Штамм Leucobacter aridicollis ARC 6 ВКПМ Ас-1992 деструктор нефти и нефтепродуктов Российский патент 2017 года по МПК C12N1/20 C02F3/34 B09C1/10 C12R1/01 

Описание патента на изобретение RU2624054C2

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области биотехнологии, микробиологии, экологии, охране окружающей среды и представляет собой новый бактериальный штамм Leucobacter aridicollis ARC 6 ВКПМ Ас-1992, обладающий способностью к деструкции нефти и нефтепродуктов. Штамм может быть использован для очистки акваторий водоемов, береговой линии, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, при температуре от+4 до +20°C и солености 30 г/л.

Уровень техники

Известен штамм Rhodococcus sp. - деструктор нефтяных углеводородов (патент РФ №2518349, приоритет 11.04.2013, опубл. 10.06.2014). Данный штамм показал высокую степень деструкции углеводородов при температуре +30°C. Однако данный штамм не способен производить утилизацию углеводородов при низких температурах.

Известен штамм Pseudomonas alcaligenes В-1 (патент РФ 2133770, приоритет 25.03.1998, опубл. 27.07.1999). Недостатком данного штамма также является то, что он не утилизирует нефтезагрязнения при низких температурах.

Известен штамм Exiguobacterium mexicanum ВКПМ В-11011 (патент РФ №2523584, приоритет 2013-03-27, опубл. 20.07.2014). Штамм может быть использован для очистки почв и водоемов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, в широком диапазоне температур от +4 до +37°C. Недостатком штамма является то, что он не способен утилизировать нефтезагрязнения при высокой солености воды до 30 г/л.

Наиболее близким аналогом является штамм Rhodococcus erythropolis, депонирован под регистрационным номером ВКМ Ac-2613D (патент РФ 2553336, 20.08.2013, опубл. 10.06.2015). Штамм используется для очистки пресноводных, солоноватоводных и морских объектов и донных отложений. Микроорганизм обеспечивает деструкцию нефти в водных объектах при температуре от +2 до +25°C и солености до 2,7%. Недостатком изобретения является то, что штамм утилизирует углеводороды в условиях, богатых по питательным веществам (в состав среды входит пептон 5 г/л и сахароза 15 г/л). В реальных условиях утилизации углеводородных загрязнений количество питательных веществ значительно снижено.

Раскрытие изобретения

Задачей настоящего изобретения является получение бактериального штамма, способного осуществлять деструкцию нефти и нефтепродуктов при температуре от +4 до +20°C и солености 30 г/л.

Поставленная задача решается тем, что получен штамм Leucobacter aridicollis ARC 6 ВКПМ Ас-1992, способный осуществлять деструкцию нефти и нефтепродуктов, который может быть использован для очистки акваторий водоемов, береговой линии, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, при температуре от +4 до +20°C и солености 30 г/л.

Штамм выделен из портовой зоны города Мурманск 3 июня 2014 года. Штамм депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИгенетика (ВКПМ, Москва, 1-й Дорожный пр., д.1) под регистрационным номером ВКПМ Ас-1992.

Идентификация штамма была осуществлена на основании изучения его культурально-морфологических и физиолого-биохимических характеристик, а также на основании изучения последовательности гена 16S рРНК.

Полученный штамм характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки

Колонии бежевые, округлые, гладкие, плоские, блестящие, с ровным краем, однородной структуры, мягкой консистенции, слизистые. Размеры около 1,5-2 мм. Клетки мелкие, палочковидные. Окраска по Граму положительная.

Физиолого-биохимические признаки

Штамм растет при температуре от +4 до +20°C, в аэробных условиях. Оптимум роста от +4 до +10°C. Растет при рН 4,0-8,0. Растет на плотных и жидких питательных средах с содержанием NaCl 30 г/л. Способен расти в жидкой среде с углеводородами в качестве единственного источника углерода и энергии.

Штамм поддерживается пересевами 1 раз в 14 дней на плотной питательной среде modPCA следующего состава (г/л): K2HPO4 - 1,5; KH2PO4 - 0,75; MgSO4 - 1,0; (NH4)2SO4 - 4,0; NaCl - 30; гидролизат казеина - 5,0; дрожжевой экстракт - 2,5; D-глюкоза - 1,0; агар - 14; рН 7,0; или жидкой питательной среде №1 следующего состава (г/л): K2HPO4 - 1,5; KH2PO4 - 0,75; MgSO4 - 1,0; (NH4)2SO4 - 4,0; NaCl - 30; гидролизат казеина - 0,5; дрожжевой экстракт - 0,1; рН 7,0. В жидкой питательной среде в качестве углеводородного субстрата использовали смесь товарной нефти Возейского месторождения (плотность 37,9° API, сернистость 0,66%, характеризуется как тяжелая, вязкая, с высоким содержанием смол и асфальтенов) и дизельного топлива в соотношении 1:1 по объему.

Также штамм может храниться при +6±2°C в лиофилизированном состоянии с использованием сухого обезжиренного молока в качестве защитной среды.

Осуществление изобретения

Пример 1. Выделение и культивирование штамма Leucobacter aridicollis ARC 6 ВКПМ Ас-1992.

Штамм выделен из образцов грунта береговой линии порта города Мурманск 3 июня 2014 года. Образец грунта массой 5±2 г вносили в 100 мл питательной среды №1. Культивирование проводили при температуре +4°C, на орбитальном шейкере (130 об/мин). Время культивирования 7 суток. Полученную накопительную культуру вносили в количестве 10 мл в 100 мл питательной среды №1. Было проведено не менее 30 пассажей накопительной культуры. Выделение штамма из накопительной культуры проводили на среде modPCA, полученную чистую культуру далее культивировали на среде №1.

Пример 2. Исследование нефтеокисляющей активности штамма Leucobacter aridicollis ARC 6 ВКПМ Ас-1992.

Штамм, выращенный на жидкой питательной среде №1, вносили в качестве инокулята в 100 мл питательной среды №1. В качестве контроля была использована питательная среда без добавления культуры. После проведения культивирования при температуре +4°C, 130 об/мин в течение 7 суток проводилась экстракция углеводородов гексаном согласно ГОСТ 31953-2012, хроматографическая оценка убыли углеводородов проводилась на приборе DSA 100 , оснащенном микрокапиллярной колонкой DB-lms, газ-носитель - гелий, расход газа - 39 мл/мин, детектор - ПИД, температура детектора - 320°C. Измерения проводили в условиях температурного градиента в термостате от 60 до 320°C. Результаты анализа были обработаны при помощи программного обеспечения OpenLAB CDS (Agilent).

Суммарная убыль для среднекипящей и высококипящей фракции составляла не менее 50% за 7 суток культивирования при температуре +4°C и солености среды 30 г/л.

Пример 3. Способ производства препарата на основе штамма Leucobacter aridicollis ARC 6 ВКПМ Ас-1992.

Штамм Leucobacter aridicollis ARC 6 ВКПМ Ас-1992, выращенный на среде PC А при температуре +4°C в течение 7 суток, вносят в жидкую питательную среду следующего состава (г/л): K2HPO4 - 1,5; KH2PO4 - 0,75; MgSO4 - 1,0; (NH4)2SO4 - 4,0; NaCl - 30; гидролизат казеина -5,0; дрожжевой экстракт - 2,5; D-глюкоза - 1,0; рН 7,0. Далее культивируют при температуре +10°C на орбитальном шейкере в течение 3 суток до конечного титра 109 КОЕ/мл. В полученную суспензию клеток в питательной среде вносят защитную среду (сухое обезжиренное молоко в количестве 10%). Далее полученную жидкую биомассу замораживают и обезвоживают методом лиофилизации. Полученную сухую биомассу штамма Leucobacter aridicollis ARC 6 ВКПМ Ас-1992 смешивают с питательным премиксом (сухое обезжиренное молоко) в соотношении 1:10.

Таким образом, получен штамм, способный осуществлять деструкцию нефти и нефтепродуктов при температуре +4°C и солености 30 г/л.

Похожие патенты RU2624054C2

название год авторы номер документа
Микробный препарат для утилизации углеводородных загрязнений 2016
  • Шестаков Андрей Иннокентьевич
  • Сережкин Илья Николаевич
  • Ламова Яна Александровна
  • Князюк Маргарита Константиновна
  • Федоренко Виктория Николаевна
  • Шабалин Николай Вячеславович
  • Шестакова Оксана Олеговна
  • Митрофанова Татьяна Ивановна
  • Павлов Владимир Анатольевич
  • Исаченко Артем Игоревич
RU2634397C2
Штамм Arthrobacter rhombi ARC 8 ВКПМ Ас-1987 - деструктор нефти и нефтепродуктов 2015
  • Шестаков Андрей Иннокентьевич
  • Сережкин Илья Николаевич
  • Ламова Яна Александровна
  • Князюк Маргарита Константиновна
  • Федоренко Виктория Николаевна
  • Шабалин Николай Вячеславович
  • Шестакова Оксана Олеговна
  • Митрофанова Татьяна Ивановна
  • Исаченко Артем Игоревич
RU2624052C2
Штамм Arthrobacter rhombi ARC 15 ВКПМ Ас-1989 деструктор нефти и нефтепродуктов 2016
  • Шестаков Андрей Иннокентьевич
  • Сережкин Илья Николаевич
  • Ламова Яна Александровна
  • Князюк Маргарита Константиновна
  • Федоренко Виктория Николаевна
  • Шабалин Николай Вячеславович
  • Шестакова Оксана Олеговна
  • Митрофанова Татьяна Ивановна
  • Исаченко Артем Игоревич
RU2624061C1
Штамм Nocardia coeliaca ARC12 ВКПМ Ас-1990 - деструктор нефти и нефтепродуктов 2015
  • Шестаков Андрей Иннокентьевич
  • Сережкин Илья Николаевич
  • Ламова Яна Александровна
  • Князюк Маргарита Константиновна
  • Федоренко Виктория Николаевна
  • Шабалин Николай Вячеславович
  • Шестакова Оксана Олеговна
  • Митрофанова Татьяна Ивановна
  • Исаченко Артем Игоревич
RU2624067C2
Штамм Salinibacterium amurskyense ARC 14 ВКПМ Ас-1993 - деструктор нефти и нефтепродуктов 2016
  • Шестаков Андрей Иннокентьевич
  • Сережкин Илья Николаевич
  • Ламова Яна Александровна
  • Князюк Маргарита Константиновна
  • Федоренко Виктория Николаевна
  • Шабалин Николай Вячеславович
  • Шестакова Оксана Олеговна
  • Митрофанова Татьяна Ивановна
  • Исаченко Артем Игоревич
RU2624069C1
ШТАММ Paeniglutamicibacter antarcticus ARC 43 ВКПМ Ас-2077 - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 2018
  • Шестаков Андрей Иннокентьевич
  • Сережкин Илья Николаевич
  • Ламова Яна Александровна
  • Гавирова Лилия Андреевна
  • Шестакова Оксана Олеговна
  • Ершова Ольга Александровна
  • Шабалин Николай Вячеславович
  • Исаченко Артем Игоревич
RU2694199C1
ШТАММ Pseudomonas extremaustralis - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 2018
  • Шестаков Андрей Иннокентьевич
  • Сережкин Илья Николаевич
  • Ламова Яна Александровна
  • Гавирова Лилия Андреевна
  • Шестакова Оксана Олеговна
  • Ершова Ольга Александровна
  • Шабалин Николай Вячеславович
  • Исаченко Артем Игоревич
RU2691691C1
ШТАММ Yarrowia lipolytica ARC 48 ВКПМ Y-4347 - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 2018
  • Шестаков Андрей Иннокентьевич
  • Сережкин Илья Николаевич
  • Ламова Яна Александровна
  • Гавирова Лилия Андреевна
  • Шестакова Оксана Олеговна
  • Ершова Ольга Александровна
  • Шабалин Николай Вячеславович
  • Исаченко Артем Игоревич
RU2699984C1
ШТАММ Psychrobacter cryohalolentis ARC 36 ВКПМ В-13082 - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 2018
  • Шестаков Андрей Иннокентьевич
  • Сережкин Илья Николаевич
  • Ламова Яна Александровна
  • Гавирова Лилия Андреевна
  • Шестакова Оксана Олеговна
  • Ершова Ольга Александровна
  • Шабалин Николай Вячеславович
  • Исаченко Артем Игоревич
RU2699962C1
Штамм Yarrowia lipolytica ARC 49 ВКПМ Y-4348 деструктор нефти и нефтепродуктов 2018
  • Шестаков Андрей Иннокентьевич
  • Сережкин Илья Николаевич
  • Ламова Яна Александровна
  • Гавирова Лилия Андреевна
  • Шестакова Оксана Олеговна
  • Ершова Ольга Александровна
  • Шабалин Николай Вячеславович
  • Исаченко Артем Игоревич
RU2700078C1

Реферат патента 2017 года Штамм Leucobacter aridicollis ARC 6 ВКПМ Ас-1992 деструктор нефти и нефтепродуктов

Изобретение относится к области биотехнологии, микробиологии, экологии, охране окружающей среды. Штамм бактерий Leucobacter aridicollis ARC 6 обладает способностью к деструкции нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий Leucobacter aridicollis депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ Ас-1992. Штамм может быть использован для очистки акваторий водоемов, береговой линии, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, при температуре от +4 до +20°C и солености 30 г/л. Изобретение позволяет повысить эффективность очистки акваторий водоемов, береговой линии, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, при температуре от +4 до +20°C и солености 30 г/л. 3 пр.

Формула изобретения RU 2 624 054 C2

Штамм Leucobacter aridicollis ARC 6 ВКПМ Ac-1992 для деструкции нефти и нефтепродуктов в водной среде при температуре от +4 до +20°C и солености 30 г/л.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2017 года RU2624054C2

ШТАММ Rhodococcus erythropolis ДЛЯ ОЧИСТКИ СОЛОНОВАТОВОДНЫХ И МОРСКИХ ЭКОСИСТЕМ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 2013
  • Маркарова Мария Юрьевна
  • Щемелинина Татьяна Николаевна
  • Заикин Игорь Алексеевич
  • Чиковани Марина Анатольевна
  • Кравченко Валерий Валентинович
RU2553336C2
БИОПРЕПАРАТ ДЛЯ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 2005
  • Власов Сергей Александрович
  • Крашенинникова Татьяна Константиновна
  • Краснопевцева Наталья Валентиновна
  • Кузнецова Ирина Вячеславна
  • Смоляная Галина Леонидовна
  • Синицын Алексей Николаевич
  • Украинцев Анатолий Дмитриевич
RU2299101C1
ШТАММ ARTHROBACTER SP. ДЛЯ РАЗЛОЖЕНИЯ СЫРОЙ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 1999
  • Власов С.А.
  • Краснопевцева Н.В.
  • Крашенинникова Т.И.
  • Лукашина Т.И.
  • Украинцев А.Д.
RU2142996C1
ШТАММ ARTHROBACTER SP. ДЛЯ РАЗЛОЖЕНИЯ СЫРОЙ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 1999
  • Власов С.А.
  • Краснопевцева Н.В.
  • Крашенинникова Т.И.
  • Лукашина Т.И.
RU2142997C1
ШТАММ Rhodococcus sp.-ДЕСТРУКТОР НЕФТЯНЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ 2013
  • Карасев Сергей Геннадьевич
  • Карасева Эмма Викторовна
  • Самков Андрей Александрович
  • Худокормов Александр Александрович
  • Волченко Никита Николаевич
  • Самкова Светлана Михайловна
  • Батина Елена Владимировна
RU2518349C1
ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS ALCALIGENES B-1, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ВОДЫ И ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 1998
  • Ермоленко З.М.
  • Холоденко В.П.
  • Чугунов В.А.
  • Кобелев В.С.
  • Акимова Н.А.
RU2133770C1
БИОПРЕПАРАТ ДЛЯ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ И ВОДЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 2007
  • Сваровская Лидия Ивановна
  • Писарева Светлана Ивановна
  • Алтунина Любовь Константиновна
RU2361686C2
ШТАММ Pseudomonas azotoformans ДЛЯ ОЧИСТКИ МОРСКИХ ВОДОЕМОВ И ПРИБРЕЖНОЙ ЗОНЫ МОРСКИХ ОБЪЕКТОВ ОТ НЕФТИ В УСЛОВИЯХ ВЫСОКИХ ШИРОТ 2013
  • Маркарова Мария Юрьевна
  • Щемелинина Татьяна Николаевна
  • Заикин Игорь Алексеевич
  • Чиковани Марина Анатольевна
  • Кравченко Валерий Валентинович
RU2553338C2

RU 2 624 054 C2

Авторы

Шестаков Андрей Иннокентьевич

Сережкин Илья Николаевич

Ламова Яна Александровна

Князюк Маргарита Константиновна

Федоренко Виктория Николаевна

Шабалин Николай Вячеславович

Шестакова Оксана Олеговна

Митрофанова Татьяна Ивановна

Исаченко Артем Игоревич

Даты

2017-06-30Публикация

2015-12-07Подача