СРЕДСТВО С ЛИПОСОМАМИ, СОДЕРЖАЩИМИ ИЗОНИАЗИД Российский патент 2017 года по МПК A61K31/4409 A61K9/127 A61K9/48 A61P31/06 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к фармации, касается разработки медицинских капсул, содержащих изониазид, и может быть использовано в качестве противотуберкулезного средства.

Известен комбинированный лекарственный препарат противотуберкулезного действия, который содержит противотуберкулезный химиопрепарат - изониазид, а в качестве потенцирующего агента, усиливающего действие химиопрепарата, наночастицы серебра при определенном соотношении компонентов [патент RU 2403050, 2010 г.].

Известна композиция для аэрозольной обработки помещения для профилактики и лечения воздушно-капельных инфекций, в частности туберкулеза, содержащая взвесь липосом, пропилен-гликолевый экстракт из древесины сосны, пропилен-гликолевый экстракт шалфея, эфирные масла бархатцев, монарды и эвкалипта, карбопол, глицерин, бланозу, эпофен, катон, натрия гидроксид и воду (первый вариант). В другом варианте композиция для профилактики и лечения воздушно-капельных инфекций, в частности туберкулеза, содержит в качестве основы взвесь липосом, пропилен-гликолевый экстракт из древесины сосны, пропилен-гликолевые экстракты одуванчика, лопуха и василька, эфирные масла лаванды, бергамота и лимонника китайского, карбопол, глицерин, бланозу, эпофен, катон, натрия гидроксид и воду [патент RU 2452470, 2012 г.].

Известно противотуберкулезное средство, содержащее изониазид и дибазол в качестве действующих веществ, интерполимерный комплекс поли(мет)акриловой кислоты и полиэтиленгликоля в качестве полимерного носителя, а также стеарат кальция при определенном соотношении компонентов [патент RU 2491935, 2013 г.].

Известно лекарственное средство для лечения туберкулеза, содержащее активное вещество - изониазид и фармацевтический носитель - тиозоль гель при содержании изониазида 5,7-54,5 мас. % и тиозоль геля 45,5-94,3 мас. % [патент RU 2523792, 2014 г.].

Известна фармацевтическая композиция для лечения туберкулеза, которая содержит конъюгат изониазида с окисленным декстраном молекулярной массы 35-60 кДа, очищенный от свободного изониазида и цитотоксических примесей, например, путем спиртового осаждения при температуре 60-80°С. Фармацевтическая композиция дополнительно содержит липосомобразующий агент, например фосфатидилхолин, фармацевтически приемлемый наполнитель, например воду для инъекций, физиологический или буферный раствор. Соотношение компонентов: коньюгат изониазида с окисленным декстраном 0,4-4,0 мас. %, липосомообразующий агент 0,1-1,0 мас. %, фармацевтически приемлемый наполнитель до 100 мас. % [патент RU 2372914, 2009 г.].

Наиболее близким аналогом изобретения является фармацевтическая композиция, включающая изониазид в концентрации 0,3-35,0 мкг/мл, фосфатидилхолин в качестве липосомообразующего агента и стабилизатор липосом пальмитоиловую кислоту в соотношении 10:1 (по массе), при этом общая концентрация смеси двух последних компонентов составляет 8-21000 мкг/мл [Голышевская В.И., Селищева А.А., Мартынова Л.П. и др. Оценка эффективности действия липосомальной формы изониазида в отношении различных видов микобактерий in vitro // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2006. №8. С. 61-64].

Задачей изобретения является расширение арсенала средств, обладающих противотуберкулезным действием.

Технический результат - получение нового лекарственного средства перорального применения в форме твердых желатиновых капсул с липосомами, обладающего противотуберкулезной активностью, обеспечивающего максимальное поступление действующих веществ из желудочно-кишечного тракта в кровоток.

Указанный технический результат достигается тем, что в средстве, обладающем противотуберкулезным действием, содержащем изониазид в качестве действующего вещества, фосфатидилхолин в качестве липосомообразующего агента, стабилизатор липосом, согласно изобретению липосомы получены при смешивании при температуре 40°С яичного лецитина, полиэтиленгликоля 2000 (ПЭГ 2000) и твина-80, взятых в массовом соотношении 6:2:1, с последующей гидратацией, заключены в капсулы для перорального введения при следующем соотношении компонентов липосомы, г на 1 капсулу:

изониазид 0,3 смесь фосфолипида, ПЭГ 2000 и твина-80 в соотношении 6:2:1 0,22

при этом используют капсулы номер 0, имеющие диаметр 7,65 мм, длину 21,7 мм, объем наполнения 0,68 мл, полученные при следующем соотношении компонентов, г на 1 капсулу:

желатин 0,0423 глицерин 0,0184 титана двуокись 0,00025 вода очищенная 0,0351

Методика получения липосом с изониазидом:

4,2 г яичного лецитина (Лецитин яичный по ТУ 6-09-0001-87 Д) смешивают с 1,4 г расплавленного полиэтиленгликоля 2000 (ПЭГ 2000) и 0,7 г твина-80 (6:2:1), растворяют в диэтиловом эфире при постоянном перемешивании на шейкере в течение 10 минут, эфир выпаривают на роторном испарителе под вакуумом на водяной бане при 40°С до образования липидной пленки, которую затем сушат в течение 2 ч. Полученную фосфолипидную пленку гидратируют 10 мл раствора изониазида (3,0 г в 10 мл воды). Полученный раствор взбалтывают в течение 2 часов на шейкере (шейкер лабораторный S - 3.02L, тип движения - орбитальное вращение, скорость 300 об/мин). Полученную смесь продавливают через мембранные фильтры «Nuclepore» (Whatman, Великобритания) с диаметром пор 400 нм по 20 раз с применением ручного мини-экструдера (Avanti Mini-Extruder, США).

Полученные липосомы заключают в капсулы для перорального введения, например, номер 0, масса 0,096 г, имеющие диаметр 7,65 мм, длину 21,7 мм, объем наполнения 0,68 мл, полученные при следующем соотношении компонентов, г на 1 капсулу:

желатин 0,0423 глицерин 0,0184 титана двуокись 0,00025 вода очищенная 0,0351

Изобретение иллюстрируется следующими материалами: в таблице 1 - влияние криопротектора (глюкоза, фруктоза, сахароза) на степень включения изониазида в различных концентрациях; в таблице 2 - изучение влияние фосфолипида (ФЛ), ПЭГ 2000 и твина-80 на эффективность включения изониазида; в таблице 3 - показано влияние холестерина на эффективность включения.

Первым этапом исследований было изучение степени включения изониазида в липосомальную форму.

4,2 г яичного лецитина (Лецитин яичный по ТУ 6-09-0001-87 Д) смешивают с 1,4 г расплавленного ПЭГ 2000 и 0,7 г твина-80, растворяют в диэтиловом эфире при постоянном перемешивании на шейкере в течение 10 минут, эфир выпаривают на роторном испарителе под вакуумом на водяной бане при 40°С до образования липидной пленки, которую затем сушат в течение 2 ч. Полученную фосфолипидную пленку гидратируют 10 мл раствора изониазида (3,0 г изониазида в 10 мл воды). Полученный раствор взбалтывают в течение 2 часов на шейкере (шейкер лабораторный S - 3.02L, тип движения - орбитальное вращение, скорость 300 об/мин). Полученную смесь продавливают через мембранные фильтры «Nuclepore» (Whatman, Великобритания) с диаметром пор 400 нм по 20 раз с применением ручного мини-экструдера (Avanti Mini-Extruder, США). Для наполнения используют капсулу белого цвета (номер 0, диаметр 7,65 мм, длина 21,7 мм, объем наполнения 0,68 мл, масса 0,096 г).

Состав капсулы: желатина - 0,0423; глицерина - 0,0184; титана двуокиси - 0,00025; воды очищенной - 0,0351. Первым этапом исследований было изучение степени включения изониазида в липосомальную форму.

10 мл липосом (точная навеска) центрифугировали до полного осаждения липосом, надосадочную жидкость помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 1 раствора нингидрина в ацетоне (1%), нагревали на водяной бане, доводили до метки водой, хорошо перемешивали и измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре СФ - 56 в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм.

Было установлено, что степень включения изониазида составляет 41,5%. Для увеличения степени включения нами было использование введение криопротектора (глюкоза, фруктоза, сахароза) в различных концентрациях (таблица 1). Было установлено, что в качестве криопротектора, позволяющего забрать излишнюю воду, лучше использовать сахарозу в концентрации 0,5%. Однако добавление криопротектора не влияет на степень включения изониазида. Для дальнейшего исследования изучили влияние холестерина на эффективность включения. Для этого добавляли определенное количество холестерина в различных соотношениях, в результате установлено, что холестерин не оказал влияние на эффективность включения изониазида (таблица 3). Затем изучили влияние соотношения фосфолипида с ПЭГ 2000 и твин-80 на эффективность включения, оптимальным оказалось соотношение 6:2:1 (таблица 2). Изучено влияние температуры на эффективность включения, процесс изготовления и перемешивания проводили при 30, 40, 50 и 60°С. Было установлено, что максимальная степень включения изониазида наблюдалась при перемешивании при 40°С.

Изониазид (ФС 42-0236-07), обладающий противотуберкулезным, антибактериальным, бактерицидным действием, ингибирует ДНК-зависимую РНК-полимеразу и подавляет синтез миколовой кислоты (основного компонента клеточной мембраны микобактерий туберкулеза). Оказывает бактерицидное действие на Mycobacterium tuberculosis в стадии размножения, МПК 0,015 мкг/мл. Действует на возбудителей, расположенных вне- и внутриклеточно (внутриклеточные концентрации в 50 раз превышают внеклеточные). Наиболее эффективен при остропротекающих процессах. Активность в отношении атипичных микобактерий низкая; сочетание изониазида и офлоксацина со вспомогательными веществами обеспечивает пролонгированное действие лекарственного комплекса за счет поверхностно-активных свойств вспомогательных веществ.

В доступной научно-медицинской и патентной литературе сведений об известности капсул с липосомами, содержащими в качестве действующего вещества изониазид, а в качестве вспомогательных веществ смесь фосфолипида, ПЭГ 2000 и твина-80 при соотношении 6:2:1, при определенном соотношении компонентов, не обнаружено. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «новизна».

В результате проведенных экспериментальных исследований было установлено, что предлагаемые капсулы с липосомами обладают высокой биодоступностью и целым рядом преимуществ: они имеют удовлетворительный внешний вид, однородны. Состав капсул, содержащих липосомы, способствует быстрому и далее пролонгированному высвобождению действующего вещества изониазида. Придание лекарственному средству формы капсул с липосомами обеспечивает удобство и гигиеничность применения, стойкость при хранении. За счет введения в состав лекарственного средства изониазида капсулы с липосомами обладают широким спектром биологической и лечебной активности: оказывают противотуберкулезное действие. Кроме этого капсулы с липосомами обладают равномерным высвобождением действующих веществ и выраженным пролонгированным действием, удобны для перорального применения больными. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Пример 1. Капсула белого цвета (номер 0, диаметр 7,65 мм, длина 21,7 мм, объем наполнения 0,68 мл, масса 0,096 г) получена при следующем соотношении компонентов, г: желатина - 0,0423; глицерина - 0,0184; титана двуокиси - 0,00025; воды очищенной - 0,0351. Состав липосомальной лекарственной формы в одной капсуле, г: изониазид - 0,3; смесь фосфолипида с ПЭГ 2000 и твин-80 при соотношении 6:2:1 - 0,22.

Общая масса 1 капсулы - 0,616 г.

Методика получения липосом с изониазидом: 4,2 г яичного лецитина (Лецитин яичный по ТУ 6-09-0001-87 Д) смешивают с 1,4 г расплавленного ПЭГ 2000 и 0,7 г твина-80 растворяют в диэтиловом эфире при постоянном перемешивании на шейкере в течение 10 минут, эфир выпаривают на роторном испарителе под вакуумом на водяной бане при 40°С до образования липидной пленки, которую затем сушат в течение 2 ч. Полученную фосфолипидную пленку гидратируют 10 мл раствора изониазида (3 г в 10 мл воды). Полученный раствор взбалтывают в течение 2 часов на шейкере (шейкер лабораторный S - 3.02L, тип движения - орбитальное вращение, скорость 300 об/мин). Полученную смесь продавливают через мембранные фильтры «Nuclepore» (Whatman, Великобритания) с диаметром пор 400 нм по 20 раз с применением ручного мини-экструдера (Avanti Mini-Extruder, США). Для наполнения используют капсулу белого цвета (номер 0, диаметр 7,65 мм, длина 21,7 мм, объем наполнения 0,68 мл, масса 0,096 г). Подготовленные капсулы для перорального применения наполняют липосомальной массой, после чего качество капсул с липосомами оценивают по внешнему виду, однородности, растворимости. Полученные капсулы с липосомами правильной формы, твердые и однородные. Изучено влияние фосфолипида и твина-80 с ПЭГ 2000 на эффективность включения, установлено, что включение изониазида составило 85,8% (таблица 2).

Пример 2. Капсула белого цвета (номер 0, диаметр 7,65 мм, длина 21,7 мм, объем наполнения 0,68 мл, масса 0,096 г) получена при следующем соотношении компонентов, г: желатина - 0,0423; глицерина - 0,0184; титана двуокиси - 0,00025; воды очищенной - 0,0351. Состав липосомальной лекарственной формы в одной капсуле, г: изониазид - 0,3; смесь фосфолипида с твин-80 и ПЭГ 2000 при соотношении 6:2,4:1 - 0,22.

Общая масса 1 капсулы - 0,616 г.

Изготавливают капсулы с липосомами аналогичным образом, описанным в примере 1.

Качество капсул с липосомами оценивают по внешнему виду, однородности, растворимости. Полученные капсулы с липосомами правильной формы, твердые и однородные. Проводят изучение влияния ФЛ, твина-80 и ПЭГ 2000 на эффективность включения, определение степени включения изониазида, которая составляет 83,0% (таблица 2).

Пример 3. Капсула белого цвета (номер 0, диаметр 7,65 мм, длина 21,7 мм, объем наполнения 0,68 мл, масса 0,096 г) получена при следующем соотношении компонентов, г: желатина - 0,0423; глицерина - 0,0184; титана двуокиси - 0,00025; воды очищенной - 0,0351. Состав липосомальной лекарственной формы в одной капсуле, г: изониазид - 0,3; смесь фосфолипида с твин-80 и ПЭГ 2000 при соотношении 6:1,6:1 - 0,22.

Общая масса 1 капсулы - 0,616 г.

Изготавливают капсулы с липосомами аналогичным образом, описанным в примере 1.

Качество капсул с липосомами оценивают по внешнему виду, однородности, растворимости. Полученные капсулы с липосомами правильной формы, твердые и однородные. Проводят определение степени включения изониазида, степень включения изониазида составляет 44,3% (таблица 2).

Из приведенных примеров видно, что оптимальным с точки зрения высокого высвобождения действующих веществ и одновременно эффекта пролонгации является состав, описанный в примере 1.

Получение предлагаемых капсул с липосомами легко осуществимо, и при их использовании достигается указанный технический результат. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «промышленная применимость».

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармации, и касается разработки средства в форме медицинских капсул с липосомами, обладающего противотуберкулезной активностью. Капсулы для перорального введения содержат липосомы, полученные при смешивании при температуре 40°С яичного лецитина, ПЭГ 2000 и твина-80 при соотношении 6:2:1 с последующей гидратацией, заключенные в капсулы для перорального введения, при этом липосомы содержат в качестве действующего вещества изониазид при следующем соотношении компонентов липосомы, г на 1 капсулу: изониазид - 0,3; смесь фосфолипида, ПЭГ 2000 и твина-80 - 0,22. Кроме этого используют капсулы номер 0, имеющие диаметр 7,65 мм, длину 21,7 мм, объем наполнения 0,68 мл. Предлагаемое средство обладает противотуберкулезным действием, а также равномерным высвобождением действующих веществ и выраженным пролонгированным действием, удобно для применения больными самостоятельно. 3 табл., 3 пр.

Средство, обладающее противотуберкулезным действием, содержащее изониазид в качестве действующего вещества, фосфатидилхолин в качестве липосомообразующего агента, стабилизатор липосом, отличающееся тем, что липосомы получены при смешивании при температуре 40°C яичного лецитина, полиэтиленгликоля 2000 (ПЭГ 2000) и твина-80, взятых в соотношении 6:2:1, с последующей гидратацией, заключены в капсулы для перорального введения при следующем соотношении компонентов липосомы, г на 1 капсулу:

изониазид 0,3 смесь фосфолипида, ПЭГ 2000 и твина-80 в соотношении 6:2:1 0,22

при этом используют капсулы номер 0, имеющие диаметр 7,65 мм, длину 21,7 мм, объем наполнения 0,68 мл, полученные при следующем соотношении компонентов, г на 1 капсулу:

желатин 0,0423 глицерин 0,0184 титана двуокись 0,00025 вода очищенная 0,0351