СПОСОБ УТОЧНЕНИЯ СТАДИИ РАСПРОСТРАНЕННОГО РАКА ШЕЙКИ МАТКИ Российский патент 2016 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии.

Известен Способ диагностики рака шейки матки (см. Патент РФ №2506892, кл. А61В 5/00, опубл. 20.02.2014), в котором при лабораторном исследовании определяют иммунологические показатели: содержание CD10×10⁹/л (CD10), CD20×10⁹/л (CD20), CD25×10⁹/л (CD25) лимфоцитов периферической крови, функциональный резерв нейтрофилов цервикальной слизи, у.е. (AHYC), уровень ИЛ-10, пг/мл крови (ИЛ-10К) и уровни интерферон-γ, пг/мл крови (ИФН-γС) и ФНО-α, пг/мл (ФНО-αС) цервикальной слизи.

На основании полученных данных вычисляют показатель

F(x1):F(x1)=-15,671×CD10+13,993×CD20-5,035×CD25+0,488×ФРНС+

0,633×ИЛ-10К+0,1×ИФН-γС-0,081×ФНО-αС-4,786

и при значении F(x1) больше 0 диагностирует carcinoma in situ, если меньше - цервикальная интраэпителиальная неоплазия III степени.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известного способа относится то, что он трудоемок и не позволяет уточнить стадию распространенного рака шейки матки.

Известен способ дифференциальной диагностики гиперплазии, интраэпителиальных неоплазий и рака шейки матки (см. Патент РФ №2321859, кл. G01N 33/483, опубл. 20.10.2006 г.), в котором мазки, полученные из канала шейки матки, окрашивают ядерным красителем и исследуют на компьютерном анализаторе. На полученном изображении измеряют площадь ядер нормальных и опухолевых клеток и устанавливают их средние значения, при этом среднее значение площади ядер нормальных клеток принимают за стандарт. Затем определяют кратность превышения среднего значения площади ядер опухолевых клеток по отношению к стандарту и при значении этого показателя 1,1-1,4 раза - диагностируют гиперплазию, 1,5-1,9 раз - цервикальную интраэпителиальную неоплазию первой степени (доброкачественную стадию канцерогенеза), 2,0-2,4 раз - цервикальную интраэпителиальную неоплазию второй степени (пограничную стадию канцерогенеза), а при его значении 2,5 и выше - рак шейки матки (злокачественную стадию канцерогенеза).

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известного способа, относится необходимость наличия дорогостоящего оборудования и невозможность уточнения стадии распространенного рака шейки матки.

Известен способ диагностики рака шейки матки (см. Патент РФ №2343485, МПК G01N 33/53, опубл 27.04.2008 г.), включающий определение в вагинальном секрете концентрации лектин-связанных РЭА/РЭА-подобных антигенов (ЛСА). При этом в качестве лектина используют маннан-связывающий лектин, полученный из целомической жидкости дальневосточного трепанга Apostichopus japonicas (МСЛ-Т). В случае выявления ЛСА в пределах 11,4±7,5 U/ml диагностируют рак шейки матки.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной способа относится невозможность уточнения стадии распространенного рака шейки матки.

Сущность предлагаемого способа уточнения стадий распространенного рака шейки матки заключается в том, что у пациентки определяют стадию заболеванию по международной гинекологической классификации (FIGO) и относят его к Ib-IIa или IIb-IV клинической стадии по уровню IL-1β в плазме крови, причем Ib-IIa стадия определяется уровнем IL-1β от 1,330 пг/мл и выше, a IIb-IV стадия - уровнем IL-1β от 0 пг/мл до 1,330 пг/мл. Использование предлагаемого изобретения обеспечивает следующий технический результат: уточнение стадии распространенного рака шейки матки по международной гинекологической классификации по FIGO.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается исследованием плазмы крови.

В плазме крови у пациентки определяют уровень интерлейкина 1β (IL-1β) в сыворотке крови. Образцы сыворотки крови хранят при - 20°C. Количественное определение ИЛ-1β основано на создании на твердой фазе 96-луночной платы для иммуноферментного анализа комплекса. Комплекс формируется при последовательном внесении в плату соответствующих реагентов, избыток которых после инкубации каждый раз удаляется. Количество связавшегося конъюгата, определяющего интенсивность развития окраски в каждой лунке после прибавления раствора хромогена, пропорционально количеству IL-1β в исследуемом образце. Результат анализа вычисляют по калибровочному графику после измерения оптической плотности.

Особенность заключается в том, что у пациентки определяют стадию заболевания рака шейки матки по международной гинекологической классификации (FIGO) и относят ее к Ib-IIa или IIb-IV стадии по уровню IL-1β в плазме крови, причем Ib-IIa стадия определяется уровнем IL-1β от 1,330 пг/мл и выше, a IIb-IV стадия - уровнем IL-1β от 0 пг/мл до 1,330 пг/мл. Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентам и научно-техническим источником информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявленного изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил аналог, характеризующийся признаками, тождественными всем существенным признакам заявленного изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа, как наиболее близкого по совокупности существенных признаков аналога, позволило выявить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков в заявленном способе, изложенных в формуле изобретения.

Следовательно, заявленное изобретение соответствует условию "новизна".

Пример определения уточненной стадии распространенного рака шейки матки.

Уточнение стадий рака шейки матки было проведено у 117 пациенток: Ia, Ib-IIa и IIb-IV стадии впервые лечившихся в период с января 2012 г. по январь 2013 г. в Ульяновском областном клиническом онкологическом диспансере. У каждой пациентки в плазме крови было определено 18 показателей.

Для каждого показателя здоровья x_i, i=1, …, N, i∈N были построены функции и , где каждая из функций описывает плотности вероятностей каждой стадии заболевания из двух исследуемых. На основании этих функции для каждого показателя было построено отношение правдоподобия [1]

Таким образом, для каждого показателя x_i, i=1, …, N, i∈N были определены интервалы и , k≥1, где z_i≥D и , соответственно (D - пороговое значение). Объединим интервалы , k≥1 во множество и , k≥1 во множество , соответственно.

Рассмотрим три ситуации:

1) если такое, что , j=1, 2, то требуется проверить, чтобы , . Если нет противоречия, то тогда можно диагностировать j стадию заболевания.

2) если такое, что , j=1, 2, то требуется проверить, чтобы , . Если есть противоречие, то увеличиваем D на 3%-10%.

3) нет ни одного i₀ такого, что , то рассчитываем значение

Если или , то можно однозначно диагностировать соответствующую стадию заболевания, если же , то нельзя однозначно судить о том, какая стадия заболевания у пациента.

В соответствии со статистикой, показатели каждого параметра были поделены на 5 групп. Была проведена аппроксимация статистики плотностью распределения методом наименьших квадратов [1], оптимальные значения σ представлены в табл. 1, 2 и 3.

Пример.

Пусть пороговое значение D=1, тогда интервалы стадий для функции z₁₂ определены следующим образом (табл. 4, 5, 6):

Пусть пороговое значение D=1, тогда интервалы стадий для функции z₂₃ определены следующим образом (табл. 7, 8, 9):

Пусть пороговое значение D=1, тогда интервалы стадий для функции z₁₃ определены следующим образом (табл. 10, 11, 12):

Рассмотрим пациента с Ia стадией заболевания (табл. 13).

В итоге по z₁₂ по 13 параметрам можно диагностировать Ia стадию, по остальным 5 параметрам - Ib-IIa стадию заболевания. Т.к. в данном случае невозможно однозначно диагностировать стадию, то, используя формулу (2), получим . Пусть пороговое значение , тогда следовательно, у пациента можно диагностировать Ia стадию заболевания.

По z₁₃ по 11 параметрам можно диагностировать Ia стадию, по остальным 7 параметрам - IIb-IV стадию заболевания. Т.к. в данном случае невозможно однозначно диагностировать стадию, то, используя формулу (2), получим . Пусть пороговое значение , тогда следовательно, у пациента можно диагностировать Ia стадию заболевания.

По z₂₃ по 7 параметрам можно диагностировать Ib-IIa стадию, по остальным 11 параметрам IIb-IV стадию заболевания. Т.к. в данном случае невозможно однозначно диагностировать стадию, то, используя формулу (2), получим . Пусть пороговое значение , тогда следовательно, у пациента можно диагностировать Ib-IIa стадию заболевания.

В совокупности получаем, что у пациента можно диагностировать Ia стадию заболевания.

Рассмотрим пациента с Ib-IIa стадией заболевания (табл. 14).

В итоге по z₁₂ по 7 параметрам можно диагностировать Ia стадию, по остальным 11 параметрам - Ib-IIa стадию заболевания. Т.к. в данном случае невозможно однозначно диагностировать стадию, то, используя формулу (2), получим

Пусть пороговое значение , тогда следовательно, у пациента можно диагностировать Ib-IIa стадию заболевания.

По z₁₃ по 10 параметрам можно диагностировать Ia стадию, по остальным 8 параметрам - IIb-IV стадию заболевания. Т.к. в данном случае невозможно однозначно диагностировать стадию, то, используя формулу (2), получим

Пусть пороговое значение , тогда следовательно, у пациента можно диагностировать Ia стадию заболевания.

По z₂₃ по 11 параметрам можно диагностировать Ib-IIa стадию, по остальным 7 параметрам - IIb-IV стадию заболевания. Т.к. в данном случае невозможно однозначно диагностировать стадию, то, используя формулу (2), получим

Пусть пороговое значение , тогда следовательно, у пациента можно диагностировать Ib-IIa стадию заболевания.

В совокупности получаем, что у пациента можно диагностировать Ib-IIa стадию заболевания.

Рассмотрим пациента с IIb-IV стадией заболевания (табл. 15).

В итоге по z₁₂ по 8 параметрам можно диагностировать Ia стадию, по остальным 10 параметрам - Ib-IIa стадию заболевания. Т.к. в данном случае невозможно однозначно диагностировать стадию, то, используя формулу (2), получим .

Пусть пороговое значение , тогда следовательно, у пациента можно диагностировать Ib-IIa стадию заболевания.

По z₁₃ по 6 параметрам можно диагностировать Ia стадию, по остальным 12 параметрам - IIb-IV стадию заболевания. Т.к. в данном случае невозможно однозначно диагностировать стадию, то, используя формулу (2), получим

Пусть пороговое значение , тогда следовательно, у пациента можно диагностировать IIb-IV стадию заболевания.

По z₂₃ по 4 параметрам можно диагностировать Ib-IIa стадию, по остальным 14 параметрам IIb-IV стадию заболевания. Т.к. в данном случае невозможно однозначно диагностировать стадию, то, используя формулу (2), получим

Пусть пороговое значение , тогда следовательно, у пациента можно диагностировать IIb-IV стадию заболевания.

В совокупности получаем, что у пациента можно диагностировать IIb-IV стадию заболевания.

На основании полученных результатов достоверным показателем для дифференциальной диагностики Ib-IIa и IIb-IV стадий РШМ является показатель IL-1β.

Таким образом, вышеизложенное описание свидетельствует о выполнении при использовании заявленного изобретения следующей совокупности условий:

- средство, воплощающее заявленное изобретение, при его осуществлении предназначено для уточнения стадий распространенного рака шейки матки;

- для заявленного способа в том виде, как он охарактеризован в изложенной формуле изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке средств и методов;

- средство, воплощающее заявленное изобретение при осуществлении, способно обеспечить достижение усматриваемого заявителем поставленной задачи: уточнение стадии распространенного рака шейки матки по международной гинекологической классификации по FIGO.

Следовательно, заявленное изобретение соответствует условию применимости.

Список сокращений:

Le - лейкоциты

Нф - нейтрофилы

ММП - матриксные металлопротеиназы

ОМБ - окислительная модификация белка

МДА - малоновый диальдегид

ГТ - глутатион-трансфераза

ГР - глутатион-редуктаза

IL - интерлейкин

IFN - интерферон

TNF - фактор некроза опухоли

Список литературы

1. Линник Ю.В. Метод наименьших квадратов и основы математико-статистической теории обработки наблюдений. - Изд-во «Государственное издательство физико-математической литературы», 1958. - 337 с.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и может быть использовано для уточнения стадий распространенного рака шейки матки. Для этого у пациентки определяют стадию заболеванию по международной гинекологической классификации (FIGO) и относят его к Ib-IIa или IIb-IV клинической стадии по уровню IL-1β в плазме крови. Причем Ib-IIa стадия определяется уровнем IL-1β от 1,330 пг/мл и выше, a IIb-IV стадия - уровнем IL-1β от 0 пг/мл до 1,330 пг/мл. Изобретение позволяет проводить дифференциальную диагностику Ib-IIa или IIb-IV стадии рака шейки матки у пациенток. 15 табл., 1 пр.

Способ уточнения стадий распространенного рака шейки матки, включающий исследование плазмы крови, отличающийся тем, что у пациентки определяют стадию заболевания по международной гинекологической классификации (FIGO) и относят его к Ib-IIa или IIb-IV клинической стадии по уровню IL-1β в плазме крови, причем Ib-IIa стадия определяется уровнем IL-1β от 1,330 пг/мл и выше, a IIb-IV стадия - уровнем IL-1β от 0 пг/мл до 1,330 пг/мл.