СПОСОБ ОТБОРА ДОНОРОВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПЛАЗМЫ КРОВИ, ЭФФЕКТИВНОЙ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ПАЦИЕНТОВ С ИНФЕКЦИОННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ И ОСЛОЖНЕНИЯМИ ПОСЛЕ ОПЕРАТИВНЫХ ВМЕШАТЕЛЬСТВ, ТРАВМ И ОЖОГОВ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, в частности к гемотрансфузиологии, и может быть использовано при отборе доноров, для получения плазмы крови, эффективной при лечении пациентов с инфекционными заболеваниями и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов.

Известен способ отбора доноров путем определения бактериальных антител в плазме их крови, широко используемый лабораторными отделениями станций (отделений) переливания крови, в соответствии с планом комплектования и предполагаемых лечебных мероприятий в учреждениях на следующие инфекции с лечебным значимым титром антител:

- антистафилоккоковые в титре 1:1280 и выше;

- антиколибацилярные в титре 1:160 и выше;

- антисинегнойные в титре 1:160 и выше;

- антипротейные в титре 1:160 и выше;

- антиклебсиеллезные в титре 1:160 и выше (А.В. Чечеткин и соавт., 2008 г. / Методические указания «Получение и клиническое применение иммунной плазмы в военно-медицинских учреждениях»).

В практике производственной трансфузиологии использовались два решения вопроса обеспечения иммунной плазмой. Это целенаправленная иммунизация доноров и скрининг антибактериальных антител у доноров, позволяющий выбрать образцы свежезамороженной плазмы с антителами с лечебным титром (титры указаны выше).

Основным показателем отбора образцов плазмы доноров является величина или значимый терапевтический титр антибактериальных антител (AT) для оказания трансфузиологической помощи. Процент обнаружения AT у кадровых доноров варьировал от 12 до 73% и зависел от пола, возраста, времени года и сезонных работ. Контроль активности плазмы доноров со стандартной иммунной сывороткой проводился 1 раз в 3-4 недели. Образцы плазмы в последующем подвергаются хранению. Если проводится заморозка в течение 6 часов после кроводачи, то данная плазма считается замороженной (А.В. Чечеткин и соавт., 2007 г. / Метод. указания - «Организация карантиризации свежезамороженной плазмы в военно-медицинских учреждениях»), а также может быть лиофилизирована в установленные сроки и храниться в сухом состоянии. Ее применение имеет значение в военно-полевых условиях, а также в отдаленных районах от крупных лечебных заведений.

С 2010 года, в связи с отсутствием тестирования на ранее указанные нами инфекции, побудило нас искать новый подход в обследовании доноров с целью определения естественных антибактериальных антител в плазме, крайне необходимых для оказания медицинской помощи и целевого применения донорской плазмы определенной категории больных.

Изыскание высокоэффективных средств терапии и профилактики различных инфекций для службы крови приобретает в настоящее время особую актуальность и неотложную задачу практического здравоохранения.

Применение полииммунной плазмы целесообразно при верифицированной внутригоспитальной инфекции (синегнойная палочка, стафилококк, стрептококк и др., гноеродная флора), ожоговой болезни, осложненной присоединившейся вторичной гнойной инфекцией, и в клинике внутренних болезней (тяжелое течение бактериальной пневмонии, септицемия и пр.).

Недостатками известных способов являются длительность и сложность выявления доноров, а также отсутствие правовой базы практической реализации в клинике указанных выше методов лечения.

Целью изобретения является повышение эффективности лечения пациентов с инфекционными заболеваниями и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов за счет использвания плазмы крови доноров, содержащей антимикробные пептиды (дефензины), которые обладают микробоцидной, хемотаксической, иммуномодулирующей и цитотоксической активностью без проведения намеренной иммунизации доноров.

Цель достигается путем исследования иммунологических показателей крови, причем выявляют содержание антимикробных пептидов дефензинов в плазме и забор крови осуществляют у лиц, в плазме которых они содержатся при титре от 180 до 545 нг/мл - у мужчин, от 128 до 386 нг/мл - у женщин.

Способ реализуется следующим образом.

Проводят исследования иммунологических показателей крови доноров, выявляют содержание антимикробных пептидов дефензинов и забор крови для использования ее при лечении тяжелобольных осуществляют у лиц, в плазме которых они содержатся при титре от 180 до 545 нг/мл - у мужчин, от 128 до 386 нг/мл - у женщин.

Практический пример 1. Донор - И. (мужчина) титр антимикробных пептидов составил 550,6 нг/мл; плазма крови направлена в клинику военно-полевой хирургии для лечения тяжелораненого, доставленного из Дагестана

Практический пример 2. Донор - К. (мужчина) титр антимикробных пептидов составил 33,1 нг/мл; плазма крови направлена в клинику факультетской терапии.

Практический пример 3. Донор - Л. (женщина) титр антимикробных пептидов составил - 228,9 нг/мл; плазма крови направлена в клинику военно-полевой терапии для лечения больного с тяжелым отравлением.

Практический пример 4. Донор - И. (женщина) титр антимикробных пептидов составил 116,1 нг/мл; плазма крови направлена в клинику акушерства и гинекологии.

В настоящее время антимикробные пептиды представляют объект повышенного внимания широкого круга специалистов, в том числе рассматривающих такие соединения, как альтернативу антибиотическим средствам. Чтобы противостоять патогенным микроорганизмам, ученые разрабатывают все новые и новые виды антибиотиков, которые по сути являются производными старых. Антимикробные пептиды уступают антибиотикам по эффективности, но действуют быстрее, разрушая бактерии, невосприимчивые к антибиотикам (Garsia A,E, Osapau G, Tran PA, Yuan J, Selsted ME Infect Immun. 2008 Dec. 76 (12):5883-91).

Пептиды постоянно образуются даже в стабильном состоянии организма. А.Е. Абатуров. Журнал «Здоровье ребенка», 3 (38) 2012 год указывает, что даже при низких концентрациях дефензинов ингибируют аденовирусную инфекцию.

Антимикробные пептиды-дефензины - мультифункциональные катионные пептиды человека и представляют собой короткие молекулы длиной от 12 до 50 аминокислот, имеют среднюю молекулярную массу 4 кД, выполняют сложные функции в поддержании и регулировании иммунного ответа на вирусную, микробную и иную антигенную агрессию на основе прямого воздействия на клеточную мембрану микроорганизма, вызывающего разрушение клетки, а также участие в регулировании процесса презентации антигена.

Лекарственные средства на основе антимикробных антител пока не созданы. В тоже время показатели содержания дефензинов в плазме крови (белка нейтрофилов человека) рассматривается как индикатор наличия высокой иммунозащитной функции.

Б.В. Пинегин, А.С. Будихина в журнале «Иммунология» 2008, №5, стр.317-320 указывают, что антимикробные пептиды (дефензины) являются компонентами иммунной системы и обеспечивают первую линию защиты макроорганизма от разных патогенов.

1. Преимущества метода:

- время исследования 3,5 часа;

- минимальная измеряемая концентрация 156 пг/мл;

- измеряемый диапазон 156-10000 пг/мл;

- объем образца 100 мкл, на лунку;

- доступность тест-систем для исследования.

2. Принцип метода.

Основан на «сэндвич» методе твердофазного иммуноферментного анализа с применением диагностического набора HNP 1-3 (дефензины нейтрофилов) ELISA.

2. Подготовка образцов крови доноров к исследованию требует строжайшего выполнения всех рекомендаций методической инструкции.

Нами обследовано 88 кадровых доноров в возрасте 21-34 года, из которых 81 человек - мужского пола, 7 - женщины.

Полученные образцы крови доноров хранили при +2-4°С. Отделение плазмы проводилось центрифугированием не позже 20 минут после эксфузии крови при 1500 g при +4°С 15 мин. Плазму отбирали в чистые полипропиленовые пробирки, осторожно, не прикасаясь к клеточному осадку. Повторно центрифугировали при тех же режимах. Наиболее достоверные результаты получали при использовании в качестве антикоагулянта гепарин или ЭДТА.

Образцы до исследования хранили при -70°С в полипропиленовых пробирках. Хранение при температуре -20°С отрицательно влияет на извлечение дефензинов HNP 1-3.

Исследования образцов донорской крови проводились через 24 часа после оттаивания и предварительного разведения поставляемым в комплекте буфером и смешивания в полипропиленовых пробирках.

Подготовка реагентов, проведение процедуры исследования выполнялось в соответствии с инструкцией.

Из 81 обследованных мужчин у 20 выявлены дефензины HNP 1-3 от 180 до 545 нг/мл - 24,7%, у 2 женщин - от 128 до 386 нг/мл - 28,5%.

Изобретение относится к медицине, а именно к гемотрансфузиологии, и может быть использовано при отборе доноров, для получения плазмы крови. Для этого получают плазму крови, выявляют в ней антимикробные пептиды дефензины. При титре дефензинов у мужчин от 180 до 545 нг/мл и у женщин - от 128 до 386 нг/мл отбирают донора для получения плазмы крови. Изобретение позволяет использовать донорскую плазму при лечении пациентов с инфекционными заболеваниями и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов.

Способ отбора доноров для получения плазмы крови путем исследования иммунологических показателей крови, отличающийся тем, что в плазме выявляют содержание антимикробных пептидов дефензинов и при титре дефензинов от 180 до 545 нг/мл - у мужчин и от 128 до 386 нг/мл - у женщин осуществляют забор крови.