СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИДИВА УГРОЖАЮЩЕГО ВЫКИДЫША Российский патент 2016 года по МПК G01N33/533 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для раннего прогнозирования рецидива угрозы прерывания беременности во втором триместре у женщин с привычным невынашиванием после проведенной стандартной сохраняющей терапии.

Актуальность заявленного способа определяется тем, что долгие годы патология невынашивания беременности в ранние сроки не имеет тенденции к снижению, несмотря на достигнутые успехи в вопросах диагностики, лечении во время и вне беременности и составляет по данным разных авторов от 2 до 55% числа всех беременностей, достигая в первом триместре гестации 50%, при этом 25% из этого числа приходится на долю привычного невынашивания (Сидельникова, В.М. Профилактика преждевременных родов // Мат. форума "Мать и дитя". - 2006. - С. 241. Роль системы цитокинов в патогенезе привычного выкидыша и преждевременных родов. / Н.К. Тетруашвили., В.М. Сидельникова., В.М. Верясов. и др. // Вестн. Рос. ассоц. акуш.-гин. - 1999. - №3. - С. 37-45). Таким образом, прогнозирование рецидива угрожающего выкидыша у женщин с привычным невынашиванием беременности в анамнезе позволит профилактировать данное осложнение и предотвратить неблагоприятный исход беременности.

Известен способ прогнозирования возникновения и сохранения угрозы прерывания беременности на всем протяжении срока гестации путем определения в сыворотке крови содержания рецепторного антагониста интерлейкина-1 и при его значении более 700 пг/мл прогнозируют возникновение в 1 триместре угрозы прерывания, сохраняющейся на протяжении всего срока гестации (Патент №2317554. Российская Федерация. Способ прогнозирования возникновения и сохранения угрозы прерывания беременности на всем протяжении срока гестации. / Посисеева Л.В., Сотникова Н.Ю., Кудряшова А.В., Лукина Н.С., Панова И.А. // Изобретения. Полезные модели. - 2008. - №5, Ч. 3. - С. 695).

Однако данный способ не является специфичным для применения у женщин с привычным невынашиванием беременности и имеет более низкую точность.

Известен способ прогнозирования угрожающих преждевременных родов у женщин с угрозой невынашивания ранних сроков путем исследования периферической венозной крови в 6-12 недель гестации, определяя соотношение показателей относительного содержания CD25⁺ к IL-2⁺ лимфоцитам, и при значении соотношения, равном или более 1,0 прогнозируют развитие угрожающих преждевременных родов (Патент №2344424. Российская Федерация. Способ прогнозирования угрожающих преждевременных родов у женщин с угрозой невынашивания ранних сроков. / Борзова Н.Ю., Сотникова Н.Ю., Крошкина Н.В., Лепилова И.Б. // Изобретения. Полезные модели. - 2009. - №2).

Однако данный способ не используется у женщин с привычным невынашиванием беременности, позволяет спрогнозировать развитие угрозы в более поздние сроки и имеет более низкую точность. Техническим результатом является расширение арсенала технических средств и повышение точности прогнозирования угрожающего выкидыша.

Заявляемый технический результат достигается путем иммунологического исследования периферической венозной крови в 7-12 недель гестации после проведенного лечения угрожающего выкидыша. При этом определяют относительное содержание CD45RA^-CD62L^- (претерминально-дифференцированных клеток памяти) в популяции CD8⁺ лимфоцитов и при его значении более 23,9% прогнозируют возникновение повторной угрозы прерывания беременности с точностью 89,2%, чувствительностью 92,3% и специфичностью 83,9%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать возникновение рецидива угрозы прерывания беременности у женщин с привычным невынашиванием беременности по определению относительного содержания CD45RA^-CD62L^- в популяции CD8⁺ лимфоцитов.

Ранее данный показатель не использовался для прогнозирования возникновения рецидива угрозы прерывания беременности у женщин с привычным невынашиванием беременности. В литературе также отсутствуют данные об изменении содержания CD45RA^-CD62L^- лимфоцитов при рецидиве угрозы прерывания беременности у женщин с привычным невынашиванием беременности. Вероятно, в тех случаях, когда проведенная сохраняющая терапия не стабилизирует барьерную функцию плаценты, увеличение уровня антигенов плодового происхождения в кровотоке матери вызывает дифференцировку претерминально-дифференцированных клеток памяти в популяции цитотоксических CD8⁺ лимфоцитов, способствуя усилению цитотоксических реакций в отношении плаценты и плода с повторным развитием угрожающего выкидыша.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом:

1. К 3 мл гепаринизированной крови из кубитальной вены добавляют 3 мл Среды 199 и выделяют обогащенную популяцию лимфоцитов стандартным методом скоростного центрифугирования при 1500 об/мин в течение 20 минут в двойном градиенте плотности фиколл-верографина (Boum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Invest. - 1968. - Vol. 21, N 97. - P. 77).

2. Суспензию лимфоцитов дважды отмывают физиологическим раствором, доводят концентрацию клеток до 1×106 кл/мл. К 0,1 мл полученной суспензии одновременно добавляют по 5 мкл моноклональных антител anti-human CD4, CD62L, CD45RA, коньюгированных с РС5, с FITC, с РЕ соответственно (Caltag Laboratories, USA). Клетки инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, отмывают в 1 мл физиологического раствора и фиксируют в 0,5 мл фиксирующего раствора CellFixTM (BD Biosciences, Belgium).

3. Определяют относительное (процентное) содержание CD45RA^-CD62L^- клеток в CD8⁺ лимфоцитарном гейте на проточном цитометре FACScan (Becton Dickinson, USA) с использованием программного обеспечения CellQuest Pro.

Использование предлагаемого способа позволяет в ранние сроки (7-12 недель) с высокой точностью 89,2% прогнозировать возникновение рецидива угрожающего выкидыша у женщин с привычным невынашиванием беременности в анамнезе после проведенного лечения угрозы прерывания беременности.

Отличительными признаками заявленного способа являются:

после проведенного лечения угрозы прерывания беременности определяют относительное содержание CD45RA^-CD62L^- в популяции CD8⁺ лимфоцитов. При значении показателя более 23,9% прогнозируют возникновение угрожающего выкидыша во втором триместре у женщин с привычным невынашиванием в анамнезе.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Пациентка Б., 34 лет, беременность четвертая, желанная, в анамнезе 1 своевременные роды в сроке 39 недель, без осложнений, 2 самопроизвольных выкидыша в сроке 6 и 8 недель, находится в зарегистрированном браке. В анамнезе: эрозия шейки матки, кольпит. При поступлении в стационар срок беременности составил 5-6 недель. Предъявляла жалобы на тянущие боли в низу живота и в области поясницы, накануне отмечала незначительные кровяные выделения из половых путей. По УЗИ: гипертонус нижних отделов тела матки. После проведенной стандартной сохраняющей терапии признаки угрожающего выкидыша купировались, беременность прогрессировала.

В 7-8 недель было проведено обследование по заявленному способу:

Уровень CD45RA^-CD62L^- лимфоцитов составил 33,1%, что выше заявляемого уровня (>23,9%).

Заключение: Прогнозируется рецидив угрожающего выкидыша.

В сроке 14-15 недель беременности женщина поступила в стационар с клиническими признаками угрожающего выкидыша. Начата сохраняющая терапия с положительным эффектом.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2. Пациентка З., 28 лет, беременность пятая, желанная, в анамнезе 1 медицинский аборт, без осложнений, 3 самопроизвольных выкидыша в сроке 4-5 и 7 недель, находится в зарегистрированном браке. В анамнезе: хронический эндометрит, эрозия шейки матки. При поступлении в стационар срок беременности составил 9-10 недель. Предъявляла жалобы на тянущие боли в низу живота и в области поясницы, кровянистые выделения из половых путей. По УЗИ: у внутреннего зева подоболочечное скопление жидкости 10·7·12 мм. После проведенной стандартной сохраняющей терапии признаки угрожающего выкидыша купировались, беременность прогрессировала.

В 11-12 недель было проведено обследование по заявленному способу.

Уровень CD45RA^-CD62L^- лимфоцитов составил 25,6%, что выше заявляемого уровня (23,9%).

Заключение: Прогнозируется рецидив угрожающего выкидыша во втором триместре беременности.

В сроке 14-15 недель беременности женщина поступила в стационар с клиническими признаками угрожающего выкидыша. Начата сохраняющая терапия с положительным эффектом.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3. Пациентка К., 29 лет, беременность четвертая, желанная, в анамнезе 1 своевременные роды без осложнений, 2 самопроизвольных выкидыша в сроке 4 и 10 недель, находится в зарегистрированном браке. В анамнезе: хронический тонзиллит, хронический гастродуоденит, хронический эндометрит, кандидозный кольпит. При поступлении в стационар срок беременности составил 5-6 недель. Предъявляла жалобы на тянущие боли в низу живота и в области поясницы, накануне однократные мажущие кровянистые выделения из половых путей. По УЗИ: гипертонус нижних отделов тела матки. После проведенной стандартной сохраняющей терапии признаки угрожающего выкидыша купировались, беременность прогрессировала.

В сроке 7-8 недель было проведено обследование по заявленному способу:

Уровень CD45RA^-CD62L^- лимфоцитов составил 23,9%, что равно заявленному уровню (23,9%).

Заключение: Прогнозируется отсутствие рецидива угрожающего выкидыша во втором триместре беременности.

Во втором триместре у женщины признаки угрозы прерывания беременности отсутствовали, в стационар женщина не поступала. Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 4. Пациентка К., 31 год, беременность четвертая, желанная, в анамнезе 3 самопроизвольных выкидыша в сроке 5-6, 8 и 8-9 недель, находится в зарегистрированном браке. В анамнезе: вегетососудистая дистония по гипотоническому типу, эутиреоз. При поступлении в стационар срок беременности составил 7 недель. Предъявляла жалобы на тянущие боли внизу живота и в области поясницы, кровянистые выделения из половых путей. По УЗИ: гипертонус нижних отделов тела матки, цервикальный канал вверху расширен до 3 мм. После проведенной стандартной сохраняющей терапии признаки угрожающего выкидыша купировались, беременность прогрессировала.

В сроке 9 недель было проведено обследование по заявленному способу:

Уровень CD45RA^-CD62L^- лимфоцитов составил 12,8%, что ниже заявленного уровня (23,9%).

Заключение: Прогнозируется отсутствие рецидива угрожающего выкидыша во втором триместре беременности.

Во втором триместре у женщины признаки угрозы прерывания беременности отсутствовали, в стационар женщина не поступала.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом обследовано 38 беременных женщин с угрожающим выкидышем. Результаты исследований сведены в таблицу 1.

Преимущества заявляемого способа:

1. Высокая точность - 89,2%;

2. Хорошая воспроизводимость метода;

3. Простота в интерпретации результатов обследования;

4. Способ дает возможность прогнозировать возникновение рецидива угрожающего выкидыша у женщин с привычным невынашиванием беременности в анамнезе;

5. Предлагаемый способ позволяет своевременно выбрать правильную тактику ведения женщин с риском развития данной акушерско-гинекологической патологии и избежать неблагоприятных исходов беременности.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования рецидива угрожающего выкидыша. Для этого проводят иммунологическое исследование периферической венозной крови в 7-12 недель гестации у женщин с угрозой невынашивания беременности. После проведенного лечения угрозы прерывания беременности определяют относительное содержание CD45RA^-CD62L^- в популяции CD8⁺ лимфоцитов. При его значении более 23,9% прогнозируют возникновение угрожающего выкидыша во втором триместре у женщин с привычным невынашиванием в анамнезе. Использование данного способа позволяет прогнозировать рецидив угрожающего выкидыша во втором триместре гестации, что позволит выбрать правильную тактику ведения беременной женщины, позволит снизить частоту данного осложнения. 1 табл., 4 пр.

Способ прогнозирования рецидива угрожающего выкидыша путем иммунологического исследования периферической венозной крови в 7-12 недель гестации у женщин с угрозой невынашивания беременности, отличающийся тем, что после проведенного лечения угрозы прерывания беременности определяют относительное содержание CD45RA^-CD62L^- в популяции CD8⁺ лимфоцитов и при его значении более 23,9% прогнозируют возникновение угрожающего выкидыша во втором триместре у женщин с привычным невынашиванием в анамнезе.