СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ У БОЛЬНЫХ МИЕЛОМНОЙ БОЛЕЗНЬЮ Российский патент 2016 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и онкологии, и может быть использовано для прогнозирования инфекционных осложнений у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

На сегодняшний день доля миеломной болезни в структуре заболеваемости гемобластозами увеличивается. Миеломная болезнь обусловлена злокачественной пролиферацией плазматических клеток в костном мозге и за его пределами с последующей плазмоклеточной инфильтрацией внутренних органов из-за гиперпродукции моноклонального протеина. Общая продолжительность жизни от момента постановки диагноза и до гибели не превышает 8 лет, в среднем составляя 4,5 года. На первом месте среди причин смертности стоят инфекционные осложнения, которые даже при адекватной антибактериальной терапии не всегда приводят к выздоровлению [1]. Для того чтобы повысить выживаемость больных миеломной болезнью требуется не только эффективная патогенетическая терапия, но и профилактика возникновения инфекционных осложнений на любой стадии заболевания.

Известен способ прогнозирования инфекционных осложнений после химиотерапии у больных острыми лейкозами путем исследования в лимфоцитах крови двух дегидрогеназ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ) и НАДФ-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы (НАДФМДГ). При сочетании активности Г6ФДГ в пределах от 10,02 до 32,74 мкЕ и НАДФМДГ в пределах от 8,29 до 15,37 мкЕ прогнозируют развитие инфекционных осложнений, а при сочетании активности Г6ФДГ в пределах от 0,01 до 4,45 мкЕ и НАДФМДГ в пределах от 0,01 до 3,21 мкЕ прогнозируют отсутствие осложнений [2]. Недостатки известного способа:

- способ не предназначен для применения при миеломной болезни, поскольку миеломная болезнь - это B-лимфопролиферативный гемобластоз, обусловленный опухолевой трансформацией плазматических клеток, и, следовательно, для выделения непатологических лимфоцитов, необходимых для исследования дегидрогеназ, требуется проведение дополнительных молекулярно-генетических исследований;

- способ трудоемкий и затратный, так как требует специального оборудования для проведения биолюминесцентных анализов.

Задачей изобретения является создание информативного способа прогнозирования инфекционных осложнений при миеломной болезни, основанного на анализе регуляторного звена иммунной системы.

Задача достигается тем, что в сыворотке крови больных миеломной болезнью определяют уровни цитокинов, а именно уровни провоспалительных цитокинов - фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-альфа) и интерлейкина-2 (ИЛ-2) и уровень противовоспалительного цитокина - интерлейкина-4 (ИЛ-4). При уровне ФНО-альфа выше 0,5 пг/мл, ИЛ-2 выше 10 пг/мл и ИЛ-4 ниже 0,55 пг/мл прогнозируют развитие инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью.

Возникновение миеломной болезни - сложный патогенетический процесс, отражающий взаимодействие организма с опухолью. Несостоятельность иммунного ответа, в частности, и противоопухолевой защиты в целом зависит от всех звеньев, принимающих в этом участие. Дисфункция регуляторного звена иммунной системы усугубляет течение заболевания, вызывая его прогрессирование. Цитокины, как регуляторы межклеточных взаимодействий в иммунной системе, способствуют активации противоопухолевого иммунного ответа, а также служат связующим звеном между иммунной и другими системами организма. Гуморальная регуляция межклеточных взаимодействий в иммунной системе опосредуется через цитокины, кроме того, многие из них сами являются эффекторами иммунного ответа при опухолевых заболеваниях, при воспалительных процессах и т.д., поэтому использование содержания цитокинов в крови в качестве достоверных маркеров риска развития инфекционных осложнений при миеломной болезни целесообразно. Было доказано, что наиболее значимыми для прогноза развития инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью является повышение уровней провоспалительных цитокинов ФНО-альфа (выше 0,5 пг/мл) и ИЛ-2 (выше 10 пг/мл) и снижение уровня ИЛ-4 (ниже 0,55 пг/мл). При этих уровнях исследуемых цитокинов риск развития инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью следует признавать высоким.

Пороговые значения цитокинов ФНО-альфа, ИЛ-2 и ИЛ-4 получены опытным путем на основании сопоставления данных по количественному содержанию исследуемых цитокинов с данными наблюдений за клиническим состоянием больных миеломной болезнью независимо от стадии заболевания, отражающими развитие у них инфекционных осложнений.

У всех обследуемых больных миеломной болезнью наблюдался дисбаланс между провоспалительными и противовоспалительными цитокинами в виде повышения уровня провоспалительных и снижения уровня противовоспалительных цитокинов. Проведенные исследования показали, что при развитии инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью уровни цитокинов варьировали в пределах: на II стадии заболевания (по Дьюри, Сальмону): ФНО-альфа - от 0,4 до 2 пг/мл, ИЛ-2 - от 7 до 15 пг/мл, ИЛ-4 - от 0,2 до 2 пг/мл; на III стадии заболевания: ФНО-альфа - от 0,8 до 5 пг/мл, ИЛ-2 - от 6 до 15 пк/мл, ИЛ-4 - от 0,1 до 1 пг/мл. При этом в 100% случаев инфекционные осложнения у больных миеломной болезнью независимо от стадии заболевания развивались при заявленных уровнях исследуемых цитокинов (ФНО-альфа выше 0,5 пг/мл, ИЛ-2 выше 10 пг/мл и ИЛ-4 ниже 0,55 пг/мл).

Альфа-фактор некроза опухоли (ФНО-альфа) относится к провоспалительным цитокинам, проявляет избирательную цитотоксичность в отношении некоторых опухолевых клеток, активирует гранулоциты, макрофаги и т.д., транскрипцию других провоспалительных цитокинов, стимулирует пролиферацию и дифференцировку нейтрофилов, фибробластов, эндотелиальных клеток и т.д.

Интерлейкин-2 (ИЛ-2) является плейотропным цитокином, стимулирует пролиферацию и активацию натуральных киллеров и цитотоксических лимфоцитов, способен индуцировать активность практически всех клонов цитотоксических клеток, стимулирует пролиферацию B-лимфоцитов и секрецию иммуноглобулинов.

Интерлейкин-4 (ИЛ-4) - противовоспалительный цитокин, подавляет функцию макрофагов и выработку ими ИЛ-1, ФНО, ИЛ-6, индуцирует дифференцировку T-лимфоцитов в Th2-клетки, стимулирует пролиферацию B-лимфоцитов, тимоцитов и активированных зрелых T-клеток.

Заявленный способ апробирован на 100 больных миеломной болезнью (у 65 больных - II стадия, у 35 - III стадия заболевания), проходивших лечение в гематологическом отделении Краевой клинической больницы №1 г. Красноярска. Содержание цитокинов (ФНО-альфа, ИЛ-2, ИЛ-4) определяли иммуноферментным анализом. У 47 больных были спрогнозированы инфекционные осложнения, которые в дальнейшем подтверждались наблюдением. У двух больных миеломной болезнью прогноз не совпал. Таким образом, отмечено совпадение прогноза в 98,0%.

Способ осуществляется следующим образом.

У больного с диагнозом миеломной болезни, независимо от стадии заболевания, при поступлении в гематологическое отделение забирают венозную кровь из локтевой вены свободным током в пробирку. Из образца выделяют сыворотку. Метод определения основан на «сэндвич» варианте твердофазного иммуноферментного анализа с применением моно- и поликлональных антител к цитокинам ФНО-альфа, ИЛ-2 и ИЛ-4 с использованием коммерческих тест-систем «Вектор-Бест». При сочетании содержания цитокинов: ФНО-альфа выше 0,5 пг/мл, ИЛ-2 выше 10 пг/мл и ИЛ-4 ниже 0,55 пг/мл прогнозируют развитие инфекционных осложнений у больных миеломной болезни.

Клинический пример 1. Больная В., 63 года, поступила на стационарное лечение в гематологическое отделение ККБ №1 г. Красноярска с диагнозом: миеломная болезнь, G-вариант, диффузно-очаговая форма, II стадия. Больная поступила на очередной курс химиотерапии. При поступлении состояние больной средней степени тяжести, беспокоит сильная слабость, боли в костях.

Проведено обследование по заявленному способу. Определены уровни цитокинов в сыворотке крови:

ФНО-альфа 1 пг/мл (выше 0,5 пг/мл) ИЛ-2 13 пг/мл (выше 10 пг/мл) ИЛ-4 0,4 пг/мл (ниже 0,55 пг/мл)

У больной прогнозируют развитие инфекционных осложнений.

В течение недели у больной нарастала слабость, появились кашель, боли в грудной клетке, рентгенологически диагностирована правосторонняя долевая пневмония. Больной назначена антибактериальная терапия.

Клинический пример 2. Больной О, 59 лет, поступил на стационарное лечение в гематологическое отделение ККБ №1 г. Красноярска с диагнозом: миеломная болезнь, G-вариант, диффузно-очаговая форма, III стадия. При поступлении состояние больного средней степени тяжести, беспокоит выраженная слабость, повышенная утомляемость, боли в костях.

Проведено обследование по заявленному способу. Определены уровни цитокинов в сыворотке крови:

ФНО-альфа 0,3 пг/мл (ниже 0,5 пг/мл) ИЛ-2 8 пг/мл (ниже 10 пг/мл) ИЛ-4 1 пг/мл (выше 0,55 пг/мл)

Уровни содержания цитокинов изменены, но не достигают пороговых значений: у больного не прогнозируют развитие инфекционных осложнений. Больному назначен курс плановой химиотерапии. Инфекционных осложнений у больного зарегистрировано не было.

Технический результат от реализации предлагаемого способа:

- повышение точности прогнозирования инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью за счет анализа регуляторного звена иммунной системы;

- сокращение длительности исследования;

- возможность ранней диагностики инфекционных осложнений при миеломной болезни;

- расширение арсенала средств для прогнозирования инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью.

Таким образом, предложенный высокочувствительный информативный способ позволяет своевременно диагностировать прогрессирование заболевания, появление осложнений, корректировать план и тактику лечения данной категории больных и улучшить результаты их реабилитации.

Источники информации.

1. Руководство по гематологии: в 3 т. Т. 2. Под ред. Воробьева А.И. 3-е изд., перераб. и допол. М.: Ньюдиамед; 2003. - 280 с.

2. Патент 2315305 РФ. Способ прогнозирования инфекционных осложнений после химиотерапии у больных острыми лейкозами / Савченко А.А., Смирнова О.В., Манчук В.Т., Москов В.И.; заявитель и патентообладатель ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН. - заявка №2005134594/15, заявл. 08.11.2005; опубл. 20.01.2008.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогноза развития инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью. Для этого в сыворотке крови больных определяют уровень содержания цитокинов - фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-альфа), интерлейкина-2 (ИЛ-2) и интерлейкина-4 (ИЛ-4). При уровне ФНО-альфа выше 0,5 пг/мл, ИЛ-2 выше 10 пг/мл и ИЛ-4 ниже 0,55 пг/мл прогнозируют развитие инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью. Использование данного способа позволяет своевременно диагностировать прогрессирование заболевания, появление осложнений, скорректировать план и тактику лечения данной категории больных. 2 пр.

Способ прогнозирования инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью путем исследования крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа определяют уровни провоспалительных цитокинов - фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-альфа) и интерлейкина-2 (ИЛ-2) и уровень противовоспалительного цитокина - интерлейкина-4 (ИЛ-4), и при уровне ФНО-альфа выше 0,5 пг/мл, ИЛ-2 выше 10 пг/мл и ИЛ-4 ниже 0,55 пг/мл прогнозируют развитие инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью.