ограничивающие объем изобретения примеры клостридиального токсина включают ботулинический токсин, такой как BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C₁, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, столбнячный токсин (ТеМТ), токсин Baratii (BaNT) и токсин Butyricum (BuNT). Цитотоксин BoNT/C₂ и цитотоксин BoNT/С₃, не представляющие собой нейротоксины, исключены из термина "клостридиальный токсин." Клостридиальные токсины могут быть получены, например, из List Biological Laboratories, Inc. (Campbell, California), the Centre for Applied Microbiology and Research (Porton Down, E.K), Wako (Osaka, Japan), и Sigma Chemicals (St Louis, Missouri). Дополнительно, клостридиальные токсины могут быть получены с использованием стандартных способов очистки или рекомбинантной биологии, известных специалистам в данной области техники. Например с использованием способа Schantz NAP могут быть отделены с получением очищенного токсина, такого как, например BoNT/A с молекулярной массой приблизительно 150 кДа со специфической активностью 1-2×10⁸ LD₅₀ Е/мг или больше, очищенный ВоМТ/В с молекулярной массой приблизительно 156 кДа со специфической активностью 1-2×10⁸ LD₅₀ Е/мг или больше, и очищенный BoNT/F с молекулярной массой приблизительно 155 кДа со специфической активностью 1-2×10⁷ LD₅₀ Е/мг или больше. Смотри Edward J. Schantz & Eric A. Johnson, Properties and use of Botulinum Toxin and Other Microbial Neurotoxins in Medicine, Microbiol Rev. 56:80-99 (1992). В качестве еще одного примера рекомбинантные клостридиальные токсины могут быть рекомбинантно получены, как описано в Lance E. Steward et al., Optimizing Expression of Active Botulinum Toxin Type А, Публикация патента США 2008/0057575; и Lance E. Steward etal., Optimizing Expression of Active Botulinum Toxin Type E, Публикация патент США 2008/0138893, каждая из которых включена здесь путем ссылки.

Клостридиальный токсин включает без ограничения природные варианты клостридиального токсина, такие как, например, изоформы клостридиального токсина и подтипы клостридиального токсина; неприродные варианты клостридиального токсина, такие как, например консервативные варианты клостридиального токсина, неконсервативные варианты клостридиального токсина, химерные варианты клостридиального токсина и активные фрагменты клостридиального токсина, или любую их комбинацию. Используемый здесь термин "вариант клостридиального токсина", как природный, так и неприродный, относится к клостридиальному токсину, который имеет по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно соответствующей области раскрытых референсных последовательностей (смотри Таблицу 1), и может быть описан в процентной идентичности относительно соответствующей области этой референсной последовательности. В качестве не ограничивающих объем изобретения примеров вариант BoNT/A, содержащий аминокислоты 1-1296 SEQ ID NO:1, имеет различие по меньшей мере по одной аминокислоте, такое как, например аминокислотная замена, делеция или добавление, по сравнению с аминокислотным фрагментом 1-1296 SEQ ID NO:1; вариант BoNT/В, содержащий аминокислоты 1-1291 SEQ ID NO:2, имеет по меньшей мере различие по одной аминокислоте, такое как, например, аминокислотная замена, делеция или добавление, по сравнению с аминокислотным фрагментом 1-1291 SEQ ID NO:2; вариант BoNT/C1, содержащий аминокислоты 1-1291 SEQ ID NO:3, имеет по меньшей мере различие по одной аминокислоте, такое как, например, аминокислотная замена, делеция или добавление, по сравнению с аминокислотным фрагментом 1-1291 SEQ ID NO:3; вариант BoNT/D, содержащий аминокислоты 1-1276 SEQ ID NO:4, имеет по меньшей мере различие по одной аминокислоте, такое как, например, аминокислотная замена, делеция или добавление, по сравнению с аминокислотным фрагментом 1-1276 SEQ ID NO:4; вариант BoNT/Е, содержащий аминокислоты 1-1252 SEQ ID NO:5, имеет по меньшей мере различие по одной аминокислоте, такое как, например, аминокислотная замена, делеция или добавление, по сравнению с аминокислотным фрагментом 1-1252 SEQ ID NO:5; вариант BoNT/F, содержащий аминокислоты 1-1274 SEQ ID NO:6, имеет по меньшей мере различие по одной аминокислоте, такое как, например, аминокислотная замена, делеция или добавление, по сравнению с аминокислотным фрагментом 1-1274 SEQ ID NO:6; вариант BoNT/G, содержащий аминокислоты 1-1297 SEQ ID NO:7, имеет по меньшей мере различие по одной аминокислоте, такое как, например, аминокислотная замена, делеция или добавление, по сравнению с аминокислотным фрагментом 1-1297 SEQ ID NO:7; вариант TeNT, содержащий аминокислоты 1-1315 SEQ ID NO:8, имеет по меньшей мере различие по одной аминокислоте, такое как, например, аминокислотная замена, делеция или добавление, по сравнению с аминокислотным фрагментом 1-1315 SEQ ID NO:8; вариант BaNT, содержащий аминокислоты 1-1268 SEQ ID NO:9, имеет по меньшей мере различие по одной аминокислоте, такое как, например, аминокислотная замена, делеция или добавление, по сравнению с аминокислотным фрагментом 1-1268 SEQ ID NO:9; и вариант BuNT, содержащий аминокислоты 1-1251 SEQ ID NO:10, имеет по меньшей мере различие по одной аминокислоте, такое как, например, аминокислотная замена, делеция или добавление, по сравнению с аминокислотным фрагментом 1-1251 SEQ ID NO:10.

Любой из множества способов выравнивания последовательностей может быть использован для определения процентной идентичности, включающий, без ограничения, глобальные способы, локальные способы и гибридные способы, такие как, например, способы наложения сегментов. Протоколы для определения процентной идентичности представляют собой рутинные способы в объеме знаний специалиста в данной области техники и исходя из изложенной здесь концепции.

Глобальные способы совмещения последовательностей от начала до конца молекулы и определения наилучшего совмещения путем добавления оценок для отдельных пар остатков и наложения штрафных баллов за пропуск. Не ограничивающие объем изобретения способы включают, например, CLUSTAL W, смотри, например, Julie D. Thompson et al., CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting, Position-Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994); и итерационное уточнение, смотри, например, Osamu Gotoh, Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. Mol. Biol. 823-838 (1996).

Локальные способы позволяют выравнивать последовательности путем идентификации одного или более консервативных мотивов, которые имеются во всех входящих последовательностях. Не ограничивающие объем изобретения способы включают, например, Match-box, смотри, например, Eric Depiereux and Ernest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501-509 (1992); пробоотбор Гиббса, смотри, например, С.Е. Lawrence et al., Detecting Subtle Sequence Signals: A Gibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment, 262(5131) Science 208-214 (1993); Align-M, смотри, например, Ivo Van Walle et al., Align-M-A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics, 1428-1435 (2004).

Гибридные способы комбинируют функциональные аспекты глобальных и локальных способов выравнивания. Не ограничивающие объем изобретения способы включают, например, посегментное сравнение, смотри, например, Burkhard Morgenstern et al., Multiple DNA and Protein Sequence Alignment Based on Segment-To-Segment Comparison, 93(22) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 12098-12103 (1996); T-Coffee, смотри, например, Cedric Notredame et al., T-Coffee: A Novel Algorithm for Multiple Sequence Alignment, 302(1) J. Mol. Biol. 205-217 (2000); MUSCLE, смотри, например, Robert С.Edgar, MUSCLE: Multiple Sequence Alignment With High Score Accuracy and High Throughput, 32(5) Nucleic Acids Res. 1792-1797 (2004); и DIALIGN-T, смотри, например, Amarendran R Subramanian et al., DIALIGN-T: An Improved Algorithm for Segment-Based Multiple Sequence Alignment, 6(1) BMC Bioinformatics 66 (2005).

Таким образом, в одном из воплощений фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C₁, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, TeNT, BaNT или BuNT. В еще одном воплощении фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит вариант клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит природный вариант клостридиального токсина или неприродный вариант клостридиального токсина. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит вариант ВоМТ/А, вариант BoNT/B, вариант BoNT/C₁, вариант BoNT/D, вариант BoNT/E, вариант BoNT/F, вариант BoNT/G, вариант TeNT, вариант BaNT или вариант BuNT, где вариант представляет собой природный вариант или неприродный вариант.

В аспекте этого воплощения гидрофильная аминокислота в одной конкретной позиции в полипептидной цепи может быть заменена на другую гидрофильную аминокислоту. Примеры гидрофильных аминокислот включают, например, С, F, I, L, М, V и W. В еще одном аспекте этого воплощения алифатическая аминокислота в одной конкретной позиции в полипептидной цепи может быть заменена на другую алифатическая аминокислоту. Примеры ароматических аминокислот включают, например, А, I, L, P, и V. В еще одном аспекте этого воплощения алифатическая аминокислота в одной конкретной позиции в полипептидной цепи может быть заменена на другую ароматическую аминокислоту. Примеры ароматических аминокислот включают, например, F, Н, W и Y. В еще одном аспекте этого воплощения стэкинг аминокислота в одной конкретной позиции в полипептидной цепи может быть заменена на другую стэкинг аминокислоту. Примеры стэкинг аминокислот включают, например, F, Н, W и Y. В еще одном аспекте этого воплощения полярная аминокислота в одной конкретной позиции в полипептидной цепи может быть заменена на другую полярную аминокислоту. Примеры полярных аминокислот включают, например, D, Е, К, N, Q и R. В еще одном аспекте этого воплощения менее полярная или индифферентная аминокислота в одной конкретной позиции в полипептидной цепи может быть заменена на другую менее полярную или индифферентную аминокислоту. Примеры менее полярных или индифферентных аминокислот включают, например, А, Н, G, P, S, Т и Y. В еще одном аспекте этого воплощения положительно заряженная аминокислота в одной конкретной позиции в полипептидной цепи может быть заменена на другую положительно заряженную аминокислоту. Примеры положительно заряженных аминокислот включают, например, К, R и Н. В еще одном аспекте этого воплощения отрицательно заряженная аминокислота в одной конкретной позиции в полипептидной цепи может быть заменена на другую отрицательно заряженную аминокислоту. Примеры отрицательно заряженных аминокислот включают, например, D и Е. В еще одном аспекте этого воплощения небольшая аминокислота в одной конкретной позиции в полипептидной цепи может быть заменена на другую небольшую аминокислоту. Примеры небольших аминокислот включают, например А, D, G, N, P, S и Т. В еще одном аспекте этого воплощения аминокислота с разветвлением по С-бета в одной конкретной позиции в полипептидной цепи может быть заменена на другую аминокислоту с разветвлением по С-бета. Примеры аминокислот с разветвлением по С-бета включают, например I, Т и V.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, комплекс с клостридиальным токсином, где клостридиальный токсин выступает в качестве активного ингредиента. Используемый здесь термин "комплекс с клостридиальным токсином" относится к комплексу, содержащему клостридиальный токсин и ассоциированные NAP, такому как, например, комплекс с ботулиническим токсином, комплекс со столбнячным токсином, комплекс с токсином Baratii и комплекс с токсином Butyricum. He ограничивающие объем изобретения примеры комплексов с клостридиальным токсином включают комплексы, продуцируемые Clostridium botulinum, такие как, например, комплекс BoNT/A массой 900 кДа, комплекс BoNT/A массой 500 кДа, комплекс BoNT/A массой 300 кДа, комплекс BoNT/B массой 500 кДа, комплекс BoNT/C₁ массой 500 кДа, комплекс BoNT/D массой 500 кДа, комплекс BoNT/D массой 300 кДа, комплекс BoNT/E массой 300 кДа и комплекс BoNT/F массой 300 кДа. Комплексы с клостридиальным токсином могут быть очищены с использованием способов, описанных в Schantz, выше, (1992); Hui Xiang et al., Animal Product Free System and Process for Purifying a Botulinum Toxin, Патент США 7354740, каждый из которых включен здесь путем ссылки. Комплексы с клостридиальным токсином могут быть получены из, например, List Biological Laboratories, Inc. (Campbell, California), the Centre for Applied Microbiology и Research (Porton Down, E.K), Wako (Osaka, Japan) и Sigma Chemicals (St Louis, Missouri).

Например, высококачественный кристаллический комплекс BoNT/A может быть получен из штамма Hall A Clostridium botulinum с характеристиками ≥3×10⁷ Е/мг, А₂₆₀/А₂₇₈ меньше чем 0,60 и отличной картиной полос на гель-электрофорезе с использованием способа Schantz. Смотри Schantz, выше, (1992). Как правило, комплекс BoNT/A может быть выделен и очищен после анаэробной ферментации путем выращивания Clostridium botulinum тип А в подходящей среде. Неочищенный токсин может быть собран путем осаждения серной кислотой и концентрирован путем ультрамикрофильтрации. Очистка может быть осуществлена путем растворения кислотного осадка в хлориде кальция. Токсин затем может быть осажден охлажденным этанолом. Осадок может быть растворен в натрий-фосфатном буфере и центрифугирован. После сушки затем может быть получен кристаллический комплекс BoNT/A массой приблизительно 900 кДа со специфической активностью 3×10⁷ LD₅₀ Е/мг или больше.

Таким образом, в одном воплощении фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит комплекс с клостридиальным токсином в виде клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит комплекс BoNT/A, комплекс BoNT/B, комплекс BoNT/C₁, комплекс BoNT/D, комплекс ВоМТ/Е, комплекс BoNT/F, комплекс BoNT/G, комплекс TeNT, комплекс BaNT или комплекс BuNT. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит комплекс BoNT/A массой 900 кДа, комплекс BoNT/A массой 500 кДа, комплекс BoNT/A массой 300 кДа, комплекс BoNT/B массой 500 кДа, комплекс BoNT/C₁ массой 500 кДа, комплекс BoNT/D массой 500 кДа, комплекс BoNT/D массой 300 кДа, комплекс BoNT/E массой 300 кДа или комплекс BoNT/F массой 300 кДа.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, модифицированный клостридиальный токсин в виде клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Используемый здесь термин "модифицированный клостридиальный токсин" относится к любому клостридиальному токсину, модифицированному некоторым образом, с получением свойств или характеристик, не представленных в немодифицированном клостридиальном токсине, но в то же время при сохранении общего клеточного механизма, посредством которого клостридиальный токсин интоксицирует клетку, включающего, например связывание клостридиального токсина с низко или высокоаффинным рецептором клостридиального токсина, интернализацию токсина/рецепторного комплекса, транслокацию легкой цепи клостридиального токсина в цитоплазму и ферментативную модификацию клостридиального токсина как субстрата. Не ограничивающие объем изобретения примеры вариантов клостридиального токсина описаны в Steward, L.E. et al., Post-Translational Modifications and Clostridial Neurotoxins, патент США 7,223,577; Wei-Jen Lin et al., Neurotoxins with Enhanced Target Specificity, патент США 7,273,722; Lance E. Steward et al., Clostridial Neurotoxin Compositions and Modified Clostridial Toxin Neurotoxins, заявка на патент США 2004/0220386; Steward, L.E. et al., Clostridial Toxin Activatable Clostridial Toxins, заявка на патент США 2007/0166332; Lance E. Steward et al., Modified Clostridial Toxins With Enhanced Targeting Capabilities For Endogenous Clostridial Toxin Receptor Systems, заявка на патент США 2008/0096248; Steward L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capability and Enhanced Targeting Activity, заявка на патент США No. 11/776,043; Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Clostridial Toxin Target Cells, заявка на патент США No. 11/776,052; каждый из которых включен путем ссылки. Steward, L.E. et al., Degradable Clostridial Toxins, заявка на патент США No. 12/192,905; каждый из которых полностью включен путем ссылки.

Таким образом, в одном из воплощений фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит модифицированный клостридиальный токсин в виде клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит модифицированный BoNT/A, модифицированный BoNT/B, модифицированный BoNT/C₁, модифицированный BoNT/D, модифицированный BoNT/E, модифицированный BoNT/F, модифицированный BoNT/G, модифицированный TeNT, модифицированный BaNT или модифицированный BuNT.

В еще одном воплощении фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина, связывающий домен клостридиального токсина и дополнительный двухлейциновый мотив.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, перенацеленный клостридиальный токсин в виде клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Используемый здесь термин "перенацеленный клостридиальный токсин" относится к клостридиальному токсину, модифицированному для избирательного связывания с рецептором, отличным от рецептора клостридиального токсина, представленным на клетках-мишенях, отличающихся от клеток-мишеней клостридиального токсина, но с сохранением оставшихся стадий интоксикации клостридиальным токсином, таких как, например интернализация комплекса токсин/рецептор, транслокация легкой цепи клостридиального токсина в цитоплазму и ферментативная модификация клостридиального токсина как субстрата. Перенацеленный клостридиальный токсин может интоксицировать нейрональную клетку или ненейрональную клетку в зависимости от модификации, произведенной с клостридиальным токсином. Перенацеленный клостридиальный токсин может представлять собой перенацеленный ботулинический токсин, перенацеленный столбнячный токсин, перенацеленный токсин Baratii и перенацеленный токсин Butyricum. He ограничивающие объем изобретения примеры перенацеленного клостридиального токсина описаны, например, в Keith A. Foster et al., Clostridial Toxin Derivatives Able To Modify Peripheral Sensory Afferent Functions, патент США 5989545; Clifford С.Shone et al., Recombinant Toxin Fragments, патент США 6461617; Conrad P. Quinn et al., Methods and Compounds for the Treatment of Mucus Hypersecretion, патент США 6632440; Lance E. Steward et al., Methods And Compositions For The Treatment Of Pancreatitis, патент США 6843998; J. Oliver Dolly et al., Activatable Recombinant Neurotoxins, патент США 7132259; Stephan Donovan, Clostridial Toxin Derivatives and Methods For Treating Pain, заявка на патент США 2002/0037833; Keith A. Foster et al., Inhibition of Secretion from Non-neural Cells, заявка на патент США 2003/0180289; Lance E. Steward etal., Multivalent Clostridial Toxin Derivatives and Methods of Their Use, заявки на патент США 2006/0211619; Keith A. Foster et al., Non-Cytotoxic Protein Conjugates, заявка на патент США 2008/0187960; Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells, заявка на патент США No. 11/776075; Keith A. Foster et al., Re-targeted Toxin Conjugates, заявка на патент США No. 11/792210; каждый из которых полностью включен путем ссылки.

Таким образом, в одном воплощении фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин в виде клостридиального токсина как активного ингредиента. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный BoNT/A, перенацеленный BoNT/B, перенацеленный BoNT/C₁, перенацеленный BoNT/D, перенацеленный BoNT/E, перенацеленный BoNT/F, перенацеленный BoNT/G, перенацеленный TeNT, перенацеленный BaNT, или перенацеленный BuNT. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержащий опиоидную нацеливающую группировку, такую как, например, энкефалин, эндоморфин, эндорфин, динорфин, ноцицептин или геморфин. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержащий тахикининовую нацеливающую группировку, такую как, например, вещество Р, нейропептид К (NPK), нейропептид гамма (NP гамма), нейрокинин A (NKA; вещество К, нейрокинин альфа, нейромедин L), нейрокинин В (NKB), хемокинин или эндокинин. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержит мелакортиновую нацеливающую группировку, такую как, например, меланоцитстимулирующий гормон, адренокортикотропин или липотропин. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержащий галаниновую нацеливающую группировку, такую как, например, галанин или галанин мессэдж-ассоциированный пептид. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержащий граниновую нацеливающую группировку, такую как, например, хромогранин А, хромогранин В или хромогранин С. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержащий нацеливающую группировку - пептид, родственный нейропептиду Y, такую как, например, нейропептид Y, пептид YY, панкреатический пептид или панкреатический икозапептид. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержащий нацеливающую группировку - нейрогормон, такой как, например, кортиколиберин, паратиреоидный гормон, тиреолиберин или соматостатин. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержащий нацеливающую группировку - нейрорегуляторный цитокин, такой как, например, цилиарный нейротрофический фактор, гликофорин-А, фактор ингибирования лейкемии, холинергический дифференцирующий фактор, интерлейкин, оностатин М, кардиотрофин-1, кардиотрофинподобный цитокин или нейролейкин. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержащий нацеливающую группировку - кининовый пептид, такой как, например, брадикинин, каллидин, desArg9 брадикинин или desArg10 брадикинин. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержащий нацеливающую группировку - фактор роста фибробластов, нацеливающую группировку - фактор роста нервов, нацеливающую группировку - инсулиноподобный фактор роста, нацеливающую группировку - эпидермальный фактор роста, нацеливающую группировку - фактор роста эндотелия сосудов, нацеливающую группировку - нейротрофический фактор головного мозга, нацеливающую группировку - глиальный нейротрофический фактор, нейротрофиновую нацеливающую группировку, такую как, например, нейротрофин-3, нейротрофин-4/5, нацеливающую группировку - головной активаторный пептид, нацеливающую группировку - нейротурин, нацеливающую группировку - персефин, нацеливающую группировку - артемин, нацеливающую группировку -трансформирующий фактор роста Р, такой как, например, TGFβ1, TGFβ2, TGFβ3 или TGFβ4, нацеливающую группировку - костный морфогенетический белок, такой как, например, ВМР2, ВМР3, ВМР4, ВМР5, ВМР6, ВМР7, ВМР8 или ВМР10, нацеливающую группировку - ростовой фактор дифференцировки, такой как, например, GDF1, GDF2, GDF3, GDF5, GDF6, GDF7, GDF8, GDF10, GDF11 или GDF15, или активиновую нацеливающую группировку, такую как, например, активин А, активин В, активин С, активин Е или ингибин А. В еще одном аспекте этого воплощения, фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит перенацеленный клостридиальный токсин, содержащий нацеливающую группировку-глюкагоноподобный гормон, такой как, например, секретин, глюкагоноподобный пептид, такой как GLP-1 и GLP-2, нацеливающую группировку-гипофизарный активирующий аденилатциклазу пептид, нацеливающую группировку-соматотропин-высвобождающий фактор, нацеливающую группировку-вазоактивный интестинальный пептид, такой как VIP1 или VIP2, нацеливающую группировку-гастроингибирующий полипептид, нацеливающую группировку-кальцитониноподобный висцеральный желудочный полипептид, такой как гастрин, гастрин-высвобождающий пептид или холецистокинин, или нацеливающую группировку-PAR пептид, такой как пептид PAR1, пептид PAR2, пептид PAR3 или пептид PAR4.

В еще одном воплощении фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий неклостридиальный токсин. В аспектах этого воплощения одноцепочечный белок содержит линейную последовательность от С к N-концу 1) клостридиального ферментативного домена, клостридиального домена транслокации и неклостридиального связывающего домена; 2) клостридиального ферментативного домена, неклостридиального связывающего домена и клостридиального домена транслокации; 3) неклостридиального связывающего домена, домена транслокации клостридиального токсина и ферментативного домена клостридиального токсина; 4) неклостридиального связывающего домена, ферментативного домена клостридиального токсина и домена транслокации клостридиального токсина; 5) домена транслокации клостридиального токсина, ферментативного домена клостридиального токсина и неклостридиального связывающего домена; или 6) домена транслокации клостридиального токсина, неклостридиального связывающего домена и ферментативного домена клостридиального токсина.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий опиоид. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий энкефалин; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий бычий адреномедуллярный пептид-22 (ВАМ22); 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий эндоморфин; 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий эндорфин; 5) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий динорфин; 6) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий ноцицептин; 7) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий геморфин; или 8) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий риморфин.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид меланокортин. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий меланоцитстимулирующий гормон; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий адренокортикотропин; или 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий липотропин.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид галанин. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий галанин; или 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий галанин мессэдж-ассоциированные пептид (GMAP).

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид Гранин. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий хромогранин А; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий хромогранин В; или 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий хромогранин С.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий тахикининовый пептид. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий Вещество Р; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий нейропептид K; 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий нейропептид гамма; 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий нейрокинин А; 5) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий хемокинин; или 6) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий эндокинин.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид, родственный нейропептиду Y. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий нейропептид Y (NPY); 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид YY (PYY); 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий панкреатический пептид (РР); или 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий панкреатический икозапептид (PIP).

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептидный нейрогормон. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий кортиколиберин (CCRH); 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий паратиреоидный гормон (РТН); 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий тиреолиберин (TRH); или 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий соматостатин.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий цитокиновый пептид. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий цилиарный нейротрофический фактор (CNTF); 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий гликофорин-А (GPA); 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий фактор, ингибирующий лейкемию (LIF); 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий интерлейкин (IL); 5) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий оностатин М; 6) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий кардиотрофин-1 (СТ-1); 7) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий кардиотрофинподобный цитокин (CLC); 8) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий нейролейкин.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий кининовый пептид. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий брадикинин; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий каллидин; 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий desArg9 брадикинин; или 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий desArg10 брадикинин.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид фактор роста фибробластов (FGF). В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий FGF-1; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий FGF-2; 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий FGF-4; 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий FGF-8; 5) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий FGF-9; 6) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий FGF-17; или 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий FGF-18.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид нейротрофин. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий фактор роста нервов (NGF); 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий нейротрофический фактор головного мозга (BDNF); 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий нейротрофин-3 (NT-3); 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий нейротрофин-4/5 (NT-4/5); или 5) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий головной активаторный пептид (НА).

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид фактор некроза опухоли (TNF).

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид глиальный фактор роста (GDNF). В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий нейртурин; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий персефрин; или 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий артемин.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид трансформирующий фактор роста β (TGFβ). В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий TGFβ1; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий TGFβ2; 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий TGFβ3; или 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий TGFβ4.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид костный морфогенетический белок β (BMP). В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий ВМР2; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий ВМР3; 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий ВМР4; 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий ВМР5; 5) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий ВМР6; 6) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий ВМР7; 7) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий ВМР8; или 8) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий ВМР10.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид фактор роста и дифференцировки В (GDF). В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий GDF1; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий GDF2; 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий GDF3; 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий GDF5; 5) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий GDF6; 6) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий GDF7; 7) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий GDF8; 8) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий GDF10; 9) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий GDF11; или 10) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий GDF15.

В других аспектах этого воплощения, фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид активин. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий активин А; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий активин В; 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий активин С; 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий активин Е; или 5) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий ингибин А.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид фактор роста эндотелия сосудов (VEGF).

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид инсулиноподобный фактор роста (IGF). В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий IGF-1; или 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий IGF-2.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид эпидермальный фактор роста (EGF).

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий глюкагоноподобный пептид. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий секретин; или 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий глюкагоноподобный пептид.

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий гипофизарный активирующий аденилатциклазу пептид (РАСАР).

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий пептид соматотропин-высвобождающий-фактор (GHRH).

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий вазоактивный интестинальный пептид (VIP). В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина, и домен, связывающий VIP1; или 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий VIP2.

В других аспектах этого воплощения, фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий желудочный ингибиторный полипептид (GIP).

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий родственный кальцитонину висцеральный кишечный пептид. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и гастринсвязывающий домен; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий гастринвысвобождающий пептид; или 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий холецистокинин (ССК).

В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и пептидсвязывающий домен активируемого протеазой рецептора (PAR). В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит: 1) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий PAR1; 2) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий PAR2; 3) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий PAR3; или 4) ферментативный домен клостридиального токсина, домен транслокации клостридиального токсина и домен, связывающий PAR4.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, фармакологически приемлемый эксципиент. Используемый здесь термин "фармакологически приемлемый эксципиент" является синонимом "фармакологический эксципиент" или "эксципиент" и относится к любому эксципиенту, который по существу не оказывает длительного или постоянного отрицательного действия при введении млекопитающему, и охватывает соединения, такие как, например, стабилизатор, наполнитель, криопротектор, лиопротектор, добавку, растворитель, носитель, разбавитель или вспомогательный агент. Эксципиент, как правило, смешан с активным ингредиентом или предназначен для растворения или включения активного ингредиента и может представлять собой твердое вещество, полутвердое вещество или жидкий агент. Также предполагается, что фармацевтическая композиция, содержащая клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, может включать один или более чем один фармацевтически приемлемый эксципиент, который облегчает обработку активного ингредиента в фармацевтически приемлемые композиции. В той степени, в которой любой фармакологически приемлемый эксципиент не является несовместимым с клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, рассматривается его применение в фармацевтически приемлемых композициях. Не ограничивающие объем изобретения примеры фармакологически приемлемых эксципиентов можно найти, например в Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams &Wilkins Publishers, 7^th ed. 1999); Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams &Wilkins, 20^th ed. 2000); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10^th ed. 2001); и Handbook of Pharmaceutical Excipients (Raymond C. Rowe et al., APhA Publications, 4^th edition 2003), каждый из которых включен здесь путем ссылки.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, эффективное количество. Используемый здесь термин "эффективное количество", когда используется в отношении количества эксципиента или специфической комбинации эксципиентов, добавляемых к композиции клостридиального токсина, относится к количеству каждого эксципиента, которое необходимо для достижения желаемой исходной восстановленной активности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. В аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента или комбинации эксципиентов приводит в результате к исходной восстановленной активности, например, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 100%. В других аспектах этого воплощения терапевтически эффективная концентрация клостридиального токсина в качестве активного ингредиента уменьшает симптом, ассоциирующийся с расстройством, которое лечат, например, максимально на 10%, максимально на 20%, максимально на 30%, максимально на 40%, максимально на 50%, максимально на 60%, максимально на 70%, максимально на 80%, максимально на 90% или максимально на 100%.

В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, по меньшей мере 0,1 мг, по меньшей мере 0,125 мг, по меньшей мере 0,2 мг, по меньшей мере 0,25 мг, по меньшей мере 0,3 мг, по меньшей мере 0,3125 мг, по меньшей мере 0,4 мг, по меньшей мере 0,5 мг, по меньшей мере 0,6 мг, по меньшей мере 0,625 мг, по меньшей мере 0,7 мг, по меньшей мере 0,8 мг или по меньшей мере 0,9 мг. В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, по меньшей мере 1,0 мг, по меньшей мере 2,0 мг, по меньшей мере 3,0 мг, по меньшей мере 4,0 мг, по меньшей мере 5,0 мг, по меньшей мере 6,0 мг, по меньшей мере 7,0 мг, по меньшей мере 8,0 мг или по меньшей мере 9,0 мг. В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, по меньшей мере 10 мг, по меньшей мере 20 мг, по меньшей мере 30 мг, по меньшей мере 40 мг, по меньшей мере 50 мг, по меньшей мере 60 мг, по меньшей мере 70 мг, по меньшей мере 80 мг, по меньшей мере 90 мг или по меньшей мере 100 мг.

В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, максимально 0,1 мг, максимально 0,125 мг, максимально 0,2 мг, максимально 0,25 мг, максимально 0,3 мг, максимально 0,3125 мг, максимально 0,4 мг, максимально 0,5 мг, максимально 0,6 мг, максимально 0,625 мг, максимально 0,7 мг, максимально 0,8 мг или максимально 0,9 мг. В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, максимально 1,0 мг, максимально 2,0 мг, максимально 3,0 мг, максимально 4,0 мг, максимально 5,0 мг, максимально 6,0 мг, максимально 7,0 мг, максимально 8,0 мг, или максимально 9,0 мг. В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, максимально 10 мг, максимально 20 мг, максимально 30 мг, максимально 40 мг, максимально 50 мг, максимально 60 мг, максимально 70 мг, максимально 80 мг, максимально 90 мг, или максимально 100 мг.

В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 50 мг, от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 10 мг, от приблизительно 0,25 мг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 0,25 мг до приблизительно 50 мг, от приблизительно 0,25 мг до приблизительно 10 мг, от приблизительно 0,5 мг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 0,5 мг до приблизительно 50 мг, от приблизительно 0,5 мг до приблизительно 10 мг, от приблизительно 0,75 мг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 0,75 мг до приблизительно 50 мг, от приблизительно 0,75 мг до приблизительно 10 мг, от приблизительно 1,0 мг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 1,0 мг до приблизительно 50 мг или от приблизительно 1,0 мг до приблизительно 10 мг.

В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, по меньшей мере 0,001%, по меньшей мере 0,002%, по меньшей мере 0,003%, по меньшей мере 0,004%, по меньшей мере 0,005%, по меньшей мере 0,006%, по меньшей мере 0,007%, по меньшей мере 0,008% или по меньшей мере 0,009%. В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, по меньшей мере 0,01%, по меньшей мере 0,02%, по меньшей мере 0,03%, по меньшей мере 0,04%, по меньшей мере 0,05%, по меньшей мере 0,06%, по меньшей мере 0,07%, по меньшей мере 0,08% или по меньшей мере 0,09%. В других аспектах этого воплощения, эффективное количество эксципиента составляет, например, по меньшей мере 0,1%, по меньшей мере 0,2%, по меньшей мере 0,3%, по меньшей мере 0,4%, по меньшей мере 0,5%, по меньшей мере 0,6%, по меньшей мере 0,7%, по меньшей мере 0,8% или по меньшей мере 0,9%. В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, по меньшей мере 1%, по меньшей мере 2%, по меньшей мере 3%, по меньшей мере 4%, по меньшей мере 5%, по меньшей мере 6%, по меньшей мере 7%, по меньшей мере 8% или по меньшей мере 9%.

В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, максимально 0,001%, максимально 0,002%, максимально 0,003%, максимально 0,004%, максимально 0,005%, максимально 0,006%, максимально 0,007%, максимально 0,008% или максимально 0,009%. В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, максимально 0,01%, максимально 0,02%, максимально 0,03%, максимально 0,04%, максимально 0,05%, максимально 0,06%, максимально 0,07%, максимально 0,08% или максимально 0,09%. В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, максимально 0,1%, максимально 0,2%, максимально 0,3%, максимально 0,4%, максимально 0,5%, максимально 0,6%, максимально 0,7%, максимально 0,8% или максимально 0,9%. В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, максимально 1%, максимально 2%, максимально 3%, максимально 4%, максимально 5%, максимально 6%, максимально 7%, максимально 8% или максимально 9%.

В других аспектах этого воплощения эффективное количество эксципиента составляет, например, от приблизительно 0,001% до приблизительно 0,01%, от приблизительно 0,001% до приблизительно 0,1%, от приблизительно 0,001% до приблизительно 1%, от приблизительно 0,001% до приблизительно 10%, от приблизительно 0,01% до приблизительно 0,1%, от приблизительно 0,01% до приблизительно 1%, от приблизительно 0,01% до приблизительно 10%, от приблизительно 0,1% до приблизительно 1% или от приблизительно 0,1% до приблизительно 10%.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, небелковый эксципиент. Используемый здесь термин "небелковый эксципиент" относится к любому эксципиенту, который не представляет собой полипептид, содержащий по меньшей мере пятнадцать аминокислот. Предполагается, что любой небелковый эксципиент полезен в приготавливаемых фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого небелкового эксципиента.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, сахар. Используемый здесь термин "сахар" относится к соединению, содержащему от одного до 10 моносахаридных единиц, например, моносахарид, дисахарид, трисахарид и олигосахарид, содержащий от четырех до десяти моносахаридных единиц. Предполагается, что любой сахар полезен в приготовлении фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого сахара. Моносахариды представляют собой полигидроксиальдегиды или полигидроксикетоны с тремя или более чем тремя атомами углерода, включающие альдозы, диальдозы, альдокетозы, кетозы и дикетозы, а также циклические формы, дезоксисахара и аминосахара, и их производные, при условии, что родительский моносахарид имеет (потенциально) карбонильную группу. Моносахариды включают триозы, такие как глицеральдегид и дигидроксиацетон; тетрозы, такие как эритроза, эритрулеза и треоза; пентозы, такие как арабиноза, ликсоза, рибоза, рибулоза, ксилоза, ксилулоза; гексозы, такие как аллоза, альтроза, фруктоза, фукоза, галактоза, глюкоза, гулоза, идоза, манноза, псикоза, рамноза, сорбоза, тагатоза, талоза и трегалоза; гептозы, такие как седогептулоза и манногептулоза; октоозы, такие как октулоза и 2-кето-3-деокси-манно-октонат; нонозы, такие как сиалоза; и декоза. Олигосахариды представляют собой соединения, в которых по меньшей мере две моносахаридных единицы соединены гликозидными связями. По количеству единиц они называются дисахаридами, трисахаридами, тетрасахаридами, пентасахаридами, гексасахаридами, гептасахаридами, октасахаридами, нонасахаридами, декасахаридами и т.д. Олигосахарид может быть неразветвленным, разветвленным или циклическим. Обычные дисахариды включают без ограничения сахарозу, лактозу, мальтозу, трегалозу, целлобиозу, гентиобиозу, койибиозу, ламинарибозу, маннобиозу, мелибиозу, нигерозу, рутинозу и ксилобиозу. Обычные трисахариды включают без ограничения раффинозу, акарбозу, мальтотриозу и мелезитозу. Другие не ограничивающие объем изобретения примеры специфических применений сахарных эксципиентов можно найти, например в ansel, выше, (1999); gennaro, выше, (2000); hardman, выше, (2001); и Rowe, выше, (2003), каждый из которых полностью включен здесь путем ссылки.

Таким образом, в одном из воплощений фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит сахар. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит моносахарид. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, пентасахарид, гексасахарид, гептасахарид, октосахарид, наносахарид или декасахарид. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит олигосахарид, содержащий от двух до десяти моносахаридных единиц.

Предполагается, что любое количество сахара полезно в приготовлении фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого количества сахара. В аспектах этого воплощения количество сахара, добавляемого к композиции, составляет приблизительно 0,1 масс./об.%, приблизительно 0,5 масс./об.%, приблизительно 1,0 масс./об.%, приблизительно 1,5 масс./об.%, приблизительно 2,0 масс./об.%, приблизительно 2,5 масс./об.%, приблизительно 3,0 масс./об.%, приблизительно 3,5 масс./об.%, приблизительно 4,0 масс./об.%, приблизительно 4,5 масс./об.%, приблизительно 5,0 масс./об.%, приблизительно 5,5 масс./об.%, приблизительно 6,0 масс./об.%, приблизительно 6,5 масс./об.%, приблизительно 7,0 масс./об.%, приблизительно 7,5 масс./об.%, приблизительно 8,0 масс./об.%, приблизительно 8,5 масс./об.%, приблизительно 9,0 масс./об.%, приблизительно 9,5 масс./об.%, приблизительно 10 масс./об.%, приблизительно 15 масс./об.%, приблизительно 20 масс./об.%, приблизительно 25 масс./об.%, приблизительно 30 масс./об.%или приблизительно 35 масс./об.%. В других аспектах этого воплощения количество сахара, добавляемого к композиции, составляет по меньшей мере 0,1 масс./об.%, по меньшей мере 0,5 масс./об.%, по меньшей мере 1,0 масс./об.%, по меньшей мере 1,5 масс./об.%, по меньшей мере 2,0 масс./об.%, по меньшей мере 2,5 масс./об.%, по меньшей мере 3,0 масс./об.%, по меньшей мере 3,5 масс./об.%, по меньшей мере 4,0 масс./об.%, по меньшей мере 4,5 масс./об.%, по меньшей мере 5,0 масс./об.%, по меньшей мере 5,5 масс./об.%, по меньшей мере 6,0 масс./об.%, по меньшей мере 6,5 масс./об.%, по меньшей мере 7,0 масс./об.%, по меньшей мере 7,5 масс./об.%, по меньшей мере 8,0 масс./об.%, по меньшей мере 8,5 масс./об.%, по меньшей мере 9,0 масс./об.%, по меньшей мере 9,5 масс./об.%, по меньшей мере 10 масс./об.%, по меньшей мере 15 масс./об.%, по меньшей мере 20 масс./об.%, по меньшей мере 25 масс./об.%, по меньшей мере 30 масс./об.%, или по меньшей мере 35 масс./об.%. В других аспектах этого воплощения, количество сахара, добавленного к композиции, составляет максимально 0,1 масс./об.%, максимально 0,5 масс./об.%, максимально 1,0 масс./об.%, максимально 1,5 масс./об.%, максимально 2,0 масс./об.%, максимально 2,5 масс./об.%, максимально 3,0 масс./об.%, максимально 3,5 масс./об.%, максимально 4,0 масс./об.%, максимально 4,5 масс./об.%, максимально 5,0 масс./об.%, максимально 5,5 масс./об.%, максимально 6,0 масс./об.%, максимально 6,5 масс./об.%, максимально 7,0 масс./об.%, максимально 7,5 масс./об.%, максимально 8,0 масс./об.%, максимально 8,5 масс./об.%, максимально 9,0 масс./об.%, максимально 9,5 масс./об.%, максимально 10 масс./об.%, максимально 15 масс./об.%, максимально 20 масс./об.%, максимально 25 масс./об.%, максимально 30 масс./об.%или максимально 35 масс./об.%.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, полиол. Используемый здесь термин "полиол" является синонимом "сахарный спирт", "многоатомный спирт" и "полиспирт" и относится к производному сахара, имеющему спиртовую группу (СН₂ОН) вместо альдегидной группы (СНО), такому как, например, маннит из маннозы, ксилит из ксилозы и лактит из лактозы. Предполагается, что любой полиол полезен в приготавливаемых фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого полиола. Не ограничивающие объем изобретения примеры полиолов включают гликоль, глицерин, арабит, эритрит, ксилит, мальтит, сорбит (глюктиол), маннит, инозит, лактит, галактит (идитол), изомальт. Другие не ограничивающие объем изобретения примеры сахарных эксципиентов можно найти, например в Ansel, выше, (1999); Gennaro, выше, (2000); Hardman, выше, (2001); и Rowe, выше, (2003), каждый из которых полностью включен здесь путем ссылки.

Таким образом, в одном из воплощений фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит полиол. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит гликоль, глицерин, арабит, эритрит, ксилит, мальтит, сорбит (глюцит), маннит, инозит, лактит, галактит (идит) или изомальт.

Предполагается, что любое количество полиола полезно в приготавливаемых фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого количества полиола. В аспектах этого воплощения количество полиола, добавляемого к композиции, составляет приблизительно 0,1 масс./об.% приблизительно 0,5 масс./об.%, приблизительно 1,0 масс./об.%, приблизительно 1,5 масс./об.%, приблизительно 2,0 масс./об.%, приблизительно 2,5 масс./об.%, приблизительно 3,0 масс./об.%, приблизительно 3,5 масс./об.%, приблизительно 4,0 масс./об.%, приблизительно 4,5 масс./об.%, приблизительно 5,0 масс./об.%, приблизительно 5,5 масс./об.%, приблизительно 6,0 масс./об.%, приблизительно 6,5 масс./об.%, приблизительно 7,0 масс./об.%, приблизительно 7,5 масс./об.%, приблизительно 8,0 масс./об.%, приблизительно 8,5 масс./об.%, приблизительно 9,0 масс./об.%, приблизительно 9,5 масс./об.%, приблизительно 10 масс./об.%, приблизительно 15 масс./об.%, приблизительно 20 масс./об.%, приблизительно 25 масс./об.%, приблизительно 30 масс./об.%, или приблизительно 35 масс./об.%. В других аспектах этого воплощения количество полиола, добавляемого к композиции, составляет по меньшей мере 0,1 масс./об.%, по меньшей мере 0,5 масс./об.%, по меньшей мере 1,0 масс./об.%, по меньшей мере 1,5 масс./об.%, по меньшей мере 2,0 масс./об.%, по меньшей мере 2,5 масс./об.%, по меньшей мере 3,0 масс./об.%, по меньшей мере 3,5 масс./об.%, по меньшей мере 4,0 масс./об.%, по меньшей мере 4,5 масс./об.%, по меньшей мере 5,0 масс./об.%, по меньшей мере 5,5 масс./об.%, по меньшей мере 6,0 масс./об.%, по меньшей мере 6,5 масс./об.%, по меньшей мере 7,0 масс./об.%, по меньшей мере 7,5 масс./об.%, по меньшей мере 8,0 масс./об.%, по меньшей мере 8,5 масс./об.%, по меньшей мере 9,0 масс./об.%, по меньшей мере 9,5 масс./об.%, по меньшей мере 10 масс./об.%, по меньшей мере 15 масс./об.%, по меньшей мере 20 масс./об.%, по меньшей мере 25 масс./об.%, по меньшей мере 30 масс./об.% или по меньшей мере 35 масс./об.%. В других аспектах этого воплощения количество полиола, добавленного к композиции, составляет максимально 0,1 масс./об.%, максимально 0,5 масс./об.%, максимально 1,0 масс./об.%, максимально 1,5 масс./об.%, максимально 2,0 масс./об.%, максимально 2,5 масс./об.%, максимально 3,0 масс./об.%, максимально 3,5 масс./об.%, максимально 4,0 масс./об.%, максимально 4,5 масс./об.%, максимально 5,0 масс./об.%, максимально 5,5 масс./об.%, максимально 6,0 масс./об.%, максимально 6,5 масс./об.%, максимально 7,0 масс./об.%, максимально 7,5 масс./об.%, максимально 8,0 масс./об.%, максимально 8,5 масс./об.%, максимально 9,0 масс./об.%, максимально 9,5 масс./об.%, максимально 10 масс./об.%, максимально 15 масс./об.%, максимально 20 масс./об.%, максимально 25 масс./об.%, максимально 30 масс./об.% или максимально 35 масс./об.%.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, полимер. Используемый здесь термин "полимер" относится к высокомолекулярным соединениям, содержащим по меньшей мере одиннадцать мономерных единиц. Полимеры, состоящие только из одного типа повторяющихся единиц, названы гомополимерами, тогда как полимеры, образованные двумя или более чем двумя различными повторяющимися единицами названы сополимерами. Полимер может быть природным или синтетическим. Не ограничивающие объем изобретения примеры полимеров включают полисахариды, такие как, например, декстраны (такие какдекстран 1К, декстран 4К, декстран 40К, декстран 60К и декстран 70К), декстрин, гликоген, инулин, крахмал, производные крахмала (такие как гидроксиметил крахмал, гидроксиэтил крахмал, гидроксипропил крахмал, гидроксибутил крахмал и гидроксипентил крахмал), гетакрахмал, целлюлоза, FICOLL, метилцеллюлоза (МС), карбоксиметилцеллюлоза (CMC), гидроксиэтилцеллюлоза (НЕС), гидроксипропилцеллюлоза (НРС), гидроксиэтилметилцеллюлоза (НЕМС), гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС); поливинилацетаты (PVA); поливинилпирролидоны (PVP), также известные как повидоны, имеющие К-величину меньше чем или равную 18, К-величину больше чем 18 или меньше чем или равную 95, или К-величину больше чем 95, такие как PVP 12 (KOLLIDON® 12), PVP 17 (KOLLIDON^® 17), PVP 25 (KOLLIDON^® 25), PVP 30 (KOLLIDON^® 30), PVP 90 (KOLLIDON^® 90); полиэтиленгликоли, такие как PEG 100, PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 500, PEG 600, PEG 700, PEG 800, PEG 900, PEG 1000, PEG 1100, PEG 1200, PEG 1300, PEG 1400, PEG 1500, PEG 1600, PEG 1700, PEG 1800, PEG 1900, PEG 2000, PEG 2100, PEG 2200, PEG 2300, PEG 2400, PEG 2500, PEG 2600, PEG 2700, PEG 2800, PEG 2900, PEG 3000, PEG 3250, PEG 3350, PEG 3500, PEG 3750, PEG 4000, PEG 4250, PEG 4500, PEG 4750, PEG 5000, PEG 5500, PEG 6000, PEG 6500, PEG 75000, PEG 7500 или PEG 8000; и полиэтиленимины (PEI); полипептиды (белки), такие как бычий сывороточный альбумин, желатин и овальбумин; полинуклеотиды, такие как ДНК и РНК. Другие не ограничивающие объем изобретения примеры полимерных эксципиентов можно найти, например в Ansel, выше, (1999); Gennaro, выше, (2000); Hardman, выше, (2001); и Rowe, выше, (2003), каждый из которых включен здесь путем ссылки.

Предполагается, что любой небелковый полимер полезен в приготовлении фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого небелкового полимера. Таким образом, в одном из воплощений фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит небелковый полимер. В аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит полисахарид. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит декстран, инулин, крахмал, производное крахмала, гетакрахмал, декстрин, гликоген, целлюлозу, FICOLL, метилцеллюлозу (МС), карбоксиметилцеллюлозу (CMC), гидроксиэтилцеллюлозу (НЕС), гидроксипропилцеллюлозу (НРС), гидроксиэтилметилцеллюлозу (НЕМС) или гидроксипропилметилцеллюлозу (НРМС). В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит поливинилацетат. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит поливинилпирролидон. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит декстран 1К, декстран 4К, декстран 40К, декстран 60К или декстран 70К. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит PVP 12, PVP 17, PVP 25, PVP 30 или PVP 90. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит полиэтиленгликоль. В аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит твердый при комнатной температуре PEG (полиэтиленгликоль). В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит PEG 1000, PEG 1100, PEG 1200, PEG 1300, PEG 1400, PEG 1500, PEG 1600, PEG 1700, PEG 1800, PEG 1900, PEG 2000, PEG 2100, PEG 2200, PEG 2300, PEG 2400, PEG 2500, PEG 2600, PEG 2700, PEG 2800, PEG 2900, PEG 3000, PEG 3250, PEG 3350, PEG 3500, PEG 3750, PEG 4000, PEG 4250, PEG 4500, PEG 4750, PEG 5000, PEG 5500, PEG 6000, PEG 6500, PEG 75000, PEG 7500 или PEG 8000. В еще одном аспекте этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит полиэтиленимин.

Предполагается, что любое количество небелкового полимера полезно в приготовлении фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого количества небелкового полимера. В аспектах этого воплощения количество небелкового полимера, добавляемого к композиции, составляет приблизительно 0,1 масс./об.%, приблизительно 0,5 масс./об.% приблизительно 1,0 масс./об.%, приблизительно 1,5 масс./об.%, приблизительно 2,0 масс./об.%, приблизительно 2,5 масс./об.%, приблизительно 3,0 масс./об.%, приблизительно 3,5 масс./об.%, приблизительно 4,0 масс./об.%, приблизительно 4,5 масс./об.%, приблизительно 5,0 масс./об.%, приблизительно 5,5 масс./об.%, приблизительно 6,0 масс./об.%, приблизительно 6,5 масс./об.%, приблизительно 7,0 масс./об.%, приблизительно 7,5 масс./об.%, приблизительно 8,0 масс./об.%, приблизительно 8,5 масс./об.%, приблизительно 9,0 масс./об.%, приблизительно 9,5 масс./об.%, приблизительно 10 масс./об.%, приблизительно 15 масс./об.%, приблизительно 20 масс./об.%, приблизительно 25 масс./об.%, приблизительно 30 масс./об.% или приблизительно 35 масс./об.%. В других аспектах этого воплощения количество небелкового полимера, добавляемого к композиции, составляет по меньшей мере 0,1 масс./об.%, по меньшей мере 0,5 масс./об.%, по меньшей мере 1,0 масс./об.%, по меньшей мере 1,5 масс./об.%, по меньшей мере 2,0 масс./об.%, по меньшей мере 2,5 масс./об.%, по меньшей мере 3,0 масс./об.%, по меньшей мере 3,5 масс./об.%, по меньшей мере 4,0 масс./об.%, по меньшей мере 4,5 масс./об.%, по меньшей мере 5,0 масс./об.%, по меньшей мере 5,5 масс./об.%, по меньшей мере 6,0 масс./об.%, по меньшей мере 6,5 масс./об.%, по меньшей мере 7,0 масс./об.%, по меньшей мере 7,5 масс./об.%, по меньшей мере 8,0 масс./об.%, по меньшей мере 8,5 масс./об.%, по меньшей мере 9,0 масс./об.%, по меньшей мере 9,5 масс./об.%, по меньшей мере 10 масс./об.%, по меньшей мере 15 масс./об.%, по меньшей мере 20 масс./об.%, по меньшей мере 25 масс./об.%, по меньшей мере 30 масс./об.% или по меньшей мере 35 масс./об.%. В других аспектах этого воплощения количество небелкового полимера, добавляемого к композиции, составляет максимально 0,1 масс./об.%, максимально 0,5 масс./об.%, максимально 1,0 масс./об.%, максимально 1,5 масс./об.%, максимально 2,0 масс./об.%, максимально 2,5 масс./об.%, максимально 3,0 масс./об.%, максимально 3,5 масс./об.%, максимально 4,0 масс./об.%, максимально 4,5 масс./об.%, максимально 5,0 масс./об.%, максимально 5,5 масс./об.%, максимально 6,0 масс./об.%, максимально 6,5 масс./об.%, максимально 7,0 масс./об.%, максимально 7,5 масс./об.%, максимально 8,0 масс./об.%, максимально 8,5 масс./об.%, максимально 9,0 масс./об.%, максимально 9,5 масс./об.%, максимально 10 масс./об.%, максимально 15 масс./об.%, максимально 20 масс./об.%, максимально 25 масс./об.%, максимально 30 масс./об.% или максимально 35 масс./об.%.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, поверхностно-активное вещество. Используемый здесь термин "поверхностно-активное вещество" относится к природному или синтетическому амфифильному соединению. Поверхностно-активное вещество может быть неионным, цвиттер-ионным или ионным. Предполагается, что любое поверхностно-активное вещество полезно в приготовлении фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого количество поверхностно-активного вещества. Не ограничивающие объем изобретения примеры поверхностно-активных веществ включают полисорбаты, такие как полисорбат 20 (TWEEN^® 20), полисорбат 40 (TWEEN^® 40), полисорбат 60 (TWEEN^® 60), полисорбат 61 (TWEEN^® 61), полисорбат 65 (TWEEN^® 65), полисорбат 80 (TWEEN^® 80) и полисорбат 81 (TWEEN^® 81); полоксамеры (полиэтилен-полипропиленовые сополимеры), такие как Полоксамер 124 (PLURONIC^® L44), Полоксамер 181 (PLURONIC^® L61), Полоксамер 182 (PLURONIC^® L62), Полоксамер 184 (PLURONIC^® L64), Полоксамер 188 (PLURONIC^® F68), Полоксамер 237 (PLURONIC^® F87), Полоксамер 338 (PLURONIC^® L108), Полоксамер 407 (PLURONIC^® F127), полиоксиэтиленгликоль додецильные эфиры, такие как BRIJ^® 30, и BRIJ^® 35; 2-додекоксиэтанол (LUBROL^®-PX); полиоксиэтиленоктилфениловый эфир (TRITON^® X-100); додецилсульфат натрия (SDS); 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфат (CHAPS); 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-2-гидрокси-1-пропансульфат (CHAPSO); сахарозы монолаурат; и холат натрия. Другие не ограничивающие объем изобретения примеры поверхностно-активных эксципиентов можно найти, например в Ansel, выше, (1999); Gennaro, выше, (2000); Hardman, выше, (2001); и Rowe, выше, (2003), каждый из которых полностью включен здесь путем ссылки.

Таким образом, в одном из воплощений фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит поверхностно-активное вещество. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит полисорбат, полоксамер, полиоксиэтиленгликоль додециловый эфир, 2-додекоксиэтанол, полиоксиэтиленоктилфениловый эфир, додецилсульфат натрия, 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфат, 3-[(3-холамидопропил) диметиламмонио]-2-гидрокси-1-пропансульфат, сахарозы монолаурат; или холат натрия.

Предполагается, что любое количество поверхностно-активного вещества полезно в приготовлении фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого количества поверхностно-активного вещества. В аспектах этого воплощения количество поверхностно-активного вещества, добавляемого к композиции, составляет приблизительно 0,01 масс./об.%, приблизительно 0,02 масс./об.%, приблизительно 0,03 масс./об.%, приблизительно 0,04 масс./об.%, приблизительно 0,05 масс./об.%, приблизительно 0,06 масс./об.%, приблизительно 0,07 масс./об.%, приблизительно 0,08 масс./об.%, приблизительно 0,09 масс./об.%, приблизительно 0,1 масс./об.%, приблизительно 0,5 масс./об.%, приблизительно 1,0 масс./об.%, приблизительно 1,5 масс./об.%, приблизительно 2,0 масс./об.%, приблизительно 2,5 масс./об.%, приблизительно 3,0 масс./об.%, приблизительно 3,5 масс./об.%, приблизительно 4,0 масс./об.%, приблизительно 4,5 масс./об.%, приблизительно 5,0 масс./об.%, приблизительно 5,5 масс./об.%, приблизительно 6,0 масс./об.%, приблизительно 6,5 масс./об.%, приблизительно 7,0 масс./об.%, приблизительно 7,5 масс./об.%, приблизительно 8,0 масс./об.%, приблизительно 8,5 масс./об.%, приблизительно 9,0 масс./об.%, приблизительно 9,5 масс./об.%, приблизительно 10 масс./об.%, приблизительно 15 масс./об.%, приблизительно 20 масс./об.%, приблизительно 25 масс./об.%, приблизительно 30 масс./об.% или приблизительно 35 масс./об.%. В других аспектах этого воплощения количество поверхностно-активного вещества, добавляемого к композиции, составляет по меньшей мере 0,01 масс./об.%, по меньшей мере 0,02 масс./об.%, по меньшей мере 0,03 масс./об.%, по меньшей мере 0,04 масс./об.%, по меньшей мере 0,05 масс./об.%, по меньшей мере 0,06 масс./об.%, по меньшей мере 0,07 масс./об.%, по меньшей мере 0,08 масс./об.%, по меньшей мере 0,09 масс./об.%, по меньшей мере 0,1 масс./об.%, по меньшей мере 0,5 масс./об.%, по меньшей мере 1,0 масс./об.%, по меньшей мере 1,5 масс./об.%, по меньшей мере 2,0 масс./об.%, по меньшей мере 2,5 масс./об.%, по меньшей мере 3,0 масс./об.%, по меньшей мере 3,5 масс./об.%, по меньшей мере 4,0 масс./об.%, по меньшей мере 4,5 масс./об.%, по меньшей мере 5,0 масс./об.%, по меньшей мере 5,5 масс./об.%, по меньшей мере 6,0 масс./об.%, по меньшей мере 6,5 масс./об.%, по меньшей мере 7,0 масс./об.%, по меньшей мере 7,5 масс./об.%, по меньшей мере 8,0 масс./об.%, по меньшей мере 8,5 масс./об.%, по меньшей мере 9,0 масс./об.%, по меньшей мере 9,5 масс./об.%, по меньшей мере 10 масс./об.%, по меньшей мере 15 масс./об.%, по меньшей мере 20 масс./об.%, по меньшей мере 25 масс./об.%, по меньшей мере 30 масс./об.% или по меньшей мере 35 масс./об.%. В других аспектах этого воплощения количество поверхностно-активного вещества, добавляемого к композиции, составляет максимально 0,01 масс./об.%, максимально 0,02 масс./об.%, максимально 0,03 масс./об.%, максимально 0,04 масс./об.%, максимально 0,05 масс./об.%, максимально 0,06 масс./об.%, максимально 0,07 масс./об.%, максимально 0,08 масс./об.%, максимально 0,09 масс./об.%, максимально 0,1 масс./об.%, максимально 0,5 масс./об.%, максимально 1,0 масс./об.%, максимально 1,5 масс./об.%, максимально 2,0 масс./об.%, максимально 2,5 масс./об.%, максимально 3,0 масс./об.%, максимально 3,5 масс./об.%, максимально 4,0 масс./об.%, максимально 4,5 масс./об.%, максимально 5,0 масс./об.%, максимально 5,5 масс./об.%, максимально 6,0 масс./об.%, максимально 6,5 масс./об.%, максимально 7,0 масс./об.%, максимально 7,5 масс./об.%, максимально 8,0 масс./об.%, максимально 8,5 масс./об.%, максимально 9,0 масс./об.%, максимально 9,5 масс./об.%, максимально 10 масс./об.%, максимально 15 масс./об.%, максимально 20 масс./об.%, максимально 25 масс./об.%, максимально 30 масс./об.% или максимально 35 масс./об.%.

В аспектах этого воплощения, количество поверхностно-активного вещества, добавляемого к композиции, составляет приблизительно 0,01 об./об.%, приблизительно 0,02 об./об.%, приблизительно 0,03 об./об.%, приблизительно 0,04 об./об.%, приблизительно 0,05 об./об.%, приблизительно 0,06 об./об.%, приблизительно 0,07 об./об.%, приблизительно 0,08 об./об.%, приблизительно 0,09 об./об.%, приблизительно 0,1 об./об.%, приблизительно 0,5 об./об.%, приблизительно 1,0 об./об.%, приблизительно 1,5 об./об.%, приблизительно 2,0 об./об.%, приблизительно 2,5 об./об.%, приблизительно 3,0 об./об.%, приблизительно 3,5 об./об.%, приблизительно 4,0 об./об.%, приблизительно 4,5 об./об.%, приблизительно 5,0 об./об.%, приблизительно 5,5 об./об.%, приблизительно 6,0 об./об.%, приблизительно 6,5 об./об.%, приблизительно 7,0 об./об.%, приблизительно 7,5 об./об.%, приблизительно 8,0 об./об.%, приблизительно 8,5 об./об.%, приблизительно 9,0 об./об.%, приблизительно 9,5 об./об.%, приблизительно 10 об./об.%, приблизительно 15 об./об.%, приблизительно 20 об./об.%, приблизительно 25 об./об.%, приблизительно 30 об./об.% или приблизительно 35 об./об.%. В других аспектах этого воплощения количество поверхностно-активного вещества, добавляемого к композиции, составляет по меньшей мере 0,01 об./об.%, по меньшей мере 0,02 об./об.%, по меньшей мере 0,03 об./об.%, по меньшей мере 0,04 об./об.%, по меньшей мере 0,05 об./об.%, по меньшей мере 0,06 об./об.%, по меньшей мере 0,07 об./об.%, по меньшей мере 0,08 об./об.%, по меньшей мере 0,09 об./об.%, по меньшей мере 0,1 об./об.%, по меньшей мере 0,5 об./об.%, по меньшей мере 1,0 об./об.%, по меньшей мере 1,5 об./об.%, по меньшей мере 2,0 об./об.%, по меньшей мере 2,5 об./об.%, по меньшей мере 3,0 об./об.%, по меньшей мере 3,5 об./об.%, по меньшей мере 4,0 об./об.%, по меньшей мере 4,5 об./об.%, по меньшей мере 5,0 об./об.%, по меньшей мере 5,5 об./об.%, по меньшей мере 6,0 об./об.%, по меньшей мере 6,5 об./об.%, по меньшей мере 7,0 об./об.%, по меньшей мере 7,5 об./об.%, по меньшей мере 8,0 об./об.%, по меньшей мере 8,5 об./об.%, по меньшей мере 9,0 об./об.%, по меньшей мере 9,5 об./об.%, по меньшей мере 10 об./об.%, по меньшей мере 15 об./об.%, по меньшей мере 20 об./об.%, по меньшей мере 25 об./об.%, по меньшей мере 30 об./об.% или по меньшей мере 35 об./об.%. В других аспектах этого воплощения количество поверхностно-активного вещества, добавляемого к композиции, составляет максимально 0,01 об./об.%, максимально 0,02 об./об.%, максимально 0,03 об./об.%, максимально 0,04 об./об.%, максимально 0,05 об./об.%, максимально 0,06 об./об.%, максимально 0,07 об./об.%, максимально 0,08 об./об.%, максимально 0,09 об./об.%, максимально 0,1 об./об.%, максимально 0,5 об./об.%, максимально 1,0 об./об.%, максимально 1,5 об./об.%, максимально 2,0 об./об.%, максимально 2,5 об./об.%, максимально 3,0 об./об.%, максимально 3,5 об./об.%, максимально 4,0 об./об.%, максимально 4,5 об./об.%, максимально 5,0 об./об.%, максимально 5,5 об./об.%, максимально 6,0 об./об.%, максимально 6,5 об./об.%, максимально 7,0 об./об.%, максимально 7,5 об./об.%, максимально 8,0 об./об.%, максимально 8,5 об./об.%, максимально 9,0 об./об.%, максимально 9,5 об./об.%, максимально 10 об./об.%, максимально 15 об./об.%, максимально 20 об./об.%, максимально 25 об./об.%, максимально 30 об./об.% или максимально 35 об./об.%.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, аминокислоту. Используемый здесь термин "аминокислота" относится к молекуле общей формулы H₂NCHRCOOH, где R представляет собой органический заместитель. Предполагается, что любая аминокислота полезна в приготовлении фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого количества аминокислоты. Аминокислоты включают как двадцать стандартных аминокислот, так и нестандартные аминокислоты. Не ограничивающие объем изобретения примеры аминокислот включают глицин, пролин, 4-гидроксипролин, серин, глутамат, аланин, лизин, саркозин, γ-аминомасляную кислоту. Другие не ограничивающие объем изобретения примеры аминокислот-эксципиентов можно найти, например в Ansel, выше, (1999); Gennaro, выше, (2000); Hardman, выше, (2001); и Rowe, выше, (2003), каждый из которых полностью включен здесь путем ссылки.

Таким образом, в одном из воплощений фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит аминокислоту. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит глицин, пролин, 4-гидроксипролин, серин, глутамат, аланин, лизин, саркозин или γ-аминомасляную кислоту.

Предполагается, что любое количество аминокислоты полезно в приготовлении фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого количества аминокислоты. В аспектах этого воплощения количество аминокислоты, добавляемой к композиции, составляет приблизительно 0,1 масс./об.%, приблизительно 0,5 масс./об.%, приблизительно 1,0 масс./об.%, приблизительно 1,5 масс./об.%, приблизительно 2,0 масс./об.%, приблизительно 2,5 масс./об.%, приблизительно 3,0 масс./об.%, приблизительно 3,5 масс./об.%, приблизительно 4,0 масс./об.%, приблизительно 4,5 масс./об.%, приблизительно 5,0 масс./об.%, приблизительно 5,5 масс./об.%, приблизительно 6,0 масс./об.%, приблизительно 6,5 масс./об.%, приблизительно 7,0 масс./об.%, приблизительно 7,5 масс./об.%, приблизительно 8,0 масс./об.%, приблизительно 8,5 масс./об.%, приблизительно 9,0 масс./об.%, приблизительно 9,5 масс./об.%, приблизительно 10 масс./об.%, приблизительно 15 масс./об.%, приблизительно 20 масс./об.%, приблизительно 25 масс./об.%, приблизительно 30 масс./об.%, или приблизительно 35 масс./об.%. В других аспектах этого воплощения количество аминокислоты, добавляемой к композиции, составляет по меньшей мере 0,1 масс./об.%, по меньшей мере 0,5 масс./об.%, по меньшей мере 1,0 масс./об.%, по меньшей мере 1,5 масс./об.%, по меньшей мере 2,0 масс./об.%, по меньшей мере 2,5 масс./об.%, по меньшей мере 3,0 масс./об.%, по меньшей мере 3,5 масс./об.%, по меньшей мере 4,0 масс./об.%, по меньшей мере 4,5 масс./об.%, по меньшей мере 5,0 масс./об.%, по меньшей мере 5,5 масс./об.%, по меньшей мере 6,0 масс./об.%, по меньшей мере 6,5 масс./об.%, по меньшей мере 7,0 масс./об.%, по меньшей мере 7,5 масс./об.%, по меньшей мере 8,0 масс./об.%, по меньшей мере 8,5 масс./об.%, по меньшей мере 9,0 масс./об.%, по меньшей мере 9,5 масс./об.%, по меньшей мере 10 масс./об.%, по меньшей мере 15 масс./об.%, по меньшей мере 20 масс./об.%, по меньшей мере 25 масс./об.%, по меньшей мере 30 масс./об.%, или по меньшей мере 35 масс./об.%. В других аспектах этого воплощения количество аминокислоты, добавляемой к композиции, составляет максимально 0,1 масс./об.%, максимально 0,5 масс./об.%, максимально 1,0 масс./об.%, максимально 1,5 масс./об.%, максимально 2,0 масс./об.%, максимально 2,5 масс./об.%, максимально 3,0 масс./об.%, максимально 3,5 масс./об.%, максимально 4,0 масс./об.%, максимально 4,5 масс./об.%, максимально 5,0 масс./об.%, максимально 5,5 масс./об.%, максимально 6,0 масс./об.%, максимально 6,5 масс,/об.%, максимально 7,0 масс./об.%, максимально 7,5 масс./об.%, максимально 8,0 масс./об.%, максимально 8,5 масс./об.%, максимально 9,0 масс./об.%, максимально 9,5 масс./об.%, максимально 10 масс./об.%, максимально 15 масс./об.%, максимально 20 масс./об.%, максимально 25 масс./об.%, максимально 30 масс./об.% или максимально 35 масс./об.%.

Предполагается, что множество небелковых эксципиентов полезно в приготовлении фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого множества небелковых эксципиентов. Таким образом, в одном из воплощений фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина содержит множество небелковых эксципиентов. В аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина может содержать, например, по меньшей мере два небелковых эксципиента, по меньшей мере три небелковых эксципиента, по меньшей мере четыре небелковых эксципиента, по меньшей мере пять небелковых эксципиентов, по меньшей мере шесть небелковых эксципиентов, по меньшей мере семь небелковых эксципиентов или по меньшей мере восемь небелковых эксципиентов. В другие аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина может содержать, например, максимально два небелковых эксципиента, максимально три небелковых эксципиента, максимально четыре небелковых эксципиента, максимально пять небелковые эксципиентов, максимально шесть небелковых эксципиентов, максимально семь небелковых эксципиентов или максимально восемь небелковых эксципиентов. В других аспектах этого воплощения фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина может содержать, например, 2-10 небелковых эксципиентов, 2-8 небелковых эксципиентов, небелковых эксципиентов, 2-4 небелковых эксципиента, 3-10 небелковых эксципиентов, 3-8 небелковых эксципиентов, 3-6 небелковых эксципиентов, 3-4 небелковые эксципиента, 4-10 небелковых эксципиентов, 4-8 небелковых эксципиентов или 4-6 небелковых эксципиентов. Например, фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина может содержать два различных сахара и клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина может содержать сахар, поверхностно-активное вещество и клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина может содержать небелковый полимер, поверхностно-активное вещество и клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, или фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина может содержать сахар, небелковый полимер, поверхностно-активное вещество и клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента.

Предполагается, что любая доля небелковых эксципиентов полезна при приготовлении фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этой доли эксципиента. В аспектах этого воплощения, когда два небелковые эксципиента добавляют к композиции, то доля первого эксципиента ко второму эксципиенту составляет по меньшей мере 400:1, по меньшей мере 300:1, по меньшей мере 200:1, по меньшей мере 150:1, по меньшей мере 100:1, по меньшей мере 50:1, по меньшей мере 20:1, по меньшей мере 15:1, по меньшей мере 10:1, по меньшей мере 9:1, по меньшей мере 8:1, по меньшей мере 7:1, по меньшей мере 6:1, по меньшей мере 5:1, по меньшей мере 4:1, по меньшей мере 3:1, по меньшей мере 2:1, по меньшей мере 1:1, по меньшей мере 1:2, по меньшей мере 1:3, по меньшей мере 1:4, по меньшей мере 1:5, по меньшей мере 1:6, по меньшей мере 1:7, по меньшей мере 1:8, по меньшей мере 1:9, по меньшей мере 1:10, по меньшей мере 1:15, по меньшей мере 1:20, по меньшей мере 1:50, по меньшей мере 1:100, по меньшей мере 1:150, по меньшей мере 1:200, по меньшей мере 1:300 или по меньшей мере 1:400. В других аспектах этого воплощения, когда три небелковые эксципиента добавляют к композиции, то доля первого эксципиента ко второму эксципиенту и третьему эксципиенту составляет по меньшей мере 10:2:1, по меньшей мере 9:2:1, по меньшей мере 8:2:1, по меньшей мере 7:2:1, по меньшей мере 6:2:1, по меньшей мере 5:2:1, по меньшей мере 4:2:1, по меньшей мере 3:2:1, по меньшей мере 2:2:1, по меньшей мере 10:1:1, по меньшей мере 9:1:1, по меньшей мере 8:1:1, по меньшей мере 7:1:1, по меньшей мере 6:1:1, по меньшей мере 5:1:1, по меньшей мере 4:1:1, по меньшей мере 3:1:1, по меньшей мере 2:1:1 или по меньшей мере 1:1:1.

Кроме того, предполагается, что фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, раскрытая в настоящем описании, может необязательно включать без ограничения другие фармацевтически приемлемые компоненты (или фармацевтические компоненты), включающие без ограничения буферы, консерванты, агенты, придающие тоничность, соли, антиоксиданты, агенты, регулирующие осмолярность, эмульгаторы, подсластители или корригенты и т.п. Различные буферы и способы корректировки рН могут быть использованы для приготовления фармацевтической композиции, раскрытой в настоящем описании, при условии, что получающийся в результате препарат является фармацевтически приемлемым. Такие буферы включают без ограничения ацетатные буферы, боратные буферы, цитратные буферы, фосфатные буферы, нейтральный забуференный физиологический раствор и забуференный фосфатом физиологический раствор. Понятно, что кислоты или основания при необходимости могут быть использованы для корректировки рН фармацевтической композиции. Предполагается, что любой уровень рН буфера может быть полезен при приготовлении фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этого эффективного уровня рН. В аспекте этого воплощения эффективный уровень рН составляет по меньшей мере приблизительно рН 5,0, по меньшей мере приблизительно рН 5,5, по меньшей мере приблизительно рН 6,0, по меньшей мере приблизительно рН 6,5, по меньшей мере приблизительно рН 7,0 или приблизительно рН 7,5. В еще одном аспекте этого воплощения эффективный уровень рН составляет максимально приблизительно рН 5,0, максимально приблизительно рН 5,5, максимально приблизительно рН 6,0, максимально приблизительно рН 6,5, максимально приблизительно рН 7,0 или максимально приблизительно рН 7,5. В еще одном аспекте этого воплощения эффективный уровень рН составляет от приблизительно рН 5,0 до приблизительно рН 8,0, эффективный уровень рН составляет от приблизительно рН 5,0 до приблизительно рН 7,0, эффективный уровень рН составляет от приблизительно рН 5,0 до приблизительно рН 6,0, составляет приблизительно от рН 5,5 до приблизительно рН 8,0, эффективный уровень рН составляет от приблизительно рН 5,5 до приблизительно рН 7,0, эффективный уровень рН составляет от приблизительно рН 5,5 до приблизительно рН 5,0, составляет от приблизительно рН 5,5 до приблизительно рН 7,5, эффективный уровень рН составляет от приблизительно рН 5,5 до приблизительно рН 6,5.

Предполагается, что любая концентрация буфера может быть полезна для приготовления фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этой эффективной концентрации буфера. В аспектах этого воплощения эффективная концентрация буфера составляет по меньшей мере 0,1 мМ, по меньшей мере 0,2 мМ, по меньшей мере 0,3 мМ, по меньшей мере 0,4 мМ, по меньшей мере 0,5 мМ, по меньшей мере 0,6 мМ, по меньшей мере 0,7 мМ, по меньшей мере 0,8 мМ или по меньшей мере 0,9 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация буфера составляет по меньшей мере 1,0 мМ, по меньшей мере 2,0 мМ, по меньшей мере 3,0 мМ, по меньшей мере 4,0 мМ, по меньшей мере 5,0 мМ, по меньшей мере 6,0 мМ, по меньшей мере 7,0 мМ, по меньшей мере 8,0 мМ или по меньшей мере 9,0 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация буфера составляет по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 30 мМ, по меньшей мере 40 мМ, по меньшей мере 50 мМ, по меньшей мере 60 мМ, по меньшей мере 70 мМ, по меньшей мере 80 мМ или по меньшей мере 90 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация буфера составляет по меньшей мере 100 мМ, по меньшей мере 200 мМ, по меньшей мере 300 мМ, по меньшей мере 400 мМ, по меньшей мере 500 мМ, по меньшей мере 600 мМ, по меньшей мере 700 мМ, по меньшей мере 800 мМ или по меньшей мере 900 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация буфера составляет максимально 0,1 мМ, максимально 0,2 мМ, максимально 0,3 мМ, максимально 0,4 мМ, максимально 0,5 мМ, максимально 0,6 мМ, максимально 0,7 мМ, максимально 0,8 мМ или максимально 0,9 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация буфера составляет максимально 1,0 мМ, максимально 2,0 мМ, максимально 3,0 мМ, максимально 4,0 мМ, максимально 5,0 мМ, максимально 6,0 мМ, максимально 7,0 мМ, максимально 8,0 мМ, или максимально 9,0 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация буфера составляет максимально 10 мМ, максимально 20 мМ, максимально 30 мМ, максимально 40 мМ, максимально 50 мМ, максимально 60 мМ, максимально 70 мМ, максимально 80 мМ или максимально на 90 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация буфера составляет максимально 100 мМ, максимально 200 мМ, максимально 300 мМ, максимально 400 мМ, максимально 500 мМ, максимально 600 мМ, максимально 700 мМ, максимально 800 мМ или максимально 900 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация буфера составляет от приблизительно 0,1 мМ до приблизительно 900 мМ, от 0,1 мМ до приблизительно 500 мМ, от 0,1 мМ до приблизительно 100 мМ, от 0,1 мМ до приблизительно 90 мМ, от 0,1 мМ до приблизительно 50 мМ, от 1,0 мМ до приблизительно 900 мМ, от 1,0 мМ до приблизительно 500 мМ, от 1,0 мМ до приблизительно 100 мМ, от 1,0 мМ до приблизительно 90 мМ или от 1,0 мМ до приблизительно 50 мМ.

Фармацевтически приемлемые антиоксиданты включают без ограничения метабисульфит натрия, тиосульфат натрия, ацетилцистеин, бутилированный гидроксианизол и бутилированный гидрокситолуол. Полезные консерванты включают без ограничения бензалконий хлорид, хлорбутанол, тиомерсал, фенилртутный ацетат, фенилртутный нитрат, стабилизированные оксихлоро композиции, такие как, например, PURITE^® и хелатообразователи, такие как, например DTPA (диэтилентриаминпентауксусная кислота) или DTPA-бисамид, кальций DTPA, и CaNaDTPA-бисамид. Агенты, придающие тоничность, полезные в фармацевтической композиции, включают без ограничения соли, такие как, например, хлорид натрия и хлорид калия. Фармацевтическая композиция может быть предложена в виде соли и может быть образована со многими кислотами, включающими без ограничения соляную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, виноградную и т.д. Соли имеют тенденцию быть более растворимыми в водных или других протонных растворителях по сравнению с соответствующими формами в виде свободного основания. Понятно, что эти и другие вещества, известные в области фармакологии, могут быть включены в фармацевтическую композицию, полезную в изобретении. Другие не ограничивающие объем изобретения примеры фармакологически приемлемых компонентов можно найти, например в Ansel, выше, (1999); Gennaro, выше, (2000); Hardman, выше, (2001); и Rowe, выше, (2003), каждый из которых полностью включен здесь путем ссылки.

Предполагается, что любая концентрация соли может быть полезна в приготавливаемой фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается с использованием этой эффективной концентрации соли. В аспектах этого воплощения эффективная концентрация соли составляет по меньшей мере 0,1 мМ, по меньшей мере 0,2 мМ, по меньшей мере 0,3 мМ, по меньшей мере 0,4 мМ, по меньшей мере 0,5 мМ, по меньшей мере 0,6 мМ, по меньшей мере 0,7 мМ, по меньшей мере 0,8 мМ или по меньшей мере 0,9 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация соли составляет по меньшей мере 1,0 мМ, по меньшей мере 2,0 мМ, по меньшей мере 3,0 мМ, по меньшей мере 4,0 мМ, по меньшей мере 5,0 мМ, по меньшей мере 6,0 мМ, по меньшей мере 7,0 мМ, по меньшей мере 8,0 мМ или по меньшей мере 9,0 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация соли составляет по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 30 мМ, по меньшей мере 40 мМ, по меньшей мере 50 мМ, по меньшей мере 60 мМ, по меньшей мере 70 мМ, по меньшей мере 80 мМ или по меньшей мере 90 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация соли составляет по меньшей мере 100 мМ, по меньшей мере 200 мМ, по меньшей мере 300 мМ, по меньшей мере 400 мМ, по меньшей мере 500 мМ, по меньшей мере 600 мМ, по меньшей мере 700 мМ, по меньшей мере 800 мМ или по меньшей мере 900 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация соли составляет максимально 0,1 мМ, максимально 0,2 мМ, максимально 0,3 мМ, максимально 0,4 мМ, максимально 0,5 мМ, максимально 0,6 мМ, максимально 0,7 мМ, максимально 0,8 мМ, или максимально 0,9 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация соли составляет максимально 1,0 мМ, максимально 2,0 мМ, максимально 3,0 мМ, максимально 4,0 мМ, максимально 5,0 мМ, максимально 6,0 мМ, максимально 7,0 мМ, максимально 8,0 мМ или максимально на 9,0 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация соли составляет максимально 10 мМ, максимально 20 мМ, максимально 30 мМ, максимально 40 мМ, максимально 50 мМ, максимально 60 мМ, максимально 70 мМ, максимально 80 мМ или максимально 90 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация соли составляет максимально 100 мМ, максимально 200 мМ, максимально 300 мМ, максимально 400 мМ, максимально 500 мМ, максимально 600 мМ, максимально 700 мМ, максимально 800 мМ или максимально 900 мМ. В других аспектах этого воплощения эффективная концентрация соли составляет от приблизительно 0,1 мМ до приблизительно 900 мМ, от 0,1 мМ до приблизительно 500 мМ, от 0,1 мМ до приблизительно 100 мМ, от 0,1 мМ до приблизительно 90 мМ, от 0,1 мМ до приблизительно 50 мМ, от 1,0 мМ до приблизительно 900 мМ, от 1,0 мМ до приблизительно 500 мМ, от 1,0 мМ до приблизительно 100 мМ, от 1,0 мМ до приблизительно 90 мМ или от 1,0 мМ до приблизительно 50 мМ.

Фармацевтические композиции, раскрытые в настоящем описании, как правило вводят в фармацевтически приемлемой композиции, содержащей ботулинический токсин в качестве активного ингредиента. Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемый" означает любой молекулярный объект или композицию, которая не вызывает неблагоприятную, аллергическую или другую неподходящую или нежелательную реакцию при введении индивиду. Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемая композиция" является синонимом "фармацевтическая композиция" и означает терапевтически эффективную концентрацию активного ингредиента, такого как, например, любой клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, раскрытый в настоящем описании. Фармацевтическая композиция, содержащая клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, полезна для медицинских и ветеринарных приложений. Фармацевтическая композиция может быть введена пациенту самостоятельно или в комбинации с другими дополнительными активными ингредиентами, агентами, лекарствами или гормонами.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, восстановленную силу фармацевтической композиции. Используемый здесь термин "восстановленная сила" является синонимом "восстановленная активность" и, когда используется со ссылкой на твердую форму фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, относится к проценту, рассчитываемому путем деления силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в хранимой разведенной композиции на силу активного клостридиального токсина, определенную перед его добавлением в тестируемый раствор. Когда используется со ссылкой на водную форму фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, "восстановленная сила" относится к проценту, рассчитываемому путем деления силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента при хранении композиции на силу активного клостридиального токсина, определенную перед его добавлением в тестируемый раствор. Используемый здесь термин "сила" относится к уровеню биологической активности, демонстрируемому клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, измеренному при помощи, например, биоанализа на мышах или анализа активности легкой цепи клостридиального токсина in vitro. В качестве не ограничивающего объем изобретения примера, в отношении твердой формы фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина восстановление 60% означает, что сила клостридиального токсина в качестве активного ингредиента после разведения составляет 60% от силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента перед его добавлением к композиции. В качестве еще одного не ограничивающего объем изобретения примера, в отношении водной формы фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина восстановление 50% означает, что сила клостридиального токсина в качестве активного ингредиента после хранения составляет 50% относительно силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента перед его добавлением к композиции.

Широкий спектр анализов силы или активности может быть использован для определения восстановленной силы. Например, для клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, обладающего способностью вызывать летальность, анализ in vivo, определяющий величину LD₅₀ для клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, может быть использован для определения восстановленной силы, такой как, например, анализ летальности у мышей или цифровой анализ оценки абдукции (DAS). В качестве альтернативы может быть использован клеточный анализ или анализ силы in vitro. В качестве еще одного примера для клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, не способного вызывать летальность, клеточный анализ или анализ активности in vitro может быть использован для определения восстановленной силы. Примеры анализов силы in vivo описаны в, например, Lindstrom and Korkeala, Laboratory Diagnostics of Botulism, Clin. Microbiol. Rev. 19(2): 298-314 (2006), который включен здесь путем ссылки. Примеры клеточных анализов силы описаны в, например Fernandez-Salas, et al., Cell-based Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) Assays for Closthdial Toxins, патент США 7183066; Fernandez-Salas, et al., Botulinum Toxin Screening Assays, патент США 7598027; каждый из которых полностью включен здесь путем ссылки. Примеры анализов силы in vitro описан в, например Steward, et al., FRETProtease Assays for Clostridial Toxins, патент США 7332567; Williams, et al., Fluoresence Polarization Assays for Determining Clostridial Toxin Acivity, патент США 7300607; Steward, et al., GFP-SNAP25 Fluorescence Release Assay for Botulinum Neurotoxin Protease Activity, патент США 7374896; Cai, etal., Botulism Diagnostics: From Clinical Symptoms to in vitro Assays, Crit. Rev. Microbiol. 33(2): 109-125 (2007); каждый из которых полностью включен здесь путем ссылки.

Предполагается, что любой уровень восстановленной силы полезен в приготавливаемых фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, при условии, что представлено терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Таким образом, в одном из воплощений фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, раскрытая в настоящем описании, демонстрирует восстановленную силу по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 100%. В еще одном воплощении фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, раскрытая в настоящем описании, демонстрирует восстановленную силу максимально 10%, максимально 20%, максимально 30%, максимально 40%, максимально 50%, максимально 60%, максимально 70%, максимально 80%, максимально 90%, или максимально на 100%. В еще одном воплощении фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, раскрытая в настоящем описании, демонстрирует восстановленную силу от приблизительно 20% до приблизительно 100%, от приблизительно 20% до приблизительно 90%, от приблизительно 20% до приблизительно 80%, от приблизительно 20% до приблизительно 70%, от приблизительно 20% до приблизительно 60% или от приблизительно 20% до приблизительно 50%. В еще одном воплощении фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, раскрытая в настоящем описании, демонстрирует восстановленную силу от приблизительно 40% до приблизительно 100%, от приблизительно 40% до приблизительно 90%, от приблизительно 40% до приблизительно 80%, от приблизительно 40% до приблизительно 70%, от приблизительно 40% до приблизительно 60% или от приблизительно 40% до приблизительно 50%.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, форму фармацевтической композиции. Используемый здесь термин "форма фармацевтической композиции" относится к фармацевтической композиции, обработанной в твердой форме или водной форме. Обработка фармацевтической композиции в твердую форму может быть достигнута путем, например, лиофилизации (сушка замораживанием) или сушки в вакууме. Обработка фармацевтической композиции в водную форму легко может быть осуществлена во время стадии смешивания путем добавления растворителя, который растворяет или суспендирует твердые эксципиенты с образованием раствора. Таким образом, в одном из воплощений фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина находится в твердой форме. В еще одном воплощении фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина находится в водной форме.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предусматривают, в частности, условия хранения фармацевтической композиции. Используемый здесь термин "условия хранения фармацевтической композиции" относится к хранению фармацевтической композиции в твердой форме до разведения подходящим раствором перед введением. Предполагается, что любые условия хранения полезны для хранения фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, раскрытой в настоящем описании, при условии, что терапевтически эффективное количество клостридиального токсина в качестве активного ингредиента достигается при разведении подходящим раствором. В одном из воплощений фармацевтическую композицию на основе клостридиального токсина, раскрытую в настоящем описании, хранят при температуре окружающей среды. В аспектах этого воплощения фармацевтическую композицию на основе клостридиального токсина, раскрытую в настоящем описании, хранят при температуре окружающей среды по меньшей мере 16°С, по меньшей мере 18°С, по меньшей мере 20°С или по меньшей мере 22°С. В других аспектах этого воплощения фармацевтическую композицию на основе клостридиального токсина, раскрытую в настоящем описании, хранят при температуре окружающей среды максимально 16°С, максимально 18°С, максимально 20°С или максимально 22°С. В других аспектах этого воплощения фармацевтическую композицию на основе клостридиального токсина, раскрытую в настоящем описании, хранят при температуре окружающей среды от приблизительно 16°С до приблизительно 24°С, от приблизительно 16°С до приблизительно 22°С, от приблизительно 16°С до приблизительно 20°С или от приблизительно 18°С до приблизительно 24°С. В еще одном воплощении фармацевтическую композицию на основе клостридиального токсина, раскрытую в настоящем описании, хранят при температуре ниже температуры замерзания. В аспектах этого воплощения фармацевтическую композицию на основе клостридиального токсина, раскрытую в настоящем описании, хранят при температуре по меньшей мере 0°С, по меньшей мере -20°С, по меньшей мере -70°С или по меньшей мере -120°С. В других аспектах этого воплощения фармацевтическую композицию на основе клостридиального токсина, раскрытую в настоящем описании, хранят при температуре максимально 0°С, максимально -20°С, максимально -70°С или максимально -120°С. В других аспектах этого воплощения фармацевтическую композицию на основе клостридиального токсина, раскрытую в настоящем описании, хранят при температуре от приблизительно 0°С до приблизительно -20°С, от приблизительно -5°С до приблизительно -20°С, от приблизительно 0°С до приблизительно -15°С, от приблизительно -5°С до приблизительно -15°С, от приблизительно 0°С до приблизительно -70°С, от приблизительно -20°С до приблизительно -70°С или от приблизительно -20°С до приблизительно -120°С.

Аспекты фармацевтических композиций по настоящему изобретению предлагают, в частности, клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, который стабилен. Для задач фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина по настоящему изобретению клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен, когда восстановленная сила активного ингредиента при хранении в течение определенного периода времени, составляет по меньшей мере 70% от исходной восстановленной силы для этого активного ингредиента. Например, клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен, когда фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, содержащая этот клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента демонстрирует, например, исходную восстановленную силу 100% и восстановленную силу по меньшей мере 70% при тестировании через год, исходную восстановленную силу 90% и восстановленную силу по меньшей мере 63% при тестировании через год, исходную восстановленную силу 80% и восстановленную силу по меньшей мере 56% при тестировании через год, исходную восстановленную силу 70% и восстановленную силу по меньшей мере 49% при тестировании через год, или исходную восстановленную силу 60% и восстановленную силу по меньшей мере 42% при тестировании через год.

Аспекты фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, раскрытых в настоящем описании, также могут быть описаны следующим образом:

1. Забуференная цитратом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество сахарозы, где композиция забуферена до приблизительно рН 5,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

2. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество лактозы, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

3. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество лактозы, где композиция забуферена до приблизительно рН 5,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

4. Забуференная цитратом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество лактозы, где композиция забуферена до приблизительно рН 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

5. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество лактозы в растворе хлорида натрия, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

6. Забуференная фосфатом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество Декстрана ЗК, где композиция забуферена до приблизительно рН 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

7. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество PVP 17, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

8. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество PVP 17, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

9. Забуференная цитратом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество PVP 17, где композиция забуферена до приблизительно рН 5,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

10. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PVP 17, и эффективное количество хлорида натрия, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

11. Забуференная цитратом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество PEG 3350, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

12. Забуференная гистидином не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество PEG 3350, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

13. Забуференная цитратом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до приблизительно рН 5,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

14. Забуференная цитратом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащая клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

15. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы и эффективное количество сахарозы, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

16. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы и эффективное количество сахарозы, где композиция забуферена до приблизительно рН 5,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

17. Забуференная фосфатом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы и эффективное количество сахарозы, где композиция забуферена до приблизительно рН 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

18. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы, эффективное количество сахарозы и эффективное количество хлорида натрия, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

19. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы и эффективное количество PVP 17, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

20. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы и эффективное количество PVP 17, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

21. Забуференная цитратом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы и эффективное количество PVP 17, где композиция забуферена до приблизительно рН 5,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

22. Забуференная фосфатом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы и эффективное количество PVP 17, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

23. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы, эффективное количество PVP 17 и эффективное количество хлорида натрия, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

24. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы и эффективное количество PEG 3350, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

25. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы и эффективное количество PVP 17, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

26. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы и эффективное количество PEG 3350, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

26. Забуференная цитратом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы и эффективное количество PEG 3350, где композиция забуферена до приблизительно рН 5,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

27. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

28. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

29. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы, эффективное количество Полоксамера 188 и эффективное количество хлорида натрия, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

30. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы и эффективное количество полисорбата 80, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

31. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

32. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

33. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы, эффективное количество Полоксамера 188, и эффективное количество хлорида натрия, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

34. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество Декстрана ЗК и эффективное количество PEG 3350, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

35. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PVP 17 и эффективное количество PEG 3350, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

36. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PVP 17 и эффективное количество PEG 3350, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

37. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество Декстрана ЗК и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

38. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество Декстрана 3K и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

39. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество Декстрана 40К и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

40. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество Декстрана 40К и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

41. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PVP 17 и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

42. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PVP 17 и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

43. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PVP 17, эффективное количество Полоксамера 188 и эффективное количество хлорида натрия, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

44. Забуференная цитратом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PEG 3350 и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

45. Забуференная фосфатом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PEG 3350 и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до приблизительно рН 5,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

46. Забуференная гистидином не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PEG 3350 и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

47. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PVP 17 и эффективное количество Полисорбата 80, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

48. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы, эффективное количество PVP 17 и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

49. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы, эффективное количество PVP 17 и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температурах ниже температуры замерзания.

50. Забуференная фосфатом не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы, эффективное количество PVP 17 и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

51. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы, эффективное количество PVP 17, эффективное количество Полоксамера 188 и эффективное количество хлорида натрия, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

52. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы, эффективное количество лактозы и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

53. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы, эффективное количество лактозы и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

54. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество сахарозы, эффективное количество PVP 17 и эффективное количество PEG 3350, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

55. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество лактозы, эффективное количество PEG 3350 и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

56. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество Декстрана 3К, эффективное количество PEG 3350 и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

57. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество Декстрана 3К, эффективное количество PEG 3350 и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

57. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PVP 17, эффективное количество PEG 3350 и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

58. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PVP 17, эффективное количество PEG 3350 и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

58. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество PVP 17, эффективное количество глицина и эффективное количество Полоксамера 188, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

59. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество эксципиента сахара и эффективное количество поверхностно-активного эксципиента.

60. Композиция по п.59, где эксципиент сахар представляет собой моносахарид, дисахарид или трисахарид.

61. Композиция по п.59, где поверхностно-активный эксципиент представляет собой полоксамер, полисорбат, полиоксиэтиленгликольдодециловый эфир или полиоксиэтиленоктилфениловый эфир.

62. Композиция по п.59, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

63. Композиция по п.59, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5.

64. Композиция по п.63, где композиция забуферена с использованием цитратного буфера, фосфатного буфера или гистидинового буфера.

65. Композиция по п.59, где композиция дополнительно содержит эффективное количество хлорида натрия.

66. Композиция по п.59, где композиция дополнительно содержит эффективное количество небелкового полимерного эксципиента.

67. Композиция по п.66, где небелковый полимерный эксципиент представляет собой декстран, полиэтиленгликоль, полиэтиленимин, поливинилпирролидон, поливинилацетат, инулин, крахмал или производное крахмала.

68. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество небелкового полимерного эксципиента и эффективное количество поверхностно-активного эксципиента.

69. Композиция по п.68, где небелковый полимерный эксципиент представляет собой декстран, полиэтиленгликоль, полиэтиленимин, поливинилпирролидон, поливинилацетат, инулин, крахмал или производное крахмала.

70. Композиция по п.68, где поверхностно-активный эксципиент представляет собой полоксамер, полисорбат, полиоксиэтиленгликольдодециловый эфир или полиоксиэтиленоктилфениловый эфир.

71. Композиция по п.68, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

72. Композиция по п.68, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5.

73. Композиция по п.72, где композиция забуферена с использованием цитратного буфера, фосфатного буфера или гистидинового буфера.

74. Композиция по п.68, где композиция дополнительно содержит эффективное количество хлорида натрия.

75. Не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащая клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, эффективное количество первого небелкового полимерного эксципиента, эффективное количество второго небелкового полимерного эксципиента и эффективное количество поверхностно-активного эксципиента.

76. Композиция по п.75, где первый небелковый полимерный эксципиент представляет собой декстран, полиэтиленгликоль, полиэтиленимин, поливинилпирролидон, поливинилацетат, инулин, крахмал или производное крахмала.

77. Композиция по п.75, где второй небелковый полимерный эксципиент представляет собой декстран, полиэтиленгликоль, полиэтиленимин, поливинилпирролидон, поливинилацетат, инулин, крахмал или производное крахмала.

78. Композиция по п.75, где поверхностно-активный эксципиент представляет собой полоксамер, полисорбат, полиоксиэтиленгликольдодециловый эфир или полиоксиэтиленоктилфениловый эфир.

79. Композиция по п.75, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

80. Композиция по п.75, где композиция забуферена до рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5.

81. Композиция по п.80, где композиция забуферена с использованием цитратного буфера, фосфатного буфера или гистидинового буфера.

82. Композиция по п.75, где композиция дополнительно содержит эффективное количество хлорида натрия.

83. Композиция по пп.1-82, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента представляет собой комплекс с клостридиальным токсином, клостридиальный токсин, модифицированный клостридиальный токсин или перенацеленный клостридиальный токсин.

84. Композиция по п.83, где комплекс с клостридиальным токсином представляет собой комплекс BoNT/A, комплекс ВоМТ/В, комплекс BoNT/C₁, комплекс BoNT/D, комплекс BoNT/E, комплекс BoNT/F, комплекс BoNT/G, комплекс ТеМТ, комплекс BaNT или комплекс BuNT.

85. Композиция по п.83, где комплекс с клостридиальным токсином представляет собой комплекс BoNT/A массой 900 кДа, комплекс BoNT/A массой 500 кДа, комплекс BoNT/А массой 300 кДа, комплекс BoNT/B массой 500 кДа, комплекс BoNT/C₁ массой 500 кДа, комплекс BoNT/D массой 500 кДа, комплекс BoNT/D массой 300 кДа, комплекс BoNT/Е массой 300 кДа, или комплекс BoNT/F массой 300 кДа.

86. Композиция по п.83, где клостридиальный токсин представляет собой BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C₁, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, TeNT, BaNT или BuNT.

87. Композиция по п.83, где BoNT/A представляет собой BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/А3, BoNT/A4 или BoNT/A5.

88. Композиция по п.83, где перенацеленный клостридиальный токсин представляет собой перенацеленный BoNT/A, перенацеленный BoNT/B, перенацеленный BoNT/C₁, перенацеленный BoNT/D, перенацеленный BoNT/E, перенацеленный BoNT/F, перенацеленный BoNT/G, перенацеленный TeNT, перенацеленный BaNT или перенацеленный BuNT.

89. Композиция по п.83, где перенацеленный клостридиальный токсин содержит опиоидную нацеливающую группировку, тахикининовую нацеливающую группировку, мелакортиновую нацеливающую группировку, граниновую нацеливающую группировку, нацеливающую группировку - пептид, родственный нейропептиду Y, нацеливающую группировку - нейрогормон, нацеливающую группировку - нейрорегуляторный цитокин, нацеливающую группировку - кининовый пептид, нацеливающую группировку - фактор роста фибробластов, нацеливающую группировку - фактор роста нервов, нацеливающую группировку - инсулиноподобный фактор роста, нацеливающую группировку - эпидермальный фактор роста, нацеливающую группировку - фактор роста эндотелия сосудов, нацеливающую группировку - нейротрофический фактор головного мозга, нацеливающую группировку - глиальный нейротрофический фактор, нейроторофиновую нацеливающую группировку, нацеливающую группировку - головной активаторный пептид, нацеливающую группировку - нейротурин, нацеливающую группировку - персефин, нацеливающую группировку - артемин, нацеливающую группировку - трансформирующий фактор роста β, нацеливающую группировку - костный морфогенетический белок, нацеливающую группировку - ростовой фактор дифференцировки, активиновую нацеливающую группировку, нацеливающую группировку - глюкагоноподобный гормон, нацеливающую группировку - гипофизарный активирующий аденилатциклазу пептид, нацеливающую группировку - соматотропин-высвобождающий фактор, нацеливающую группировку - вазоактивный интестинальный пептид, нацеливающую группировку - гастроингибирующий полипептид, нацеливающую группировку - кальцитониноподобный висцеральный желудочный полипептид или нацеливающую группировку - PAR пептид.

90. Композиция по п.89, где опиоидная нацеливающая группировка представляет собой энкефалин, эндоморфин, эндорфин, динорфин, ноцицептин или геморфин.

91. Композиция по п.89, где тахикининовая нацеливающая группировка представляет собой вещество Р, нейропептид К, нейропептид гамма, нейрокинин А, нейрокинин В, хемокинин или эндокинин.

92. Забуференная не содержащая животный белок твердая форма фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина, содержащей клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента и эффективное количество трегалозы и эффективное количество Полоксамера 188, где композиция забуферена от приблизительно рН 5,5 до приблизительно 6,5, и где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента стабилен в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

ПРИМЕРЫ

Следующие примеры определяют специфические воплощения фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина по настоящему изобретению, и не предполагается, что они ограничивают объем изобретения.

Пример 1

Небелковые стабилизированные композиции - один эксципиент

Эксперименты осуществляли для определения действия композиций, содержащих один небелковый эксципиент, в отношении восстановления клостридиального токсина в качестве активного ингредиента после разведения. Небелковые тестируемые эксципиенты добавляли по отдельности или в комбинации с перечисленными буферами или солями (Таблица 2). Все композиции смешивали, лиофилизировали, растворяли и силу оценивали тем же самым образом и с тем же самым клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, используемого в каждой композиции, за исключением того, что каждую композицию готовили с различными небелковыми эксципиентами или с различными количествами небелкового эксципиента.

Композиции смешивали сначала путем добавления указанного количества небелкового эксципиента(ов) к стерильной воде с образованием раствора. Затем клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента добавляли к раствору с получением композиции. Добавляемый в качестве активного ингредиента клостридиальный токсин представлял собой приблизительно 150 единиц комплекса BoNT/А 900 массой кДа, приблизительно 150 единиц BoNT/A массой 150 кДа или приблизительно 250 нг перенацеленного BoNT/A массой 100 кДа, где модификация представляла собой замену BoNT/A связывающего домена на опиоидный лиганд, смотри, например, Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells, заявка на патент США № 11/776075 (11 июля 2007 года); Dolly, J.O. et al., Activatable Clostridial Toxins, заявка на патент США № 11/829475 (27 июля 2007 года); Foster, K.A. et al., Fusion Proteins, международная зявка на патент WO 2006/059093 (8 июня 2006 года); и Foster, K.A. et al., Non-Cytotoxic Protein Conjugates, международная заявка на патент WO 2006/059105 (8 июня 2006 года), каждая из которых полностью включена путем ссылки. Композиции превращали в твердые формы (путем лиофилизации или сушки в вакууме), хранили в течение определенного периода времени (приблизительно одних суток, по меньшей мере трех месяцев или по меньшей мере одного года), разбавляли стерильной водой или специализированным буфером и затем измеряли для определения восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента.

Для определения восстановленной силы клостридиального токсина, комплекса с клостридиальным токсином или модифицированного клостридиального токсина растворенную композицию измеряли при помощи биотеста LD₅₀ на мышах. Для каждой растворенной композиции минимум шесть серийных разведений с интервалами 1,33 дозы готовили в нормальном физиологическом растворе, и обычно пять или шесть мышей (самок Swiss Weber массой 17-22 грамм) использовали для каждой дозируемой группы. Мышам интраперитонеально осуществляли инъекции в правую нижнюю часть брюшной полости и регистрировали уровень смертности в течение 72 часов для каждого разведения. Разведения готовили таким образом, что наиболее концентрированное разведение приводило к уровню смертности по меньшей мере у 80% инъецированных мышей, а разведение с наименьшей концентрацией приводило к уровню смертности не больше чем у 20% инъецированных мышей. Минимум из четырех разведений должен оказываться в пределах монотонно уменьшающегося диапазона уровеней смертности, т.е. два наибольших и два наименьших уровня должны быть уменьшающимися (не равными). Монотонно уменьшающийся диапазон начинается с уровня смертности не менее чем 80%. Два референтных стандартных анализа проводят одновременно. Разведение, при котором 50% мышей погибают в течение трех суток после инъекции, обозначенный как период наблюдения, определяют как разведение, которое содержит одну единицу (1Е) ботулинического токсина. Биотест LD₅₀ на мышах обеспечивает определение силы клостридиального токсина, комплекса с клостридиальным токсином или модифицированного клостридиального токсина с точки зрения его 50% летальной дозы или "LD₅₀" для мышей. Таким образом, одну единицу (Е) клостридиального токсина, комплекса с клостридиальным токсином или модифицированного клостридиального токсина определяют как количество токсина, которое при интраперитонеальной инъекции убивало 50% подвергнутых инъекции мышей, т.е. LD₅₀.

Восстановление выражается в виде процента и рассчитывается путем деления силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в хранимой разведенной композиции на силу активного клостридиального токсина, определенную перед его добавлением в тестируемый раствор. Таким образом, например, восстановление 60% означает, что сила клостридиального токсина в качестве активного ингредиента после разведения составляла 60% от силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента перед его добавлением к композиции. Максимальная теоретическая восстановленная сила составляет 100%. Полученный результат показывает, что, в общем, фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, содержащая комплекс с клостридиальным токсином, была плохо стабилизирована, когда композиция содержала один небелковый эксципиент (Таблица 2).

Когда единичный используемый эксципиент представлял собой сахар, то только дисахарид лактоза демонстрировал любую степень исходной восстановленной силы, демонстрируя от приблизительно 15% до приблизительно 41% восстановления клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, когда добавляли от приблизительно 10 мг до приблизительно 50 мг лактозы (от приблизительно 1 масс./об.% до приблизительно 5 масс./об.%) (Таблица 2). Кроме того, хотя тестируемые композиции, содержащие лактозу в качестве единственного эксципиента, демонстрируют восстановление, они по-видимому не являются очень стабильными после хранения в течение одного года, поскольку восстановленная сила не обнаруживается в этот момент времени для любого тестируемого количества за исключением 20 мг лактозы (Таблица 2). Добавление 10 мМ цитрата натрия (рН 5,5) и фосфата калия (рН 5,5) улучшало исходную восстановленную силу и длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих лактозу в качестве единственного эксципиента. Исходная восстановленная сила увеличивалась от приблизительно 41% до приблизительно 60%, когда композиция лактозы содержала 10 мМ цитрат натрия (рН 5,5), и увеличивалась от приблизительно 41% до приблизительно 71%, когда композиция лактозы содержала 10 мМ фосфат калия (рН 5,5) (Таблица 2). Кроме того, увеличенная восстановленная сила клостридиального токсина в качестве активного ингредиента также обнаружена после по меньшей мере одного года хранения с использованием буфера с рН 5,5 в противоположность воде в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, которые хранили при температуре окружающей среды или температурах замерзания (Таблица 2). Тем не менее добавление 10 мМ цитрата натрия (рН 6,5) к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим лактозу в качестве единственного эксципиента, не улучшало исходную восстановленную силу или длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Неожиданно, добавление 10 мМ фосфата калия (рН 6,5) к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим лактозу в качестве единственного эксципиента, действительно в целом устраняло восстановление клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Наконец, добавление 10 мМ хлорида натрия к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим лактозу в качестве единственного эксципиента, не улучшало восстановленную силу или длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2).

Дисахариды сахароза и трегалоза и трисахарид раффиноза не демонстрировали восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента при использовании в качестве единственного эксципиента. Кроме того, за одним исключением добавление буферов или хлорида натрия к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим эти сахара в качестве единственного эксципиента, не улучшало исходную восстановленную силу или длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Единственное исключение представляла собой фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, содержащая сахарозу и 10 мМ цитрат натрия (рН 5,5). Эта композиция демонстрировала 44% исходной восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента и эта степень восстановления поддерживалась в течение по меньшей мере одного года при хранении при температуре окружающей среды или температуре замерзания (Таблица 2).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие полиол (маннит) в качестве единственного эксципиента, не демонстрируют какой-либо восстановленной силы (Таблица 2). Добавление буферов или хлорида натрия к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим маннит в качестве единственного эксципиента, не улучшало восстановленную силу или длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2).

Таблица 2 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - один эксципиент Эксципиент 1 Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Доля Раствор^c Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Сахароза 5 - Вода (pH 5,6) 0 0 0 0 0 Сахароза 10 - Вода (pH 5,6) 0 0 0 0 0 Сахароза 20 - Вода (pH 5,6) 0 0 0 0 0 Сахароза 30 - Вода (pH 5,6) 0 0 0 0 0 Сахароза 50 - Вода (pH 5,6) 0 0 0 0 0 Сахароза 100 - Вода (pH 5,6) 0 0 0 0 0 Сахароза 250 - Вода (pH 5,6) 0 0 0 0 0 Сахароза 20 - 10 мМ SC (pH 5,5) 44 44 44 39 49 Сахароза 20 - 10 мМ SC (pH 5,5) 0 0 0 0 0 Сахароза 20 - 10 мМ SC (pH 5,5) 0 0 0 0 0 Сахароза 20 - 10 мМ SC (pH 5,5) 0 0 0 0 0 Сахароза 20 - 10 мМ SC (pH 5,5) 0 0 0 0 0 Сахароза 30 - 10 мМ SC (pH 5,5) 0 0 0 0 0 Сахароза 60 - 10 мМ SC (pH 5,5) 46 0 0 46 46 Лактоза 5 - Вода (pH 4,8) 0 0 0 0 0 Лактоза 10 - Вода (pH 4,8) 15

Таблица 2 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - один эксципиент Эксципиент 1 Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Доля Раствор^c Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Лактоза 20 - Вода (pH 4,8) 41 45 38 38 51 Лактоза 50 - Вода (pH 4,8) 35 Лактоза 20 - 10 мМ SC (pH 5,5) 60 55 55 85 67 Лактоза 20 - 10 мМ SC (pH 6,5) 45 0 0 49 49 Лактоза 20 - 10 мМ PP (pH 5,5) 71 46 49 58 55 Лактоза 20 - 10 мМ PP (pH 6,5) 0 0 0 0 0 Лактоза 20 - 10 мМ NaCl (pH 4,8) 39 50 0 58 - Трегалоза 5 - Вода 0 0 0 0 0 Трегалоза 10 - Вода 0 0 0 0 0 Трегалоза 50 - Вода 0 0 0 0 0 Раффиноза 5 - Вода 0 0 0 0 0 Раффиноза 10 - Вода 0 0 0 0 0 Раффиноза 50 - Вода 0 0 0 0 0 Маннит 5 - Вода 46 0 0 46 46 Маннит 10 - Вода 0 0 0 0 0 Маннит 20 - Вода 15

Таблица 2 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - один эксципиент Эксципиент 1 Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Доля Раствор^c Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Маннит 50 - Вода 0 0 0 0 0 Маннит 20 - 10 мМ PP (pH 5,5) 0 0 0 0 0 Инулин 5 - Вода 0 0 0 0 0 Инулин 10 - Вода 0 0 0 0 0 Инулин 50 - Вода 0 0 0 0 0 Декстран 3K 60 - Вода (pH 5,2) 0 0 0 0 0 Декстран 3K 60 - 10 мМ SC (pH 5,5) 0 0 0 0 0 Декстран 3K 60 - 10 мМ SC (pH 6,5) 0 0 0 0 0 Декстран 3K 60 - 10 мМ PP (pH 5,5) 66 0 0 66 73 Декстран 3K 60 - 10 мМ PP (pH 6,5) 0 0 0 0 0 Декстран 3K 60 - 10 мМ HB (pH 5,5) 0 0 0 0 0 Декстран 3K 60 - 10 мМ HB (pH 6,5) 0 0 0 0 0 Декстран 40K 60 - Вода (pH 5,2) 0 0 0 0 0 Декстран 40K 60 - 10 мМ SC (pH 5,5) 0 0 0 0 0 Декстран 40K 60 - 10 мМ SC (pH 6,5) 0 0 0 0 0 Декстран 40K 60 - 10 мМ PP (pH 5,5) 0

Таблица 2 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - один эксципиент Эксципиент 1 Количество^b Доля Раствор^c Исходная Восстановленная сила^d (%) Тип Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Декстран 40К 60 - 10 мМ РР (рН 6,5) 0 0 0 0 0 Декстран 40К 60 - 10 мМ НВ (рН 5,5) 0 0 0 0 0 Декстран 40К 60 - 10 мМ НВ (рН 6,5) 0 0 0 0 0 PVP 17 0,5 - Вода (рН 4,2) 0 0 0 0 0 PVP 17 5 - Вода (рН 4,2) 48 - - - - PVP 17 10 - Вода (рН 4,2) 52 - - - - PVP 17 20 - Вода (рН 4,2) 43 0 0 55 52 PVP 17 30 - Вода (рН 4,0) 0 0 0 0 0 PVP 17 50 - Вода (рН 4,2) 0 0 0 0 0 PVP 17 60 - Вода (рН 4,0) 55 0 0 46 46 PVP 17 100 - Вода (рН 4,2) 0 0 0 0 0 PVP 17 250 - Вода (рН 4,2) 0 0 0 0 0 PVP 17 20 - 10 мМ SС(рН5,5) 113 70 41 101 115 PVP 17 20 - 10 мМ SС(рН6,5) 81 44 0 88 58 PVP 17 20 - 10 мМ РР (рН 5,5) 79 0 0 75 73 PVP 17 20 - 10 мМРР(рН6,5) 83 0 0 69 69

Таблица 2 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - один эксципиент Эксципиент 1 Количество^b Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев PVP 17 60 - 10 мM NaCl(pH 3,1) 100 0 0 100 100 PVP 17 20 - 10 мM NaCl (pH 4,2) 44 0 0 44 - PVP 17 30 - 10 мМ NаСl(рН 4,0) 46 - - 58 62 PEG 3350 60 - Вода (рН 7,0) 47 0 0 47 47 PEG 3350 50 - Вода (рН 7,0) 0 0 0 0 0 PEG 3350 60 - 10 мМ SС (рН 5,5) 76 58 0 87 82 PEG 3350 60 - 10 мМ SС (рН 6,5) 57 0 0 57 66 PEG 3350 60 - 10 мМ РР (рН 5,5) 80 0 0 70 97 PEG 3350 60 - 10 мМ РР (рН 6,5) 0 0 0 0 0 PEG 3350 60 - 10 мМ НВ (рН 5,5) 72 97 87 110 74 PEG 3350 60 - 10 мМ НВ (рН 6,5) 73 73 76 59 62 Полоксамер 188 50 - Вода 0 0 0 0 0 Полоксамер 188 20 - Вода (рН 6,5) 0 0 0 0 0 Полоксамер 188 20 - 10 мМ SС (рН 5,5) 81 73 67 87 97 Полоксамер 188 20 - 10 мМ SС (рН 6,5) 56 0 0 50 38 Полоксамер 188 20 - 10 мМ РР (рН 5,5) 39 0 0 0 0

Таблица 2 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - один эксципиент Эксципиент 1 Количество^b Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Полоксамер 188 20 - 10 мМ РР (рН 6,5) 0 0 0 0 0 Полоксамер 188 20 - 10 мМ NаСl (рН 6,4) 0 0 0 0 0 Глицин 5 - Вода 0 0 0 0 0 Глицин 10 - Вода 0 0 0 0 0 Глицин 50 - Вода 0 0 0 0 0 а Количество комплекса ботулинического нейротоксина серотипа A, добавленного в композицию, составляло 150 единиц. Общий объем композиции составлял 1,0 мл.
b Для сахарозы, лактозы, трегалозы, раффинозы, маннита, инулина, Декстрана 3K, Декстрана 40K, PEG 3550, PVP17, полоксамера 188 и глицина количество единиц добавляемого эксципиента выражается в мг. Для полисорбата 20 и полисорбата 80 количество единиц добавляемого эксципиента выражается в мг.
c Сокращенные обозначения буферов являются следующими: SC, натрий-цитратный буфер; PP, калий-фосфатный буфер; НВ, гистидиновый буфер; HPB, гистидин-фосфатный буфер.
d Восстановление выражается в виде процента и рассчитывается путем деления силы активного ингредиента, определенной после разведения, на силу активного ингредиента, определенной перед добавлением к композиции. 3 месяца относится к длительности промежутка времени, в течение которого композицию хранили при температуре. 12 месяца относится к длительности промежутка времени, в течение которого композицию хранили при указанной температуре.
e Температура окружающей среды составляет от приблизительно 18°С до приблизительно 22°С.
f Температура ниже температуры замерзания составляет от приблизительно -5°C до приблизительно -20°C.

Когда единственный использованный эксципиент представлял собой небелковый полимер, тогда восстановленная сила клостридиального токсина в качестве активного ингредиента зависела от типа используемого небелкового полимера и специфического добавленного буфера. Например, Декстран 3К и Декстран 40К демонстрировали отсутствие исходной восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента при использовании в качестве единственного эксципиента. С другой стороны, добавление приблизительно 60 мг PEG 3350 (приблизительно 2 масс./об.%) приводило в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 47%. Аналогично добавление от приблизительно 5 мг до приблизительно 20 мг PVP 17 (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) приводило в результате к исходной восстановленной силе от приблизительно 39% до приблизительно 52% (Таблица 2).

В общем, добавление различных буферов не улучшало исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, когда Декстран 3К или Декстран 40К использовали в качестве единственного эксципиента. Единственное исключение представляли собой фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие декстран 3К в 10 мМ фосфате калия (рН 5,5), где исходная восстановленная сила увеличивалась от 0% до приблизительно 66%, и восстановленная сила, которая поддерживалась в течение по меньшей мере одного года. Неожиданно, добавление различных буферов значительно улучшало восстановленную силу и длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, когда PEG 3350 или PVP 17 использовали в качестве единственного эксципиента. Например, в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих PEG 3350, добавление 10 мМ цитрата натрия (рН 5,5) увеличивало восстановленную силу от 0% до приблизительно 76%; добавление 10 мМ фосфата калия (рН 5,5) увеличивало восстановленную силу от 0% до приблизительно 80%; и добавление 10 мМ гистидинового буфера (рН 5,5) увеличивало восстановленную силу от 0% до приблизительно 72% (Таблица 2). Во всех случаях добавление этих различных буферов приводило в результате к длительной стабильности в течение по меньшей мере одного года при температуре окружающей среды и температурах замерзания.

Аналогичные, но более сложные результаты обнаружены в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих PVP 17 в качестве единственного эксципиента. Например, в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих PVP 17, добавление 10 мМ цитрата натрия (рН 5,5) увеличивало исходную восстановленную силу от приблизительно 43% до приблизительно 113%; добавление 10 мМ цитрата натрия (рН 6,5) увеличивало исходную восстановленную силу от приблизительно 43% до приблизительно 81%; добавление 10 мМ фосфата калия (рН 5,5) увеличивало исходную восстановленную силу от приблизительно 43% до приблизительно 97%; и добавление 10 мМ фосфата калия (рН 5,5) увеличивало исходную восстановленную силу от приблизительно 43% до приблизительно 83%. Тем не менее, несмотря на то, что все тестируемые буферы демонстрировали увеличение восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, только добавление буфера цитрата натрия приводило в результате к длительной стабильности в течение по меньшей мере одного года. Наконец, добавление 10 мМ хлорида натрия к фармацевтическим композициям, содержащим PVP 17 в качестве единственного эксципиента, не улучшало исходную восстановленную силу или длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента.

Когда единственный использованный эксципиент представлял собой поверхностно-активное вещество, не была обнаружена зависимость восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. К тому же, применение различных буферов приводило в результате к смешанной восстановленной силе. Например, в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих Полоксамер 188, добавление 10 мМ цитрата натрия (рН 5,5) увеличивало исходную восстановленную силу от 0% до приблизительно 81%; добавление 10 мМ цитрата натрия (рН 6,5) увеличивало исходную восстановленную силу от 0% до приблизительно 56%; и добавление 10 мМ фосфата калия (рН 5,5) увеличивало исходную восстановленную силу от 0% до приблизительно 39%; но добавление 10 мМ фосфата калия (рН 6,5) вовсе не улучшало восстановление (Таблица 2). Тем не менее, только добавление 10 мМ цитрата натрия (рН 5,5) приводило в результате к длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, который хранили при температуре окружающей среды или температуре замерзания (Таблица 2).

Таким образом, как правило, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие единственный эксципиент, не приводят в результате к значительной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, особенно когда такие композиции хранят в течение по меньшей мере одного года. Неожиданно, тем не менее, добавление буфера к фармацевтической композиции на основе клостридиального токсина может приводить в результате к улучшенной восстановленной силе и увеличенной длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Однако сочетание конкретного эксципиента с конкретным буфером может быть определено только эмпирически.

Пример 2

Небелковые стабилизированные композиции - два эксципиента

Эксперименты осуществляли для определения действий композиций, содержащих два различных небелковых эксципиента, в отношении восстановления клостридиального токсина в качестве активного ингредиента после разведения. Тестируемые небелковые эксципиенты добавляли по отдельности или в комбинации с перечисленными буферами или солями (Таблицы 3-5). Все композиции смешивали, лиофилизировали, растворяли, и силу оценивали тем же самым образом и с тем же самым клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, используемым в каждой композиции, за исключением того, что каждую композицию готовили с различными небелковыми эксципиентами или с различными количествами небелковых эксципиентов.

Тестируемые композиции смешивали, обрабатывали, хранили и растворяли, как описано в Примере 1, восстановленную силу определяли с использованием биотеста LD₅₀ на мышах, как описано в Примере 1. Восстановление выражается в виде процента и рассчитывается путем деления силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в хранимой разведенной композиции на силу активного клостридиального токсина, определенную перед его добавлением в тестируемый раствор. Полученный результат показывает, что фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, содержащая комплекс с клостридиальным токсином, может быть стабилизирована, когда композиция содержит два небелковых эксципиента (Таблицы 3-5).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина содержащие два различных сахара, приводили к смешанным результатам. Например, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие лактозу и сахарозу, по-видимому, значительно не увеличивали восстановленную силу. Например, композиции, содержащие приблизительно 5 масс./об.% лактозы, приводили в результате к исходной восстановленной силе, составляющей приблизительно 35% (Таблица 2), композиции, содержащие приблизительно 5 масс./об.% сахарозы, приводили в результате к отсутствию восстановленной силы (Таблица 2), и композиции, содержащие приблизительно 5 масс./об.% лактозы и приблизительно 5 масс./об.% сахарозы, приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 27% (Таблица 3). Аналогично, композиции, содержащие приблизительно 2 масс./об.% лактозы, приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 41% (Таблица 2), композиции, содержащие приблизительно 1 масс./об.% сахарозы, приводили в результате к отсутствию восстановленной силы (Таблица 2), и композиции, содержащие приблизительно 2 масс./об.% лактозы и приблизительно 1 масс./об.% сахарозы, приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 68% (Таблица 3). Хотя обнаружено увеличение исходной восстановленной силы в композиции, содержащей приблизительно 2 масс./об.% лактозы и приблизительно 1 масс./об.% сахарозы, длительная стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих приблизительно 2% лактозы и приблизительно 1% сахарозы, близка композициям, содержащим приблизительно 2 масс./об.% только лактозы (смотри Таблицы 3 и 4).

Аналогично, добавление 10 мМ цитрата натрия (рН 5,5), 10 мМ цитрата натрия (рН 6,5) и 10 мМ фосфата калия (рН 5,5) не оказывало действия на исходную восстановленную силу или длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих приблизительно 2% лактозы и приблизительно 1% сахарозы, при сравнении с композициями, содержащими приблизительно 2% лактозы в виде единственного сахарного эксципиента. Неожиданно, тем не менее, в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих лактозу 2 масс./об.% и сахарозу 1 масс./об.%, добавление 10 мМ фосфата калия (рН 6,5) увеличивало исходную восстановленную силу от 0% до приблизительно 50%, и эта композиция сохраняла стабильность в течение по меньшей мере одного года при температурах замерзания. Аналогично поразительно то, что в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих лактозу 2 масс./об.% и сахарозу 1 масс./об.%, добавление 10 мМ хлорида натрия увеличивало исходную восстановленную силу (по сравнению с лактозой, 2 масс./об.%, 10 мМ хлоридом натрия при приблизительно 39%, сахарозой 2 масс./об.%, 10 мМ хлоридом натрия при 0%, и лактозой 2 масс./об.%, сахарозой 1 масс./об.%, 10 мМ хлоридом натрия при приблизительно 61%). Более важно то, что эта композиция приводит в результате к длительной стабильности, составляющей по меньшей мере один год при температуре окружающей среды и температурах замерзания.

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахарозу и трегалозу или маннит, не улучшали исходную восстановленную силу, притом что большинство комбинаций приводили в результате к отсутствию восстановления. Аналогично, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие лактозу и маннит, не улучшали исходную восстановленную силу (по сравнению с 5 масс./об.% лактозой при приблизительно 35% (Таблица 2), 5 масс./об.% маннита при 0% (Таблица 2), и 5 масс./об.% лактозой и 5 масс./об.% маннита при приблизительно 23% (Таблица 3)).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахар и небелковый полимер, увеличивали диапазон количества эксципиента, эффективного для обеспечения исходной восстановленной силы и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, различные количества сахарозы в комбинации с различными количествами PVP 17 увеличивали диапазон количества эксципиента, эффективного для увеличения восстановленной силы и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Когда сахарозу использовали в качестве единственного эксципиента в диапазонах от приблизительно 5 мг до приблизительно 250 мг (приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 25 масс./об.%), не обнаружили восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, тогда как PVP 17 в количестве от приблизительно 5 мг до приблизительно 20 мг (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) приводил в результате к исходной восстановленной силе. Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 30 мгдо приблизительно 250 мг (от приблизительно 3 масс./об.% до приблизительно 25 масс./об.%) сахарозы в комбинации с от приблизительно 30 мг до приблизительно 250 мг (от приблизительно 3 масс./об.% до приблизительно 25 масс./об.%) PVP 17, приводили в результате к значению от приблизительно 39 до приблизительно 62% исходной восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (каждый из этих эксципиентов в этих количествах приводил в результате к отсутствию обнаруживаемого восстановления). В качестве еще одного примера приблизительно 5 мг сахарозы (приблизительно 0,5 масс./об.%) в комбинации с приблизительно 50 мг PVP 17 (приблизительно 5 масс./об.%) увеличивали восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента до приблизительно 39% (Таблица 3) (каждый из этих эксципиентов в этих количествах по отдельности не приводил в результате к обнаруживаемому восстановлению).

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Сахароза 50 Лактоза 50 1:1 Вода (рН 4,8) 27 - - - - Сахароза 10 Лактоза 20 1:2 Вода (рН 4,8) 68 44 44 46 50 Сахароза 10 Лактоза 20 1:2 10 мМ SС (рН5,5) 64 68 58 65 65 Сахароза 10 Лактоза 20 1:2 10 мM SC (pH6,5) 41 0 0 41 0 Сахароза 10 Лактоза 20 1:2 10 мМ РР (рН5,5) 43 55 49 55 68 Сахароза 10 Лактоза 20 1:2 10 мМ РР (рН6,5) 50 0 0 51 38 Сахароза 10 Лактоза 20 1:2 10 мM NaCl(pH 4,8) 61 58 45 66 58 Сахароза 50 Трегалоза 50 1:1 Вода (рН 4,3) 0 0 0 0 0 Сахароза 50 Трегалоза 5 10:1 Вода (рН 4,3) 0 0 0 0 0 Сахароза 5 Трегалоза 50 1:10 Вода (рН 4,3) 0 0 0 0 0 Сахароза 50 Маннит 5 10:1 Вода (рН 4,3) 0 0 0 0 0 Сахароза 50 Маннит 50 1:1 Вода (рН 4,3) 27 - - - - Сахароза 5 Маннит 50 1:10 Вода (рН 4,3) 0 0 0 0 0 Сахароза 250 PVP 17 10 25:1 Вода (рН 4,3) 58 - - Сахароза 5 PVP 17 0,5 10:1 Вода (рН 4,3) 0 0 0 0 0

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Сахароза 20 PVP 17 10 2:1 Вода (рН 4,3) 77 49 0 76 101 Сахароза 250 PVP 17 250 1:1 Вода (рН 4,3) 39 Сахароза 30 PVP 17 30 1:1 Вода (рН 4,1) 62 Сахароза 15 PVP 17 15 1:1 Вода (рН 4,1) 77 0 0 68 on OU Сахароза 5 PVP 17 5 1:1 Вода (рН 4,3) 49 Сахароза 0,5 PVP 17 0,5 1:1 Вода (рН 4,3) 0 0 0 0 0 Сахароза 5 PVP 17 10 1:2 Вода (рН 4,3) 58 Сахароза 5 PVP 17 20 1:4 Вода (рН 4,3) 47 Сахароза 5 PVP 17 50 1:10 Вода (рН 4,3) 39 Сахароза 0,5 PVP 17 5 1:10 Вода (рН 4,3) 58 Сахароза 5 PVP 17 100 1:20 Вода (рН 4,3) 0 0 0 0 0 Сахароза 0,5 PVP 17 10 1:20 Вода (рН 4,3) 46 Сахароза 0,5 PVP 17 20 1:40 Вода (рН 4,3) 49 Сахароза 20 PVP 17 10 2:1 10 мМ SС (рН 5,5) 100 52 38 87 101 Сахароза 20 PVP 17 10 2:1 10 мМ SС (рН 6,5) 87 0 0 88 85 Сахароза 20 PVP 17 10 2:1 10 мМ РР (рН 5,5) 65 42 47 83 87

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Сахароза 20 PVP 17 10 2:1 10 мМ PP (рН 6,5) 63 61 51 75 99 Сахароза 20 PVP 17 10 2:1 10 мМ NaCl (рН 4,4) 83 112 43 77 93 Сахароза 30 PVP 17 30 1:1 10 мМ NaCl (рН 4,1) 66 0 0 66 66 Сахароза 15 PVP 17 15 1:1 10 мМ NaCl (рН 4,1) 59 0 0 59 59 Сахароза 50 PEG 3350 5 10:1 Вода 41 - - - - Сахароза 50 PEG 3350 50 1:1 Вода 44 - - - - Сахароза 5 PEG 3350 50 1:10 Вода 35 - - - - Сахароза 10 Полоксамер 188 0,25 40:1 Вода (рН 5,9) 62 0 0 78 78 Сахароза 5 Полоксамер 188 0,125 40:1 Вода (рН 5,7) 70 0 0 70 78 Сахароза 60 Полоксамер 188 3 20:1 Вода (рН 6,1) 75 0 0 84 106 Сахароза 30 Полоксамер 188 1,5 20:1 Вода (рН 6,1) 104 0 0 92 79 Сахароза 10 Полоксамер 188 0,5 20:1 Вода (рН 6,2) 66 0 0 88 79 Сахароза 5 Полоксамер 188 0,25 20:1 Вода (рН 5,9) 64 0 0 78 78 Сахароза 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ SС (рН 6,7) 99 0 0 115 115 Сахароза 50 Полоксамер 188 5 10:1 Вода 43 - - - -

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Сахароза 27 Полоксамер 188 2,7 10:1 Вода (рН 6,2) 92 0 0 80 80 Сахароза 48 Полоксамер 188 12 4:1 Вода (рН 6,4) 110 0 0 85 113 Сахароза 24 Полоксамер 188 6 4:1 Вода (рН 6,4) 102 0 0 88 84 Сахароза 10 Полоксамер 188 2,5 4:1 Вода (рН 6,4) 84 0 0 104 87 Сахароза 5 Полоксамер 188 1,25 4:1 Вода (рН 6,4) 72 0 0 92 82 Сахароза 40 Полоксамер 188 20 2:1 Вода (рН 6,9) 113 78 74 102 111 Сахароза 20 Полоксамер 188 10 2:1 Вода (рН 6,5) 101 87 0 117 115 Сахароза 10 Полоксамер 188 5 2:1 Вода (рН 6,9) 94 0 0 92 106 Сахароза 5 Полоксамер 188 2,5 2:1 Вода (рН 6,6) 105 61 0 108 102 Сахароза 2,5 Полоксамер 188 1,25 2:1 Вода (рН 6,4) 87 - - 85 86 Сахароза 1,25 Полоксамер 188 0,625 2:1 Вода (рН 6,2) 71 - - 81 90 Сахароза 50 Полоксамер 188 50 1:1 Вода 59 - - - - Сахароза 20 Полоксамер 188 40 1:2 Вода (рН 6,9) 115 117 101 117 115 Сахароза 5 Полоксамер 188 50 1:10 Вода 55 Сахароза 60 Полоксамер 188 6 10:1 10мМ SС (рН5,5) 111 97 101 115 Сахароза 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ SC (рН 5,5) 113 112 89 115 101

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Лактоза 50 Маннит 50 1:1 Вода 23 - - - - Лактоза 5 PVP 17 0,5 10:1 Вода 52 - - - - Лактоза 5 PVP 17 5 1:1 Вода 57 - - - - Лактоза 0,5 PVP 17 0,5 1:1 Вода 0 0 0 0 0 Лактоза 5 PVP 17 10 1:2 Вода 65 - - - - Лактоза 5 PVP 17 20 1:4 Вода 49 - - - - Лактоза 5 PVP 17 50 1:10 Вода 52 - - - Лактоза 0,5 PVP 17 5 1:10 Вода 65 - - - - Лактоза 5 PVP 17 100 1:20 Вода 0 - - - - Лактоза 0,5 PVP 17 10 1:20 Вода 47 - - - Лактоза 0,5 PVP 17 20 1:40 Вода 65 - - - - Лактоза 0,5 PVP 17 50 1:100 Вода 0 - - - - Лактоза 55 PEG 3550 5,5 10:1 Вода (рН 4,9) 96 61 62 112 98

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Лактоза 2,5 Полоксамер 188 1,25 2:1 10 мМ SС (рН 5,5) 86 - 102 101 Лактоза 1,25 Полоксамер 188 0,625 2:1 10 мМ SС (рН 5,5) 106 90 107 Лактоза 0,625 Полоксамер 188 0,3125 2:1 10 мМ SС (рН 5,5) 74 - 61 81 Лактоза 20 Полоксамер 188 10 2:1 10 мМ SС (рН 6,5) 81 56 56 113 117 Лактоза 20 Полоксамер 188 10 2:1 10 мМ РР (рН 5,5) 115 88 85 107 114 Лактоза 20 Полоксамер 188 10 2:1 10 мМ РР (рН 6,5) 91 65 65 103 93 Лактоза 20 Полоксамер 188 10 2:1 10 мМ NaCl (pH 5,5) 115 87 101 115 115 Лактоза 5 Полоксамер 188 2,5 2:1 10 мМ NaCl (pH 5,5) 107 - - 92 112 Лактоза 2,5 Полоксамер 188 1,25 2:1 10 мМ NaCl (pH 5,5) 86 - - 102 101 Лактоза 1,25 Полоксамер 188 0,625 2:1 10 мМ NaCl (pH 5,5) 106 - - 90 107 Лактоза 0,625 Полоксамер 188 0,3125 2:1 10 мМ NaCl (pH 5,5) 74 - - 61 81 Трегалоза 50 Маннит 50 10:1 Вода 0 0 0 0 0 Трегалоза 50 Маннит 5 1:1 Вода 0 0 0 0 0 Трегалоза 5 Маннит 50 1:10 Вода 0 0 0 0 0

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Трегалоза 50 PEG 3350 5 10:1 Вода 41 - - -- - Трегалоза 50 PEG 3350 50 1:1 Вода 0 0 0 0 0 Трегалоза 5 PEG 3350 50 1:10 Вода 36 - - - - Трегалоза 50 Полоксамер 188 5 10:1 Вода 50 - - - - Трегалоза 50 Полоксамер 188 50 1:1 Вода 53 - - - - Трегалоза 5 Полоксамер 188 50 1:10 Вода 75 - - - - Трегалоза 40 Полоксамер 188 20 2:1 50 мМ НРВ (рН 6,5) 175 94 - 98 98 Трегалоза 20 Полоксамер 188 40 1:2 50 мМ НРВ (рН 6,5) 171 100 - 100 100 Трегалоза 20 Полоксамер 188 40 1:2 50 мМ НРВ (рН 6,5)
3,3 мM NaCl 183 97 - 100 100 Трегалоза 50 Глицин 5 10:1 Вода 0 0 0 0 0 Трегалоза 50 Глицин 50 1:1 Вода 0 0 0 0 0 Трегалоза 5 Глицин 50 1:10 Вода 0 0 0 0 0 а - Количество комплекса ботулинического нейротоксина серотипа А, добавленного в композицию, составляло 150 единиц. Общий объем композиции составлял 1,0 мл.
b - Для сахарозы, лактозы, трегалозы, раффинозы, маннита, инулина, Декстрана 3К, Декстрана 40К, PEG 3550, PVP 17, Полоксамера 188 и глицина количество единиц добавляемого эксципиента выражается в мг. Для полисорбата 20 и полисорбата 80 количество единиц добавляемого эксципиента выражается в мл.
с - Сокращенные обозначения буферов являются следующими: SC, натрий-цитратный буфер; РР, калий-фосфатный буфер; НВ, гистидиновый буфер; НРВ, гистидин-фосфатный буфер.
d - Восстановление выражается в виде процента и рассчитывается путем деления силы активного ингредиента, определенной после разведения, на силу активного ингредиента, определенную перед добавлением к композиции. 3 месяца относится к длительности промежутка времени, в течение которого композицию хранили при указанной температуре. 12 месяцев относится к длительности промежутка времени, в течение которого композицию хранили при указанной температуре.
е - Температура окружающей среды составляет от приблизительно 18°С до приблизительно 22°С.
f - Температура ниже температуры замерзания составляет от приблизительно -5°С до приблизительно -20°С.

В зависимости от добавляемых количеств, добавление различных буферов к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим сахарозу и PVP 17, влияло на исходную восстановленную силу или стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента при длительном хранении (Таблица 3). Например, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 20 мг сахарозы и 10 мг PVP 17, обеспечивали в результате исходную восстановленную силу, составляющую приблизительно 77% (Таблица 2). Однако добавление натрий-цитратного буфера к этой композиции приводило в результате к увеличению восстановленной силы от приблизительно 87% до приблизительно 100% (Таблица 3). Кроме того, добавление натрий-цитратного буфера с рН, равным приблизительно 5,5, к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим приблизительно 20 мг сахарозы и 10 мг PVP 17, приводило в результате к стабильности при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания длительностью по меньшей мере один год (Таблица 3). Аналогично, хотя не обнаружено увеличение степени исходной восстановленной силы, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 20 мг сахарозы и 10 мг PVP 17 в калий-фосфатном буфере с рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, приводило в результате к значительному увеличению длительности периода стабильности композиции при хранении при температуре окружающей среды (Таблица 3).

В фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих сахарозу и PVP 17, добавление хлорида натрия к композиции, по-видимому, не оказывало значительного действия в отношении исходной восстановленной силы. Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 20 мг сахарозы и 10 мг PVP 17 в хлориде натрия, приводили в результате к значительному увеличению длительности периода стабильности композиции при хранении при температуре окружающей среды (Таблица 3).

В качестве еще одного примера, хотя не обнаружена восстановленная сила, когда от приблизительно 5 мг до приблизительно 50 мг сахарозы (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 5 масс./об.%) использовали в качестве единственного эксципиента, или когда приблизительно 50 мг PEG 3350 (приблизительно 5 масс./об.%) использовали в качестве единственного эксципиента, в комбинации обнаружено увеличение восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 35% до приблизительно 44% (Таблица 3).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие лактозу и небелковый полимер, также увеличивали диапазон количества эксципиента, эффективного для достижения исходной восстановленной силы и длительности периода стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, когда лактозу использовали в качестве единственного эксципиента, она эффективно увеличивала восстановленную силу в количестве от приблизительно 10 мг до приблизительно 50 мг (от приблизительно 1 масс./об.% до приблизительно 5 масс./об.%) (Таблица 2), тогда как PVP 17 был эффективен для увеличения восстановленной силы в количестве от приблизительно 5 мг до приблизительно 20 мг (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) (Таблица 2). Тем не менее, приблизительно 5 мг лактозы (приблизительно 0,5 масс./об.%) в комбинации с приблизительно 0,5 мг PVP 17 (приблизительно 0,05 масс./об.%) увеличивали исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента до приблизительно 52% (Таблица 3) (каждый из этих эксципиентов в этих количествах по одному приводил в результате к отсутствию обнаруживаемого восстановления, смотри Таблица 2). В качестве еще одного примера приблизительно 5 мг лактозы (приблизительно 0,5 масс./об.%) в комбинации с приблизительно 50 мг PVP 17 (приблизительно 5 масс./об.%) увеличивали исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента до приблизительно 52% (Таблица 3) (каждый из этих эксципиентов в этих концентрациях по одному приводил в результате к отсутствию обнаруживаемого восстановления, смотри Таблица 2).

Кроме того, добавление лактозы в количествах, в которых этот сахар сам по себе был не эффективен для достижения исходной восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, по-видимому, усиливало исходную восстановленную силу в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих в качестве единственного эксципиента количество PVP 17, достаточное для достижения исходной восстановленной силы. Например, приблизительно 5 мг лактозы (0,5 масс./об.%) в комбинации с PVP 17 в количестве от приблизительно 5 мг до приблизительно 20 мг (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) увеличивали исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента до приблизительно 57%, приблизительно 65% и приблизительно 49%, соответственно (Таблица 3). Эта восстановленная сила значительно выше, чем восстановление, обнаруженное, когда PVP 17 используют в виде единственного эксципиента (смотри Таблицу 2, только 5 мг PVP 17, 0,5 масс./об.% при приблизительно 48%; только 10 мг PVP 17, 1 масс./об.% при приблизительно 52%; только 20 мг PVP 17, 2 масс./об.% при приблизительно 43%). Аналогично, приблизительно 0,5 мг лактозы (0,05 масс./об.%) в комбинации с PVP 17 в количестве от приблизительно 5 мг до приблизительно 20 мг (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) увеличивали исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента до приблизительно 65%, приблизительно 47% и приблизительно 65%, соответственно (Таблица 3). В общем, эта восстановленная сила значительно выше восстановления, обнаруженного в том случае, когда PVP 17 используют в качестве единственного эксципиента (смотри Таблицу 2, только 5 мг PVP 17, 0,5 масс./об.% при приблизительно 48%; только 10 мг PVP 17, 1 масс./об.% при приблизительно 52%; только 20 мг PVP 17, 2 масс./об.% при приблизительно 43%).

Обнаружены похожие результаты, когда лактозу комбинировали с PEG 3350. Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 50 мг лактозы (приблизительно 5 масс./об.%), приводили в результате к исходной восстановленной силе 35% (Таблица 2), тогда как композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 50 мг PEG 3350 (приблизительно 5 масс./об.%), приводили в результате к отсутствию исходной восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Тем не менее, композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 50 мг лактозы (приблизительно 5 масс./об.%) и приблизительно 50 мг PEG 3350 (приблизительно 5 масс./об.%), приводили в результате к исходной восстановленной силе 53% (Таблица 3). Усиление исходной восстановленной силы также обнаружено в композициях на основе клостридиального токсина, содержащих например, лактозу и PEG 3350 в различных забуференных растворах (смотри Таблицу 3).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахар и поверхностно-активное вещество, приводили в результате к эффективной увеличенной восстановленной силе и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в широком диапазоне количеств эксципиента. Например, только сахароза и только Полоксамер 188 приводили в результате к отсутствию детектируемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Неожиданно, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 1,25 мг до приблизительно 60 мг сахарозы (от приблизительно 0,125 масс./об.% до приблизительно 6 масс./об.%) в комбинации с от приблизительно 0,25 мг до приблизительно 50 мг Полоксамера 188 (от приблизительно 0,025 масс./об.% до приблизительно 5 масс./об.%), приводили в результате к увеличенной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 43% до приблизительно 115% (Таблица 3). Дополнительно все такие комбинации приводили в результате к длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента при хранении по меньшей мере при температурах ниже температуры замерзания по меньшей мере один год (Таблица 3).

Интересно, что в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих сахарозу и Полоксамер 188, добавление различных буферов к композиции, по-видимому, не оказывало значительного действия в отношении исходной восстановленной силы или длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента при хранении при температурах ниже температуры замерзания (Таблица 3). Неожиданно, однако, добавление различных буферов к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим сахарозу и Полоксамер 188, значительно улучшало длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента при хранении при температуре окружающей среды (Таблица 3). Добавление хлорида натрия к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим сахарозу и Полоксамер 188, по-видимому, не оказывало значительного действия в отношении исходной восстановленной силы или длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 3).

Обнаружены похожие результаты, когда сахарозу комбинировали с полисорбатом 80. Композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахарозу в качестве единственного эксципиента, приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Тем не менее, композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 10 мг до приблизительно 20 мг сахарозы (от приблизительно 1 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) и от приблизительно 0,25 мг до приблизительно 2,5 мг полисорбата 80 (от приблизительно 0,025 масс./об.% до приблизительно 0,25 масс./об.%), приводили в результате к исходной восстановленной силе от приблизительно 78% до приблизительно 102% (Таблица 3). Усиление длительной стабильности также обнаружено в композициях на основе клостридиального токсина, содержащих сахарозу и полисорбат 80 (смотри Таблицу 3).

В качестве еще одного примера, только сахароза и только Полоксамер 188 приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Неожиданно обнаружили, что фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 1,25 мг до приблизительно 60 мг сахарозы (от приблизительно 0,125 масс./об.% до приблизительно 6 масс./об.%) в комбинации с от приблизительно 0,25 мг до приблизительно 50 мг Полоксамера 188 (от приблизительно 0,025 масс./об.% до приблизительно 5 масс./об.%), приводили в результате к увеличенной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 43% до приблизительно 115% (Таблица 3). Кроме того, все такие комбинации приводили в результате к длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента при хранении по меньшей мере при температурах ниже температуры замерзания по меньшей мере один год (Таблица 3).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие лактозу и Полоксамер 188, также увеличивали диапазон количества эксципиента, эффективного для достижения исходной восстановленной силы и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, при использовании лактозы в качестве единственного эксципиента она была эффективна при восстановлении клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в количестве от приблизительно 10 мг до приблизительно 50 мг (от приблизительно 1 масс./об.% до приблизительно 5 масс./об.%) (Таблица 2), тогда как только Полоксамер 188 приводил в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Тем не менее, от приблизительно 0,625 до приблизительно 5 мг лактозы (от приблизительно 0,0625 масс./об.% до приблизительно 0,5 масс./об.%) в комбинации с Полоксамером 188 в количестве от приблизительно 0,3125 мг до приблизительно 2,5 мг (от приблизительно 0,03125 масс./об.% до приблизительно 0,25 масс./об.%) увеличивали исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 73% до приблизительно 107 (Таблица 3) (каждый из этих эксципиентов в этих количествах по одному приводил в результате к отсутствию восстановления, смотри Таблицу 2). Дополнительно, все такие комбинации приводили в результате к длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента при хранении по меньшей мере при температурах ниже температуры замерзания по меньшей мере один год (Таблица 3).

Кроме того, добавление Полоксамера 188 в количествах, в которых это поверхностно-активное вещество само по себе не эффективно для обеспечения восстановления клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, по-видимому, усиливало исходную восстановленную силу в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих количество лактозы, достаточное для обеспечения исходной восстановленной силы в качестве единственного эксципиента. Например, от приблизительно 20 мг до приблизительно 55 мг лактозы (от приблизительно 2 масс./об.% до приблизительно 5,5 масс./об.%) в комбинации с Полоксамером 188 в количестве от приблизительно 5,5 мг до приблизительно 20 мг (от приблизительно 0,55 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) увеличивали исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 63% до приблизительно 108% (Таблица 3). Эта восстановленная сила значительно выше, чем восстановление в случае, когда лактозу использовали в качестве единственного эксципиента (смотри Таблицу 2, только 10 мг лактозы, 1 масс./об.% при приблизительно 15%; только 20 мг лактозы, 2 масс./об.% при приблизительно 41%; только 50 мг лактозы, 5 масс./об.% при приблизительно 35%).

В зависимости от добавленных количеств добавление различных буферов к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим лактозу и Полоксамер 188, изменяло исходную восстановленную силу или длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 3). Например, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 20 мг лактозы и 10 мг Полоксамера 188, приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 63% (Таблица 2). Тем не менее, добавление к этой композиции забуференного раствора с рН от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, приводило в результате к увеличению исходной восстановленной силы от приблизительно 81% до приблизительно 115% (Таблица 3). Аналогично, добавление буфера к этим композициям приводило в результате к усиленной длительной стабильности при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания по меньшей мере в течение одного года. Аналогично, добавление хлорида натрия к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим лактозу и Полоксамер 188, хотя и не оказывало значительного действия на исходную восстановленную силу, значительно увеличивало длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, особенно при хранении при температуре окружающей среды (Таблица 3).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие два небелковых полимера, приводили в результате к усиленной восстановленной силе и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, добавление Декстрана 3К в количествах, в которых этот небелковый полимер сам по себе не эффективен для того, чтобы обеспечить исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, по-видимому, увеличивало исходную восстановленную силу в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих количество PEG 3350, достаточное для обеспечения исходной восстановленной силы в виде единичного эксципиента. Таким образом, композиции, содержащие Декстран 3К и PEG 3350, демонстрировали усиленную исходную восстановленную силу в воде (сравните 0% исходную восстановленную силу только для PEG 3350 (Таблица 2) с 47% исходной восстановленной силой для Декстрана 3К и PEG 3350 вместе (Таблица 4)); в буферах на основе цитрата натрия (сравните 76% исходную восстановленную силу только для PEG 3350 в натрий-цитратном буфере (рН 5,5) (Таблица 2) с 92% исходной восстановленной силой для Декстрана 3К и PEG 3350 вместе в натрий-цитратном буфере (рН 5,5) (Таблица 4); и 57% исходную восстановленную силу только для PEG 3350 в натрий-цитратном буфере (рН 6,5) (Таблица 2) с 82% исходной восстановленной силой для Декстрана 3К и PEG 3350 вместе в натрий-цитратном буфере (рН 6,5) (Таблица 4)); в буферах на основе фосфата калия (сравните 80% исходную восстановленную силу только для PEG 3350 в калий-фосфатном буфере (рН 5,5) (Таблица 2) с 101% исходной восстановленной силой для Декстрана 3К и PEG 3350 вместе в калий-фосфатном буфере (рН 5,5) (Таблица 4); и 0% исходную восстановленную силу только для PEG 3350 в калий-фосфатном буфере (рН 6,5) (Таблица 2) с 102% исходной восстановленной силой для Декстрана 3К и PEG 3350 вместе в калий-фосфатном буфере (рН 5,5) (Таблица 4)); и гистидиновых буферах (сравните 72% исходную восстановленную силу только для PEG 3350 в калий-фосфатном буфере (рН 5,5) (Таблица 2) с 82% исходной восстановленной силой для Декстрана 3К и PEG 3350 вместе в гистидиновом буфере (рН 5,5) (Таблица 4)).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие PVP 17 и PEG 3350, увеличивали диапазон количества эксципиента, эффективного для достижения исходной восстановленной силы и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, когда PVP 17 использовали в качестве единственного эксципиента в диапазонах от приблизительно 30 мг до приблизительно 250 мг (от приблизительно 3 масс./об.% до приблизительно 25 масс./об.%) не обнаруживали восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, тогда как только PEG 3350 приводил в результате к исходной восстановленной силе в количествах больше приблизительно 60 мг (приблизительно 6 масс./об.%) (Таблица 2). Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 30 мг до приблизительно 40 мг PVP 17 (от приблизительно 3 масс./об.% до приблизительно 4 масс./об.%) в комбинации с PEG 3350 в количестве от приблизительно 20 мг до приблизительно 30 мг (от приблизительно 2 масс./об.% до приблизительно 3 масс./об.%), приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 80% (Таблица 4) (каждый из этих эксципиентов по одному приводил в результате к отсутствию обнаруживаемой исходной восстановленной силы). Аналогично, когда PEG 3350 использовали в качестве единственного эксципиента в диапазонах больше приблизительно 60 мг (приблизительно 6 масс./об.%), не обнаруживали восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, тогда как PVP 17 в количестве от приблизительно 5 мгдо приблизительно 20 мг (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) приводил в результате к исходной восстановленной силе (Таблица 2). Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 40 мг до приблизительно 55 мг (от приблизительно 4 масс./об.% до приблизительно 5,5 масс./об.%) PEG 3350 в комбинации с PVP 17 в количестве от приблизительно 20 мг (приблизительно 2 масс./об.%), приводили в результате к приблизительно 68% исходной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (20 мг (приблизительно 2 масс./об.%) только PVP 17 приводили в результате к 43% исходной восстановленной силе) (Таблица 4). Это усиление исходного восстановления также обнаружено в том случае, когда различные забуференные растворы добавляли к композициям (Таблица 4).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие небелковый полимер и поверхностно-активное вещество, приводили в результате к эффективному увеличению восстановленной силы и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, Декстран 3К и Полоксамер 188 по одному приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Неожиданно обнаружили, что фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие как Декстран 3К, так и Полоксамер 188, приводили в результате к исходной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 78% до приблизительно 98% (Таблица 4). Кроме того, это синергическое действие также обнаружено для фармацевтических композиций на основе клостридиального токсина, содержащих Декстран 3К и Полоксамер 188 в забуференных растворах (Таблица 4). Как Декстран 3K, так и Полоксамер 188 по одному приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в композиции, содержащей натрий-цитратный буфер или калий-фосфатный буфер (рН 6,5) (Таблица 2). Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие Декстран 3К и Полоксамер 188, приводили в результате к диапазону от приблизительно 82% до приблизительно 100% исходной восстановленной силы при добавлении натрий-цитратного буфера (рН 5,5); от приблизительно 85% до приблизительно 99% исходной восстановленной силы при добавлении натрий-цитратного буфера (рН 6,5); от приблизительно 82% до приблизительно 103% исходной восстановленной силы при добавлении калий-фосфатного буфера (рН 6,5); от приблизительно 103% до приблизительно 125% исходной восстановленной силы при добавлении гистидинового буфера (рН 5,5); и от приблизительно 115% до приблизительно 134% исходной восстановленной силы при добавлении гистидинового буфера (рН 6,5). Дополнительно такие забуференные фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина приводили в результате к увеличенной длительной стабильности в течение по меньшей мере одного года. Аналогично, усиленное восстановление обнаружено в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих Декстран 3K и Полоксамер 188 в калий-фосфатном буфере (рН 5,5) (сравните 66% исходную восстановленную силу только для Декстрана 3K (Таблица 2); 39% исходную восстановленную силу только для Полоксамера 188 (Таблица 2); и от приблизительно 90% до приблизительно 120% исходной восстановленной силы для Декстрана 3K и Полоксамера 188 вместе (Таблица 4). Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие Декстран 3К и Полоксамер 188 в калий-фосфатном буфере (рН 5,5), также демонстрировали увеличенную длительную стабильность при хранении при температуре окружающей среды или ниже температуры замерзания.

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Декстран 3K 55 PEG 3350 5,5 10:1 Вода (рН 7,1) 0 0 0 0 0 Декстран 3K 40 PEG 3350 20 2:1 Вода (рН 6,3) 82 0 0 0 0 Декстран 3K 30 PEG 3350 30 1:1 Вода (рН 6,4) 0 0 0 0 0 Декстран 3K 20 PEG 3350 40 1:2 Вода (рН 6,7) 47 0 0 0 0 Декстран 3K 5,5 PEG 3350 55 1:10 Вода (рН 6,9) 47 0 0 0 0 Декстран 3K 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ SС (рН 5,5) 82 0 0 92 94 Декстран 3K 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ SС (рН 5,5) 86 0 0 92 92 Декстран 3K 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ SС (рН 5,5) 92 0 0 88 90 Декстран 3K 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ SС (рН 5,5) 82 0 0 82 81 Декстран 3K 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ SС (рН 5,5) 92 0 0 82 82 Декстран 3K 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ SС (рН 6,5) 104 0 0 81 80 Декстран 3K 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ SС (рН 6,5) 104 0 0 92 92 Декстран 3K 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ SС (рН 6,5) 82 0 0 82 102 Декстран 3K 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ SС (рН 6,5) 82 0 0 57 78 Декстран 3K 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ SС (рН 6,5) 82 0 0 71 60

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет небелковый полимер Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Декстран 3K 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ РР (рН 5,5) 102 53 0 92 80 Декстран 3K 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ РР (рН 5,5) 59 0 0 92 102 Декстран 3K 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ РР (рН 5,5) 82 0 0 96 104 Декстран 3K 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ РР (рН 5,5) 104 0 0 96 92 Декстран 3K 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ РР (рН 5,5) 101 0 0 92 80 Декстран 3K 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ РР (рН 6,5) 81 0 0 106 104 Декстран 3K 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ РР (рН 6,5) 102 0 0 92 82 Декстран 3K 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ РР (рН 6,5) 82 0 0 82 88 Декстран 3K 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ РР (рН 6,5) 104 0 0 88 88 Декстран 3K 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ РР (рН6,5) 102 0 0 85 82 Декстран 3K 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 104 46 0 74 92 Декстран 3K 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 104 0 0 92 82 Декстран 3K 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 80 0 0 75 78 Декстран 3K 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ НВ (рН 5,5) 96 0 0 65 94 Декстран 3K 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ НВ (рН 5,5) 82 46 0 94 92 Декстран 3K 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 68 0 0 72 78

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Декстран 3K 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ НВ (рН6,5) 87 0 0 90 68 Декстран 3K 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ НВ (рН6,5) 87 0 0 90 68 Декстран 3K 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ НВ (рН6,5) 84 0 0 82 60 Декстран 3K 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ НВ (рН6,5) 70 0 0 78 78 Декстран 3K 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ НВ (рН6,5) 66 0 0 61 54 Декстран 3K 60 Полоксамер 188 3 20:1 Вода (рН 5,6) 98 57 57 120 128 Декстран 3K 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 Вода (рН 5,9) 78 0 0 114 128 Декстран 3K 40 Полоксамер 188 20 2:1 Вода (рН 6,5) 98 0 0 128 69 Декстран 3K 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ SС (рН5,5) 100 0 0 103 105 Декстран 3K 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ SС(рН5,5) 82 0 0 120 115 Декстран 3K 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мM SC (рН 5,5) 85 0 0 130 130 Декстран 3K 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ SС (рН 6,5) 99 0 0 78 125 Декстран 3K 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ SС (рН6,5) 85 0 0 128 130 Декстран 3K 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ SС (рН6,5) 93 0 0 107 128 Декстран 3K 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ РР (рН 5,5) 90 57 57 67 130 Декстран 3K 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ РР (рН5,5) 95 55 55 128 130

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Декстран 3K 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ РР (рН 5,5) 120 0 0 115 115 Декстран 3K 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ РР (рН 6,5) 86 0 0 89 133 Декстран 3K 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ РР (рН 6,5) 98 0 0 120 103 Декстран 3K 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ РР (рН 6,5) 82 0 0 70 113 Декстран 3K 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 103 0 0 104 110 Декстран 3K 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 122 74 0 128 103 Декстран 3K 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 125 59 0 103 122 Декстран 3K 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 134 0 0 127 103 Декстран 3K 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 115 0 0 128 110 Декстран 3K 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 115 0 0 128 108 Декстран 40К 60 Полоксамер 188 3 20:1 Вода (рН 5,8) 87 0 0 76 78 Декстран 40К 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 Вода (рН 6,0) 85 0 0 78 77 Декстран 40К 40 Полоксамер 188 20 2:1 Вода (рН 6,5) 128 0 0 75 90 Декстран 40К 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ SС (рН 5,5) 102 0 0 100 74 Декстран 40К 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ SС (рН 5,5) 115 0 0 83 115 Декстран 3K 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ РР (рН 5,5) 120 0 0 115 115

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев PVP 17 55 PEG 3350 5,5 10:1 Вода (рН 6,5) 0 0 0 0 0 PVP 17 40 PEG 3350 20 2:1 Вода (рН 4,6) 80 0 0 70 70 PVP 17 30 PEG 3350 30 1:1 Вода (рН 5,0) 80 0 0 62 62 PVP 17 20 PEG 3350 40 1:2 Вода (рН 5,4) 68 0 0 66 66 PVP 17 5,5 PEG 3350 55 1:10 Вода (рН 4,1) 47 0 0 54 54 PVP 17 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ SC (рН 5,5) 92 0 0 78 78 PVP 17 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ SС (рН 5,5) 76 0 0 69 69 PVP 17 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ SС (рН 5,5) 80 0 0 68 68 PVP 17 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ SС (рН 5,5) 92 0 0 78 78 PVP 17 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ SC (рН 5,5) 83 0 0 64 64 PVP 17 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ SС (рН 6,5) - - - - - PVP 17 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ SС (рН 6,5) - - - - - PVP 17 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ SС (рН 6,5) - - - - - PVP 17 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ SС (рН 6,5) - - - - - PVP 17 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ SС (рН 6,5) - - - - - PVP 17 55 PEG 3350 5,5 10:1 Вода (рН 6,5) 0 0 0 0 0

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев PVP 17 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ РР (рН 5,5) - - - - - PVP 17 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ РР (рН 5,5) - - - - - PVP 17 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ РР (рН 5,5) - - - - - PVP 17 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ РР (рН5,5) - - - - - PVP 17 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ РР (рН 5,5) - - - - - PVP 17 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ РР (рН 6,5) - - - - - PVP 17 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ РР (рН 6,5) - - - - - PVP 17 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ РР (рН 6,5) - - - - - PVP 17 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ РР (рН 6,5) - - - - - PVP 17 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ РР (рН 6,5) - - - - - PVP 17 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 92 42 42 54 54 PVP 17 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 92 0 0 98 98 PVP 17 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 109 0 0 112 112 PVP 17 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ НВ (рН 5,5) 84 0 0 61 61 PVP 17 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ НВ (рН 5,5) 92 0 0 78 78 PVP 17 55 PEG 3350 5,5 10:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 86 0 0 78 78

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев PVP 17 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 92 0 0 102 102 PVP 17 30 PEG 3350 30 1:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 78 0 0 74 74 PVP 17 20 PEG 3350 40 1:2 10 мМ НВ (рН 6,5) 104 46 46 92 92 PVP 17 5,5 PEG 3350 55 1:10 10 мМ НВ (рН 6,5) 102 61 61 80 80 PVP 17 10 Полоксамер 188 0,25 40:1 Вода (рН 4,3) 64 0 0 82 78 PVP 17 5 Полоксамер 188 0,125 40:1 Вода (рН 4,2) 80 0 0 76 61 PVP 17 60 Полоксамер 188 3 20:1 Вода (рН 4,0) 68 0 0 72 72 PVP 17 30 Полоксамер 188 1,5 20:1 Вода (рН 4,0) 77 0 0 68 80 PVP 17 10 Полоксамер 188 0,5 20:1 Вода (рН 4,3) 82 0 0 82 68 PVP 17 5 Полоксамер 188 0,25 20:1 Вода (рН 4,2) 79 0 0 82 62 PVP17 55 Полоксамер 188 5 10:1 Вода (рН 4,1) 78 0 0 53 71 PVP 17 27 Полоксамер 188 2,7 10:1 Вода (рН 4,1) 82 0 0 53 81 PVP 17 48 Полоксамер 188 12 4:1 Вода (рН 4,1) 73 0 0 82 65 PVP 17 24 Полоксамер 188 6 4:1 Вода (рН 4,1) 78 0 0 53 65 PVP 17 10 Полоксамер 188 2,5 4:1 Вода (рН 4,3) 78 0 0 82 82 PVP 17 40 PEG 3350 20 2:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 92 0 0 102 102

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев PVP 17 5 Полоксамер 188 1,25 4:1 Вода (рН 4,3) 80 0 0 68 68 PVP 17 40 Полоксамер 188 20 2:1 Вода (рН 4,3) 74 0 0 78 72 PVP 17 20 Полоксамер 188 10 2:1 Вода (рН 4,4) 71 0 0 101 97 PVP 17 10 Полоксамер 188 5 2:1 Вода (рН 4,4) 79 0 0 83 74 PVP 17 5 Полоксамер 188 2,5 2:1 Вода (рН 4,4) 63 0 0 82 70 PVP 17 20 Полоксамер 188 40 1:2 Вода (рН 5,7) 69 0 0 61 67 PVP 17 10 Полоксамер 188 20 1:2 Вода (рН 5,2) 77 0 0 91 64 PVP 17 5 Полоксамер 188 10 1:2 Вода (рН 5,4) 82 0 0 117 68 PVP 17 2,5 Полоксамер 188 5 1:2 Вода (рН 5,3) 80 0 0 70 66 PVP 17 1,25 Полоксамер 188 2,5 1:2 Вода (рН 5,3) 70 - - 53 47 PVP 17 0,625 Полоксамер 188 1,25 1:2 Вода (рН 5,4) 73 - - 55 78 PVP 17 0,3125 Полоксамер 188 0,625 1:2 Вода (рН 5,2) 64 - - 62 78 PVP 17 0,5 Полоксамер 188 10 1:20 Вода (рН 6,4) 79 0 0 58 59 PVP 17 0,25 Полоксамер 188 5 1:20 Вода (рН 6,4) 82 0 0 62 0 PVP 17 55 Полоксамер 188 5,5 2:1 10 мМ SС (рН 5,5) 86 39 0 78 82 PVP 17 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ SС (рН 5,5) 86 41 0 88 94

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев PVP 17 20 Полоксамер 188 10 2:1 10 мМ SС (рН 5,5) 65 65 0 101 105 PVP 17 20 Полоксамер 188 10 2:1 10 мМ SС (рН 6,5) 87 0 0 97 102 PVP 17 20 Полоксамер 188 10 2:1 10 мМ РР (рН5,5) 71 0 0 79 79 PVP 17 20 Полоксамер 188 10 2:1 10 мМ РР (рН 6,5) 65 0 0 63 65 PVP 17 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мM NaCl (pH 4,2) 104 0 0 96 104 PVP 17 20 Полоксамер 188 10 2:1 10 мM NaCl (pH 4,4) 91 0 0 93 115 PVP 17 10 Полоксамер 188 20 1:2 Вода (рН 5,2) 77 0 0 91 64 PVP 17 20 Полоксамер 188 40 1:2 10 мМ SС (рН 5,5) 92 39 0 83 96 PVP 17 10 Полоксамер 188 20 1:2 10 мМ SС (рН5,5) 81 71 49 97 85 PVP 17 2,5 Полоксамер 188 5 1:2 10 мМ SС (рН 5,5) 104 - - 76 73 PVP 17 1,25 Полоксамер 188 2,5 1:2 10 мМ SС (рН 5,5) 72 - - 92 90 PVP 17 0,625 Полоксамер 188 1,25 1:2 10 мМ SС (рН 5,5) 102 - - 102 88 PVP 17 0,3125 Полоксамер 188 0,625 1:2 10 мМ SС (рН 5,5) 84 - - 78 90 PVP 17 10 Полоксамер 188 20 1:2 10 мМ SС (рН 6,5) 88 0 0 79 91 PVP 17 10 Полоксамер 188 20 1:2 10 мМ РР (рН 5,5) 68 0 0 73 89 PVP 17 10 Полоксамер 188 20 1:2 10 мМ РР (рН 6,5) 88 0 0 88 88

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев PVP 17 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 79 0 0 80 80 PVP 17 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 92 0 0 0 0 PVP 17 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 72 0 0 92 92 PVP 17 20 Полоксамер 188 40 1:2 10 мМ НВ (рН 5,5) 106 42 42 102 102 PVP 17 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 104 46 46 100 100 PVP 17 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 112 0 0 91 91 PVP 17 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ НВ (рН 6,5) 91 0 0 102 102 PVP 17 20 Полоксамер 188 40 1:2 10 мМ НВ (рН 6,5) 100 0 0 0 0 PVP 17 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ NаСl (рН 3,0) 58 0 0 54 54 PVP 17 30 Полоксамер 188 1,5 10:1 10 мM NaCl (pH 3,0) 78 0 0 80 92 PVP 17 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мM NaCl (pH 4,0) 68 0 0 92 92 PVP 17 27 Полоксамер 188 2,7 10:1 10 мM NaCl (pH 4,0) 76 0 0 88 83 PVP 17 48 Полоксамер 188 12 4:1 10 мM NaCl (pH 4,1) 92 - - 82 82 PVP 17 24 Полоксамер 188 6 4:1 10 мM NaCl (pH 4,1) 102 0 0 78 79 PVP 17 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мM NaCl (pH 4,3) 102 - - 55 55 PVP 17 20 Полоксамер 188 10 2:1 10 мM NaCl (pH 4,3) 78 0 0 88 82

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев PVP 17 10 Полоксамер 188 20 1:2 10 мM NaCl (pH 4,7) 115 0 0 80 81 PVP 17 2,5 Полоксамер 188 5 1:2 10 мM NaCl (pH 5,2) 94 - - 101 79 PVP 17 1,25 Полоксамер 188 2,5 1:2 10 мM NaCl (pH 5,2) 88 - - 100 102 PVP 17 0,625 Полоксамер 188 1,25 1:2 10 мM NaCl (pH 5,2) 96 - - 98 77 PVP 17 0,3125 Полоксамер 188 0,625 1:2 10 мM NaCl (pH 5,2) 85 - - 76 80 PVP 17 10 Полисорбат 80 0,5 20:1 Вода (рН 4,2) 82 - - 81 81 PVP 17 5 Полисорбат 80 0,25 20:1 Вода (рН 4,2) 84 - - 77 77 PVP 17 10 Полисорбат 80 2,5 4:1 Вода (рН 4,4) 90 - - 82 82 PVP 17 5 Полисорбат 80 1,25 4:1 Вода (рН 4,4) 90 - - 104 104 PEG 3350 50 Маннит 5 10:1 Вода 0 0 0 0 0 PEG 3350 50 Маннит 50 1:1 Вода 26 - - - - PEG 3350 5 Маннит 50 1:10 Вода 30 - - - - PEG 3350 60 Полоксамер 188 3 20:1 Вода (рН 7,0) 0 0 0 0 0 PEG 3350 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 Вода (рН 7,0) 0 0 0 0 0

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев PEG 3350 50 Полоксамер 188 5 10:1 Вода (рН 7,0) 0 0 0 0 0 PEG 3350 40 Полоксамер 188 20 2:1 Вода (рН 7,0) 0 0 0 0 0 PEG 3350 50 Полоксамер 188 50 1:1 Вода 0 0 0 0 0 PEG 3350 5 Полоксамер 188 50 1:10 Вода 0 0 0 0 0 PEG 3350 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ SC (рН 5,5) 101 66 46 94 95 PEG 3350 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ SС (рН 5,5) 90 59 0 87 94 PEG 3350 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ SС (рН 5,5) 101 59 0 98 99 PEG 3350 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ SС (рН 6,5) 70 0 0 58 70 PEG 3350 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ SС (рН 6,5) 66 0 0 58 66 PEG 3350 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ SС (рН 6,5) 76 0 0 69 66 PEG 3350 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ РР (рН 5,5) 92 0 0 87 77 PEG 3350 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ РР (рН 5,5) 98 0 0 86 101 PEG 3350 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ РР (рН 5,5) 83 0 0 96 78 PEG 3350 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ РР (рН 6,5) 0 0 0 0 0 PEG 3350 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ РР (рН 6,5) 0 0 0 0 0 PEG 3350 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ РР (рН 6,5) 0 0 0 0 0

Таблица 3 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет собой сахар Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев PEG 3350 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ НВ(рН 5,5) 75 78 76 91 101 PEG 3350 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ НВ (рН 5,5) 98 98 63 98 73 PEG 3350 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ НВ(рН 5,5) 72 82 65 83 89 PEG 3350 60 Полоксамер 188 3 20:1 10 мМ НВ(рН 6,5) 85 109 101 112 92 PEG 3350 55 Полоксамер 188 5,5 10:1 10 мМ НВ(рН 6,5) 81 101 82 136 87 PEG 3350 40 Полоксамер 188 20 2:1 10 мМ НВ(рН 6,5) 65 106 85 120 109 PEG 3350 50 Глицин 5 10:1 Вода 0 0 0 0 0 PEG 3350 50 Глицин 50 1:1 Вода 0 0 0 0 0 PEG 3350 5 Глицин 50 1:10 Вода 0 0 0 0 0 а - Количество комплекса ботулинического нейротоксина серотипа А, добавленного в композицию, составляло 150 единиц. Общий объем композиции составлял 1,0 мл.
b - Для сахарозы, лактозы, трегалозы, раффинозы, маннита, инулина, Декстрана 3K, Декстрана 40K, PEG 3550, PVP 17, полоксамера 188 и глицина количество единиц добавляемого эксципиента выражается в мг. Для полисорбата 20 и полисорбата 80 количество единиц добавляемого эксципиента выражается в мл.
с - Сокращенные обозначения буферов являются следующими: SC, натрий-цитратный буфер; РР, калий-фосфатный буфер; НВ, гистидиновый буфер; НРВ, гистидин-фосфатный буфер.
d - Восстановление выражается в виде процента и рассчитывается путем деления силы активного ингредиента, определенной после разведения, на силу активного ингредиента, определенную перед добавлением к композиции. 3 месяца относится к длительности промежутка времени, в течение которого композицию хранили при указанной температуре. 12 месяцев относится к длительности промежутка времени, в течение которого композицию хранили при указанной температуре.
е - Температура окружающей среды составляет от приблизительно 18°С до приблизительно 22°С.
f - Температура ниже температуры замерзания составляет от приблизительно -5°С до приблизительно -20°С.

Аналогичные степени улучшения исходного восстановления и длительной стабильности обнаружены в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих Декстран 40К и Полоксамер 188. Например, как Декстран 40K, так и Полоксамер 188 по одному приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Неожиданно обнаружили, что фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие как Декстран 40К, так и Полоксамер 188, приводили в результате к исходной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 85% до приблизительно 102% (Таблица 4). Это синергическое действие также обнаружено в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих Декстран 40К и Полоксамер 188 в забуференных растворах. Как Декстран 40К, так и Полоксамер 188 по одному приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в композиции, содержащей калий-фосфатный буфер (рН 6,5) (Таблица 2). Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие Декстран 40K и Полоксамер 188, приводили в результате к исходной восстановленной силе от приблизительно 102% до приблизительно 115% при добавлении калий-фосфатного буфера (рН 6,5) (Таблица 4). Кроме того, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие Декстран 40К и Полоксамер 188 в различных других забуференных растворах, приводило в результате к усилению восстановленной силы и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Таким образом, композиции, содержащие как Декстран 40К, так и Полоксамер 188, демонстрировали усиленную исходную восстановленную силу в натрий-цитратном буфере (сравните 81% исходную восстановленную силу только полоксамера 188 в натрий-цитратном буфере (рН 5,5) (Таблица 2) с 128% исходной восстановленной силой Декстрана 40К и Полоксамера 188 вместе в натрий-цитратном буфере (рН 5,5) (Таблица 4); и 56% исходную восстановленную силу только Полоксамера 188 в натрий-цитратном буфере (рН 5,5) (Таблица 2) со 100% исходной восстановленной силой Декстрана 40К и Полоксамера 188 вместе в натрий-цитратном буфере (рН 6,5) (Таблица 4)); и калий-фосфатном буфере (рН 5,5) (сравните 39% исходную восстановленную силу только Полоксамера 188 в калий-фосфатном буфере (рН 5,5) (Таблица 2) с 103% исходной восстановленной силой Декстрана 40K и Полоксамера 188 вместе в калий-фосфатном буфере (рН 5,5) (Таблица 4)).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие PVP 17 и поверхностно-активное вещество, приводили в результате к эффективному увеличению восстановленной силы и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента по всему диапазону количества эксципиента. Например, когда PVP 17 использовали в качестве единственного эксципиента, он был эффективен для увеличения восстановленной силы в количествах, находящихся в диапазоне от приблизительно 5 мг до приблизительно 20 мг (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%). Как обсуждалось выше, Полоксамер 188 сам по себе приводил в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Тем не менее, от приблизительно 0,3125 мг до приблизительно 2,5 мг PVP 17 (от приблизительно 0,03 масс./об.% до приблизительно 0,25 масс./об.%) в комбинации с Полоксамером 188 в количестве от приблизительно 0,625 мг до приблизительно 5 мг (от приблизительно 0,06 масс./об.% до приблизительно 0,5 масс./об.%) увеличивали восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 64% до приблизительно 80% (каждый из этих эксципиентов в этих концентрациях сам по себе приводил в результате к отсутствию обнаруживаемого восстановления). Аналогично, от приблизительно 30 мг до приблизительно 60 мг PVP 17 (от приблизительно 3 масс./об.% до приблизительно 6 масс./об.%) в комбинации с Полоксамером 188 в количестве от приблизительно 1,5 мг до приблизительно 5 мг (от приблизительно 0,15 масс./об.% до приблизительно 0,5 масс./об.%) увеличивали восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 68% до приблизительно 77% (каждый из этих эксципиентов в этих концентрациях сам по себе приводил в результате к отсутствию обнаруживаемого восстановления). Добавление различных буферов или хлорида натрия к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим PVP 17 и Полоксамер 188, по-видимому, не оказывало значительного действия в отношении исходной восстановленной силы или длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 4).

Аналогичное увеличение исходной восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента обнаруживали с PVP 17 в комбинации с Полисорбатом 80 (Таблица 4). Композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 5 мг до приблизительно 10 мг PVP 17 (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 1 масс./об.%) в виде единственного эксципиента, приводили в результате к восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 48% до приблизительно 52% (Таблица 2). Тем не менее, композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 5 мг до приблизительно 10 мг PVP 17 (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 1 масс./об.%) и от приблизительно 0,25 мг до приблизительно 2,5 мг полисорбата 80 (от приблизительно 0,025 масс./об.% до приблизительно 0,25 масс./об.%), приводили в результате к исходной восстановленной силе от приблизительно 82% до приблизительно 90% (Таблица 4). Увеличение длительной стабильности также обнаружено в композициях на основе клостридиального токсина, содержащих, например, сахарозу и полисорбат 80 (смотри Таблицу 4).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие PEG 3350 и поверхностно-активное вещество, приводили в результате к усилению исходной восстановленной силы и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента при приготовлении с некоторыми забуференными растворами. Например, как PEG 3350 сам по себе, так и Полоксамер 188 сам по себе приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Аналогично, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие PEG 3350 и Полоксамер 188 в воде, приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 4). Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие PEG 3350 и Полоксамер 188 в забуференных композициях, неожиданно приводили в результате к эффективной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента и во многих случаях приводили в результате к усилению исходного восстановления и длительной стабильности (Таблица 4). Например, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 60 мг PEG 3350 (приблизительно 6 масс./об.%) в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 5,5 приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 76%, тогда как композиции, содержащие приблизительно 20 мг PEG 3350 (приблизительно 2 масс./об.%) в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 5,5 приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 81%. Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 40 мг до приблизительно 60 мг PEG 3350 (от приблизительно 4 масс./об.% до приблизительно 6 масс./об.%) и от приблизительно 3 мг до приблизительно 20 мг Полоксамера 188 (от приблизительно 0,3 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 5,5, приводили в результате к исходным восстановленным силам от приблизительно 90% до приблизительно 101%. Длительная стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента также усиливалась в этих композициях (Таблица 4).

Аналогично, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 60 мг PEG 3350 (приблизительно 6 масс./об.%) в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 6,5, приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 57%, где композиции, содержащие приблизительно 20 мг PEG 3350 (приблизительно 2 масс./об.%) в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 6,5, приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 80%. Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 40 мг до приблизительно 60 мг PEG 3350 (от приблизительно 4 масс./об.% до приблизительно 6 масс./об.%) и от приблизительно 3 мг до приблизительно 20 мг Полоксамера 188 (от приблизительно 0,3 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 6,5, приводили в результате к исходным восстановленным силам от приблизительно 83% до приблизительно 98%. Длительная стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента также усиливалась в этих композициях (Таблица 4).

Таблица 5 Композиции с использованием комплекса ботулинического нейротоксина^а - два эксципиента, один из которых представляет поверхностно-активное вещество Эксципиент 1 Эксципиент 2 Доля Раствор^c Восстановленная сила^d (%) Тип Количество^b Тип Количество^b Исходная Температура окружающей среды^e Ниже температуры замерзания^f 3 месяца 12 месяцев 3 месяца 12 месяцев Полоксамер188 50 Маннит 5 10:1 Вода 30 - - - - Полоксамер188 50 Маннит 50 1:1 Вода 33 - - - - Полоксамер188 5 Маннит 50 1:10 Вода 35 - - - - Полоксамер188 50 Глицин 5 1:10 Вода 33 - - - - Полоксамер188 50 Глицин 50 1:1 Вода 26 - - - - Полоксамер188 5 Глицин 50 10:1 Вода 0 0 0 0 0 а - Количество комплекса ботулинического нейротоксина серотипа А, добавленного в композицию, составляло 150 единиц. Общий объем композиции составлял 1,0 мл.
b - Для сахарозы, лактозы, трегалозы, раффинозы, маннита, инулина, Декстрана 3K, Декстрана 40K, PEG 3550, PVP 17, полоксамера 188 и глицина количество единиц добавляемого эксципиента выражается в мг. Для полисорбата 20 и полисорбата 80 количество единиц добавляемого эксципиента выражается в мл.
с - Сокращенные обозначения буферов являются следующими: SC, натрий-цитратный буфер; РР, калий-фосфатный буфер; НВ, гистидиновый буфер; НРВ, гистидин-фосфатный буфер.
d - Восстановление выражается в виде процента и рассчитывается путем деления силы активного ингредиента, определенной после разведения, на силу активного ингредиента, определенную перед добавлением к композиции. 3 месяца относится к длительности промежутка времени, в течение которого композицию хранили при указанной температуре. 12 месяцев относится к длительности промежутка времени, в течение которого композицию хранили при указанной температуре.
е - Температура окружающей среды составляет от приблизительно 18°С до приблизительно 22°С.
f - Температура ниже температуры замерзания от приблизительно -5°С до приблизительно -20°С.

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие полиол и поверхностно-активное вещество, также приводили в результате к восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, как маннит сам по себе, так и Полоксамер 188 сам по себе приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Неожиданно обнаружили, что фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие маннит и Полоксамер 188, приводили в результате к восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 5).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие аминокислоту и поверхностно-активное вещество, также приводили в результате к восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, как глицин сам по себе, так и Полоксамер 188 сам по себе приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 2). Неожиданно обнаружили, что фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие глицин и Полоксамер 188, приводили в результате к восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 30% до приблизительно 35% (Таблица 5).

Пример 3

Небелковые стабилизированные композиции - три эксципиента

Эксперименты осуществляли для определения действия композиций, содержащих три различных небелковых эксципиента, в отношении восстановления клостридиального токсина в качестве активного ингредиента после разведения. Тестируемые небелковые эксципиенты добавляли по отдельности или в комбинации с перечисленными буферами или солями (Таблица 6). Все композиции смешивали, лиофилизировали, растворяли и силу оценивали тем же самым образом и с тем же самым клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, используемого в каждой композиции, за исключением того, что каждую композицию готовили с различными небелковыми эксципиентами или с различными количествами небелковых эксципиентов.

Тестируемые композиции смешивали, обрабатывали, хранили и растворяли, как описано в Примере 1. Восстановленную силу определяли с использованием биотеста LD₅₀ на мышах, как описано в Примере 1. Восстановление выражается в виде процента и рассчитывается путем деления силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в хранимой разведенной композиции на силу активного клостридиального токсина, определенную перед его добавлением в тестируемый раствор. Полученный результат показывает, что фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, содержащая комплекс с клостридиальным токсином, может быть стабилизирована, когда композиция содержит три небелковых эксципиента (Таблица 6).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахар, небелковый полимер и поверхностно-активное вещество, приводили в результате к эффективной восстановленной силе и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 10 мг сахарозы (1 масс./об.%) и приблизительно 10 мг PVP 17 (1 масс./об.%), демонстрировали исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента приблизительно 77% (Таблица 4). Аналогично, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 10 мг сахарозы (приблизительно 1 масс./об.%) и приблизительно 10 мг Полоксамера 188 (приблизительно 1 масс./об.%), демонстрировали исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента приблизительно 59% (Таблица 4). Аналогично, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 10 мг до приблизительно 20 мг Kollodon 17 (от приблизительно 1 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) и от приблизительно 10 мг до приблизительно 20 мг Полоксамера 188 (от приблизительно 1 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%), демонстрировали исходную восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента от приблизительно 71% до приблизительно 82% (Таблица 4). Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 10 мг сахарозы (приблизительно 1 масс./об.%), приблизительно 10 мг PVP 17 (приблизительно 1 масс./об.%) и приблизительно 10 мг Полоксамера 188 (приблизительно 1 масс./об.%), демонстрировали восстановленную силу клостридиального токсина в качестве активного ингредиента приблизительно 102% (Таблица 6). Аналогичное увеличение исходной восстановленной силы на приблизительно 89% обнаружено в фармацевтических композициях на основе клостридиального токсина, содержащих приблизительно 15 мг сахарозы (приблизительно 1,5 масс./об.%), приблизительно 30 мг PVP 17 (приблизительно 3 масс./об.%) и приблизительно 15 мг Полоксамера 188 (приблизительно 1,5 масс./об.%) (Таблица 6). Добавление различных буферов или хлорида натрия к фармацевтическим композициям на основе клостридиального токсина, содержащим сахарозу, PVP 17 и Полоксамер 188, усиливало исходную восстановленную силу или длительную стабильность клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в зависимости от количества каждого из добавленных эксципиентов (Таблица 6).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие два различных сахара и поверхностно-активное вещество, приводили в результате к эффективной восстановленной силе и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, композиции, содержащие сахарозу, лактозу и Полоксамер 188, приводили в результате к исходной восстановленной силе от приблизительно 81% до приблизительно 114% (Таблица 6). Неожиданно фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахарозу, лактозу и Полоксамер 188, усиливали исходную восстановленную силу при добавлении натрий-цитратного буфера с рН приблизительно 6,5. Например фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 20 мг сахарозы (приблизительно 2 масс./об.%) и приблизительно 20 мг лактозы (приблизительно 2 масс./об.%) в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 6,5, приводили в результате к 41% исходной восстановленной силе (Таблица 3). Аналогично, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 20 мг сахарозы (приблизительно 2 масс./об.%) и приблизительно 10 мг Полоксамера 188 (приблизительно 1 масс./об.%) в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 6,5 приводили в результате к 90% исходной восстановленной силе (Таблица 3). Аналогично, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие приблизительно 20 мг лактозы (приблизительно 2 масс./об.%) и приблизительно 10 мг Полоксамера 188 (приблизительно 1 масс./об.%) в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 6,5, приводили в результате к 81% исходной восстановленной силе (Таблица 3). Тем не менее, композиции, содержащие все три эксципиента в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 6,5, приводили в результате к приблизительно 99% исходной восстановленной силе (Таблица 6).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахар и два различных небелковых полимера, приводили в результате к усиленной восстановленной силе и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 5 мг до приблизительно 20 мг сахарозы (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%) и от приблизительно 5 мгдо приблизительно 15 мг PVP 17 (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 1,5 масс./об.%), приводили в результате к исходной восстановленной силе от приблизительно 58% до приблизительно 77% (Таблица 3). Аналогично, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 5 мг до приблизительно 50 мг сахарозы (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 5 масс./об.%) и от приблизительно 5 мг до приблизительно 50 мг PEG 3350 (от приблизительно 0,5 масс./об.% до приблизительно 5 масс./об.%), приводили в результате к исходной восстановленной силе от приблизительно 35% до приблизительно 44% (Таблица 3). Сходным образом фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие от приблизительно 30 мг до приблизительно 40 MrPVP 17 (от приблизительно 3 масс./об.% до приблизительно 4 масс./об.%) и от приблизительно 20 мг до приблизительно 30 мг PEG 3350 (от приблизительно 2 масс./об.% до приблизительно 2 масс./об.%), приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 80% (Таблица 4). Тем не менее, композиции, содержащие все три эксципиента, приводили в результате к исходной восстановленной силе от приблизительно 82% до приблизительно 102% (Таблица 6).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие два различных небелковых полимера и поверхностно-активное вещество, приводили в результате к эффективной восстановленной силе и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие Декстран 3К, PEG 3350 и Полоксамер 188, приводили в результате к исходным восстановленным силам от приблизительно 81% до приблизительно 104% в воде, от приблизительно 88% до приблизительно 106% в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 5,5, от приблизительно 76% до приблизительно 96% в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 6,5, от приблизительно 87% до приблизительно 96% в калий-фосфатном буфере с рН приблизительно 6,5, от приблизительно 82% до приблизительно 106% в калий-фосфатном буфере с рН приблизительно 6,5, от приблизительно 70% до приблизительно 102% в гистидиновом буфере с рН приблизительно 5,5, и от приблизительно 65% до приблизительно 102% в гистидиновом буфере с рН приблизительно 6,5 (Таблица 6). Аналогично, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие PVP 17, PEG 3350 и Полоксамер 188, приводили в результате к эффективной восстановленной силе и длительной стабильности клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 6).

Пример 4

Небелковые стабилизированные композиции - клостридиальный токсин массой 150 кДа

Эксперименты осуществляли для приготовления множества композиций, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, содержащегося в композиции, представлял собой клостридиальный токсин массой 150 кДа (Таблица 7). Тестируемые небелковые эксципиенты добавляли по отдельности или в комбинации с перечисленными буферами или солями (Таблица 7). Все композиции смешивали, лиофилизировали, растворяли и силу оценивали тем же самым образом и с тем же самым клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, используемого в каждой композиции, за исключением того, что каждую композицию готовили с различными небелковыми эксципиентами или с различными количествами небелковых эксципиентов.

Тестируемые композиции смешивали, обрабатывали, хранили и растворяли, как описано в Примере 1, за исключением того, что добавляемый клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента представлял собой приблизительно 150 единиц BoNT/A массой 150 кДа. Восстановленную силу определяли с использованием биотеста LD₅₀ на мышах, описанного в Примере 1. Восстановление выражается в виде процента и рассчитывается путем деления силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в хранимой разведенной композиции на силу активного клостридиального токсина, определенную перед его добавлением в тестируемый раствор. Полученный результат показывает, что фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, содержащая клостридиальный токсин массой 150 кДа, может быть стабилизирована, когда композиция содержит два или более чем два небелковых эксципиента (Таблица 7).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахар и поверхностно-активное вещество, приводили в результате к эффективной исходной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, как сахароза сама по себе, так и Полоксамер 188 сам по себе приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 7). Неожиданно обнаружили, что фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахарозу в комбинация с Полоксамером 188, приводили в результате к восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента приблизительно 113% (Таблица 7). Эти открытия, касающиеся BoNT/A массой 150 кДа, аналогичны синергическому восстановлению, обнаруженному с комплексом токсина BoNT/A массой 900 кДа в Примерах 1-3, где фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахарозу в комбинации с Полоксамером 188, приводили в результате к 99% исходной восстановленной силе (Таблица 3).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие лактозу и/или Полоксамер 188, обеспечивали смешанные результаты, такие как результаты, обнаруженные для комплексов токсина BoNT/A массой 900 кДа в Примерах 1-3. Например, фармацевтические композиции, содержащие лактозу в виде единственного эксципиента, не приводили в результате к какой-либо обнаруженной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (150 кДа BoNT/A) (Таблица 7). Эта утрата восстановления была неожиданной, учитывая обнаружение восстановленной силы приблизительно 35% для фармацевтических композиций, содержащих лактозу в виде единственного эксципиента, когда клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента представлял собой комплекс токсина BoNT/A массой 900 кДа (Таблица 2). Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие Полоксамер 188 в виде единственного эксципиента, приводили в результате к отсутствию обнаруживаемой восстановленной силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента (Таблица 7), причем это открытие аналогично обсуждавшемуся в Примере 1. Гораздо более примечательно то, что фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие лактозу и Полоксамер 188 в качестве эксципиентов, приводили в результате к исходной восстановленной силе приблизительно 110% (Таблица 7). Таким образом, подобно комплексу токсина BoNT/A массой 900 кДа, происходит синергическое восстановление фармацевтических композиций BoNT/A массой 150 кДа, содержащих лактозу и Полоксамер 188.

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие два небелковых полимера, также приводили в результате к эффективной исходной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие Декстран 40К и/или Полоксамер 188, также обеспечивали результаты, сравнимые с результатами, обнаруженными для комплекса токсина BoNT/A массой 900 кДа в Примерах 1-3. Например, восстановление BoNT/A массой 150 кДа обнаружено в фармацевтических композициях, содержащих Декстран 40К и Полоксамер 188, хотя исходная восстановленная сила ниже для BoNT/A массой 150 кДа (сравните приблизительно 50% исходную восстановленную силу для BoNT/A массой 150 кДа в Таблице 7 с приблизительно 85% исходной восстановленной силой комплекса токсина BoNT/A массой 900 кДа в Таблице 4).

Фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие PEG 3350 и/или Полоксамер 188, обеспечивали в некоторой степени отличающиеся результаты по сравнению с результатами, обнаруженными для комплексов токсина BoNT/A массой 900 кДа в Примерах 1-3. Например, исходная восстановленная сила приблизительно 47% для BoNT/A массой 150 кДа обнаружена для фармацевтических композиций, содержащих PEG 3350 и Полоксамер 188 (Таблица 7). Это восстановление является неожиданным, учитывая то, что восстановленная сила не обнаружена для фармацевтических композиций, содержащих PEG 3350 и Полоксамер 188, когда клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента представлял собой комплекс токсина BoNT/A массой 900 кДа (Таблица 4). Тем не менее, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие PEG 3350 и/или Полоксамер 188 в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 5,5, обеспечивали результаты, сравнимые с результатами, обнаруженными для комплекса токсина BoNT/A массой 900 кДа в Примерах 1-3. Например, восстановление BoNT/A массой 150 кДа обнаружено в фармацевтических композициях, содержащих PEG 3350 и/или Полоксамер 188 в натрий-цитратном буфере с рН приблизительно 5,5, хотя исходная восстановленная сила была ниже для BoNT/A массой 150 кДа (сравните приблизительно 52% исходную восстановленную силу для BoNT/A массой 150 кДа в Таблице 7 с приблизительно 90% исходной восстановленной силой комплекса токсина BoNT/A массой 900 кДа в Таблице 4). Аналогично, восстановление BoNT/A массой 150 кДа обнаружено в фармацевтических композициях, содержащих PEG 3350 и/или Полоксамер 188 в калий-фосфатном буфере с рН приблизительно 5,5, хотя исходная восстановленная сила была ниже для BoNT/A массой 150 кДа (сравните приблизительно 53% исходную восстановленную силу для BoNT/A массой 150 кДа в Таблице 7 с приблизительно 98% исходной восстановленной силой для комплекса токсина BoNT/A массой 900 кДа в Таблице 4).

Пример 5

Небелковые стабилизированные композиции - перенацеленный клостридиальный токсин

Эксперименты осуществляли для приготовления множества композиций, где клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента, содержащийся в композиции, представлял собой перенацеленный клостридиальный токсин (Таблица 8). Тестируемые небелковые эксципиенты добавляли по отдельности или в комбинации с перечисленными буферами или солями (Таблица 8). Все композиции смешивали, лиофилизировали и растворяли и силу оценивали тем же самым образом и с тем же самым клостридиальным токсином в качестве активного ингредиента, используемым в каждой композиции, за исключением того, что каждую композицию готовили с различными небелковыми эксципиентами или с различными количествами небелковых эксципиентов.

Тестируемые композиции смешивали, обрабатывали, хранили и растворяли, как описано в Примере 1, за исключением того, что добавляемый клостридиальный токсин в качестве активного ингредиента представлял собой приблизительно 250 нг перенацеленного BoNT/A массой 100 кДа, где модификация представляла собой замену связывающего домена BoNT/A на опиоидный лиганд, смотри, например, Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells, заявка на патент США No. 11/776075 (11 июля 2007 года); Dolly, J.O. et al., Activatable Clostridial Toxins, заявка на патент США №11/829475 (27 июля 2007 года); Foster, K.A. et al., Fusion Proteins, международная заявка на патент WO 2006/059093 (8 июня 2006 года); и Foster, K.A. et al., Non-Cytotoxic Protein Conjugates, международная заявка на патент WO 2006/059105 (8 июня 2006 года), каждый из которых полностью включен путем ссылки.

Для определения восстановленной силы перенацеленного клостридиального токсина в растворенной композиции измеряли ферментативную активность при помощи анализа легкой цепи in vitro. В этом анализе твердую композицию растворяют в 1,0 мл буфера для расщепления, содержащего 2 мМ DTT (дитиотрейтол), 300 мкМ ZnCl₂ и 50 мМ HEPES (рН 7,4), и инкубировали при 37°С в течение 30 минут. После инкубации 500 мкл инкубируемой композиции переносят в новую пробирку и добавляют 5,0 мкл 200 мкМ субстрата с гашением флуоресценции при высвобождении (SNAPTIDE® 520). Эту смесь инкубируют при 30°С в течение от приблизительно 18 до приблизительно 20 часов для того, чтобы дать возможность для клостридиального токсина в качестве активного ингредиента расщеплять субстрат с гашением флуоресценции при высвобождении. Реакцию останавливают путем добавления 25 мкл 5% TFA (трифторуксусной кислоты) к расщепленной смеси. Погашенную расщепленную смесь затем анализировали при помощи способов стандартной высокоэффективной жидкостной хроматографии в обращенной фазе (RP-HPLC) для разделения и измерения количества субстрата с гашением флуоресценции при высвобождении в растворенной композиции. Для этого анализа RP-HPLC погашенную расщепленную смесь переносили во флаконы для HPLC и 25 мкл этой смеси впрыскивали в колонку (Waters SYMMETRY 300™ С18, 3,5 мкм, 4,6×150 мм), установленную для скорости потока 1,0 мл/мин и температуру колонки 35°С. Время анализа составляло 20 минут с 5-минутной задержкой впрыска. Градиент подвижной фазы представлял собой Раствор А, содержащий 0,1% TFA в воде, и Раствор В, содержащий 0,1% TFA в ацетонитриле. Программа градиента была следующей: 0-10 минут 90% А и 10% В, 10-15 минут 80% А и 20% В, и 15-20 минут 100% В. Многоволновый флуоресцентный детектор настраивали на волну возбуждения 322 нм и длину волны испускания 420 нм, и данные собирали и анализировали с использованием стандартного программного обеспечения. Расщепленные продукты идентифицировали по времени удерживания с использованием флуоресцентной детекции и количественно определяли по площади пиков. Субстрат с гашением флуоресценции при высвобождении типично элюировался при времени удерживания 5,7 минут.

Для определения восстановленной силы перенацеленного клостридиального токсина растворенную композицию также измеряли по общему количеству клостридиального токсина в качестве активного ингредиента, восстановленному с использованием иммуноферментного анализа (ELISA). Микротитровальный планшет, используемый для анализа ELISA, покрывают первичным поликлональным антителом (захватывающее антитело) против ВоМТ/А массой 150 кДа (вследствие присутствия тех же самых эпитопов для перенацеленного клостридиального токсина, как в антителах BoNT/A). После нанесения антитела на 96-луночный планшет в течение 14-72 часов при 2-8°С добавляли и инкубировали в течение 90 минут при 25°С при осторожном встряхивании. Добавляют вторичное антитело (захватывающее антитело, конъюгированное с молекулами биотина) и инкубируют в течение 60 минут при 25°С при осторожном встряхивании. После инкубации в течение одного часа и нескольких стадий встряхивания конъюгат стрептавидин-HRP (пероксидаза хрена) добавляют на планшет и инкубируют в течение еще 60 минут при 25°С при осторожном встряхивании. На окончательной стадии после нескольких стадий отмывки добавляют раствор колориметрического субстрата (ТМВ-субстрат) и инкубируют при комнатной температуре в течение 5-7 минут до проявления окрашивания. Поглощение при 450 нм измеряют при помощи УФ/видимой спектроскопии. Поглощение тестируемого образца сравнивают со стандартной кривой и измеряют концентрацию белка.

Восстановление выражают в виде процента и рассчитывают путем деления силы клостридиального токсина в качестве активного ингредиента в хранимой разведенной композиции на силу активного клостридиального токсина, определенную перед его добавлением в тестируемый раствор. Фармацевтическая композиция на основе клостридиального токсина, содержащая перенацеленный клостридиальный токсин, может быть стабилизирована, когда композиция содержит два или более чем два небелковых эксципиента, по аналогии с комплексом токсина BoNT/A массой 900 кДа и BoNT/A массой 150 кДа.

Полученные результаты демонстрируют, что фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахар и поверхностно-активное вещество, приводили в результате к эффективной исходной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахарозу или лактозу в комбинации с Полоксамером 188, приводили в результате к восстановленной силе перенацеленного клостридиального токсина, близкой к результату, обнаруженному для комплекса токсина ВоМТ/А массой 900 кДа (смотри Примеры 1-3) и BoNT/A массой 150 кДа (Пример 4). В качестве еще одного примера фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахарозу в комбинации с Полисорбатом 20, приводили в результате к высокой восстановленной силе перенацеленного клостридиального токсина (Таблица 8). В качестве еще одного примера фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие сахарозу в комбинации с Полоксамером 188, приводили в результате к высокой восстановленной силе перенацеленного клостридиального токсина (Таблица 8). В качестве еще одного примера фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие трегалозу в комбинации с Полоксамером 188, приводили в результате к высокой восстановленной силе перенацеленного клостридиального токсина (Таблица 8). В качестве еще одного примера фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие трегалозу в комбинации с PEG 3550 и Полисорбатом 20, приводили в результате к высокой восстановленной силе перенацеленного клостридиального токсина (Таблица 8).

Полученные результаты также демонстрируют, что фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие небелковый полимер и поверхностно-активное вещество, также приводили в результате к эффективной исходной восстановленной силе клостридиального токсина в качестве активного ингредиента. Например, фармацевтические композиции на основе клостридиального токсина, содержащие Декстран 40К или PEG 3550 в комбинации с Полоксамером 188, приводили в результате к восстановленной силе перенацеленного клостридиального токсина, близкой к приведенной в результате, обнаруженном для комплекса токсина BoNT/A массой 900 кДа (смотри Примеры 1-3) и BoNT/A массой 150 кДа (Пример 4).

Группа изобретений относится к фармацевтическим композициям на основе ботулинового токсина и предназначена для диагностического или терапевтического введения субъекту. Лиофилизированная или высушенная в вакууме композиция содержит ботулиновый токсин, стабилизированный небелковым эксципиентом; соединение, выбранное из группы, состоящей из первого моносахарида, первого дисахарида, первого трисахарида и первого спирта, полученного восстановлением первого моносахарида; и соединение, выбранное из группы, состоящей из второго моносахарида, второго дисахарида, второго трисахарида, второго спирта и аминокислоты. В другом аспекте фармацевтическая композиция содержит ботулиновый токсин, стабилизированный небелковым эксципиентом; полиэтиленгликоль и соединение, выбранное из группы, состоящей из моносахарида, дисахарида, трисахарида и аминокислоты. Фармацевтическая композиция может содержать ботулиновый токсин, стабилизированный небелковым эксципиентом; поливинилпирролидон; и дисахарид. Не содержащая животный белок фармацевтическая композиция ботулинового токсина включает ботулиновый токсин; соединение, выбранное из группы, состоящей из первого моносахарида, первого дисахарида, первого трисахарида; и аминокислоту. Использование группы изобретений обеспечивает стабильную фармацевтическую композицию для диагностического или терапевтического введения субъекту. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 8 табл., 5 пр.

1. Лиофилизированная или высушенная в вакууме фармацевтическая композиция, содержащая:
(a) ботулиновый токсин, причем ботулиновый токсин стабилизирован небелковым эксципиентом,
(b) соединение, выбранное из группы, состоящей из первого моносахарида, первого дисахарида, первого трисахарида и первого спирта, полученного восстановлением первого моносахарида, и
(c) соединение, выбранное из группы, состоящей из второго моносахарида, второго дисахарида, второго трисахарида, второго спирта и аминокислоты, причем второй моносахарид, второй дисахарид и второй трисахарид отличаются от соответствующих первого моносахарида, первого дисахарида и первого трисахарида.

2. Лиофилизированная или высушенная в вакууме фармацевтическая композиция, содержащая:
(a) ботулиновый токсин, причем ботулиновый токсин стабилизирован небелковым эксципиентом,
(b) полиэтиленгликоль, и
(c) соединение, выбранное из группы, состоящей из моносахарида, дисахарида, трисахарида и аминокислоты.

3. Не содержащая животный белок фармацевтическая композиция ботулинового токсина, содержащая:
ботулиновый токсин,
первое соединение, выбранное из группы, состоящей из первого моносахарида,
первого дисахарида, первого трисахарида, и
второго соединения, представляющего собой аминокислоту.

4. Лиофилизированная или высушенная в вакууме фармацевтическая композиция, содержащая:
(a) ботулиновый токсин, причем ботулиновый токсин стабилизирован небелковым эксципиентом,
(b) поливинилпирролидон, и
(с) дисахарид.

5. Фармацевтическая композиция по п.4, где ботулиновый токсин выбран из группы, состоящей из ботулиновых токсинов типов А, В, С, D, Е, F и G.

6. Фармацевтическая композиция по п.4, где ботулиновый токсин выбран из ботулинового токсина типа А.

название	год	авторы	номер документа
СТАБИЛИЗИРОВАННЫЕ НЕБЕЛКОВЫЕ КОМПОЗИЦИИ КЛОСТРИДИАЛЬНОГО ТОКСИНА	2017	Абиад Морис Дани Бхас Шалаев Евгений	RU2762607C2
СОСТАВЫ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ВНУТРИПУЗЫРНОЙ ИНСТИЛЛЯЦИИ	2015	Форссен Эрик А. Хьюз Патрик М. Рупп Дэвид С.	RU2720991C2
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ С ЗАМЕДЛЕННЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ, СОДЕРЖАЩИЕ ПОЛОКСАМЕР	2009	Хант Терренс Дж.	RU2482874C2
СОСТАВ ДЛЯ СТАБИЛИЗАЦИИ БЕЛКОВ, КОТОРЫЙ НЕ СОДЕРЖИТ ЭКСЦИПИЕНТЫ ИЗ МЛЕКОПИТАЮЩИХ	2010	Тэйлор Харольд Бургер Маркус Мандер Герд Й.	RU2539388C2
РЕКОМБИНАНТНАЯ ЭКСПРЕССИЯ БЕЛКОВ В ДВУХЦЕПОЧЕЧНОЙ ФОРМЕ С ДИСУЛЬФИДНЫМ МОСТИКОМ	2006	Шпехт Фолькер	RU2412253C2
КЛОСТРИДИАЛЬНЫЕ НЕЙРОТОКСИНЫ С ИЗМЕНЕННОЙ ПЕРСИСТЕНТНОСТЬЮ	2009	Фреверт Юрген	RU2524429C2
РАЗРУШАЕМЫЕ КЛОСТРИДИАЛЬНЫЕ ТОКСИНЫ	2011	Стюард Лэнс Э. Ганшани Санджив Фернандез-Салас Эстер Гилмор Марселла А. Фрэнсис Джозеф Аоки Кей Роджер	RU2561465C2
СЛИТЫЕ БЕЛКИ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ТЕРАПИИ	2012	Чеддок Джон Харпер Элейн	RU2651492C2
ЖИДКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НЕЙРОТОКСИНА, СТАБИЛИЗИРОВАННАЯ ТРИПТОФАНОМ ИЛИ ТИРОЗИНОМ	2017	Ярстад, Андерс Фриис, Анна Шталь, Ульф Гурелль, Анн Агрен, Барбро Эдстром, Эмилия Пикетт, Эндрю	RU2741497C2
PEG-ИЛИРОВАННЫЙ МУТИРОВАННЫЙ ТОКСИН CLOSTRIDIUM BOTULINUM	2007	Фреферт Юрген Шпехт Фолькер	RU2426739C2

СПОСОБ РЕМОНТА МОНОКОЛЕСА ТУРБОМАШИН	2009	Наговицын Евгений Михайлович Гейкин Валерий Александрович Докашев Виктор Васильевич Есипова Татьяна Сергеевна Никитин Александр Иванович Поклад Валерий Александрович Пузанов Сергей Георгиевич Скворцов Иван Владимирович Соломатина Наталья Анатольевна	RU2419527C1
WO 2007041664 A1, 12.04.2007
WO 2006005910 A2, 19.01.2006

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ ТОКСИНА КЛОСТРИДИЙ Российский патент 2014 года по МПК A61K9/19 A61K47/00

Описание патента на изобретение RU2535003C2

Похожие патенты RU2535003C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 535 003 C2

Реферат патента 2014 года ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ ТОКСИНА КЛОСТРИДИЙ

Формула изобретения RU 2 535 003 C2

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2014 года RU2535003C2

RU 2 535 003 C2