СПОСОБ СНИЖЕНИЯ ГОРМОНАЛЬНО ОБУСЛОВЛЕННОГО ИММУНОСУПРЕССИВНОГО ЭФФЕКТА КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА ГОМЕОПАТИЧЕСКИМИ ПРЕПАРАТАМИ in vitro Российский патент 2015 года по МПК A61K35/14 A61P43/00 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в лабораторной работе для снятия иммуносупрессивного эффекта гормональных стероидных препаратов при изучении клеточного иммунитета животных.

Известен «Модулятор клеточного иммунитета» (патент РФ №2146528, кл. A61K 35/78 от 20.03.2000), включающий приготовление растительного экстракта из свежих листьев Geranium robertanium, сухих листьев Plantago lanceolata и сухих листьев Calendula officinales. Листья настаивают в течение 8 дней при комнатной температуре, при одно- или многократных ежедневных помешиваниях.

Недостатком известного способа является длительность срока приготовления препарата (до 15 дней), необходимость наличия лабораторных животных и ограниченный срок его хранения.

Ближайшим техническим решением к данному изобретению является способ оценки клеточного иммунитета в опсонофагоцитарной реакции (ОФР) нейтрофилов крупного рогатого скота, которую проводили по методике (Оценка естественной резистентности сельскохозяйственных животных: Метод, рекомендации / Россельхозакадемия, Сиб. Отд-ие, ГНУ ИЭВС и ДВ, ГНУ ВИЕВ, ФГОУ НРИПК АПК МСХ РФ, НГАУ. - Новосибирск, 2003. - 32 с.). Оценку снижения иммуносупрессивного влияния препарата глюкортин клеточного иммунитета учитывали по изменению фагоцитарной активности (ФА) нейтрофилов, фагоцитарного числа (ФЧ) нейтрофилов, фагоцитарного индекса (ФИ) нейтрофилов, фагоцитарной емкости (ФЕ) нейтрофилов и переваривающей способности крови (ПСК).

Задача изобретения - расширение арсенала способов снижения гормонально обусловленного иммуносупрессивного эффекта клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами в условие in vitro.

Указанная задача достигается тем, что в способе снижения гормонально обусловленного иммуносупрессивного эффекта клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами in vitro, включающем использование лейкоцитарной взвеси, гомеопатического и гормонального препаратов, разведенных в физиологическом растворе в выбранном разведении (Д15, С6, С12, С30, С200), согласно изобретению, к лейкоцитарной взвеси в объеме 0,5 мл добавляют 0,01 мл гормонального препарата (Глюкортин-20), затем полученный раствор помещают в термостат на 2 часа при Т=37±0,5°C, после этого, вносят по 0,5 мл гомеопатического препарата, разведенного в физиологическом растворе в выбранном разведении, раствор вновь помещают в термостат на 4 часа при Т=37±0,5°C, затем вносят взвесь микроорганизмов референтного штамма Staphylococcus albus №182 по 0,5 мл, содержащую 10⁹ КОЕ / в 1 мл физиологического раствора, далее помещают в термостат на 30 минут при Т=37±0,5°C, после инкубации, мазки крови фиксируют в спирт-формалине 1:9 (40% раствор формалина и 96° спирт) в течение 10 минут и окрашивают по Романовскому-Гимза в течение 30 минут.

Для определения достоверности полученные результаты сопоставляли с результатами исследований в контрольных группах. В 1-й контрольной группе использовали глюкортин и 0,85% водный раствор NaCl, во 2-й контрольной группе использовали 0,85% водный раствор NaCl. Оценку роста показателя активности клеточного иммунитета проводили по отношению к показателям контрольных групп.

Пример. Снижение гормонально обусловленного иммуносупрессивного эффекта клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами показало, что при применении 30% исследуемых препаратов в зависимости от вида и степени разведения, отмечен рост или тенденция к росту показателя (ФИ, ФЧ нейтрофилов). Так, активацию клеточного иммунитета (ФИ и ФЧ) наблюдали при контакте с Фитолаккой (С6, С200) от 57,6 до 120%, с Фенугросци (С6, С12) от 30 до 49%, с Ипекакуана (С6, С200) от 17 до 32% относительно контрольной группы (табл.1).

Таблица 1 №п/п Название препаратов и степень разведения Влияние гомеопатических средств на показатели ОФР нейтрофилов относительно контрольных групп, % ФА ФЕ ФИ ФЧ ПСК 1 Фитолакка С6 6 3,8 66 57,6 8,6 2 Фитолакка С200 8,6 4 120 119 15,4 3 Арсеникум альбум С6 76,9 95,4 0,8 0,8 80 4 Арсеникум альбум С30 139 107 0,4 -0,4 133 5 Арсеникум альбум С200 221,7 180 0 0 36 6 Лахезис Д15 73,9 42,3 0 0 100 7 Лахезис С12 61,5 54,5 -2 -2 40 8 Лахезис С30 100 76,9 2 2 125 9 Лахезис С200 204 154 0,8 1,2 183,3 10 Аконит С6 192 59 -3,2 -3,2 36 11 Аконит С12 60 68,2 -2,8 -0,8 48 12 Аконит С200 3,8 34,6' -0,8 -2 66,6 13 Белладонна С30 27 56 13 34 56 14 Нукс вомика С6 46 59 50 17 12 15 Фенугросци С6 78 86 37 30 16 16 Фенугросци С12 ПО 34 49 40 27 17 Кониум С30 98 120 34 56 11 18 Арника С12 61 59 12 33 39 19 Ипекакуана С6 47 56 28 17 23 20 Ипекакуана С200 28 41 32 29 31

Снижение иммуносупрессивного эффекта гормоносодержащего препарата (Глюкортин) на клеточный иммунитет гомеопатическими лекарственными средствами выражается в стимулирующем влияние показателей ФА и ФЕ нейтрофилов у 20 (100%) исследуемых препаратов. Так, максимальный рост показателей ФА и ФЕ отмечен при применении Фенугросци (С6, С12) от 34 до 110%, Кониума (С30) от 98 до 120%, Аконита (С6, С12) от 59 до 192%, Лахезиса (Д15, С12, С30, С200) от 42,3 до 204%, Арсеникум альбум (С6, С30, С200) от 76,9 до 221,7%.

Снижение гормонально обусловленного иммуносупрессивного эффекта клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами привело к выраженному росту показателя ПСК при одновременном воздействии препарата с различными разведениями. Так, рост показателя ПСК при применение Арсеникум альбум (С6, С30, С200) составил от 36 до 133%, а при использовании Лахезис (С12, С30, С200) - от 40 до 183%.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к аспектам, связанным с клеточным иммунитетом, и описывает способ снижения гормонально обусловленного иммуносупрессивного эффекта клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами in vitro. Способ характеризуется тем, что к лейкоцитарной взвеси добавляют гормональный препарат глюкортин-20, затем после инкубации вносят гомеопатический препарат, разведенный в физиологическом растворе в выбранном из Фитолакка С6 или С200, Арсеникум альбум С6 или С12 или С30 или С200, Лахезис Д15 или С12 или С30 или С200, Аконит С6 или С12 или С200, Белладонна С30, Нукс вомика С6, Фенугросци С6 или С12, Кониум С30, Арника С12, Ипекакуана С6 или С200 разведении, затем после инкубации вносят взвесь микроорганизмов референтного штамма Staphylococcus albus №182, содержащую 10⁹ КОЕ / в 1 мл физиологического раствора, далее после инкубации мазки крови фиксируют в спирт-формалине, взятом в соотношении 1:9, содержащем 40% раствор формалина и 96° спирт в течение 10 минут, и затем окрашивают по Романовскому-Гимза в течение 30 минут. Изобретение может быть использовано в ветеринарной практике для снятия иммуносупрессивного эффекта гормональных стероидных препаратов при изучении клеточного иммунитета животных. 1 табл.

Способ снижения гормонально обусловленного иммуносупрессивного эффекта клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами in vitro, включающий использование лейкоцитарной взвеси, гормонального и гомеопатического препаратов, разведенных в физиологическом растворе, отличающийся тем, что к лейкоцитарной взвеси в объеме 0,5 мл добавляют 0,01 мл гормонального препарата Глюкортин-20, затем полученный раствор помещают в термостат на 2 часа при Т=37±0,5°С, после этого вносят по 0,5 мл гомеопатического препарата, разведенного в физиологическом растворе, в выбранном из Фитолакка С6 или С200, Арсеникум альбум С6 или С12 или С30 или С200, Лахезис Д15 или С12 или С30 или С200, Аконит С6 или С12 или С200, Белладонна С30, Нукс вомика С6, Фенугросци С6 или С12, Кониум С30, Арника С12, Ипекакуана С6 или С200 разведении, затем пробирки вновь помещали в термостат на 4 часа при Т=37±0,5°С, затем вносили взвесь микроорганизмов референтного штамма Staphylococcus albus №182 по 0,5 мл, содержащую 10⁹ КОЕ / в 1 мл физиологического раствора, далее помещали в термостат на 30 минут при Т=37±0,5°С, после инкубации мазки крови фиксировали в спирт-формалине 1:9 40% р-р формалина и 96° спирт в течение 10 минут и окрашивали по Романовскому-Гимза в течение 30 минут.