АЛЛЕРГОТРОПИНЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АЛЛЕРГИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ КЛЕЩАМИ ДОМАШНЕЙ ПЫЛИ Российский патент 2015 года по МПК A61K39/35 A61K39/39 A61P37/08 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и аллергологии, и касается лечения аллергии к клещам домашней пыли.

В настоящее время аллергоспецифическую иммунотерапию (АСИТ), например, поллинозов, проводят как методом подкожных инъекций (пкАСИТ), так и сублингвально (слАСИТ). Для инъекционных форм препаратов используют водно-солевые экстракты (ВСЭ) аллергенов, модифицированные аллергены (аллергоиды), а также депонированные аллергены и аллергоиды. Для слАСИТ используют водно-солевые экстракты аллергенов и аллергоиды.

Известны водно-солевые экстракты аллергенов и аллергоиды для пкАСИТ, представленные на фармацевтическом рынке отечественными препаратами: «Аллерген из домашней пыли для диагностики и лечения», регистрационный номер 94/161/20, (Биомед им. И.И. Мечникова, Россия); «Аллерген из клеща Dermatophagoides pteronissimus для диагностики и лечения», регистрационный номер 89/686/16, (Биомед им. И.И. Мечникова, Россия); «Аллерген из клеща Dermatophagoides farinae для диагностики и лечения», регистрационный помер 92/203/19 (Биомед им. И.И. Мечникова, Россия); «Аллергоид из домашней пыли для лечения» регистрационный номер Р N 001536/01 от 05.03.2009 г. («Микроген» НПО ФГУП, г. Ставрополь).

ВСЭ аллергенов при их относительной дешевизне и доступности на рынке фармпрепаратов не отличаются безопасностью и удобством применения. Главным недостатком ВСЭ является высокое содержание балластных веществ, являющихся потенциальными аллергенами, что создает при лечении риск - получение реакций анафилактического типа.

Аллергоиды («НПО Микроген») относительно дешевы и доступны на рынке фармпрепаратов, характеризуются сниженной аллергенностью по сравнению с ВСЭ аллергенов и, соответственно, большей эффективностью и меньшей опасностью, лечение занимает меньше времени. Однако проведение пкАСИТ аллергоидами не обеспечивает равномерного поступления препарата в организм больного, к тому же существующие на данный момент времени указанные аллергоиды зачастую недостаточно стабильны.

Известны депонированные аллерговакцины для пкАСИТ, представленные препаратом «Алюсталь» «Аллерген клещей», регистрационный номер ЛП-001047, дата регистрации: 21.10.2011 г., (АО Сталлержен, Франция). «Алюсталь» представляет собой адсорбированный на суспензии гидроксида алюминия ВСЭ аллергенов. При наличии такого преимущества препарата «Алюсталь», как пролонгированное действие инъекции аллерговакцины, нельзя не отметить главного недостатка, вызванного наличием ВСЭ аллергена в составе аллерговакцины - риска получения реакций анафилактического типа. Кроме этого депонированные препараты вызывают образование болезненного уплотнения в месте укола.

Известны пероральные формы аллерговакцин на основе ВСЭ аллергенов, представленные препаратами в виде растворов: «Сталораль» «Аллерген клещей», регистрационный номер ЛСР-008340/10-180810 (АО Сталлержен, Франция) и «Н-Al» «Смесь клещей» («Sevapharma», Чехия), регистрационный номер ЛСР-003619/09 от 14.05.2009. Пероральные формы аллерговакцин на основе аллергоидов (в виде таблеток) представлены препаратом «Лайс Дерматофагоидес», регистрационный номер ЛП-001303 от 29.11.2011 г. (Лофарма СпА, Италия). Препараты для слАСИТ удобны в применении, но дорогостоящи и не всегда легкодоступны на фармацевтическом рынке. Метод слАСИТ удобен в применении, но не обеспечивает возможности равномерного поступления препарата в организм пациента. Кроме этого нельзя не отметить высокую аллергенность препаратов на основе ВСЭ аллергенов.

Исходя из вышеизложенного ясно, что основной целью, на решение которой направлено данное изобретение, является усовершенствование аллерговакцины, а именно: снижение аллергенности, при сохранении иммуногенности, повышение стабильности аллерговакцины, создание пролонгированных лекарственных форм.

Известен способ получения аллергоидов посредством модификации аллергенов формальдегидом (В.А. Фрадкин «Диагностические и лечебные аллергены», Москва, Медицина, 1990 г. ).

Таким образом, ближайших аналогов по назначению не выявлено.

Известен аллерготропин (патент РФ №2205661 «Аллерготропин для лечения поллинозов и способ лечения поллинозов»). Данный аллерготропин характеризуется тем, что он содержит аллергоид пыльцы аллергенных растений (березы, тимофеевки или полыни) и связанный с ним синтетический иммуномодулятор - Полиоксидоний. Данный аллерготропин предназначен для лечения поллинозов, вызванных пыльцой тимофеевки, березы или полыни и, соответственно, не является аналогом изобретения по назначению. Однако структура известного аллерготропина может быть названа аналогом заявленного изобретения.

Аллерготропины представляют собой конъюгат аллергоида, приготовленного из очищенного аллерген-специфического лиофильно высушенного водно-солевого экстракта аллергена, и синтетического высокомолекулярного иммуномодулятора - Полиоксидония. Полиоксидоний (сополимер N-окиси-1,4-этиленпиперазина и N-карбоксиэтил-1,4-этиленпиперазиний бромида), регистрационный номер 96/302/9, патент РФ N 2073031, ФСП 42-0501460703, хорошо растворим в воде, нетоксичен, деструктирует и полностью выводится из организма.

Аллергоид представляет собой химически модифицированный аллерген и имеет преимущества перед последним, т.к. при химической модификации наблюдается снижение аллергенности и риска наведения анафилактического шока. Превращение аллергена в аллергоид путем химической модификации в присутствии формальдегида, приводящее к взаимодействию высоко- и низкомолекулярных компонентов, способствует сохранению свойств аллергоида индуцировать синтез антител. Это действие усиливается и за счет жесткой, стабильной структуры молекулы аллергоида, устойчивой к влиянию денатурирующих агентов в отличие от исходного аллергена, а также способствует пролонгированию действия аллергоида, так как разрушение его в организме больного будет происходить медленнее.

Снижение аллергенности в полимеризованных аллергенах связано, с одной стороны, с уменьшением числа антигенных детерминант в результате их реакции с альдегидными группами, а с другой стороны - недоступностью для реагинов остальных детерминант, скрытых внутри высокомолекулярного соединения. Положительное влияние на иммуногенность оказывает увеличение молекулярной массы и создание более жестких внутримолекулярных связей.

Действующие начала аллерготропинов - аллергоид, обладающий сниженной аллергенной активностью (по сравнению с исходным аллергеном), и иммуномодулятор Полиоксидоний. Препарат должен содержать специфически активный антиген и обладать способностью взаимодействовать со специфическими к нему IgG-антителами контрольной положительной сыворотки крови больных с гиперчувствительностью к аллергену.

На основании исследований установлено, что аллерготропины сохраняют свои медико-биологические и физико-химические свойства в течение 3-х лет.

Использование комбинации аллергоида и иммуномодулятора позволяет сократить курс лечения (с 32 инъекций при проведении пкАСИТ ВСЭ аллергена до 15), что уменьшает возможность осложнений (анафилактических реакций) при проведении курса лечения.

Таким образом, высокая эффективность, безопасность и невысокая себестоимость аллерготропинов делает их крайне перспективными и конкурентоспособными на рынке антиаллергических препаратов.

Задачей данного изобретения является усовершенствование аллерговакцины, а техническим результатом является создание лекарственных средств для специфической иммунотерапии аллергии к клещам домашней пыли.

Указанная задача решается, а технический результат достигается за счет того, что разработан аллерготропин для лечения аллергии, вызываемой клещами домашней пыли, характеризующийся тем, что он получен методом химической конъюгации аллергоида и синтетического высокомолекулярного иммуномодулятора - Полиоксидония, и содержащий 1000±200 PNU аллергоида клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus или Dermatophagoides farinae и 6,25±1,25 мг Полиоксидония.

Таким образом, для решения данной задачи были разработаны аллерготропины «Птерпол» - для лечения аллергии к клещам Dermatophagoides pteronyssinus и «Фарпол» - для лечения аллергии к клещам Dermatophagoides farinae. Препараты получают методом химической конъюгации аллергоида и Полиоксидония.

Аллерготропины «Птерпол» и «Фарпол» содержат 1000±200 PNU аллергоида клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus или Dermatophagoides farinae и 6,25±1,25 мг Полиоксидония.

Заявляемые в изобретении препараты аллерготропинов обладают целым рядом очевидных преимуществ, а именно: относительно ВСЭ аллергенов - сниженной аллергенной активностью, усиленным иммунным ответом, пролонгированным действием; относительно аллергоидов - усиленным иммунным ответом, пролонгированным действием; относительно депонированных форм ВСЭ аллергенов - сниженной аллергенной активностью, усиленным иммунным ответом, отсутствием болезненного уплотнения в месте укола благодаря водорастворимой основе полимерного носителя.

Предлагаемое изобретение поясняется следующими графическими материалами: в таблице 1 представлены результаты определения иммуногенности аллерготропина «Птерпол», в таблице 2 представлены результаты определения иммуногенности аллерготропина «Фарпол», на фиг. 1 представлены в виде графика значения ОП в ИФА при нейтрализации IgE-антител для аллергена, аллергоида и аллерготропина «Птерпол», на фиг. 2 представлены в виде графика значения ОП в ИФА при нейтрализации IgE-антител для аллергена, аллергоида и аллерготропина «Фарпол».

Аллерготропин для лечения аллергии, вызываемой клещами домашней пыли, был получен методом химической конъюгации аллергоида и синтетического высокомолекулярного иммуномодулятора - Полиоксидония. При этом аллерготропин содержал 1000±200 PNU аллергоида клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus или Dermatophagoides farinae и 6,25±1,25 мг Полиоксидония.

Осуществление изобретения поясняется примерами.

Пример 1.

Аллерготропин «Птерпол» представляет собой конъюгат аллергоида из клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus, приготовленного из высокоочищенного лиофилизированного водно-солевого экстракта, и синтетического высокомолекулярного иммуномодулятора Полиоксидония.

В одном флаконе содержится 1000+200 PNU аллергоида из клещей домашней пыли и 6,25+1,25 мг Полиоксидония.

Аллерготропин представлен в форме лиофилизата для приготовления раствора для подкожного введения. Разведение лиофилизата осуществляют с использованием разводящей жидкости для неинфекционных аллергенов (ФСП 42-0010-2041-01).

Аллерготропин применяют для проведения специфической иммунотерапии (СИТ) больных поллинозом с сенсибилизацией к клещам домашней пыли D.pteronysinus.

Аллерготропин назначают при наличии анамнеза и клинического заболевания с такими проявлениями, как риноконъюнктивит и атопическая бронхиальная астма IA 1; а также при установленном диагнозе аллергии, подтвержденном провокационными назальными тестами и кожными пробами с коммерческим аллергеном клещей домашней пыли D.pterony sinus.

Аллерготропин хранят в сухом, защищенном от света месте при температуре от 4 до 8°C. Срок хранения 3 года.

Поскольку разработанный препарат предназначен для лечения аллергопатологии, то конъюгация с Полиоксидонием не должна изменить аллергенные свойства препарата в сравнении с исходным аллергоидом.

Сравнивали иммуногенность и остаточную аллергенность. Причем, иммуногенность должна быть не ниже, а остаточная аллергенность не выше, чем соответствующие значения для исходного аллергоида.

Определение иммуногенности и остаточной аллергенности препарата проводили в иммуноферментном анализе (ИФА). На полистироловые планшеты наносили соответственно:

- аллергоид, изготовленный из аллергена клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus, полученный в ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России;

- аллерготропин «Птерпол», полученный в ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России.

Иммуногенность препарата определяется по способности взаимодействовать со специфическим к нему IgG из сывороток крови больных. В качестве положительного контроля использовали пулированную сыворотку с высоким содержанием специфических IgG антител. Сыворотки для нее, содержащие не менее 10 mgA/1, были отобраны с использованием коммерческих флюороиммуноферментных наборов на приборе ImmunoCAP (Pharmacia biotech). Результаты определения иммуногенности аллерготропинов представлены в таблице 1.

Видно, что оптические плотности полученных препаратов и контролей очень близки, различие недостоверно (р>0,05). Таким образом, показано, что иммуногенность изготовленного нами аллерготропина «Птерпол» не изменилась по сравнению с исходным аллергоидом.

Как и исходный аллергоид, изготовленный препарат должен обладать сниженной специфической активностью по сравнению с очищенным аллергеном, из которого приготовлен препарат - аллергенная активность исходного аллергена должна превышать аллергенную активность аллергоида или аллерготропина не менее чем на 40%.

Определение проводили методом ингибиции ИФА. В качестве положительного контроля использовали пулированную сыворотку с высоким содержанием специфических IgE антител. Сыворотки для нее, содержащие не менее 85 kUA/1, были отобраны с использованием коммерческих флюороиммуноферментных наборов на приборе ImmunoCAP (Pharmacia biotech).

Результаты представлены на фиг. 1. Результаты реакции оценивали на графике по разнице ОП сравниваемых образцов, в двух точках линейного участка калибровочных кривых, разница должна быть не менее 40%. Из фиг. 1 видно, что связывание аллергена со специфическим IgE контрольной сыворотки выше, т.к. значения ОП в ИФА при нейтрализации антител существенно ниже, чем для соответствующих концентраций аллергоида и препарата, что свидетельствует о лучшем связывании со специфическим IgE контрольной сыворотки. В двух точках линейного участка калибровочной кривой разница ОП для аллергена и аллергоида, вместе с изготовленным на его основе препаратом превысила 40%. Таким образом, аллерготропин «Птерпол», как и исходный аллергоид, обладает меньшей аллергенностью по сравнению с аллергеном клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus.

Пример 2.

Аллерготропин «Фарпол» представляет собой конъюгат аллергоида из клещей домашней пыли Dermatophagoides farinae, приготовленного из высокоочищенного лиофилизированного водно-солевого экстракта, и синтетического высокомолекулярного иммуномодулятора Полиоксидония.

В одном флаконе содержится 1000+200 PNU аллергоида из клещей домашней пыли Dermatophagoides farinae и 6,25+1,25 мг Полиоксидония.

Аллерготропин представлен в форме лиофилизата для приготовления раствора для подкожного введения. Разведение лиофилизата осуществляют с использованием разводящей жидкости для неинфекционных аллергенов (ФСП 42-0010-2041-01).

Аллерготропин применяют для проведения специфической иммунотерапии (СИТ) больных поллинозом с сенсибилизацией к клещам домашней пыли Dermatophagoides farinae.

Аллерготропин назначают при наличии анамнеза и клинического заболевания с такими проявлениями, как риноконъюнктивит и атопическая бронхиальная астма IA 1; а также при установленном диагнозе аллергии, подтвержденном провокационными назальными тестами и кожными пробами с коммерческим аллергеном клещей домашней пыли Dermatophagoides farinae.

Аллерготропин хранят в сухом, защищенном от света месте при температуре от 4 до 8°C. Срок хранения 3 года.

Поскольку разработанный препарат предназначен для лечения аллергопатологии, то конъюгация с Полиоксидонием не должна изменить аллергенные свойства препарата в сравнении с исходным аллергоидом.

Сравнивали иммуногенность и остаточную аллергенность. Причем, иммуногенность должна быть не ниже, а остаточная аллергенность не выше, чем соответствующие значения для исходного аллергоида.

Определение иммуногенности и остаточной аллергенности препарата проводили в иммуноферментном анализе (ИФА). На полистироловые планшеты наносили соответственно:

- аллергоид, изготовленный из аллергена клещей домашней пыли Dermatophagoides farinae, полученный в ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России;

- Аллерготропин «Фарпол», полученный в ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России.

Иммуногенность препарата определяется по способности взаимодействовать со специфическим к нему IgG из сывороток крови больных. В качестве положительного контроля использовали пулированную сыворотку с высоким содержанием специфических IgG антител. Сыворотки для нее, содержащие не менее 10 mgA/1, были отобраны с использованием коммерческих флюороиммуноферментных наборов на приборе ImmunoCAP (Pharmacia biotech). Результаты определения иммуногенности аллерготропинов представлены в таблице 2.

Видно, что оптические плотности полученных препаратов и контролей очень близки, различие недостоверно (р>0,05). Таким образом, показано, что иммуногенность изготовленного нами аллерготропина «Фарпол» не изменилась по сравнению с исходным аллергоидом.

Как и исходный аллергоид, изготовленный препарат должен обладать сниженной специфической активностью по сравнению с очищенным аллергеном, из которого приготовлен препарат, аллергенная активность исходного аллергена должна превышать аллергенную активность аллергоида или аллерготропина не менее чем на 40%.

Определение проводили методом ингибиции ИФА. В качестве положительного контроля использовали пулированную сыворотку с высоким содержанием специфических IgE антител. Сыворотки для нее, содержащие не менее 85 kUA/1, были отобраны с использованием коммерческих флюороиммуноферментных наборов на приборе ImmunoCAP (Pharmacia biotech).

Результаты представлены на фиг. 2. Результаты реакции оценивали на графике по разнице ОП сравниваемых образцов, в двух точках линейного участка калибровочных кривых, разница должна быть не менее 40%. Из фиг. 2 видно, что связывание аллергена со специфическим IgE контрольной сыворотки выше, т.к. значения ОП в ИФА при нейтрализации антител существенно ниже, чем для соответствующих концентраций аллергоида и препарата, что свидетельствует о лучшем связывании со специфическим IgE контрольной сыворотки. В двух точках линейного участка калибровочной кривой разница ОП для аллергена и аллергоида, вместе с изготовленным на его основе, препаратом превысила 40%. Таким образом, аллерготропин «Фарпол», как и исходный аллергоид, обладает меньшей аллергенностью по сравнению с аллергенами клещей домашней пыли Dermatophagoides farinae.

Таблица 1 Определение иммуногенности аллерготропина «Птерпол» Форма препарата Изготовитель IgG-антитела (оптическая плотность) М±m Число экспериментов Аллергоид Институт иммунологии 1,322±0,137 5 «Птерпол» Институт иммунологии 1,418±0,164 5

Таблица 2 Определение иммуногенности аллерготропина «Фарпол» Форма препарата Изготовитель IgG-антитела (оптическая плотность) М±m Число экспериментов Аллергоид Институт иммунологии 1,291±0,138 5 «Фарпол» Институт иммунологии 1,309±0,143 5

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и аллергологии, и может быть использовано для лечения аллергии к клещам домашней пыли. Для этого получают аллерготропин методом химической конъюгации аллергоида и синтетического высокомолекулярного иммуномодулятора - Полиоксидония. Алерготропин содержит 1000±200 PNU аллергоида клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus или Dermatophagoides farinae и 6,25±1,25 мг Полиоксидония. Получение аллерготропинов на основе аллергоидных форм аллергенов клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farina, обладающих, по сравнению с нативным аллергеном, более выраженными иммуногенными и гипосенсибилизирующими свойствами, позволяет провести эффективное лечение аллергии методом АСИТ. 2 пр., 2 табл., 2 ил.

Аллерготропин для лечения аллергии, вызываемой клещами домашней пыли, характеризующийся тем, что он получен методом химической конъюгации аллергоида и синтетического высокомолекулярного иммуномодулятора - Полиоксидония, и содержащий 1000±200 PNU аллергоида клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus или Dermatophagoides farinae и 6,25±1,25 мг Полиоксидония.