СПОСОБ АНАЛИЗА ПРОБЫ Российский патент 2017 года по МПК G01N33/53 G01N35/10 

Данное изобретение относится к способу анализа пробы согласно ограничительной части независимого пункта 1 формулы изобретения.

Способы анализа для определения клинико-химических параметров и способы анализа для определения иммунологических параметров медицинских проб широко известны из уровня техники. При этом во время первой из упомянутых процедур, как правило, определяют клинико-химические параметры, а во время второй - иммунологические параметры, причем для каждой из процедур используют отдельный анализатор, чаще всего автоматический.

Недостатком при этом, особенно для небольших лабораторий и врачебных кабинетов, является то, что необходимо приобрести и иметь в наличии по меньшей мере два автоматических анализатора: первый анализатор - для осуществления клинико-химического теста, обычно при температуре тела, то есть при температуре 37°C, а второй - для определения иммунологических параметров, обычно при комнатной температуре, то есть при температуре 21°C. При этом указанный недостаток обусловлен не только высокими затратами на приобретение соответствующего оборудования, но и необходимостью в постоянном техническом обслуживании указанных двух приборов. Причина того, что требуется иметь два прибора, заключается в том, что клинико-химические и иммунологические параметры определяют различными способами.

В связи с вышесказанным задача данного изобретения состоит в том, чтобы предложить способ, который позволит в одном и том же автоматическом анализаторе определять как клинико-химические, так и иммунологические параметры пробы, при этом он будет требовать минимальных затрат и отличаться простотой в реализации.

Основные признаки предлагаемого изобретения изложены в отличительной части независимых пунктов 1 и 12 формулы изобретения. Предпочтительные варианты осуществления изобретения раскрыты в зависимых пунктах 2-11 и 13-15.

Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ анализа пробы, включающего в себя анализ клинико-химических параметров и анализ иммунологических параметров в автоматическом анализаторе, оснащенном дозирующим устройством, по меньшей мере одним гнездом под картридж для реагентов, содержащий компоненты, необходимые для осуществления анализа, приемным устройством для измерительной кюветы, по меньшей мере одной измерительной кюветой, причем с каждым картриджем для реагентов соединена одна измерительная кювета, приемным устройством для сосуда для проб, содержащего пробу, а также фотометрическим или спектрометрическим измерительным устройством. Предлагаемый способ включает в себя следующие этапы:

a) в приемное устройство устанавливают картриджи для реагентов для выполнения анализов;

b) в пробоприемник устанавливают сосуд для проб, содержащий пробу;

c) определяют клинико-химические параметры посредством измерительной кюветы, соединенной с картриджем для реагентов, предусмотренным для выполнения анализа соответствующего клинико-химического параметра; и/или

d) определяют иммунологические параметры посредством измерительной кюветы, соединенной с картриджем для реагентов, предусмотренным для выполнения анализа соответствующего иммунологического параметра;

e) промывают или извлекают использованные измерительные кюветы;

f) извлекают использованные картриджи для реагентов и сосуд для проб.

Очевидно, что предлагаемый способ по существу предусматривает выполнение следующих трех действий:

- подготовку анализатора;

- определение заданных клинико-химических и/или иммунологических параметров;

- вывод данных или очистку анализатора.

При этом подготовка анализатора состоит из этапов а) и b), определение заданных клинико-химических и иммунологических параметров - из этапов с) и d), a вывод данных или очистка анализатора - из этапов е) и f) описанного выше способа.

Очевидным преимуществом предлагаемого способа является то, что в процессе одной и той же процедуры можно определить как клинико-химические параметры, так и иммунологические компоненты пробы. Прежде всего, данный способ можно осуществлять в одном и том же анализаторе. В результате, отпадает необходимость в приобретении различных аппаратов для анализа клинико-химических параметров и иммунологических параметров, что, в частности, приводит к значительной экономии средств в небольших врачебных кабинетах. Это преимущество достигается благодаря тому, что и клинико-химические, и иммунологические параметры определяют посредством измерительной кюветы. В отличие от этого, во всех известных способах посредством измерительной кюветы измеряют только клинико-химические параметры, а иммунологические параметры, напротив, измеряют в лунке планшета для микротитрования.

Соответственно еще одно преимущество предлагаемого способа заключается в том, что для определения как клинико-химических, так и иммунологических параметров в анализаторе может быть предусмотрен только один фотометрический блок. Кроме того, в одном и том же анализаторе можно определить несколько различных клинико-химических и/или иммунологических параметров пробы. Следовательно, для составления диагноза врач может применить, например, следующий подход. Сначала он берет у пациента пробу исследуемой биологической жидкости. Затем врач выбирает различные картриджи для реагентов, в зависимости от того, какие параметры ему необходимо определить. Для каждого из параметров врач вставляет в анализатор соответствующий картридж и, таким образом, осуществляет предлагаемый способ. Как описано выше, посредством данного способа врач получает необходимые различные клинико-химические и иммунологические параметры, на основе которых он позже может поставить диагноз.

Очевидно, что является предпочтительным, если для каждого определяемого клинико-химического или иммунологического параметра в приемное устройство для картриджей в анализаторе вставляют отдельный картридж. При этом в ячейках картриджа содержатся необходимые для соответствующего теста реагенты-индикаторы. Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить несколько различных клинико-химических и/или иммунологических параметров пробы. При этом целесообразно, если для каждого определяемого клинико-химического или иммунологического параметра в приемное устройство для картриджей в анализаторе вставляют отдельный картридж, причем в ячейках картриджа содержатся реагенты-индикаторы, необходимые для соответствующего теста.

Картриджи для реагентов, предназначенные для выполнения анализа клинико-химических параметров, предпочтительно содержат по меньшей мере один реагент-индикатор, а картриджи, предназначенные для выполнения анализа иммунологических параметров, предпочтительно содержат первую ячейку с конъюгатом, вторую ячейку с субстратным раствором и твердую фазу.

Согласно настоящему изобретению определение клинико-химических параметров предусматривает следующие этапы:

а) посредством дозирующего устройства осуществляют забор реагента-индикатора из картриджа для реагентов и забор пробы;

b) из дозирующего устройства реагент-индикатор и пробу помещают в измерительную кювету, соответствующую картриджу для реагентов;

c) инкубируют реагент-индикатор вместе с пробой, причем реагент-индикатор, имеющий содержащийся в пробе и определяемый клинико-химический параметр, в процессе реакции образует продукт, обнаруживаемый фотометрическим способом;

d) фотометрическим способом посредством измерительного устройства определяют концентрацию данного продукта в измерительной кювете.

Кроме того, определение клинико-химических параметров может включать в себя следующие этапы:

a) посредством дозирующего устройства осуществляют забор первого реагента-индикатора из первой ячейки картриджа для реагентов, а также забор пробы;

b) из дозирующего устройства реагент-индикатор и пробу помещают в измерительную кювету, соответствующую картриджу для реагентов;

c) посредством дозирующего устройства осуществляют забор второго реагента-индикатора из еще одной ячейки картриджа для реагентов;

d) из дозирующего устройства второй реагент-индикатор помещают в измерительную кювету;

e) инкубируют реагенты-индикаторы вместе с пробой, причем реагенты-индикаторы, имеющие содержащийся в пробе и определяемый клинико-химический параметр, в процессе реакции образуют продукт, обнаруживаемый фотометрическим способом;

f) фотометрическим способом посредством измерительного устройства определяют концентрацию данного продукта в измерительной кювете.

Данный второй вариант, в частности, осуществляют тогда, когда для определения конкретного клинико-химического параметра требуется более одного реагента.

Определение клинико-химических параметров также может предусматривать следующие этапы:

a) посредством дозирующего устройства осуществляют забор первого реагента-индикатора из первой ячейки картриджа для реагентов, а также забор пробы;

b) из дозирующего устройства реагент-индикатор и пробу помещают в измерительную кювету, соответствующую картриджу для реагентов;

c) посредством дозирующего устройства осуществляют забор второго реагента-индикатора из еще одной ячейки картриджа для реагентов;

d) из дозирующего устройства второй реагент-индикатор помещают в измерительную кювету;

e) осуществляют забор по меньшей мере еще одного реагента-индикатора из еще одной ячейки картриджа для реагентов или из ячейки дополнительного картриджа для реагентов и помещают указанный дополнительный или дополнительные реагенты-индикаторы в измерительную кювету;

f) инкубируют реагенты-индикаторы вместе с пробой, причем реагенты-индикаторы, имеющие содержащийся в пробе и определяемый клинико-химический параметр, в процессе реакции образуют продукт, обнаруживаемый фотометрическим способом;

g) фотометрическим способом посредством измерительного устройства определяют концентрацию данного продукта в измерительной кювете.

Для получения результата с наименьшими погрешностями, целесообразно, чтобы определение концентрации продукта характерной реакции фотометрическим способом включало в себя следующие этапы:

- посредством измерительного устройства осуществляют в измерительной кювете первое фотометрическое измерение;

- инкубируют в измерительной кювете смесь, состоящую из первого и/или второго реагента-индикатора и пробы;

- посредством измерительного устройства осуществляют в измерительной кювете второе фотометрическое измерение.

Благодаря этому, в частности, удается предотвратить и компенсировать неточности измерений, которые могут возникнуть, если к моменту первого измерения реакция завершилась еще не полностью.

Согласно настоящему изобретению определение иммунологических параметров включает в себя следующие этапы:

a) посредством дозирующего устройства осуществляют забор конъюгата из первой ячейки картриджа для реагентов, предназначенного для выполнения иммунологического анализа, а также забор пробы;

b) из дозирующего устройства конъюгат и пробу вносят на твердую фазу картриджа;

c) инкубируют твердую фазу с конъюгатом и пробой;

d) удаляют лишний конъюгат и пробу промыванием твердой фазы;

e) посредством дозирующего устройства осуществляют забор субстратного раствора из второй ячейки картриджа для реагентов, предназначенного для выполнения иммунологического анализа;

f) из дозирующего устройства субстратный раствор вносят на твердую фазу;

g) инкубируют субстратный раствор на твердой фазе;

h) посредством дозирующего устройства осуществляют забор прореагировавшего субстратного раствора;

i) из дозирующего устройства прореагировавший субстратный раствор помещают в измерительную кювету;

j) посредством измерительного устройства измеряют концентрацию прореагировавшего субстрата в субстратном растворе.

При этом этапы а)-g) соответствуют общеизвестным этапам, выполняемым при твердофазном иммуноферментном анализе. Это означает, что при совместной подаче конъюгата и пробы на твердую фазу контролируемый иммунологический параметр, например, определенный пептид, антитело или другой протеин, соединяется со своим связанным с твердой фазой партнером по связи, то есть с соответствующим антителом, подходящим антигеном и прочее. Конъюгат содержит подходящий ферментный комплекс, который состоит из партнера по связи и связанного с партнером по связи фермента. Кроме того, партнер по связи связывается с контролируемым параметром. Таким образом, на твердой фазе иммобилизуется весь комплекс, состоящий из параметра, партнера по связи и фермента. Лишний комплекс или лишнюю пробу удаляют или смывают во время следующего этапа. Добавленный после этого субстратный раствор содержит специфический субстрат для фермента, иммобилизованного на твердой фазе. Данный субстрат реагирует с ферментом, в результате чего происходит изменение цвета и, следовательно, изменение оптической плотности при определенной длине волны.

Таким образом, особое преимущество предлагаемого способа состоит в том, что реакция фермент-субстрат завершается вследствие того, что весь субстратный раствор, теперь содержащий как прореагировавший, так и не прореагировавший субстрат, удаляют с твердой фазы и при помощи пипетки переносят в измерительную кювету для определения необходимых параметров. Таким образом, при помощи одного и того же устройства, содержащего картриджи для реагентов и измерительные кюветы, можно определить несколько различных параметров, прежде всего иммунологических и клинико-химических параметров. Во время процесса, который протекает всегда одинаково, концентрацию соответствующего параметра можно определить посредством измерительной кюветы и всего лишь одного фотометрического блока.

В этой связи еще одно преимущество предлагаемого способа состоит в том, что нет необходимости приготавливать в качестве дополнительного компонента стоп-реагент, который в известных способах используют, чтобы завершить реакцию фермент-субстрат. В отличие от известных технических решений, в настоящем изобретении указанную реакцию завершают, удалив и переместив посредством пипетки в измерительную кювету частично прореагировавший субстратный раствор. Кроме того, так как ферменты, иммобилизованные на твердой фазе, остаются на твердой фазе, а не переносятся в измерительную кювету, если раствор удаляют с твердой фазы, никакой дополнительной реакции субстрата не происходит.

Предлагаемый способ предпочтительно осуществляют при температуре от 27 до 39°C, предпочтительно при температуре 37°C. Подобное согласование температурных условий твердофазного иммуноферментного анализа позволяет определять клинико-химические и иммунологические параметры в любой последовательности, непосредственно друг за другом, без необходимости каждый раз изменять температуру прибора, в противном случае это было бы связано с длительными фазами нагрева или охлаждения и соответствующим временем ожидания.

Чтобы предотвратить загрязнение кончика дозирующего устройства и, тем самым, исключить искажение результатов анализа, после каждой выдачи реагента-индикатора, пробы, конъюгата или субстратного раствора кончик дозирующего устройства предпочтительно заменяют или очищают в промывочном устройстве.

Кроме того, изобретение также относится к способу определения иммунологических параметров с применением твердофазного иммуноферментного анализа в автоматическом анализаторе, оснащенном дозирующим устройством, по меньшей мере одним гнездом под картридж для реагентов, содержащий компоненты, необходимые для осуществления анализа, приемным устройством для измерительной кюветы, по меньшей мере одной измерительной кюветой, причем с каждым картриджем для реагентов соединена одна измерительная кювета, приемным устройством для сосуда для проб, а также фотометрическим или спектрометрическим измерительным устройством, причем указанный способ включает в себя следующие этапы:

a) посредством дозирующего устройства осуществляют забор конъюгата и пробы;

b) из дозирующего устройства конъюгат и пробу вносят на твердую фазу;

c) инкубируют твердую фазу с конъюгатом и пробой;

d) удаляют лишний конъюгат и пробу промыванием твердой фазы;

e) посредством дозирующего устройства осуществляют забор субстратного раствора;

f) из дозирующего устройства субстратный раствор вносят на твердую фазу;

g) инкубируют субстратный раствор на твердой фазе;

h) посредством дозирующего устройства осуществляют забор прореагировавшего субстратного раствора;

i) из дозирующего устройства прореагировавший субстратный раствор помещают в измерительную кювету;

j) посредством измерительного устройства измеряют концентрацию прореагировавшего субстрата в субстратном растворе.

При этом после внесения на твердую фазу конъюгат и пробу предпочтительно смешивают. Кроме того, измерение концентрации путем определения оптической плотности предпочтительно осуществляют при различных длинах волны, а пробу перед забором посредством дозирующего устройства на этапе а) предпочтительно разбавляют в отдельном картридже для разбавления.

Дополнительные признаки, подробности и преимущества настоящего изобретения следуют из формулы изобретения и описания, приведенного ниже со ссылками на прилагаемые чертежи, иллюстрирующие предпочтительные варианты его осуществления. В частности, на чертежах изображено следующее.

На фиг.1а показано расположение нескольких картриджей для реагентов и измерительных кювет для определения нескольких показателей в автомате, предназначенном для осуществления предлагаемого способа.

На фиг.1b показан картридж для реагентов, используемый для осуществления предлагаемого способа.

На фиг.2 проиллюстрирована последовательность теста для определения клинико-химического параметра при осуществлении предлагаемого способа.

На фиг.3 проиллюстрирована последовательность теста для определения иммунологического параметра при осуществлении предлагаемого способа.

Как было указано выше, предлагаемый способ по существу предусматривает выполнение следующих действий:

- подготовку анализатора;

- определение заданных клинико-химических и/или иммунологических параметров;

- вывод данных или очистку анализатора.

Как правило, данному способу предшествует взятие проб. Также, пользователю следует определить, какие параметры взятой пробы он намерен регистрировать, то есть исследовать. После этого пользователь производит подготовку анализатора.

Данный этап осуществления способа включает в себя установку соответствующих выбранных картриджей Р.Р для реагентов и, при необходимости, установку в анализатор измерительных кювет М и пробы Р. Картриджи RP для реагентов выбирают в зависимости от того, какие параметры необходимо определить. В анализатор можно устанавливать либо несъемные измерительные кюветы М, либо одноразовые кюветы. Кроме того, указанный способ предпочтительно осуществляют при помощи устройства, в котором пробу р устанавливают отдельно от картриджей RP для реагентов и измерительных кювет М.

На фиг.1а показано, что картриджи RP для реагентов и измерительные кюветы М вставлены последовательно в карусель КА анализатора. Каждому картриджу RP для реагентов соответствует измерительная кювета М.

Как следует из фиг.1b, каждый картридж RP содержит корпус 11, в котором предусмотрены три ячейки 12, 13, 14; В зависимости от определяемых параметров в указанные ячейки 12, 13, 14 помещают соответствующие реагенты или растворы для выполнения теста.

Кроме того, в корпусе 15 выполнен вырез 15, в который вставлена твердая фаза 20. Если картриджи RP используют для проведения иммунологического теста, с твердой фазой 20 связан соответствующий антиген или антитело А. При этом предпочтительно, чтобы указанный способ осуществляли при помощи устройства, в котором проба р или сосуд Р для проб, содержащий пробу р, была установлена отдельно от картриджей RP для реагентов и измерительных кювет М.

После того, как анализатор подготовлен соответствующим образом, пользователь еще может ввести в управляющий компьютер анализатора последовательность, в которой он вставил в анализатор соответствующие картриджи для реагентов и, следовательно, последовательность определяемых параметров. Несмотря на это, картриджи RP для реагентов можно, например, снабдить штриховым кодом, что позволяет анализатору определить регистрируемый параметр автоматически.

Заданные клинико-химические и/или иммунологические параметры определяются анализатором автоматически сразу же после подготовки анализатора на следующем этапе осуществления способа, а именно на этапе определения заданных клинико-химических и/или иммунологических параметров. При этом сначала обращаются к первому картриджу RP для реагентов и устанавливают, какой из параметров необходимо определить с его помощью - клинико-химический и/или иммунологический. Затем посредством соответствующего теста, как описано ниже, определяют требуемый параметр.

Если определяемый параметр представляет собой клинико-химический показатель, то тест осуществляют в последовательности, которая схематично показана на фиг.2 и описана ниже. К началу данной последовательности в сосуде Р для проб уже имеется проба р. В зависимости от требований в ячейках 12, 13, 14 картриджа RP для регентов содержится один или насколько реагентов-индикаторов R1, R2.

На первом этапе А1 посредством дозирующего устройства (не показано) берут первый реагент-индикатор R1 и соответствующее количество пробы р. Для этого сначала всасывают реагент-индикатор R1, подготовленный в одной из ячеек 12, 13, 14 картриджа RP для реагентов. После этого берут пузырек воздуха, чтобы, с одной стороны, предотвратить загрязнение пробы р, содержащейся в сосуде Р для проб, а с другой стороны, предотвратить непосредственное смешивание реагента-индикатора R1 и пробы р до следующей операции. И наконец, еще берут пробу р.

На втором этапе А2 взятый реагент-индикатор R1 и взятую пробу р помещают в измерительную кювету М анализатора. После этого в измерительной кювете М смешивают реагент-индикатор R1 и пробу р. Очевидно, что смешивание можно активно поддерживать, например, посредством втягивания и внесения пипеткой и прочее.

Если для выбранного теста требуется еще один реагент-индикатор R2, то его берут в ходе третьего этапа A3 из еще одной ячейки 12, 13, 14 картриджа RP для реагентов, после чего на четвертом этапе А4 его помещают в измерительную кювету М. Снова происходит перемешивание с уже имеющимися жидкостями.

При необходимости этапы A3 и А4 повторяют до тех пор, пока в измерительной кювете М не будут находиться все требуемые компоненты.

Прежде чем оценивать тест, компоненты R1, R2, р, смешанные указанным образом в измерительной кювете М, инкубируют в течение заданного периода времени в ходе следующего этапа А5. Данное время зависит от протекающей во время теста реакции, при этом время можно запрограммировать заранее, или его может ввести пользователь.

В ходе последнего этапа А6 осуществляют фотометрическую оценку. При этом оптическую плотность определяют сразу же по истечении инкубационного периода, просвечивая измерительную кювету М светом определенной длины h_v волны, например, 420 нм. После этого может последовать еще один инкубационный период, а затем - второе измерение. Затем, сравнивая оба измеренных значения и запрограммированное эталонное значение или эталонное значение, индивидуально заданное пользователем, определяют фактическое значение, представляющее собой результат теста.

Если определяемый параметр представляет собой иммунологический параметр, то предлагаемый тест, а именно твердофазный иммуноферментный анализ, осуществляют в последовательности, которая схематично показана на фиг.3.

На первом этапе В1 вместе с соответствующим количеством пробы р берут содержащийся в картридже RP для реагентов раствор, который содержит конъюгат фермента и кратко обозначается как конъюгат К. Проба р, как и при определении клинико-химического параметра, находится в сосуде Р для проб. Забор осуществляют аналогично этапу А1, то есть сначала из соответствующей ячейки 12 картриджа RP для реагентов берут конъюгат К, затем пузырек воздуха и, наконец, пробу р из сосуда Р для проб.

На этапе В2 конъюгат К и пробу р помещают на твердую фазу 20 картриджа RP для реагентов и инкубируют на твердой фазе 20 в течение заданного периода времени. С твердой фазой 20 связан антиген или антитело А, подходящее к определяемому параметру.

В течение инкубационного периода определяемый параметр соединяется со связанным с твердой фазой 20 антигеном или антителом А и одновременно с содержащимся в конъюгате К партнером по связи (партнер по связи на чертежах не показан). Данный партнер по связи, в свою очередь, связан с ферментом. Таким образом, на твердой фазе 20 картриджа RP для реагентов иммобилизируется комплекс. Наряду с партнером по связи и связанным антигеном или антителом А данный комплекс содержит определяемый параметр и фермент, способный преобразовать специфический субстрат.

Затем на третьем этапе ВЗ избыточный конъюгат К и избыточную пробу р удаляют путем промывки твердой фазы 20.

После этого на четвертом этапе В4 из еще одной ячейки 13 картриджа RP для реагентов берут субстратный раствор S. Субстратный раствор S в определенной концентрации содержит субстрат, согласованный с содержащимся в конъюгате К ферментом. Если субстрат, например, тетраметилбензидиновый субстрат, реагирует с ферментом, то происходит особое обнаруживаемое изменение цвета.

Субстратный раствор S подают на твердую фазу 20 на этапе В5. Теперь содержащийся в данном растворе субстрат может прореагировать с иммобилизованным на твердой фазе 20 ферментом. При этом как прореагировавший, так и не прореагировавший субстрат в растворе остается мобильным, а ферментный комплекс остается связанным с твердой фазой 20. Таким образом, возникающий прореагировавший субстратный раствор S’, в зависимости от количества иммобилизованного на твердой фазе 20 фермента, содержит соответствующее количество прореагировавшего субстрата и соответствующее количество не прореагировавшего субстрата.

Согласно настоящему изобретению данную реакцию завершают на этапе В6. При этом осуществляют забор прореагировавшего субстратного раствора S’ из твердой фазы 20, а затем на этапе В7 помещают его в измерительную кювету М. При данном переносе, выполняемом посредством пипетки, связанные с твердой фазой ферменты остаются. Напротив, прореагировавший субстрат берут вместе в раствором. Тем не менее, субстрат, который все еще содержится в растворе, продолжать реагировать с ферментом не может, так как фермент в измерительной кювете М теперь отсутствует.

Затем, как описано в отношении клинико-химических параметров, осуществляют количественную оценку реакции фермент-субстрат в измерительной кювете. При этом определяют оптическую плотность субстратного раствора при трех различных длинах волн. Данные значения сравнивают с эталонным значением, сохраненным в памяти анализатора или заданным пользователем.

При этом между временем, прореагировавшим количеством и температурой реакции существует известное специалисту соотношение. Так как время и температура реакции известны или заданы, на основании прореагировавшего количества субстрата можно сделать заключение об имеющемся количестве иммобилизованного фермента и, следовательно, о концентрации определяемого параметра в пробе р.

Если определение первого показателя завершено, переходят к следующему картриджу для реагентов. При этом снова определяют сначала, какой из параметров следует определить с помощью данного картриджа - клинико-химический и/или иммунологический. Затем опять осуществляют соответствующую процедуру из двух вышеописанных тестовых процедур.

По завершению процесса определения каждого параметра полученные результаты отправляют в устройство вывода данных, например, принтер, в файл или на дисплей, чтобы пользователь мог оценить эти результаты.

Если все требуемые параметры определены, пользователю всего лишь остается очистить анализатор, для этого он извлекает использованные картриджи RP для реагентов. Очевидно, что анализатор можно выполнить с возможностью автоматического извлечения картриджей RP.

Если при осуществлении способа используют одноразовые кюветы, то извлекают и кюветы. В качестве альтернативы, можно оснастить анализатор автоматически исполняющейся программой чистки остающихся в анализаторе измерительных кювет М.

Настоящее изобретение не ограничивается описанными вариантами осуществления, его можно использовать различным образом.

Все признаки и преимущества, следующие из формулы изобретения, описания и чертежей, включая конструктивные особенности, расположение в пространстве и технологические этапы, могут быть существенными для изобретения как сами по себе, так и в самых разных сочетаниях.

Таким образом, способ анализа пробы, включающего в себя анализ клинико-химических параметров и анализ иммунологических параметров в автоматическом анализаторе, оснащенном дозирующим устройством, по меньшей мере одним гнездом под картридж RP для реагентов, содержащий компоненты, необходимые для осуществления анализа, приемным устройством для измерительной кюветы М, по меньшей мере одной измерительной кюветой М, причем с каждым картриджем RP для реагентов соединена одна измерительная кювета М, приемным устройством для сосуда Р для проб, содержащего пробу р, а также фотометрическим или спектрометрическим измерительным устройством, содержит следующие этапы:

a) в приемное устройство устанавливают картриджи RP для реагентов для выполнения анализов;

b) в пробоприемник устанавливают сосуд Р для проб, содержащий пробу р;

c) определяют клинико-химические параметры посредством измерительной кюветы М, соединенной с картриджем RP для реагентов, предусмотренным для выполнения анализа соответствующего клинико-химического параметра; и/или

а) определяют иммунологические параметры посредством измерительной кюветы М, соединенной с картриджем RP для реагентов, предусмотренным для выполнения анализа соответствующего иммунологического параметра;

e) промывают или извлекают использованные измерительные кюветы М;

f) извлекают использованные картриджи RP для реагентов и сосуд Р для проб.

При этом определяют предпочтительно несколько разных клинико-химических и/или иммунологических параметров одной пробы р. Кроме того, целесообразно для каждого определяемого клинико-химического или иммунологического параметра в приемное устройство для картриджей RP анализатора вставлять отдельный картридж RP, причем в картридже RP в ячейках 12, 13, 14 содержатся реагенты-индикаторы R1, R2, К, S, необходимые для соответствующего теста.

Кроме того, картриджи RP для реагентов, предназначенные для выполнения анализа клинико-химических параметров, предпочтительно содержат по меньшей мере один реагент-индикатор R1, R2. Картриджи RP, предназначенные для выполнения анализа иммунологических параметров, предпочтительно содержат первую ячейку 12 с конъюгатом К, вторую ячейку 13 с субстратом S и твердую фазу 20. При этом определение клинико-химических параметров предпочтительно предусматривает следующие этапы:

а) посредством дозирующего устройства осуществляют забор реагента-индикатора R1 из картриджа RP для реагентов и забор пробы р;

g) реагент-индикатор R1 и пробу р из дозирующего устройства помещают в измерительную кювету М, соответствующую картриджу RP для реагентов;

h) инкубируют реагент-индикатор R1 вместе с пробой р, причем реагент-индикатор R1, имеющий содержащийся в пробе р и определяемый клинико-химический параметр, в процессе реакции образует продукт, обнаруживаемый фотометрическим способом;

i) фотометрическим способом посредством измерительного устройства определяют концентрацию указанного продукта в измерительной кювете М.

Также предпочтительно, если определение клинико-химических параметров включает в себя следующие этапы:

а) посредством дозирующего устройства осуществляют забор первого реагента-индикатора R1 из первой ячейки 12 картриджа RP для реагентов, а также забор пробы р;

b) из дозирующего устройства реагент-индикатор R1 и пробы р помещают в измерительную кювету М, соответствующую картриджу RP для реагентов;

с) посредством дозирующего устройства осуществляют забор второго реагента-индикатора R2 из еще одной ячейки 13, 14 картриджа RP для реагентов;

d) из дозирующего устройства второй реагент-индикатор R2 помещают в измерительную кювету К;

e) инкубируют реагенты-индикаторы R1, R2 вместе с пробой р, причем реагенты-индикаторы R1, R2, имеющие содержащийся в пробе р и определяемый клинико-химический параметр, в процессе реакции образуют продукт, обнаруживаемый фотометрическим способом;

f) фотометрическим способом посредством измерительного устройства определяют концентрацию данного продукта в измерительной кювете М.

Также предпочтительно, чтобы определение клинико-химических параметров предусматривало выполнение следующих этапов:

a) посредством дозирующего устройства осуществляют забор первого реагента-индикатора R1 из первой ячейки 12, 13, 14 картриджа RP для реагентов, а также забор пробы р;

b) из дозирующего устройства реагент-индикатор R1 и пробу р помещают в измерительную кювету М, соответствующую картриджу RP для реагентов;

c) посредством дозирующего устройства осуществляют забор второго реагента-индикатора R2 из еще одной ячейки 12, 13, 14 картриджа RP для реагентов;

d) из дозирующего устройства второй реагент-индикатор R2 помещают в измерительную кювету М;

e) осуществляют забор по меньшей мере еще одного реагента-индикатора из еще одной ячейки 12, 13, 14 картриджа RP для реагентов или из ячейки 12, 13, 14 дополнительного картриджа RP для реагентов и помещают указанный дополнительный или дополнительные реагенты-индикаторы в измерительную кювету М;

f) инкубируют реагенты-индикаторы R1, R2 вместе с пробой р, причем реагенты-индикаторы R1, R2, имеющие содержащийся в пробе р и определяемый клинико-химический параметр, в процессе реакции образуют продукт, обнаруживаемый фотометрическим способом;

g) фотометрическим способом посредством измерительного устройства определяют концентрацию данного продукта в измерительной кювете М.

В каждом случае является целесообразным, если при определении концентрации продукта характерной реакции фотометрическим способом действуют следующим образом:

- посредством измерительного устройства осуществляют в измерительной кювете М первое фотометрическое измерение;

- инкубируют в измерительной кювете М смесь, состоящую из первого и/или второго реагента-индикатора и пробы;

- посредством измерительного устройства осуществляют в измерительной кювете М второе фотометрическое измерение.

Очевидно также, что предпочтительным является, если при определении иммунологических параметров посредством предлагаемого способа действуют следующим образом:

a) посредством дозирующего устройства осуществляют забор конъюгэта К из первой ячейки 12, 13, 14 картриджа RP для реагентов, предназначенного для выполнения иммунологического анализа, а также забор пробы р;

b) из дозирующего устройства конъюгат К и пробу р вносят на твердую фазу 20 картриджа RP;

c) инкубируют твердую фазу 20 с конъюгатом К и пробой р;

d) удаляют лишний конъюгат К и пробу р промыванием твердой фазы 20;

e) посредством дозирующего устройства осуществляют забор субстратного раствора S из второй ячейки 12, 13, 14 картриджа RP для реагентов, предназначенного для выполнения иммунологического анализа;

f) из дозирующего устройства субстратный раствор S вносят на твердую фазу 20;

g) инкубируют субстратный раствор S на твердой фазе 20;

h) посредством дозирующего устройства осуществляют забор прореагировавшего субстратного раствора S’;

i) из дозирующего устройства прореагировавший субстратный раствор S’ помещают в измерительную кювету М;

j) посредством измерительного устройства измеряют концентрацию прореагировавшего субстрата в субстратном растворе S’.

Указанный способ осуществляют предпочтительно при температуре от 27 до 39°C, предпочтительно при температуре 37°C, причем после каждой выдачи реагента-индикатора R1, R2, пробы р, конъюгата К или субстратного раствора S кончик дозирующего устройства заменяют или очищают в промывочном устройстве.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу определения иммунологических параметров в пробе р с применением твердофазного иммуноферментного анализа в автоматическом анализаторе, оснащенном дозирующим устройство, по меньшей мере одним гнездом под картридж RP для реагентов, содержащий компоненты, необходимые для осуществления анализа, и твердую фазу 20, связанную с антигеном или антителом А, приемным устройством для измерительной кюветы М, по меньшей мере одной измерительной кюветой М, причем с каждым картриджем RP для реагентов соединена одна измерительная кювета М, приемным устройством для сосуда Р для проб, содержащего пробу р, а также фотометрическим или спектрометрическим измерительным устройством. При этом указанный способ включает в себя следующие этапы:

a) посредством дозирующего устройства осуществляют забор конъюгата К и пробы р;

b) из дозирующего устройства конъюгат К и пробу р вносят в твердую фазу 20;

c) инкубируют твердую фазу 20 с конъюгатом К и пробой р;

d) удаляют лишний конъюгат К и пробу р промыванием твердой фазы 20;

e) посредством дозирующего устройства осуществляют забор субстратного раствора S;

f) из дозирующего устройства субстратный раствор S вносят на твердую фазу 20;

g) инкубируют субстратный раствор S на твердой фазе 20;

h) посредством дозирующего устройства осуществляют забор прореагировавшего субстратного раствора S’;

i) из дозирующего устройства прореагировавший субстратный раствор S’ помещают в измерительную кювету М;

j) посредством измерительного устройства измеряют концентрацию прореагировавшего субстрата в субстратном растворе S’.

При этом целесообразно, если конъюгат К и пробу р смешивают после внесения на твердую фазу 20, если измерение концентрации путем определения оптической плотности осуществляют при различных длинах волны, и/или если пробу р перед забором посредством дозирующего устройства на этапе а) разбавляют в отдельном картридже для разбавления.

НОМЕРА ПОЗИЦИЙ

А антиген или антитело

К конъюгат

КА карусель

М измерительная кювета

Р сосуд для проб

р проба

RP картридж для реагентов

R1 реагент-индикатор

R2 реагент-индикатор

S субстратный раствор

S’ субстратный раствор

11 корпус

12 ячейка

13 ячейка

14 ячейка

15 вырез

20 твердая фаза

Изобретение относится к области анализа биологических проб. Способ анализа проб включает в себя анализ клинико-химических и иммунологических параметров, а также включает установку картриджей для реагентов в приемное устройство, установку сосуда для пробы в пробоприемник, определение клинико-химических и иммунологических параметров с применением измерительной кюветы, промывку или извлечение использованных измерительных кювет, извлечение использованных картриджей для реагентов и сосуда для проб. При этом для каждого определяемого клинико-химического или иммунологического параметра в приемное устройство вставляют отдельный картридж для реагентов, который содержит ячейки с необходимыми для анализа реагентами-индикаторами, причем в картриджи для реагентов для анализа клинико-химических параметров помещают по меньшей мере один реагент-индикатор, а в картриджах для анализа иммунологических параметров, предусматривают первую ячейку с конъюгатом, вторую ячейку с субстратным раствором и твердую фазу. Изобретение обеспечивает возможность одновременного определения клинико-химических и иммунологических параметров пробы. 10 з.п. ф-лы, 3 ил.

1. Способ анализа пробы (р), включающий в себя анализ клинико-химических параметров и анализ иммунологических параметров в автоматическом анализаторе, оснащенном дозирующим устройством, по меньшей мере одним приемным устройством (KA) в виде карусели, выполненной с возможностью установки в нее равного количества картриджей (RP) для реагентов, содержащих компоненты, необходимые для осуществления анализа, и измерительных кювет (М), причем с каждым картриджем (RP) для реагентов связана одна измерительная кювета (М), приемным устройством для сосуда (Р) для проб, содержащего пробу (р), а также фотометрическим или спектрометрическим измерительным устройством, отличающийся тем, что он включает в себя следующие этапы:

a) в приемное устройство (KA) устанавливают картриджи (RP) для реагентов для выполнения анализов, причем для каждого определяемого клинико-химического или иммунологического параметра в соответствующее приемное устройство (KA) анализатора вставляют отдельный картридж для реагентов, причем картридж (RP) для реагентов содержит ячейки (12, 13, 14) и в ячейках соответствующего картриджа (RP) для реагентов содержатся необходимые для соответствующего анализа реагенты-индикаторы, причем в картриджи (RP) для реагентов, предназначенные для выполнения анализа клинико-химических параметров, помещают по меньшей мере один реагент-индикатор (R1, R2), а в картриджах (RP), предназначенных для выполнения анализа иммунологических параметров, предусматривают первую ячейку (12) с конъюгатом (K), вторую ячейку (13) с субстратным раствором (S) и твердую фазу (20);

b) в пробоприемник устанавливают сосуд (Р) для проб, содержащий пробу (р), отдельно от картриджей (RP) для реагентов и измерительных кювет (М);

c) определяют клинико-химические параметры с применением измерительной кюветы (М), связанной с картриджем (RP) для реагентов, предусмотренным для выполнения анализа соответствующего клинико-химического параметра, причем на этапе определения клинико-химических параметров выполняют этапы, на которых:

- посредством дозирующего устройства осуществляют забор по меньшей мере одного реагента-индикатора (R1, R2) из картриджа (RP) для реагентов и забор пробы (р);

- из дозирующего устройства по меньшей мере один реагент-индикатор (R1, R2) и пробу (р) помещают в измерительную кювету (М), соответствующую картриджу (RP) для реагентов;

- инкубируют по меньшей мере один реагент-индикатор (R1, R2) вместе с пробой (р), причем по меньшей мере один реагент-индикатор (R1, R2) реагирует с клинико-химическим параметром, содержащимся в пробе с образованием продукта, обнаруживаемого фотометрическим способом;

- фотометрическим способом посредством измерительного устройства определяют концентрацию продукта в измерительной кювете (М) и

d) определяют иммунологические параметры с применением измерительной кюветы (М), связанной с картриджем (RP) для реагентов, предусмотренным для выполнения анализа соответствующего иммунологического параметра, причем на этапе определения иммунологических параметров выполняют этапы, на которых:

- посредством дозирующего устройства осуществляют забор конъюгата (K) из первой ячейки (12, 13, 14) картриджа (RP) для реагентов, предназначенного для выполнения иммунологического анализа, а также забор пробы (р);

- из дозирующего устройства конъюгат (K) и пробу (р) вносят на твердую фазу (20) картриджа (RP) для реагентов;

- инкубируют твердую фазу (20) с конъюгатом (K) и пробой (р);

- удаляют лишний конъюгат (K) и пробу (р) промыванием твердой фазы (20);

- посредством дозирующего устройства осуществляют забор субстратного раствора (S) из второй ячейки (12, 13, 14) картриджа (RP) для реагентов, предназначенного для выполнения иммунологического анализа;

- из дозирующего устройства субстратный раствор (S) вносят на твердую фазу 20;

- инкубируют субстратный раствор (S) на твердой фазе 20;

- посредством дозирующего устройства осуществляют забор прореагировавшего субстратного раствора (S');

- из дозирующего устройства прореагировавший субстратный раствор (S') помещают в измерительную кювету (М);

- посредством измерительного устройства измеряют концентрацию прореагировавшего субстрата в субстратном растворе (S');

e) промывают или извлекают использованные измерительные кюветы (М);

f) извлекают использованные картриджи (RP) для реагентов и сосуд (Р) для проб.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что определяют несколько разных клинико-химических и/или иммунологических параметров одной пробы (р).

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что реагенты-индикаторы содержатся в ячейках (12, 13, 14) и содержат первый реагент-индикатор (R1), второй реагент-индикатор (R2), конъюгат (K) и субстратный раствор (S).

4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что определение клинико-химических параметров включает в себя следующие этапы:

a) посредством дозирующего устройства осуществляют забор первого реагента-индикатора (R1) из первой ячейки (12) картриджа (RP) для реагентов, а также забор пробы (р);

b) из дозирующего устройства реагент-индикатор (R1) и пробу (р) помещают в измерительную кювету (М), соответствующую картриджу (RP) для реагентов;

c) посредством дозирующего устройства осуществляют забор второго реагента-индикатора (R2) из еще одной ячейки (13, 14) картриджа (RP) для реагентов;

d) из дозирующего устройства второй реагент-индикатор (R2) помещают в измерительную кювету (М);

e) инкубируют реагенты-индикаторы (R1, R2) вместе с пробой (р), причем реагенты-индикаторы (R1, R2) реагируют с клинико-химический параметрами, содержащимися в пробе с образованием продукта, обнаруживаемого фотометрическим способом;

f) фотометрическим способом посредством измерительного устройства определяют концентрацию продукта в измерительной кювете (М).

5. Способ по любому из пп. 1-2, отличающийся тем, что определение клинико-химических параметров предусматривает следующие этапы:

a) посредством дозирующего устройства осуществляют забор первого реагента-индикатора (R1) из первой ячейки (12, 13, 14) картриджа (RP) для реагентов, а также забор пробы (р);

b) из дозирующего устройства реагент-индикатор (R1) и пробу (р) помещают в измерительную кювету (М), соответствующую картриджу (RP) для реагентов;

c) посредством дозирующего устройства осуществляют забор второго реагента-индикатора (R2) из еще одной ячейки (12, 13, 14) картриджа (RP) для реагентов;

d) из дозирующего устройства второй реагент-индикатор (R2) помещают в измерительную кювету (М);

e) осуществляют забор по меньшей мере еще одного реагента-индикатора из еще одной ячейки (12, 13, 14) картриджа (RP) для реагентов или из ячейки (12, 13, 14) дополнительного картриджа (RP) для реагентов и помещают указанный дополнительный или дополнительные реагенты-индикаторы в измерительную кювету (М);

f) инкубируют первый реагент-индикатор (R1), второй реагент-индикатор (R2) и указанный по меньшей мере еще один дополнительный реагент-индикатор вместе с пробой (р), причем реагенты-индикаторы реагируют с клинико-химическими параметрами, содержащимися в пробе (р) с образованием продукта, обнаруживаемого фотометрическим способом;

g) фотометрическим способом посредством измерительного устройства определяют концентрацию продукта в измерительной кювете (М).

6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что определение концентрации продукта характерной реакции фотометрическим способом предусматривает следующие этапы:

посредством измерительного устройства осуществляют в измерительной кювете (М) первое фотометрическое измерение;

инкубируют в измерительной кювете (М) смесь, состоящую из первого и/или второго реагента-индикатора и пробы;

посредством измерительного устройства осуществляют в измерительной кювете (М) второе фотометрическое измерение.

7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что после внесения на твердую фазу (20) конъюгат (K) и пробу (р) смешивают.

8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что измерение концентрации осуществляют путем определения оптической плотности при различных длинах волны.

9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что анализатор содержит отдельный картридж для разбавления, при этом пробу (р) перед забором посредством дозирующего устройства на этапе а) разбавляют в указанном отдельном картридже для разбавления.

10. Способ по любому из пп. 1, 2, 6, 7-9, отличающийся тем, что его осуществляют при температуре от 27 до 39°С, предпочтительно при температуре 37°С.

11. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что анализатор содержит промывочное устройство, причем после каждой выдачи реагента-индикатора (R1, R2), пробы (р), конъюгата (K) или субстратного раствора (S) кончик озирующего устройства заменяют или очищают в указанном промывочном устройстве.