СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ЭНДОМЕТРИТА У ЖЕНЩИН С АНОМАЛЬНЫМИ МАТОЧНЫМИ КРОВОТЕЧЕНИЯМИ Российский патент 2016 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для диагностики хронического эндометрита.

Аномальные маточные кровотечения (АМК) являются широко распространенной медицинской и социальной проблемой в большинстве развитых стран среди женщин репродуктивного периода (Веселова Н.М. Маточные кровотечения пубертатного периода (патогенез, диагностика, лечение): дис. … докт. мед. наук / Н.М. Веселова. - Москва, 2007. - 248 с.; Matteson К.А. Abnormal uterine bleeding, health status, and usual source of medical care: analyses using the Medical Expenditures Panel Survey / K.A. Matteson, C.A. Raker, M.A. Clark, K.D. Frick // J Womens Health (Larchmt). - 2013. - №22 (11). - P. 959-965; Pearlman M.D. What is new in abnormal uterine bleeding? Best articles from the past year / M.D. Pearlman // Obstet Gynecol. - 2014. - №124 (1). - P. 159-161). Частота АМК, по данным разных авторов, варьирует от 5% (Шанькова И.Л. Реабилитация репродуктивного здоровья девушек-подростков после медицинского аборта / И.Л. Шанькова, Е.Г. Гуменюк // Мат-лы IX Всероссийского научного форума «Мать и дитя», Москва 2-5 октября 2007 г. М. - 2007. - С. 571) и даже до 30% в структуре экстренной гинекологической заболеваемости (Kriplani A. Efficacy, acceptability and side effects of the levonorgestrel intrauterine system for menorrhagia / A. Kriplani, B.M. Singh, S. Lai, N. Agarwal // Internetional Journal of Gynecology and Obstetrics. - 2007. - №97. - P. 190-194). В последние десятилетия отмечается рост частоты АМК, этиология и патогенез которых недостаточно изучены.

За последние годы появилось множество публикаций о значении и роли воспалительного фактора в этиопатогенезе АМК (Сибирская Е.В. Маточное кровотечение пубертатного периода: медико-генетические аспекты клиники, диагностики, лечения и профилактики: автрореф. дис. … док. Мед. наук / Е.В. Сибирская. - Москва, 2011; Коколина В.Ф. Маточные кровотечения пубертатного периода / В.Ф. Коколина. - М.: «АдамантЪ», 2012. - 40 с.; Сухих Г.Т. Хронический эндометрит / Г.Т. Сухих, А.В. Шуршалина. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 64 с.; Уварова Е.В. Аномальные маточные кровотечения пубертатного периода / Е.В. Уварова // Репродуктивное здоровье детей и подростков. - 2013. - №3. - С. 73-87; Kannar V. Evaluation of Endometrium for Chronic Endometritis by Using Syndecan-1 in Abnormal Uterine Bleeding / V. Kannar, Η.K.M. Lingaiah, V. Sunita // J Lab Physicians. - 2012. - №4 (2). - P. 69-73; Kasius J.C. The reliability of the histological diagnosis of endometritis in asymptomatic IVF cases: a multicenter observer study / Kasius J.C., Broekmans F.J., Sie-Go D.M., Bourgain C., Eijkemans M.J., Fauser B.C., Devroey P., Fatemi H.M. // Hum. Reprod. - 2012. - №27 (1). - P. 153-158). В настоящее время несмотря на применение современных методов диагностики и антибактериальных препаратов широкого спектра действия частота воспалительных процессов органов малого таза не только не снижается, но и отмечается рост данной патологии у женщин детородного возраста (Павлов P.B. Иммунологические особенности перитонеальной жидкости при хронических воспалительных заболеваниях придатков матки / Р.В. Павлов, В.А. Чеботарев, Е.А. Байков, И.В. Телегина // Астраханский медицинский журнал. - 2012. - Т. 7, №4. - С. 94-98; Дикарева Л.В. Диагностическое значение менструальных выделений при гинекологической патологии / Л.В. Дикарева, Е.Г. Шварев, А.Р. Абжалилова, О.Г. Тишкова, Ю.Ю. Уханова // Астраханский медицинский журнал. - 2013. - Т. 8, №3. - С. 12-17; Орлова B.C. Современное понимание этиопатогенетической роли инфекционных агентов экстрагенитальных биотопов в недонашивании беременности / B.C. Орлова, А.А. Должиков, И.В. Калашникова, Ю.И. Набережнев, С.Ю. Шеховская // Астраханский медицинский журнал. - 2013. - Т. 8, №4. - С. 27-32; Ташухожаева Д.Т. Профилактика внутриматочных синехий при самопроизвольном аборте: дис. … канд. мед. наук / Д.Т. Ташухожаева. - Волгоград, 2014. - 150 с.) и составляет более 60% среди женщин репродуктивного периода (Долгушина В.Ф. Клиническая характеристика хронического эндометрита / В.Ф Долгушина, Т.В. Надвикова, Н.А. Трошина, Н.П. Летягина // Уральский медицинский журнал - 2014. - N 1. - С. 56-59; Gendron N. Group A Streptococcus Endometritis following Medical Abortion / N. Gendron, C. Joubrel, S. Nedellec, J. Campagna, A. Agostini, F. Doucet-Populaire, A. Casetta, J. Raymond, C. Poyart, S. Kernéis // J. Clin. Microbiol. - 2014. - №52 (7) - P. 2733-2735).

Большинство хронических эндометритов протекает латентно без клинических проявлений инфекции (Радзинский В.Е. Неразвивающаяся беременность / В.Е. Радзинский, В.И. Димитрова, И.Ю. Майскова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 200 с.), а вклад хронического воспаления в нарушении репродуктивной функции огромен (Дебольская А.И. Оптимизация алгоритма ведения девочек-подростков с рецидивирующими маточными кровотечениями: автореф. дис. … канд. мед. наук / А.И. Дебольская. - Москва, 2009. - 24 с.). В клинической картине АМК у женщин репродуктивного периода зачастую отсутствуют характерные симптомы воспалительного процесса, а рутинное гистологическое исследование не всегда позволяет диагностировать его, что нередко приводит к недооценке необходимости антимикробной и противовоспалительной терапии при АМК. Таким образом, современная медицина нуждается в совершенствовании и создании новых способов диагностики хронического эндометрита у женщин с АМК.

Наиболее распространенным способом диагностики эндометрита у женщин с АМК является гистологическое исследование материала, полученного при раздельном диагностическом выскабливании стенок полости матки и цервикального канала, и позволяет установить признаки воспаления при АМК. Полученный материал фиксируют в 15%-ном растворе формалина, окрашивают гематоксилином-эозином. Воспалительный процесс выявляется на основании наличия лейкоцитарного инфильтрата (Петрова Е.Н. Гистологическая диагностика заболеваний матки. - М.: Медицина, 1959, с. 93-94).

Однако способ имеет недостатки:

- инвазивность и травматичность процесса забора материала;

- метод не позволяет проводить исследование в динамике;

- необходимость специальных методов окраски препаратов;

- наличие специализированных лабораторий и оборудования;

- длительность исследования (гистологическое исследование проводится 7-10 дней), что приводит к несвоевременности лечения;

- возможность ложноотрицательных результатов вследствие выборочного исследования фрагментов направленного материала (точность метода не превышает 64%).

В качестве прототипа избран способ диагностики хронического эндометрита путем определения в менструальной крови уровня растворимого антигена лейкоцитов-2 (РАЛ-2). При уровне РАЛ-2, равном или выше 640 мкг/мл, диагностируют хронический эндометрит (Посисеева Л.В. Пат. 2108750 Рос. Федерация, МПК⁶ А61В 10/00, G01N 33/53. Способ диагностики хронического эндометрита / Л.В. Посисеева, Е.Л. Бойко, Н.Ю. Борзова, А.И. Малышкина, Н.В. Шехлова; заявитель и патентообладатель Ивановский НИИ материнства и детства МЗ и МП РФ. - №95116328/14; заявл. 25.09.1995; опубл. 20.04.1998).

Недостатками способа-прототипа являются:

- способ является трудоемким за счет необходимости выполнения ряда последовательных действий вручную;

- способ является полуколичественным и не может точно определить уровень исследуемого маркера;

- продолжителен во времени (на получение результатов требуется около 24 часов).

Изобретение направлено на повышение точности и упрощение диагностики хронического эндометрита у женщин с АМК.

Указанный технический результат достигается тем, что проводят количественное определение уровня церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений иммунотурбидиметрическим методом и при уровне церулоплазмина, равном и выше 850 мг/дл, диагностируют хронический эндометрит.

Новизна изобретения заключается в том, что впервые предлагается диагностика хронического эндометрита у женщин с АМК по определению церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений. Ранее исследования супернатанта менструальных выделений женщин с АМК на церулоплазмин с целью диагностики воспалительных процессов матки не проводились.

Церулоплазмин представляет собой белок с молекулярной массой около 150000 дальтон, содержит 8 ионов Cu⁺ и 8 ионов Cu²⁺. Главный медьсодержащий белок плазмы относится к альфа-2-глобулинам; на его долю приходится 3% общего содержания меди в организме и свыше 95% меди сыворотки. Церулоплазмин обладает выраженной оксидазной активностью; в плазме он также ограничивает освобождение запасов железа, активирует окисление аскорбиновой кислоты, норадреналина, серотонина и сульфгидрильных соединений, а также инактивирует активные формы кислорода, предотвращая перекисное окисление липидов. Церулоплазмин является белком острой фазы (период полураспада 6 сут), поэтому возрастание его уровня наблюдается у больных с острыми и хроническими инфекционным заболеваниями (Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. - М.: Медицина, 2000, с. 124-125).

Способ осуществляется следующим образом. Менструальные выделения получают путем аспирации содержимого полости матки зондом Пайпеля и центрифугируют в течение 10 минут с частотой 3000 об/мин. Надосадочную жидкость в количестве 1,5 мл переливают в пробирку эппендорфа. Определение уровня церулоплазмина осуществляется с помощью набора реагентов фирмы SENTINEL DIAGNOSTICS для количественного определения церулоплазмина в сыворотке и плазме крови иммунотурбидиметрическим методом и автоматического планшетного анализатора для ИФА фирмы ELISYS UNO. Для калибровки используется калибратор плазменных белков Plasmoproteins Cal фирмы SENTINEL DIAGNOSTICS в разведениях 1, 1:2, 1:4, 1:8. Автоматизированно измеряется оптическая плотность проб. Автоматизированно выстраивается калибровочная зависимость путем откладывания по оси X значения концентраций для каждого разведения калибратора, а по оси Y - значения оптической плотности соответствующего разведения. Концентрация в пробах определяется при помощи калибровочного графика по значению оптической плотности пробы. При уровне церулоплазмина, равном или выше 850 мг/дл, диагностируют хронический эндометрит.

Существенными отличиями заявленного способа от способа-прототипа являются:

во-первых, предложен диагностический параметр в виде церулоплазмина в супернатанте менструальной крови, соответствующий при хроническом эндометрите 850 мкг/мл и выше;

во-вторых, используется количественный метод исследования, что повышает точность полученных данных;

в-третьих, результаты исследования могут быть получены в течение 1-2 часов;

в-четвертых, способ определения уровня церулоплазмина является полностью автоматизированным и требует минимальной затраты рабочего времени врача-лаборанта.

Предлагаемый способ был успешно апробирован в гинекологическом отделении Александро-Мариинской Областной клинической больницы в 2011-2014 гг. Обследованы 68 больных с АМК в возрасте от 18 до 44 лет (31,7±6,4 год).

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример №1.

История болезни №893.

Больная Ш., 40 лет в экстренном порядке поступила в гинекологическое отделение Областной Александро-Мариинской клинической больницы с диагнозом: Аномальное маточное кровотечение.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 12 лет по 3-4 дня, цикл 25 дней, регулярные, умеренные, безболезненные. В анамнезе 2 беременности, из которых 1 завершилась родами, 1 артифициальный аборт.

Гинекологическая патология.

Хронический эндометрит. В анамнезе бесплодие 1.

Сопутствующая патология.

Гипертоническая болезнь, ожирение III степени.

Объективно: Молочные железы без патологии.

P.V. Наружные половые органы развиты правильно. Слизистая влагалища бледно-розового цвета. Шейка матки цилиндрическая, эпителий не изменен. Наружный зев щелевидный, закрыт. Матка в anteversio, не увеличена. Придатки с обеих сторон не пальпируются, область их безболезненная.

УЗИ органов малого таза от 21.03.2012 г.

Матка размерами 50×44×61 мм, контур ровный. Полость расширена до 4 мм. В полости лоцируются сгустки крови. В Дугласовом пространстве жидкость 6 мм. М-эхо 12 мм. Яичники не лоцируются.

21.03.2012 г. выполнена аспирация содержимого полости матки зондом Пайпеля.

21.03.2012 г. выполнено раздельное диагностическое выскабливание стенок полости матки и цервикального канала.

Результат гистологического исследования (получен 04.04.2012 г.).

Лейкоцитарная инфильтрация эндометрия.

Согласно заявленному способу было проведено определение уровня церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений.

Уровень церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений 1248,12 мг/дл (результат получен 21.03.2012 г.).

Заключение: Аномальное маточное кровотечение. Хронический эндометрит

Пример №2.

История болезни №18501.

Больная Д., 25 лет в экстренном порядке поступила в гинекологическое отделение Областной Александро-Мариинской клинической больницы с диагнозом: Аномальное маточное кровотечение. Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 12 лет по 5 дней, цикл 30 дней, регулярные, умеренные, безболезненные. В анамнезе 2 беременности, из которых 1 завершилась родами, 1 самопроизвольный выкидыш.

Гинекологические заболевания.

Хронический двусторонний аднексит.

Сопутствующая патология.

Лекарственная аллергия, хронический гастрит, вегетососудистая дистония.

Объективно: Молочные железы без патологии.

P.V. Наружные половые органы развиты правильно. Слизистая влагалища бледно-розового цвета. Шейка матки цилиндрическая, эпителий не изменен. Наружный зев щелевидный, закрыт. Матка в anteversio, не увеличена. Придатки с обеих сторон не пальпируются, область их безболезненная.

УЗИ органов малого таза от 06.06.2012 г.

Матка размерами 51×43×52 мм. Шейка матки 41×34 мм, неоднородной структуры, лоцируются множественные кисты эндоцервикса. М-эхо 20 мм, неоднородной структуры с жидкостными зонами. Правый яичник 34×23×25 мм, фолликулы 4,5 мм. Левый яичник 53×32×33 мм, объемом 29,8 мм³, подпаян к матке.

06.06.2012 г. выполнена аспирация содержимого полости матки зондом Пайпеля.

06.06.2012 г. выполнено раздельное диагностическое выскабливание стенок полости матки и цервикального канала.

Результат гистологического исследования (получен 18.06.2012 г.).

Эндометрий в фазе инволюции.

Согласно заявленному способу было проведено определение уровня церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений.

Уровень церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений 858,73 мг/дл (результат получен 06.06.2012 г.).

Заключение: Аномальное маточное кровотечение. Хронический эндометрит. Хронический двусторонний аднексит.

Пример №3.

История болезни №4591.

Больная Ж., 39 лет в экстренном порядке поступила в гинекологическое отделение Областной Александро-Мариинской клинической больницы с диагнозом: Аномальное маточное кровотечение.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 12 лет по 5 дней, цикл 30 дней, регулярные, обильные, болезненные. В анамнезе 3 беременности, из которых 2 завершились родами, 1 артифициальный аборт.

Гинекологические заболевания.

Миома матки.

Сопутствующая патология.

Гипертиреоз.

Объективно: Молочные железы без патологии.

P.V. Наружные половые органы развиты правильно. Слизистая влагалища бледно-розового цвета. Шейка матки цилиндрическая, эпителий не изменен. Наружный зев щелевидный, закрыт. Матка в anteversio, увеличена до 8 недель беременности. Придатки с обеих сторон не пальпируются, область их безболезненная.

УЗИ органов малого таза от 21.01.2013 г.

Матка размерами 78×62×69 мм. Структура миометрия неоднородная, лоцируются множественные миоматозные узлы. М-эхо 6 мм. Придатки с обеих сторон без особенностей.

21.01.2013 г. выполнена аспирация содержимого полости матки зондом Пайпеля.

21.01.2013 г. выполнено раздельное диагностическое выскабливание стенок полости матки и цервикального канала.

Гистологическое исследование (получено 02.02.2013).

Эндометрий в фазе пролиферации.

Согласно заявленному способу было проведено определение уровня церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений.

Уровень церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений 428,17 мг/дл (результат получен 21.01.2013 г.).

Заключение: Аномальное маточное кровотечение. Миома матки. Признаков хронического эндометрита не выявлено.

Предлагаемый способ диагностики хронического эндометрита у женщин АМК позволяет в короткие сроки, на малых объемах биологических жидкостей и высокой диагностической чувствительностью оценить характер патологического процесса, определить оптимальный объем лечения. Кроме того, данный способ может быть использован в качестве скринингового метода для выявления групп риска по возникновению АМК, наличию воспалительных процессов женской репродуктивной системы в условиях женской консультации. Ценность данного способа значительно повышается при его сочетании с ультразвуковым и гистологическим исследованиями.

Кроме того, при помощи данного способа повышается чувствительность диагностики воспалительных процессов гениталий на 26,9% по сравнению с гистологическим методом и на 14% по сравнению с определением уровня РАЛ-2 в менструальной крови и составляет 90,9%.

Заявленный способ способствует более точной диагностике воспалительных процессов гениталий у женщин с АМК и назначению правильной этиопатогенетической терапии.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики хронического эндометрита у женщин с аномальными маточными кровотечениями. Сущность способа состоит в том, что исследуют биологическую жидкость, проводят количественное определение уровней церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений иммунотурбидиметрическим методом. При значении церулоплазмина, равном или выше 850 мг/дл, диагностируют хронический эндометрит. Использование заявленного способа позволяет с высокой точностью диагностировать хронический эндометрит у женщин с аномальными маточными кровотечениями. 3 пр.

Способ диагностики хронического эндометрита у женщин с аномальными маточными кровотечениями путем биохимического исследования биологических жидкостей, отличающийся тем, что проводят количественное определение уровня церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений иммунотурбидиметрическим методом и при уровне церулоплазмина, равном или выше 850 мг/дл, диагностируют хронический эндометрит.