СРЕДСТВО, ПРОЯВЛЯЮЩЕЕ БАКТЕРИОСТАТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ В ОТНОШЕНИИ ПОЛИРЕЗИСТЕНТНЫХ ШТАММОВ MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2016 года по МПК A61K9/08 A61K31/409 A61P31/06 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и может быть использовано для угнетения роста полирезистентных штаммов микобактерий туберкулеза в эксперименте.

В последние годы повсеместно отмечается широкое распространение антибиотикорезистентных штаммов туберкулезной палочки [Lipin M.Y., Stepanshina V.N., Shemyakin I.G., Shinnick T.M. Association of specific mutations in katG, rpoB, rpsL and rrs genes with spoligotypes of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates in Russia. Clin. Microbiol. Infect. 2007. 13. 620-626; Ali Chaudhry L., Rambhala N., Al-Shammri A.S., Al-Tawfiq J.A. Patterns of antituberculous drug resistance in Eastern Saudi Arabia: a 7-year surveillance study from 1/2003 to 6/2010. J. Epidemiol. Glob. Health. 2012. 2(1). 57-60; Areeshi M.Y., Bisht S.C., Mandal R.K., Haque S. Prevalence of drug resistance in clinical isolates of tuberculosis from GCC: a literature review from January 2002 to March 2013. J. Infect. Dev. Ctries. 2014. 12. 8(9). 1137-1147]. Последнее диктует необходимость изыскания новых лекарственных средств, влияющих на рост данного микроорганизма.

Препарат фотодитазин, выпускаемый фирмой "Вета-Гранд" (Россия), представляет собой диметилглюкаминовую соль хлорина Е6 и используется в настоящее время в качестве фотосенсибилизатора для флюоресцентной диагностики и фотодинамической терапии злокачественных опухолей [Рагулин Ю.А., Капинус Н.В., Каплан М.А. и др. Возможности фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором фотодитазин в лечении центрального рака легких. Российский биотерапевтический журнал. 2005. 3. 58-61; Белый Ю.А., Терещенко А.В., Володин П.Л. и др. Лечение меланом сосудистой оболочки глаза большого размера методом фотодинамической терапии с препаратом фотодитазин (клинический случай). Российский биотерапевтический журнал. 2008. 4. 53-56; Странадко Е.Ф., Волгин В.Н., Ламоткин М.В. и др. Фотодинамическая терапия базально-клеточного рака кожи с фотосесибилизатором фотодитазином. Российский биотерапевтический журнал. 2008. 4. 7-11].

Нами впервые установлено ингибирующее влияние фотодитазина на рост полирезистентных штаммов микобактерий туберкулеза.

Лекарственно-устойчивые штаммы микобактерий туберкулеза были получены при посеве респираторного материала (мокрота), полученного от больных, проходящих лечение в ГБУЗ «Тамбовский областной клинический противотуберкулезный диспансер». Профили лекарственной устойчивости (ЛУ) были получены с использованием стандартной методики оценки лекарственной устойчивости микобактерий на плотной яичной питательной среде Левенштейна-Йенсена, не содержащей крахмал (HiMedia, Индия), методом абсолютных концентраций (приказ МЗ РФ от 21 марта 2003 г. N 109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации»), а ЛУ к рифампицину и изониазиду дополнительно оценивали с помощью постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР) и последующей гибридизации генетического материала М. tuberculosis на биочипах «ТБ-БИОЧИП» (ООО «Биочип-ИМБ», Россия) по методике, рекомендованной производителем. Все штаммы М. tuberculosis были множественно лекарственно-устойчивыми (МЛУ), т.е. резистентными к основным противотуберкулезным препаратам - изониазиду, рифампицину, стрептомицину, этамбутолу и чувствительными к пиразинамиду.

Фотодитазин разводили в дистиллированной воде до конечной концентрации 4·10^-5 моль/л. Бактериальную взвесь М. tuberculosis с титром 100000 КОЕ/мл питательной среды Middlebrook 7Н9 смешивали с раствором фотосенсибилизатора в соотношении 1:9 (итоговый объем образца равен 5 мл) в пластиковых чашках Петри диаметром 10 см и инкубировали в течение 15 мин при температуре 37°C. В качестве контроля использовали взвесь М. tuberculosis каждого штамма, которую вместо раствора сенсибилизатора разводили дистиллированной водой, сохраняя объемное соотношение 1:9.

Посев производили на жидкую питательную среду Middlebrook 7Н9 в индикаторные пробирки MGIT автоматизированной системы ВАСТЕС™ MGIT™ 960 (Becton Dickinson, Sparks, MD). В каждую пробирку вносили по 0,5 мл каждого образца из чашек Петри. Выполняли по пять повторных посевов, учитывая возможность случайных колебаний роста культур микобактерий. Наблюдения проводили в течение месяца. Результат фиксировался автоматической системой при достижении стандартного титра микобактерий в пробирке и выражался в сутках после посева.

Статистическая обработка результатов экспериментов проводилась с использованием программы GraphPad Prism-5. Различия с контролем признавались достоверными при p<0,05.

Результаты наблюдений представлены в таблице.

Как видно из таблицы, воздействие фотодитазина в 1,32 раза замедляет скорость роста микобактерий туберкулеза в жидкой среде, т.е. оказывает отчетливый бактериостатический эффект.

Следовательно, данный препарат может быть использован по новому назначению, а именно как средство, угнетающее рост Mycobacterium tuberculosis в эксперименте.

Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности и представляет собой средство, проявляющее бактериостатическую активность в отношении полирезистентных штаммов Mycobacterium tuberculosis в эксперименте, представляющее собой водный раствор фотодитазина в концентрации 4·10^-5 моль/л. Изобретение обеспечивает расширения арсенала медикаментозных средств, используемых для подавления роста Mycobacterium tuberculosis. 1 табл.

Средство, проявляющее бактериостатическую активность в отношении полирезистентных штаммов Mycobacterium tuberculosis в эксперименте, представляющее собой водный раствор фотодитазина в концентрации 4·10^-5 моль/л.