СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОККЛЮЗИРУЮЩИХ ПОРАЖЕНИЙ СОСУДОВ У ПАЦИЕНТОВ С СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к сердечно-сосудистым заболеваниям, и может быть использовано для диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями (ССЗ).

Известен способ диагностики поражений сосудов у пациентов с ССЗ путем биохимического исследования уровня общего гомоцистеина (оГци) в плазме крови; при содержании оГци более 10 мкмоль/л судят о возможности сосудистых поражений (Katrusiak A.E., Paterson P.G., Kamencic H., Shoker A., Lyin A.W. Pre-column derivatization high-performance liquid chromatographic method for determination of cysteine, cystenyl-glycine, homocysteine and glutathione in plasma and cell extracts // Journ. Chromatogr. B. Biomed. Sci. Appl. - 2001. - V.758, №.2. - P.207-212).

Недостаток способа: способ не позволяет диагностировать окклюзирующие поражения в сосудах.

Известны исследования, направленные на создание дополнительных лабораторных тестов для диагностики поражения (тромбофилических расстройств) сосудов. К ним относятся исследования генетических полиморфизмов фактора V - мутации Лейдена или мутации G20210A протромбина (Dahlback В. Inherited resistance to activated protein С, a major cause of venous thrombosis, is due to a mutation in the factor V gene // Haemostasis. - 1994. - Vol.24. - P.139), а также других генетических маркеров тромбофилий, таких, как МТГФР и полиморфизма 4G/5G ингибитора активатора плазминогена (Akar N., Akar E., Akcay R., Avcu F., Yalcin A., Cin S. Effect of methylenetetrahydrofolate reductase 677 C-T, 1298 A-C, and 1317 T-C on factor V 1691 mutation in Turkish deep vein thrombosis patients // Thromb Res. - 2000. - Vol.97. - P.163-167).

Недостатком этих исследований является отсутствие практических критериев, которые можно было бы использовать в качестве маркеров окклюзирующих поражений сосудов пациентов с ССЗ.

Известен способ диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с ССЗ путем дуплексного ультразвукового исследования - ДУЗИ (Национальные рекомендации по ведению пациентов с сосудистой артериальной патологией (Российский согласительный документ). Часть 1. Периферические артерии. - М.: Изд-во НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН, 2010. - 176 с.). Этот способ принят авторами за прототип.

Недостатком прототипа является то, что каждое исследование направлено на диагностику конкретного сосуда, при этом отсутствует критерий, позволяющий диагностировать состояние сосудов организма в целом.

Техническим результатом изобретения является расширение арсенала средств диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с ССЗ, возможность выявления окклюзирующих состояний сосудов организма в целом.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с сердечнососудистыми заболеваниями, согласно изобретению, определяют уровень общего гомоцистеина в крови, наличие мутаций полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы, Лейденовской мутации G1691A в гене фактора V, мутаций полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа и учитывают возраст пациента, затем рассчитывают значение дискриминантной функции по формуле:

D=-0,531×В-15,466×MTHFR+19,0338·FV Leiden+0,9814·(PAI-1)+0,89·оГци-18,266,

где:

где B - возраст пациента, лет;

MTHFR - мутация полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы: 0 - норма, 1 - гетерозигота по мутации, 2 - гомозигота по мутации;

FV Leiden - Лейденовская мутация G1691A в гене фактора V: 0 - норма, 1 - гетерозигота по мутации, 2 - гомозита по мутации.

PAI-1 - мутация полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа: 0 - норма, 1 - гетерозигота по мутации, 2 - гомозигота по мутации;

оГци - уровень общего гомоцистеина, мкмоль/л;

и при значении D>0 диагностируют наличие окклюзирующих поражений сосудов, а при D<0 - отсутствие.

Предлагаемый способ основан на анализе результатов исследования 46 пациентов с ССЗ, страдающих поражением сосудов всего организма различной степени тяжести. Для исследования были сформированы две группы пациентов. Первую группу (21 человек) составили пациенты с окклюзирующими поражениями сосудов организма различной локализации (легочных артерий, коронарных артерий, глубоких вен нижних конечностей, брахиацефальных артерий, сосудов сетчатки, брызжеечных артерий брюшной полости). Вторую группу (25 человек) составили пациенты без окклюзирующих поражений сосудов с гемодинамически незначимыми сосудистыми поражениями в виде эндотелиальных расстройств и/или гемодинамически незначимых стенозов. Возраст пациентов первой группы составлял 45,7±14,03 лет, возраст пациентов второй группы - 59,5±8,9 лет. По гендерному распределению в обеих группах преобладали мужчины. В первой группе - 15 мужчин и 6 женщин; во второй группе - 13 мужчин и 12 женщин. Диагнозы заболеваний всех пациентов были верифицированы клинически и с помощью методов нейровизуализации: магнитно-резонансной томографии и/или спиральной компьютерной томографии головного мозга в ангиорежиме. Дополнительно выполнялись ультразвуковая диагностика брахиоцефальных артерий (УЗДГ БЦА), транскраниальная допплерография (ТКДГ), дуплексное ультразвуковое исследование (ДУЗИ) сосудов нижних конечностей, сосудов головного мозга и шеи. Исследование неврологического статуса проводилось по методике проведения неврологического осмотра (Скоромец А.А., Скоромец Т.А. Топическая диагностика заболеваний нервной системы: Руководство для врачей. - 3-е изд., испр. и доп. - СПб.: Политехника, 2000. - 399 с.: ил).

Для выявления наиболее значимых корреляционных связей в патологии поражения сосудов были исследованы 25 показателей, в том числе: возраст, наличие сопутствующих хронических заболеваний сердечнососудистой, дыхательной, эндокринной систем, наличие неврологических синдромов, оГци, полиморфизм L 33 P (Т>С) гена рецептора тромбоцитов (ITGB3) (гликопротеин 3 а), полиморфизм 807 C>Т (F224F) гена рецептора тромбоцитов (ITGA2), полиморфизм С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы (MTHFR), мутация G1691A (Arg506Gln) в гене фактора V (FV Leiden), полиморфизм 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа (PAI-1), полиморфизм 455 G/A гена фибриногена (FCB).

В результате проведения дискриминантного анализа наиболее значимыми оказались следующие переменные: возраст пациента, мутация полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы, Лейденовская мутация G1691A в гене фактора V, мутация полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа (PAI-1) и уровень общего гомоцистеина.

Процент правильной классификации (точность диагностики) составил 88,4%; для группы с окклюзирующими поражениями сосудов - 96,7%; для группы с гемодинамически незначащими стенозами - 78,7%.

Способ осуществляют, например, следующим образом.

После проведения клинического исследования и неврологического осмотра (Скоромец А.А., Скоромец Т.А. Топическая диагностика заболеваний нервной системы: Руководство для врачей. - 3-е изд., испр. и доп. - СПб.: Политехника, 2000. - 399 с.: ил) пациента с ССЗ направляют на лабораторное исследование. Выполняют исследование о Гци в плазме крови с помощью ВЭЖХ-анализа на хроматографе Agilent 1100 с фотометрическим детектированием (Лабораторная диагностическая технология выявления гипергомоцистеинемии». Жлоба А.А., Блашко Э.Л., Никитина В.В., № ФС 2009/309 от 04.09.09). Проводят генетическое исследование для выявления мутаций полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы, Лейденовских мутаций G1691A в гене фактора V, мутаций полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа. Затем по результатам проведенных исследований, с учетом возраста пациента рассчитывают значение дискриминантной функции по формуле:

D=-0,531×B-15,466×MTHFR+19,0338·FV Leiden+0,9814·(PAI-1)+0,89·оГци-18,266

и при значении D>0 диагностируют наличие окклюзирующих поражений сосудов, а при D<0 - отсутствие.

Способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациент В., 64 г. Диагноз: энцефалопатия смешанного генеза (дисциркуляторная, дисметаболическая). Начальные атеросклеротические расстройства церебральных артерий. Варикозная болезнь вен нижних конечностей. Гипергомоцистеинемия умеренной степени тяжести. Выполнено исследование предлагаемым способом. Биохимическое исследование плазмы крови: уровень оГци - 14,2 мкмоль/л.

Молекулярно-генетическое исследование:

наличие мутаций полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы - норма (MTHFR=0),

наличие Лейденовских мутаций G1691A в гене фактора V - норма (FV Leiden=0),

наличие мутаций полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа - норма (PAI-1=0).

Значение дискриминантной функции по формуле, с учетом возраста:

D=-0,531×В-15,466×MTHFR+19,0338·FV Leiden+0,9814·(PAI-1)+0,89·оГци-18,266

D=-39,612; D<0 - диагностируют отсутствие окклюзирующих поражений сосудов, что было подтверждено УЗДГ сосудов нижних конечностей, магистральных артерий организма.

Пример 2. Пациентка М., 46 лет. Диагноз: Варикозная болезнь вен нижних конечностей. Остаточные явления после тромбоэмболии мелких ветвей легочной артерии. Сердечная недостаточность II ф.к. по NYHA. Гипертоническая болезнь III ст, АГ 3 ст, риск ССО 3. Дисциркуляторная энцефалопатия I ст. Гипергомоцистеинемия умеренной степени тяжести.

Выполнено исследование предлагаемым способом. Биохимическое исследование плазмы крови: уровень оГци - 18,5 мкмоль/л.

Молекулярно-генетическое исследование:

наличие мутаций полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы - гетерозигота (MTHFR=0)

Лейденовских мутаций G1691A в гене фактора V - обнаружена гомозигота (FV Leiden=2)

мутаций полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа - не обнаружено (PAI-1=0).

Значение дискриминантной функции по формуле, с учетом возраста:

D=-0,531×B-15,466×MTHFR+19,0338·FV Leiden+0,9814·(PAI-1)+0,89·оГци-18,266

D=11,84; D>0 - диагностируют наличие окклюзирующих поражений сосудов организма. Диагноз заболевания верифицирован с помощью клинического исследования, результатов ультразвуковой диагностики сосудов нижних конечностей, компьютерной томографии грудной клетки. УЗДГ сосудов нижних конечностей: несостоятельность клапанного аппарата глубоких вен нижних конечностей. Компьютерная томография грудной клетки: тромбоэмболия мелких ветвей легочной артерии с двух сторон.

Пример 3. Пациент, 41 г. Диагноз: Гипертоническая болезнь II ст, АГ 2 ст, риск ССО 3. ИБС, стенокардия напряжения 2 ф. класса. Дисциркуляторная энцефалопатия II ст. Гипергомоцистеинемия умеренной степени тяжести. Выполнено исследование предлагаемым способом. Биохимическое исследование плазмы крови: уровень оГци - 15,3 мкмоль/л.

Молекулярно-генетическое исследование:

Лейденовских мутаций G1691A в гене фактора V - обнаружена гомозигота (FV Leiden - 2).

мутаций полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа - не обнаружено (PAI-1=0).

наличие мутаций полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы - гетерозигота (MTHFR=0).

Значение дискриминантной функции по формуле, с учетом возраста:

D=-0,531×B-15,466×MTHFR+19,0338×FVLeiden+0,9814×(PAI-1)+0,89·оГци-18,266 D=11,65; D>0 - диагностируют окклюзирующие поражение сосудов пациента, что было подтверждено выполненными УЗДГ БЦА, ТКДГ. Обнаружено: гемодинамически значимое стенозирование артерий головного мозга (70%), субкритический стеноз.

Предлагаемый способ расширяет арсенал средств диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с ССЗ, дает возможность диагностики окклюзирующих сосудов организма в целом.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями. У пациента определяют возраст, уровень общего гомоцистеина в крови, наличие мутаций полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы, Лейденовской мутации G1691A в гене фактора V, мутаций полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа, затем рассчитывают значение дискриминантной функции по формуле. При значении D>0 диагностируют наличие окклюзирующих поражений сосудов, при D<0 - отсутствие. Изобретение обеспечивает эффективный способ диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями. 3 пр.

Способ диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями, отличающийся тем, что определяют уровень общего гомоцистеина в крови, наличие мутаций полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы, Лейденовской мутации G1691A в гене фактора V, мутаций полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа и учитывают возраст пациента, затем рассчитывают значение дискриминантной функции по формуле:
D=-0,531 × B - 15,466 × MTHFR + 19,0338 × FV Leiden + 0,9814 × (PAI-1) + 0,89 × оГци - 18,266,
где:
где B - возраст пациента, лет;
MTHFR - мутация полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы: 0 - норма, 1 - гетерозигота по мутации, 2 - гомозигота по мутации;
FV Leiden - Лейденовская мутация G1691A в гене фактора V: 0 - норма, 1 - гетерозигота по мутации, 2 - гомозигота по мутации;
PAI-1 - мутация полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа: 0 - норма, 1 - гетерозигота по мутации, 2 - гомозигота по мутации;
оГци - уровень общего гомоцистеина, мкмоль/л;
и при значении D>0 диагностируют наличие окклюзирующих поражений сосудов, а при D<0 - отсутствие.