СПОСОБ ОЧИСТКИ ПОЧВ ОТ НЕФТИ В УСЛОВИЯХ НИЗКИХ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ ТЕМПЕРАТУР ПСИХРОТОЛЕРАНТНЫМИ БАКТЕРИЯМИ Pseudomonas sp. ИБ-1.1 Российский патент 2015 года по МПК B09C1/10 C12N1/20 C12R1/38 

Изобретение относится к области биотехнологии защиты окружающей среды, в частности к способам очистки почв от нефтяных загрязнений в сокращенные сроки в условиях низких положительных температур.

Использование биологических средств для ликвидации нефтяных загрязнений почвы часто является единственно возможным способом восстановления экологически чистой обстановки в природных условиях без нарушения естественного биоценоза. В России большинство месторождений нефти расположено в северных регионах и в Западной Сибири. Поэтому для этих регионов оптимальным является внесение психроактивных микроорганизмов, которые обладают достаточной активностью при низкой температуре, приспособлены к сезонным колебаниям температур. Интродукция этих микроорганизмов, способных функционировать при низких положительных температурах, позволит продлить период очистки почвы от нефти на несколько месяцев.

Известен способ восстановления плодородия нефтезагрязненных почв микробным препаратом «Байкал ЭМ1» [1]. Недостатком его является неспособность деструкции нефти в условиях пониженных температур.

Известен способ очистки мерзлотных почв от нефти спорообразующими микроорганизмами Bacillus subtilis [2]. Недостатком является сравнительно высокий период очистки.

Технической задачей предлагаемого изобретения является разработка способа очистки почв от нефти в условиях низких положительных температур путем внесения в почву суспензии микробного препарата из штамма бактерий Pseudomonas sp.

Поставленная задача решается путем внесения микробного препарата, состоящего из микроорганизмов штамма бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1, обладающего способностью разлагать нефтепродукты в условиях низких положительных температур.

Штамм депонирован во Всероссийскую коллекцию микроорганизмов с регистрационным номером ВКМ B - 1831D и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические и микроскопические особенности штамма.

Клетки палочковидные 1,5-2,0 мкм в длину, 0,5-0,7 мкм в диаметре, грамотрицательные. Колонии круглые диаметром 2,5 мм, выпуклые, желтоватые, полупрозрачные.

Условия, необходимые для культивирования штамма: селективная питательная среда - среда Раймонда + источник углерода.

Состав питательной среды (среда Раймонда), г/л: Na₂CO₃ - 0,1; CaCl₂ - 0,01; MnSO₄·7H₂O - 0,02; FeSO₄·7H₂O - 0,02; NaH₂PO₄ - 1,5; K₂HPO₄ - 1,0; MgSO₄·7H₂O - 0,2; NH₄NO₃ - 2,0; дизельное топливо - 1%; вода дистиллированная - до 1 л.

Для хранения культуры в коллекции на косяках в среду Раймонда добавляют пептон 1 г/л. Оптимальный интервал температур для роста 10-15°C, срок выращивания 3 суток. Штамм хранится лиофильно в ампулах. В холодильнике штамм хранится на скошенном агаре, среда Раймонда; пересев осуществляется один раз в два месяца.

Штамм бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1. выращивают на среде Раймонда pH 7,0-7,2 в течение 3 суток при 15°C в условиях аэрации до достижения титра микроорганизмов в культуральной жидкости величины не менее 10⁸ КОЕ/мл.

Пример конкретного выполнения.

Испытания способа очистки почв от нефти в условиях низких положительных температур проводили в условиях нефтезагрязненного участка территории ООО «РН-Пурнефтегаз» площадью 1,0 га. Участок разделен на две равные части. Одна из частей была обработана путем внесения суспензии микробного препарата, состоящего из микроорганизмов психротолерантного штамма бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1 с титром 2,0·10⁸ КОЕ/мл. Расход составил 1 м². Вторая часть осталась без обработки в качестве контроля. В период испытания температура воздуха колебалась в интервале от 0 до 9°C.

Для оценки эффективности применения способа контролировали степень разложения углеводородов нефти в соответствии с ПНД Ф 16.1.41-2004 «Методика выполнения измерений массовой концентрации нефтепродуктов в пробах почв гравиметрическим методом» (табл.).

На момент месячной экспозиции испытаний деструкция углеводородов на обработанной части составила свыше 90%, в контроле содержание нефти существенно не изменилось.

Таким образом, применение суспензии, состоящей из микроорганизмов психротолерантного штамма бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1, очищает почву, загрязненную нефтью, и может быть использовано в восстановлении нефтезагрязненных земель в условиях пониженных положительных температур Крайнего Севера и Западной Сибири.

Таблица Динамика изменения содержания нефтепродуктов в почве Часть участка Содержание нефтепродуктов, % Исходное Через 14 сут Через 1 мес С обработкой 4,88 2,61 0,44 Без обработки, контроль 4,88 4,85 4,80

Список литературы

1. Безуглова О.С., Мордвинова Д.В. Главный агроном, 2009. - №3. - С.16-17.

2. Патент РФ №2446900, кл. B09C 1/10, 2012.

Изобретение относится к области биотехнологии защиты окружающей среды, в частности к способам очистки почв от нефтяных загрязнений в сокращенные сроки в условиях низких положительных температур. Способ включает внесение в почву суспензии микробного препарата на основе суспензии психротолерантного штамма бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1. с титром не менее 2,0·10⁸ КОЕ/мл. Изобретение позволяет за 1 месяц провести биодеградацию нефти со степенью деструкции углеводородов свыше 90%. 1 табл.

Способ очистки почвы от нефти в условиях низких положительных температур путем внесения в почву суспензии микробного препарата, отличающийся тем, что в качестве микробного препарата используют суспензию штамма бактерий Pseudomonas sp. ИБ 1.1.