СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕТРАЦИКЛИЧЕСКИХ ТРИТЕРПЕНОВ В СЫРЬЕ ЧАГИ ИЛИ ПРЕПАРАТЕ ЧАГИ Российский патент 2015 года по МПК A61K36/07 B01D11/02 G01N33/15 

Описание патента на изобретение RU2566067C1

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, может быть использовано для стандартизации сырья чаги и контроля качества лекарственных средств на основе чаги, а именно для количественного определения в них тетрациклических тритерпенов.

Фармакологическая активность сырья чаги и препаратов на его основе обусловлена наличием в них тетрациклических тритерпенов, для которых показана выраженная противоопухолевая активность (Kahlos K. [and others] // Planta Medica. - 1986. - №52. - P. 554, Nakata T. [and others] // Bioorganic & Medicinal Chemistry. - 2007.- V. 15, I. 1. - P. 257-264; M.J. Chung [and others] // Nutrition research and practice. - 2010. - V. 4, №3. - P. 177-182). Содержание тетрациклических тритерпенов в чаге не превышает 1% (Ловягина Е.В., Шиврина А.Н. // Биохимия. - 1962. - Т. 27. - №5. - С. 794-800; Жукович Е.Н. [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 44, №.3. - С. 35-37). Это обуславливает актуальность разработки чувствительных методов их количественного определения с целью стандартизации сырья чаги и препаратов на его основе.

Наиболее близким техническим решением, взятым за прототип, является способ количественного определения тетрациклических тритерпенов в препаратах «Чаги настойка» и «Бефунгин» (Жукович Е.Н. [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 44, №.3. - С. 35-37). В известном способе проводят исчерпывающую экстракцию препарата чаги диэтиловым эфиром при объемном соотношении препарат : растворитель 1:1, затем эфирный экстракт отделяют и обрабатывают 5% раствором едкого натра. После разделения фаз щелочной раствор, содержащий фенольные вещества, удаляют, а остаток эфирного экстракта промывают водой, фильтруют через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия и упаривают под вакуумом досуха с получением фракции, преимущественно содержащей тетрациклические тритерпены. Количественное содержание тетрациклических тритерпенов в полученной фракции определяют спектрофотометрическим методом.

Недостатком данного способа является некорректное определение реального содержания тетрациклических тритерпенов в сырье чаги и препаратах чаги, поскольку диэтиловым эфиром из сырья и препаратов чаги вместе с липофильными веществами (в том числе тетрациклическими тритерпенами) извлекаются фенольные соединения, что затрудняет их дальнейшее определение. Для удаления фенольных веществ полученный экстракт обрабатывают раствором едкого натра. При этом тетрациклические тритерпены частично переходят в щелочной раствор (Шиврина А.Н. // Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. - М. - Л., 1965. - С. 59-64.), что в конечном результате не позволяет определить точное количество тетрациклических тритерпенов.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препаратах чаги, а также упрощение способа за счет исключения стадии удаления фенольных соединений.

Поставленная задача достигается способом, в котором к сырью чаги или препарату чаги добавляют петролейный эфир с температурой кипения 40-70°C при объемном соотношении сырье чаги или препарат чаги : растворитель 1:2, проводят исчерпывающую экстракцию, отделяют органический экстракт, удаляют из него растворитель с получением сухого остатка, в котором определяют количество тетрациклических тритерпенов спектрофотометрическим методом.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение точности количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препаратах чаги за счет максимального избирательного извлечения этих соединений.

Сущность способа заключается в следующем.

В заявляемом способе для исчерпывающей экстракции сырья чаги или препарата чаги используют петролейный эфир с температурой кипения 40-70°C. Выбор петролейного эфира в качестве растворителя обусловлен его селективностью по отношению к гидрофобным компонентам чаги, в том числе и к тетрациклическим тритерпенам. При этом в петролейном эфире, в отличие от диэтилового эфира, не растворяются вещества фенольной природы, содержащиеся в чаге в значительном количестве, что исключает необходимость проведения стадии очистки органического экстракта от фенольных веществ и, следовательно, позволяет предотвратить возможные потери тетрациклических тритерпенов. К тому же, диэтиловый эфир имеет достаточно высокую токсичность и стоимость, что делает применение петролейного эфира в лабораторной практике более рациональным. Объемное соотношение сырье чаги или препарат на его основе : растворитель составляет 1:2, что является оптимальным и позволяет извлечь максимальное количество экстрактивных веществ. Уменьшение количества растворителя приводит к снижению выхода экстрактивных веществ, а увеличение не влияет на выход этих веществ. Полученный органический экстракт, преимущественно содержащий тетрациклические тритерпены, отделяют, удаляют растворитель под вакуумом с получением сухого остатка и определяют в нем количество тетрациклических тритерпенов спектрофотометрическим методом. Избирательное извлечение из сырья чаги или препаратов чаги липофильных соединений (в том числе тетрациклических тритерпенов), исключение дополнительной стадии очистки позволяет увеличить точность определения реального содержания тетрациклических тритерпенов по сравнению со способом-прототипом.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Для анализа использовали стандартизированное сырье чаги и фармацевтические препараты «Бефунгин»:

сырье 1 сырье ООО «КФХ «Кентавр», партия 011209 сырье 2 сырье ООО «Алтай-Фарм», партия 101213 Бефунгин-1 «Бефунгин» ЗАО «Вифитех», серия 060911 Бефунгин-2 «Бефунгин» ОАО «Татхимфармпрепараты», серия 911211

Определение количества тетрациклических тритерпенов во всех примерах проводили спектрофотометрическим методом следующим образом. Сухой остаток, содержащий преимущественно тетрациклические тритерпены, перерастворяли в этиловом спирте. Далее к 1 мл спиртового раствора, содержащего тетрациклические тритерпены, добавляли 1 мл 10% спиртового раствора ванилина (№140821000 Acros Organics) и 5 мл 72% раствора серной кислоты, выдерживали при температуре 60°C в течение 10 мин, охлаждали и измеряли оптическую плотность при длине волны 550±5 нм относительно раствора сравнения (1 мл этилового спирта, 10% спиртовой раствор ванилина и 72% раствор серной кислоты). Расчет количественного содержания тетрациклических тритерпенов проводили по градуировочному графику зависимости оптической плотности растворов ланостерола-стандарта (№S446793-1EA Sigma-Aldrich) от их концентрации (0,016-0,08 мг/мл).

Пример 1 (по способу-прототипу)

К 5 мл Бефунгин-1 приливали 5 мл дистиллированной воды, перемешивали и добавляли 4 раза по 10 мл диэтилового эфира. Органический экстракт отделяли и добавляли к нему 5 мл 5% раствора едкого натра. Щелочной раствор удаляли. К органическому экстракту добавляли 5 мл дистиллированной воды для удаления остатков щелочи и фильтровали через бумажный фильтр с 2,5 г безводного сульфата натрия с целью удаления избытка воды. Из полученного экстракта удаляли растворитель на вакуумном испарителе при 25-30°C с получением сухого остатка, в котором определяли содержание тетрациклических тритерпенов вышеописанным способом.

Примеры 2-4 (по способу-прототипу). Аналогичны примеру 1, отличаются анализируемыми объектами.

Пример 5 (по изобретению)

К 5 мл Бефунгин-1 приливали 5 мл дистиллированной воды, перемешивали и добавляли 20 мл петролейного эфира. Проводили исчерпывающую экстракцию. Органический экстракт отделяли, удаляли растворитель на вакуумном испарителе при 25-30°C с получением сухого остатка, в котором определяли содержание тетрациклических тритерпенов вышеописанным способом.

Примеры 6-8 (по изобретению). Аналогичны примеру 5, отличаются анализируемыми объектами.

Результаты многократно проведенных экспериментов обработаны с помощью программы «Statistica 6.0» и приведены в таблице.

Качественный состав полученных экстрактов определяли методом тонкослойной хроматографии на пластинах «Sorbfil» с использованием двух систем растворителей: для разделения нейтральных липофильных соединений - №1 (петролейный эфир - диэтиловый эфир - уксусная кислота в соотношении 90:10:1, Кейтс М. Техника липидологии / М. Кейтс. - М., 1975. - 324 с.) и для разделения тетрациклических тритерпенов и стериновых веществ - №2 (хлороформ - этанол в соотношении 25:1; Жукович Е.Н. [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 44, №.3. - С. 35-37). Хроматограммы обрабатывали специфичным реагентом на стериновые и тритерпеновые вещества - раствором хлорного железа (Кейтс М. Техника липидологии / М. Кейтс. - М., 1975. - 324 с). Идентификацию веществ проводили по значениям коэффициента распределения (Rf). Присутствие в экстрактах сквалена, ланостерола и эргостерола подтверждено использованием стандартов-метчиков: ланостерол (№S446793-1EA Sigma-Aldrich), сквален (№S3626-10ML Sigma-Aldrich), эргостерол (№117810050 Acros Organics).

Проведенный анализ показал, что все экстракты сырья чаги и препаратов чаги, полученные с использованием диэтилового эфира и петролейного эфира, имеют одинаковый качественный состав и содержат биологически активные вещества - сквален, жирные кислоты, витамины E и K, кофермент Q, стерины и их эфирные формы (ланостерол и его производные, эргостерол). Таким образом, предлагаемый способ при использовании петролейного эфира позволяет извлечь из сырья и препаратов чаги те же липофильные вещества, что и в способе-прототипе при использовании диэтилового эфира.

Как показывают данные таблицы, предлагаемый способ позволяет более точно определить количество тетрациклических тритерпенов в сырье и препаратах чаги за счет избирательного извлечения петролейным эфиром липофильных соединений и исключения потерь тетрациклических тритерпенов. По сравнению со способом-прототипом предлагаемый способ позволяет определить в среднем в 2 раза больше тетрациклических тритерпенов в препаратах чаги и до 10 раз больше - в сырье чаги.

При экстракции препарата «Бефунгин» диэтиловым эфиром авторами (Жукович Е.Н. [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 44, №.3. - С. 35-37) были определены тетрациклические тритерпены в количестве 0,01-0,02 масс.% от абсолютного сухого веса препарата, в то время как содержание указанных соединений, определенное предлагаемым способом, составило 0,17±0,03 масс.%.

Таким образом, количественный анализ тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препаратах чаги по предлагаемому способу в сравнении с прототипом более точен, прост в исполнении, не требует дополнительных стадий очистки и значительно дешевле (в среднем в 4 раза).

Предлагаемый способ определения тетрациклических тритерпенов может быть использован для стандартизации сырья чаги или препаратов чаги на предприятиях фармацевтической промышленности.

Похожие патенты RU2566067C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАКЦИИ ЛИПОФИЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ ЧАГИ 2013
  • Сысоева Мария Александровна
  • Хабибрахманова Венера Равилевна
  • Никитина Светлана Александровна
RU2530636C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАКЦИИ ЛИПОФИЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ ЧАГИ 2013
  • Сысоева Мария Александровна
  • Хабибрахманова Венера Равилевна
  • Никитина Светлана Александровна
RU2522952C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАКЦИИ ФЕНОЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ ЧАГИ 2013
  • Сысоева Мария Александровна
  • Хабибрахманова Венера Равилевна
  • Кыямова Гульнара Илдусовна
RU2530637C1
Ингибитор репликации коронавируса SARS-CoV-2 на основе водного экстракта гриба Inonotus obliquus 2020
  • Теплякова Тамара Владимировна
  • Пьянков Олег Викторович
  • Скарнович Максим Олегович
  • Бормотов Николай Иванович
  • Косогова Татьяна Алексеевна
  • Овчинникова Алена Сергеевна
  • Магеррамова Анастасия Викторовна
  • Потешкина Алевтина Леонидовна
  • Сафатов Александр Сергеевич
  • Филиппова Екатерина Игоревна
RU2741714C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДНЫХ ИЗВЛЕЧЕНИЙ И ПОЛИФЕНОЛОВ ЧАГИ, ОБЛАДАЮЩИХ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 2007
  • Сысоева Мария Александровна
  • Хабибрахманова Венера Равилевна
  • Гамаюрова Валентина Семеновна
  • Зиятдинова Гузель Камилевна
  • Будников Герман Константинович
RU2339390C1
ЭКСТРАКТ ЧАГИ СУХОЙ "ФИТО-ПРОДУКТ" 2004
  • Цой Г.А.
  • Кобиашвили Г.А.
  • Метленкин А.А.
RU2259841C1
ИНГИБИТОР РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА ПЕРВОГО ТИПА 2008
  • Теплякова Тамара Владимировна
  • Гашникова Наталья Матвеевна
  • Пучкова Лариса Ивановна
  • Проняева Татьяна Рудольфовна
  • Косогова Татьяна Алексеевна
RU2375073C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЛАНИНА ИЗ ЧАГИ 2013
  • Сысоева Мария Александровна
  • Хабибрахманова Венера Равилевна
  • Никитина Светлана Александровна
RU2523414C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЛАНИНА ИЗ ЧАГИ 2015
  • Сысоева Мария Александровна
  • Хабибрахманова Венера Равилевна
  • Уразлина Ляйсян Наилевна
RU2582972C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПИРТОВОГО ЭКСТРАКТА ЧАГИ 2007
  • Сысоева Мария Александровна
  • Хабибрахманова Венера Равилевна
  • Гамаюрова Валентина Семеновна
  • Юмаева Ляйсан Рифгатовна
RU2336888C1

Реферат патента 2015 года СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕТРАЦИКЛИЧЕСКИХ ТРИТЕРПЕНОВ В СЫРЬЕ ЧАГИ ИЛИ ПРЕПАРАТЕ ЧАГИ

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препарате чаги. Способ количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препарате чаги включает исчерпывающую экстракцию сырья или препарата петролейным эфиром с температурой кипения 40-70°C при объемном соотношении сырье чаги или препарат чаги:растворитель 1:2, отделение полученного экстракта, удаление органического растворителя и определение количества тетрациклических тритерпенов в полученном сухом остатке спектрофотометрическим методом. Вышеописанный способ повышает точность количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье или препарате чаги за счет максимального избирательного извлечения этих соединений. 1 табл., 8 пр.

Формула изобретения RU 2 566 067 C1

Способ количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препарате чаги, включающий исчерпывающую экстракцию сырья или препарата органическим растворителем, отделение полученного экстракта, удаление органического растворителя и определение количества тетрациклических тритерпенов в полученном сухом остатке спектрофотометрическим методом, отличающийся тем, что сырье или препарат экстрагируют петролейным эфиром с температурой кипения 40-70°C при объемном соотношении сырье чаги или препарат чаги:растворитель 1:2.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2015 года RU2566067C1

Е.Н.ЖУКОВИЧ и др
К вопросу стандартизации препаратов "Чаги настойка" и "Бефунгин" // Химико -фармацевтический журнал
Приспособление для суммирования отрезков прямых линий 1923
  • Иванцов Г.П.
SU2010A1
- Т
Приспособление для плетения проволочного каркаса для железобетонных пустотелых камней 1920
  • Кутузов И.Н.
SU44A1
- С
Скоропечатный станок для печатания со стеклянных пластинок 1922
  • Дикушин В.И.
  • Левенц М.А.
SU35A1
Е.Н.ЖУКОВИЧ и др.Тетрациклические тритерпены чаги, Inonotus obliquus (Pers.) PIL, произрастающей в России.// Химико -фармацевтический журнал
Приспособление для суммирования отрезков прямых линий 1923
  • Иванцов Г.П.
SU2010A1
- Т
Приспособление для плетения проволочного каркаса для железобетонных пустотелых камней 1920
  • Кутузов И.Н.
SU44A1
- С
Видоизменение прибора с двумя приемами для рассматривания проекционные увеличенных и удаленных от зрителя стереограмм 1919
  • Кауфман А.К.
SU28A1
М.А
БУРМАСОВА и

RU 2 566 067 C1

Авторы

Сысоева Мария Александровна

Никитина Светлана Александровна

Хабибрахманова Венера Равилевна

Даты

2015-10-20Публикация

2014-06-27Подача