СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПРОСТОЙ И БЫСТРОРАСТУЩЕЙ МИОМЫ МАТКИ С НОРМАЛЬНЫМ СТРОЕНИЕМ ЭНДОМЕТРИЯ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для диагностики простой и быстрорастущей миомы матки.

Актуальность проблемы миомы матки (ММ) заключается в том, что она является наиболее распространенной опухолью гениталий. Последние масштабные патологоанатомические исследования свидетельствуют о том, что распространенность ее может достигать 85% (Тихомиров А.Л., 2010).

Особое место занимает вопрос быстрорастущей миомы матки (БММ), что обусловлено высокой вероятностью ее выявления во всех возрастных периодах, возможностью сочетания с гиперплазией эндометрия, предраком и раком эндометрия, опухолями яичников, а также трансформации в лейомиосаркому (Дикарева Л.В. Гиперпластические процессы матки: клинико-диагностическое значение маркеров биологических жидкостей, автореф. диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук, Волгоград, 2009; Сидорова И.С. Миома матки, МИА, Москва, 2003; Лазарева Н.И. и соавт., 2003; Calleri L.F., 2000). Актуальность проблемы БММ связана также с возникшей в последние годы тенденцией к позднему планированию беременности (после 35 лет), когда ММ является причиной репродуктивных неудач (Benecke С., Kruger T.F., Siebert T.I., Merwe J.P. van der, Steyn D.W. Effect of fibroids on fertility in patients undergoing assisted reproduction. A structured literature review // Gynecol. Obstet. Invest. 2005. Vol.59(4). P.225-230).

Настораживает и тот факт, что у женщин молодого возраста (20-30 лет) чаще встречается именно быстрорастущая, пролиферирующая ММ с наличием множественных узлов (Сидорова И.С., Унанян А.Л., Коган Е.А., Гуриев Т.Д. Миома матки у больных молодого возраста: клинико-патогенетические особенности // Акушерство, гинекология и репродукция, 2010; N1: с.16-20).

Для дифференциальной диагностики БММ в практической медицине используется несколько методов.

Известен способ прогнозирования роста ММ, заключающийся в том, что в тканях миоматозных узлов, получаемых методом трансцервикальной пункционной биопсии, иммуногистохимическим методом предлагается определять плотность и интенсивность окрашивания рецепторов к прогестерону, и при увеличении этих показателей прогнозируется рост миомы в течение 12 месяцев (Ichimura Т., Kawamura N., Ito F., Shibata S., Minakuchi K., Tsujimura A., Umesaki N., Ogita S. Correlation between the growth of uterine leiomyomata and estrigen and progesterone receptors in needle biopsy speciments // Fertil. Steril. - 1998. - V.70. - P.967-971).

Данный способ имеет ряд недостатков:

- плохая воспроизводимость результатов в связи с погрешностями при приготовлении срезов, неоднородным по интенсивности окрашиванием тканей, особенностями микроскопии (Иммунологические методы [под редакцией Х. Фримеля] // М.: Мир. - 1979. - 518 с.);

- инвазивность и травматичность.

Известен способ дифференциальной диагностики БММ, отличающийся тем, что в биоптате эндометрия определяют содержание эпидермального фактора роста и при его значении, равном 6 нг/мл и менее, диагностируют ложный рост ММ, а при значении более 6 нг/мл - истинный рост ММ (Патент №2258222. Способ дифференциальной диагностики быстрорастущей лейомиомы матки / Посисеева Л.В., Малышкина А.И., Красильникова А.К., Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Перетятко Л.П. // Изобретения. Полезные модели. - 2005. - №22).

Однако и этот способ имеет ряд недостатков:

- он является инвазивным;

- забор эндометрия происходит при проведении гистероскопии в стационарных условиях, что требует госпитализацию пациентки и использование дорогостоящего оборудования;

- способ трудоемок, так как для его осуществления требуется выделение обогащенной популяции мононуклеарных клеток из ткани эндометрия с последующим культивированием клеток в течение 24 часов, при этом для культуральных исследований необходимы дорогостоящие питательные среды и CO₂-инкубатор.

Известны также способы дифференциальной диагностики простой и БММ, заключающиеся в эхографическом исследовании гениталий (Ашрафян Л.А. и соавт. Современные принципы первичной и уточняющей диагностики рака эндометрия // Практическая онкология, 2004; №1, стр.16-24; А.И. Гус и соавт. Современные принципы ультразвуковой, клинической и лабораторной диагностики синдрома поликистозных яичников // Гинекология 2002; №2, с.44-47; Демидов В.Н., Гус А.И., Современные принципы ультразвуковой диагностики генитального эндометриоза // Гинекология, 2002; №2, с.48-52).

Недостатками этих способов являются

- необходимость наличия соответствующего оборудования для ультразвуковой диагностики и специальных условий для проведения исследования;

- сложность интерпретации эхо-картин у больных с объемными процессами внутренних гениталий.

Известные способы дифференциальной диагностики простой и БММ основаны на особенностях эхографической картины, иммуногистохимическом исследовании ткани миоматозных узлов и эндометрия.

Заявленный способ дифференциальной диагностики простой и БММ с нормальным строением эндометрия с помощью метода краевой дегидратации не имеет аналогов.

Изобретение направлено на упрощение дифференциальной диагностики простой и БММ с нормальным строением эндометрия.

Указанный технический результат достигается тем, что супернатант менструальных выделений в количестве 0,2 мл наносят на поверхность предметного стекла в форме капли, накрывают покровным стеклом, высушивают при комнатной температуре, после чего полученные образцы микроскопируют и при наличии в них параллельных структур диагностируют БММ, а при обнаружении переходных форм - простую ММ.

Поставленной задачей было создание такого способа дифференциальной диагностики простой и БММ, который позволил бы в короткие сроки, на малых объемах биологических жидкостей, с минимальными материальными затратами оценить характер патологических процессов. Это достигается тем, что для дифференциальной диагностики простой и БММ с нормальным строением эндометрия проводится микроскопическое исследование супернатанта менструальных выделений из полости матки. Выбор менструальных выделений в качестве исследуемого субстрата у женщин связан с тем, что ряд ферментов, энзимов способны накапливаться в апикальных отделах железистых клеток, а затем выделяться в эндометриальную слизь и полость матки (Шварев Е.Г. Опухолевые маркеры в диагностике и оценке эффективности гормонотерапии рака эндометрия, автореф. диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук, Санкт-Петербург, 1993). Описанное свойство позволяет использовать менструальные выделения (или смывы из полости матки) для проведения структурного анализа биологических жидкостей в скрининге и мониторинге темпов роста ММ. Изложенная сущность изобретения поясняется рисунками, где

рис.1 - фрагмент морфологической картины супернатанта менструальных выделений, характеризующийся наличием переходных форм;

рис.2 - фрагмент морфологической картины супернатанта менструальных выделений, характеризующийся наличием параллельных структур.

Способ осуществляют следующим образом.

Менструальные выделения (MB) больной гормонозависимой опухолью матки получают путем аспирации содержимого полости матки зондом Пайпеля и центрифугируют. Затем 0,2 мл полученного супернатанта наносят на поверхность стандартного предметного стекла, накрывают покровным стеклом и высушивают при комнатной температуре течение трех суток. Предварительно стекла замачивают на 24-48 часов в растворе детергента, затем промывают в проточной воде в течение 10 минут и помещают в смесь Никифорова, состоящую из равных соотношений спирта и эфира на 30 мин. Перед нанесением пробы стекла вытирают сухой безворсовой тканью. Полученные образцы микроскопируют в проходящем свете, оценивают их морфологическую картину и при наличии в них параллельных структур диагностируют быстрорастущую миому матки (см. рис.2), а при обнаружении переходных форм - простую миому матки (см. рис.1).

Предлагаемый способ был успешно апробирован в гинекологических отделениях Александро-Мариинской областной клинической больницы, Городского бюджетного учреждения здравоохранения Астраханской области «Клинический родильный дом», Городского бюджетного учреждения здравоохранения Астраханской области «Городская поликлиника №1» г. Астрахани в 2011-2013 гг.

Обследовано более 100 больных в возрасте от 18 до 49 лет. Все больные были разделены по нозологическому признаку (простая ММ с нормальным строением эндометрия, БММ с нормальным строением эндометрия). Ниже приводятся результаты апробации.

Пример 1. Больная О., 41 год. Наблюдалась в женской консультации по поводу миомы матки малых размеров - 5-6 недель - на протяжении 2-х лет. В течение последнего года менструации стали обильными, нерегулярными со склонностью к задержкам. В анамнезе 1 своевременные роды без осложнений. Метод контрацепции - барьерный. При влагалищном исследовании: шейка цилиндрическая, без дефектов слизистой, матка увеличена до 5-6 недель беременности, плотная при пальпации, подвижная, безболезненная, придатки не пальпируются, своды свободные.

По данным ультразвукового сканирования (УЗС): тело матки размерами 47×44×48 мм неоднородной структуры. Из передней стенки исходит интрамурально-субсерозный узел на широком основании размерами 30×20 мм, пониженной эхогенности, неоднородной структуры, из задней стенки исходит интрамуральный узел размерами 15×20 мм, пониженной эхогенности, неоднородной структуры. Полость матки не деформирована. М-эхо 7 мм. Правый яичник 40×31 мм, нормальной структуры, левый яичник отсутствует (левосторонняя аднексэктомия в 2006 г.).

Анализ крови: Hb - 104 г/л, эритроциты - 3,26×10¹² г/л, цветной показатель 0,8, лейкоциты - 3,7×10⁹ г/л, эозинофилы - 5, сегментоядерные нейтрофилы - 62, моноциты - 7, лимфоциты - 26, СОЭ - 6 мм/ч.

Клинический диагноз: миома матки небольших размеров.

13.03.2013 г. выполнена аспирация содержимого полости матки зондом Пайпеля.

22.03.2013 г. выполнено раздельное диагностическое выскабливание стенок полости матки и цервикального канала.

Гистологическое исследование (получено 29.03.2013)фрагменты эндометрия, соответствующие фазе пролиферации менструального цикла.

Морфологическое исследование супернатанта менструальных выделений.

Забор материала: после осмотра женщины на зеркалах в асептических условиях зондом Пайпеля аспирируют содержимое матки. Полученную смесь центрифугируют в течение 15 минут с частотой 3000 об/мин. Супернатант (надосадочную жидкость) используют для приготовления препаратов.

Через 72 часа (16.03.2013) от момента забора материала при исследовании образцов менструальных выделений была выявлена морфологическая картина, характеризующаяся наличием переходных форм (рис.1).

Заключение: морфологическая картина характерна для простой миомы матки.

Пример 2. Больная З., 49 лет. Наблюдалась в женской консультации по поводу миомы матки небольших размеров - 6-7 недель - в течение 2 лет. В течение последнего года менструации стали более обильными, отмечается рост ММ соответственно 12 неделям согласно данным УЗС и бимануального осмотра. В анамнезе 1 своевременные роды без осложнений. Метод контрацепции - барьерный. При влагалищном исследовании: шейка цилиндрическая, без дефектов слизистой, матка увеличена до 12 недель беременности, плотная при пальпации, ограниченно подвижная, безболезненная, придатки не пальпируются, своды свободные.

По данным УЗС: тело матки размерами 70×77×63 мм неоднородной структуры. Из передней стенки исходят 2 интрамурально-субсерозных узла на широком основании размерами 32×34 мм, 30×27 мм, пониженной эхогенности, неоднородной структуры, из задней стенки исходит интрамуральный узел размерами 24×24 мм, пониженной эхогенности, неоднородной структуры, из дна матки интрамурально-субсерозный узел 30×31 мм, пониженной эхогенности, неоднородной структуры. Полость матки не деформирована. М-эхо 11 мм. Правый яичник 31×28 мм, нормальной структуры, левый яичник 34×29 мм, нормальной структуры.

Анализ крови: Hb - 129×10¹² г/л, эритроциты - 3,9×10¹² г/л, цветной показатель 0,9, лейкоциты - 4,0×10⁹ г/л, эозинофилы - 1, сегментоядерные нейтрофилы - 67, моноциты - 7, лимфоциты - 25, СОЭ - 5 мм/ч.

06.03.2013 г. выполнена аспирация содержимого полости матки зондом Пайпеля.

13.03.2013 г. выполнено раздельное диагностическое выскабливание стенок полости матки и цервикального канала.

Гистологическое исследование (получено 20.03. 2013) эндометрий фазы пролиферации.

Морфологическое исследование супернатанта менструальных выделений.

Забор и приготовление материала производился так же, как и в примере №1. При исследовании образцов менструальных выделений была выявлена морфологическая картина, характеризующаяся наличием параллельных структур (рис.2).

Заключение: морфологическая картина характерна для быстрорастущей миомы матки.

Применение предлагаемого способа упрощает дифференциальную диагностику простой и БММ (скрининг-тест), а именно, позволяет в короткие сроки, на малых объемах биологических жидкостей, с минимальными материальными затратами предотвратить нарастание тяжести патологии гениталий и избежать операции по удалению органа. Забор исследуемого материала технически прост, легко переносится больными, исключает риск развития частых и тяжелых осложнений, вызываемых травматизацией при диагностическом выскабливании. Атравматичность забора материала открывает широкую возможность проведения многократных анализов, что является необходимым условием для динамической оценки состояния ММ на фоне проводимого лечения.

Данный способ позволяет предотвратить нарастание тяжести патологии гениталий и избежать операции по удалению органа.

Специфические особенности морфологической картины супернатанта менструальных выделений позволяют доступными методами (даже в условиях женских консультаций) определить тенденции к развитию определенного патологического состояния. Это дает возможность выбора тактики лечения больных для сохранения их репродуктивной функции, позволяет прогнозировать темпы роста миомы матки и выбирать тактику ведения таких пациенток.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для дифференциальной диагностики простой и быстрорастущей миомы матки. Изобретение направлено на упрощение дифференциальной диагностики простой и быстрорастущей миомы матки с нормальным строением эндометрия. Сущность способа состоит в том, что супернатант менструальных выделений в количестве 0,2 мл наносят на поверхность предметного стекла в форме капли, накрывают покровным стеклом, высушивают при комнатной температуре, после чего полученные образцы микроскопируют и при наличии в них параллельных структур диагностируют быстрорастущую миому матки, а при обнаружении переходных форм - простую миому матки. Изобретение обеспечивает упрощение дифференциальной диагностики простой и быстрорастущей миомы матки с нормальным строением эндометрия, осуществление дифференциальной диагностики в короткие сроки с использованием малых объемов биологических жидкостей и с минимальными материальными затратами. 2 ил., 2 пр.

Способ дифференциальной диагностики простой и быстрорастущей миомы матки с нормальным строением эндометрия, заключающийся в том, что проводят ультразвуковое сканирование матки на наличие миомы матки, затем осуществляют аспирацию из полости матки менструальных выделений и центрифугирование их в течение 15 мин с частотой 3000 об/мин, после чего супернатант менструальных выделений в количестве 0,2 мл наносят на поверхность предметного стекла в форме капли, накрывают покровным стеклом, высушивают при комнатной температуре, после чего полученные образцы микроскопируют и при наличии в них параллельных структур диагностируют быстрорастущую миому матки, а при обнаружении переходных форм - простую миому матки.