СПОСОБ ОТБОРА ДОНОРОВ КРОВИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПЛАЗМЫ С ЦЕЛЬЮ ЛЕЧЕНИЯ ПАЦИЕНТОВ С ИНФЕКЦИОННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ И ОСЛОЖНЕНИЯМИ ПОСЛЕ ОПЕРАТИВНЫХ ВМЕШАТЕЛЬСТВ, ТРАВМ И ОЖОГОВ Российский патент 2016 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к области медицины, в частности к трансфузиологии, и может быть использовано при отборе доноров с целью получения плазмы крови, эффективной при лечении пациентов с различными инфекционными заболеваниями, внутригоспитальной инфекцией и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов.

Ранее, до 2010 г., в России проводился отбор доноров путем определения бактериальных антител в лечебном титре в плазме крови на широко распространенные в лечебных учреждениях инфекции:

- антистафилокковые;

- антиколибациллярные;

- антисинегнойные;

- антипротейные;

- антиклебсиеллезные (А.В.Чечеткин и соавт., Методические указания «Получение и клиническое применение иммунной плазмы в военно-медицинских учреждениях», СПб, ВМедА, 2008 г.).

С 2010 г., в связи с отсутствием диагностикумов для тестирования на ранее указанные инфекции, побудило искать новый подход для поиска естественных антибактериальных белков в плазме крови доноров, что крайне необходимо для оказания медицинской помощи и целевого применения плазмы определенной категории больных.

Известен способ получения вакцины на основе живых личинок нематод рода trichinella railliet (1895) для иммунизации животных и человека, применение молока животного, иммунизированного этой вакциной, в качестве средства для профилактики и лечения заболеваний иммунной системы, способ получения сыворотки из крови иммунизированных животных и способ профилактики и лечения заболеваний иммунной системы с помощью такой сыворотки (патент на изобретение RU №2506088).

Применение полииммунной плазмы целесообразно при верифицированной внутригоспитальной инфекции, ожоговой болезни, осложненной присоединившейся вторичной гнойной инфекции и в клинике внутренних болезней (тяжелое течение бактериальной пневмонии, септицемия, трофические язвы при сахарном диабете и пр.).

Целью изобретения является расширение арсенала средств и повышение эффективности лечения пациентов с инфекционными заболеваниями и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов.

Цель данного изобретения достигается путем исследования иммунологических показателей крови, причем выявляют содержание бактерицидного белка, увеличивающего проницаемость мембран клеток возбудителей гемоконтактных инфекций; забор крови осуществляют у лиц, в плазме которых (по данному решению) он содержится в концентрации более 1,5 нг/мл у мужчин и более 1,0 нг/мл у женщин.

Антимикробные белки, увеличивающие проницаемость мембран клеток возбудителей гемоконтактных инфекций (GENERAL SUBJECT:BACTERICIDAL PERMEABILITY-INCREASING PROTEIN), имеют Мм=55 kDa, содержатся в первичных гранулах полиморфноядерных лейкоцитов и составляют от 0,5 до 1% общего белка нейтрофилов человека.

Способ реализуется следующим образом.

Проводят исследования иммунологических показателей крови доноров, выявляют содержание бактерицидного белка, увеличивающего проницаемость мембран клеток возбудителей гемоконтактных инфекций. Затем осуществляют забор крови у лиц, в плазме которых он содержится выше принятого порогового показателя.

В настоящее время бактерицидные белки, повышающие проницаемость клеток, представляют объект повышенного внимания широкого круга специалистов, в том числе рассматривающих такие соединения как альтернативу антибиотическим средствам и (или) усиливающих их действие. Учеными разрабатываются все новые и новые антибиотики, которые по сути являются производными старых, чтобы противостоять патогенным микроорганизмам на современном этапе достижений медицины (Garcia А.Е., Osapau G., Tran P.A.,Yuan J. Selsted ME Infect Immun / 2008 Dec. 76 (12): 5883-91). Естественно, бактерицидные белки, увеличивающие проницаемость мембран клеток возбудителей гемоконтактных инфекций, уступают современным антибиотикам по эффективности, но действуют они быстрее путем разрушения бактерий, а также потенцируют действие применяемых антибиотиков.

В 2012 г. ВОЗ описала устойчивые бактерии как «глобальную угрозу для здравоохранения, затрагивающую все страны мира», и эксперты согласны, что кризис только усугубляется.

Проницаемость биологических мембран - важнейшее свойство, заключающееся в их способности пропускать в клетку и из нее различные метаболиты, что имеет определяющее значение для осморегуляции и поддержании постоянства состава клетки, ее физико-химический гомеостаз.

Бактерицидный белок, увеличивающий проницаемость клеток, - это микробицидный белок, который присутсвует в азурофильных гранулах полиморфноядерных лейкоцитов, играет важную роль в генерации и проведении нервного импульса, в энергообеспечении клетки, сенсорных механизмах и др. процессах жизнедеятельности. К особенностям строения бактерицидного белка относится то, что он является осмотическим барьером между клеткой и внешней средой и подтверждает единство и взаимосвязь между структурой и функцией на молекулярном уровне и регулируется гормонами и биологически активными веществами (Гершанович В.Н. / Биологические мембраны. - М., 1973).

Данный белок связывает липополисахариды и быстро секретируется полиморфноядерными лейкоцитами в ответ на появление липополисахаридов или бактерий. Было доказано, что белок, увеличивающий проницаемость мембран, связывается с липополисахаридами с высокой аффинностью, индуцируя тем самым гибель бактерий, и ингибирует агрессивные эффекты липополисахаридов.

Лекарственные средства на основе данных антимикробных белков пока не созданы. Но, в то же время, показатели содержания антимикробных белков в плазме крови рассматриваются как индикатор наличия высокой иммунозащитной функции.

Б.В. Пинегин, А.С. Будихина в журнале «Иммунология», 2008, №5, указывают, что антимикробные белки являются компонентами иммунной системы и обеспечивают первую линию защиты макроорганизма от различных гемоконтактных патогенов.

1. Преимущества метода:

- время исследования - около 4 часов;

- минимальная измеряемая концентрация - 0,1 нг/мл;

- измеряемый диапазон - до 25 нг/мл;

- объем образца - 100 мкл;

- доступность диагностических тест-систем.

2. Принцип метода.

Основан на «сендвич-методе» твердофазного иммуноферментного анализа с применением диагностического набора Human BPI Elisa test KIT.

3. Подготовка образцов крови доноров к исследованию требует строжайшего выполнения всех рекомендаций методической инструкции - от разведения, применения требуемых пробирок до раскапывания исследуемого биологического материала.

Нами обследовано 88 кадровых доноров в возрасте 21-34 г., из которых 81 человек - мужского пола, 7 - женского.

Полученные образцы крови доноров немедленно дважды центрифугировали при +4°C, чтобы предотвратить контаминацию плазмы балластными лейкоцитами. Полученные образцы крови до исследования хранились в холодильнике при -70°C.

Исследование образцов крови доноров проводили через 24 ч после оттаивания.

Подготовка реагентов, проведение процедуры исследования выполняли в соответствии с инструкцией, прилагаемой к набору.

Из 81 обследованных мужчин у 12 выявлен белок, повышающий проницаемость клеток от 4,6 до 6,7 нг/мл - 14,8%, и у 1 женщины 3,1 нг/мл 1.4%.

Изобретение относится к области медицины, в частности трансфузиологии, и результаты его будут востребованы в практической медицине. Способ касается отбора доноров для получения плазмы крови с целью лечения пациентов с инфекционными заболеваниями и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов, путем исследования иммунологических показателей крови. Исследуют содержание бактерицидного белка, увеличивающего проницаемость клеточных мембран, и забор крови осуществляют у лиц, в плазме крови которых его концентрация составляет более 1,5 нг/мл у мужчин и более 1,0 нг/мл у женщин. Изобретение обеспечивает повышение эффективности лечения пациентов с инфекционными заболеваниями и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов.

Способ отбора доноров для получения плазмы крови с целью лечения пациентов с инфекционными заболеваниями и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов путем исследования иммунологических показателей крови, отличающийся тем, что исследуют содержание бактерицидного белка, увеличивающего проницаемость клеточных мембран, и забор крови осуществляют у лиц, в плазме крови которых его концентрация составляет более 1,5 нг/мл у мужчин и более 1,0 нг/мл у женщин.