ПРОИЗВОДНЫЕ ХИНАЗОЛИНОНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ PARP Российский патент 2018 года по МПК C07D239/91 A61K31/517 A61P35/00 A61P29/00 A61P25/28 A61P9/00 

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задачей изобретения является обнаружение новых соединений, которые обладают ценными свойствами, в частности, таких, которые можно применять для получения лекарственных средств.

Настоящее изобретение относится к производным хиназолинона, которые ингибируют активность танкираз (TANK) и поли(ADP-рибоза)полимеразы PARP-1. Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению пригодны для лечения заболеваний, таких как злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечнососудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления. Настоящее изобретение также обеспечивает способы получения этих соединений, фармацевтические композиции, которые содержат эти соединения, и способы лечения заболеваний с использованием фармацевтических композиций, которые содержат эти соединения.

Ядерный фермент поли(ADP-рибоза) полимераза-1 (PARP-1) является представителем семейства ферментов PARP. Это семейство ферментов роста состоит из PARP, таких как, например: PARP-1, PARP-2, PARP-3 и Vault-PARP; и танкираз (TANK), таких как, например: TANK-1 и TANK-2. PARP также обозначается как поли(аденозин5'-дифосфорибоза)полимераза или PARS (поли(ADP-рибоза)синтетаза).

Полагают, что TANK-1 необходима для полимеризаций связанной с митотическим веретеном поли(ADP-рибозы). Поли(ADP-рибозил)ирующая активность TANK-1 должна быть решающей для точного образования и поддержания биполярности веретена. Кроме того, полагают, что PARP активность TANK-1 необходима для нормального разделения теломер перед анафазой. Интерференция с танкиразной PARP активностью приводит к аберрантному митозу, который вызывает временную остановку клеточного цикла, возможно, вследствие активации контрольной точки веретена, с последующей клеточной гибелью. Таким образом, полагают, что ингибирование танкираз имеет цитотоксическое действие на пролиферирующие опухолевые клетки (WO 2008/107478).

Ингибиторы PARP описаны М. Rouleau и др. в Nature Reviews, том 10, 293-301 в клинических исследованиях злокачественных новообразований (таблица 2, страница 298).

В соответствии с обзором Horvath и Szabo (Drug News Perspect 20(3), April 2007, 171-181) в самых последних исследованиях было показано, что PARP ингибиторы усиливают гибель раковых клеток главным образом в связи с их препятствованием репарации ДНК на различных уровнях. В самых последних исследованиях также было показано, что PARP ингибиторы ингибируют ангиогенез, либо путем ингибирования экспрессии фактора роста, либо путем ингибирования индуцированных фактором роста клеточных пролиферативных ответов. Эти данные также могут оказывать влияния на характер противораковых эффектов PARP ингибиторов in-vivo.

Также в исследовании Tentori и др. (Eur. J. Cancer, 2007, 43 (14) 2124-2133) было показано, что PARP ингибиторы аннулируют индуцированную VEGF или плацентным фактором роста миграцию и предотвращают образование трубочкообразных сетей в клеточных системах, и повреждают ангиогенез in-vivo. В исследовании также показано, что индуцированный фактором роста ангиогенез является дефектным у PARP-1 «knock-out» мышей. Результаты исследования обеспечивают подтверждение для нацеливания PARP на анти-ангиогенез, добавляя новые терапевтические показания к применению PARP ингибиторов при лечении злокачественного новообразования.

Хорошо известно, дефекты в консервативных путях передачи сигналов играют ключевую роль в происхождении и поведении по существу всех злокачественных новообразований (E.A. Fearon, Cancer Cell, том 16, изд. 5, 2009, 366-368). Wnt путь является мишенью для противораковой терапии. Ключевой особенностью Wnt пути является регулированный протеолиз (деградация) β-катенина с помощью комплекса, разрушающего β-катенин. Белки, такие как WTX, АРС или Axin, задействованы в процесс разложения. Правильное разложение β-катенина является важным для избегания несоответствующей активации Wnt пути, которая наблюдается при многих злокачественных новообразованиях. Танкиразы ингибируют активность Axin и, следовательно, ингибируют разложение β-катенина. В результате этого, ингибиторы танкиразы повышают разложение β-катенина. В издании журнала Nature были предложены не только важные новые сведения относительно белков, регулирующих Wnt передачу сигналов, но и дополнительно подтвержден подход антагонизации уровней β-катенина и локализации с помощью небольших молекул (Huang и др., 2009; Nature, том 461, 614-620). Соединение XAV939 ингибирует рост DLD-1-раковых клеток. Авторы обнаружили, что XAV9393 блокирует Wnt-стимулированное накопление β-катенина путем повышения уровней белков AXIN1 и AXIN2. В последующей работе авторами было показано, что XAV939 регулирует уровни AXIN посредством ингибирования танкираз 1 и 2 (TNKS1 и TNKS2), которые обе являются членами семейства белков поли(ADP-рибоза) полимеразы (PARP) (S.J. Hsiao и др., Biochimie 90, 2008, 83-92).

Было обнаружено, что соединения в соответствии с изобретением и их соли обладают чрезвычайно ценными фармакологическими свойствами, а также хорошей переносимостью.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I, которые ингибируют танкиразу 1 и 2, к композициям, которые содержат эти соединения, и к способам их применения для лечения заболеваний и осложнений, индуцированных TANK.

Кроме того, соединения формулы I могут использоваться для выделения и исследования активности или экспрессии TANK. Дополнительно, они особенно пригодны для применения в методах диагностики заболеваний, связанных с нерегулированной или нарушенной активностью TANK.

Хозяин или пациент может принадлежать к любому из видов млекопитающих, например, к видам приматов, в частности, к людям; грызунам, включая мышей, крыс и хомяков; кроликам, лошадям, коровам, собакам, кошкам и т.д. Животные модели представляют интерес для экспериментальных исследований, обеспечивая модель для лечения болезней человека.

Чувствительность определенной клетки к лечению с помощью соединений в соответствии с данным изобретением может определяться с помощью анализов in-vitro. Типично, к культуре клеток прибавляют соединение в соответствии с данным изобретением при различных концентрациях в течение периода времени, который является достаточным для того, чтобы позволить активным агентам, таким, как анти IgM, индуцировать клеточный ответ, такой как экспрессия поверхностного маркера, обычно от одного часа до одной недели. In-vitro анализ может осуществляться при использовании культивируемых клеток, полученных из крови или из образца биопсии. Количество экспрессированного поверхностного маркера оценивают с помощью проточной цитометрии при использовании специфических антител, которые узнают маркер.

Доза варьирует в зависимости от используемого специфического соединения, специфического заболевания, состояния пациента, и т.д. Терапевтическая доза типично является достаточной для того, чтобы значительно уменьшить численность нежелательной клеточной популяции в целевой ткани при поддержании жизнеспособности пациента. Лечение в общем случае продолжается до возникновения значительного снижения, например, снижения, которое составляет, по крайней мере, 50% клеточной нагрузки, и может продолжаться до отсутствия существенного обнаружения нежелательных клеток в организме.

ИЗВЕСТНЫЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Е. Wahlberg и др., Nature Biotechnology (2012), 30(3), 283:

следующий хиназолинон описан в качестве ингибитора танкиразы -

IC₅₀(TNKS1)=590 нМ, IC₅₀(TNKS2)=600 нМ; клеточное исследование: отсутствие воздействия при 30 мкМ.

WO 2010/106436 (Resverlogix Corp.):

следующие соединения описаны в качестве противовоспалительных средств -

Производные (аза-)изохинолинона описаны в качестве промежуточных соединений в ЕР 1020445. Производные изохинолинона описаны в качестве ингибиторов PARP в WO 2010/133647.

Производные изохинолинона описаны исследователями:

Won-Jea Cho и др., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1998), 8, 41-46;

Sung Hoon Cheon и др., Archives of Pharmacal Research (1997), 20, 138-143;

Sung Hoon Cheon и др., Archives of Pharmacal Research (2001), 24, 276-280.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к соединениям формулы I

,

в которой

R¹, R² каждый, независимо друг от друга, означает Н, F или Cl,

R³ означает Н, F, Cl, СН₃ или ОСН₃,

X¹, X² каждый, независимо друг от друга, означает СН или N,

Y означает А, Cyc или оксиранил, оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперазинил, пиперидинил, морфолинил, пирролидинил, тиоморфолинил или диазепанил, который может быть незамещен или моно- или дизамещен посредством =O, Hal, ОН и/или А',

А' означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 4 атомов С, где одна группа СН₂ может быть заменена на атом О и/или один атом Н может быть заменен на ОН,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 2 до 10 атомов С, где два расположенных рядом атома углерода могут образовывать двойную связь и/или одна или две не расположенные рядом СН- и/или СН₂-группы могут быть заменены на атомы N, О и/или S и где от 1 до 7 атомов Н могут быть заменены на F, Cl и/или ОН,

Cyc означает циклоалкил, содержащий от 3 до 7 атомов С, который незамещен или монозамещен посредством ОН, Hal или А',

Hal означает F, Cl, Br или I,

при условии, что по меньшей мере один из R¹, R², R³ не означает Н,

и при условии, что Y не означает 4-изопропил-1-пиперазинил,

и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях.

Изобретение также относится к оптически активным формам (стереоизомерам), энантиомерам, рацематам, диастереомерам и гидратам и сольватам этих соединений.

Изобретение относится к соединениям формулы I и их таутомерам формулы Ia

.

Кроме того, изобретение относится к фармацевтически приемлемым производным соединений формулы I.

Термин сольваты соединений обозначает аддукции молекул инертного растворителя на соединениях, которые образуются благодаря их силе взаимного притяжения. Сольваты представляют собой, например, моно- или дигидраты или алкоголяты.

Подразумевается, что изобретение также относится к сольватам солей.

Термин фармацевтически приемлемые производные обозначает, например, соли соединений в соответствии с изобретением, а также так называемые пролекарства соединений.

Как используется в настоящей заявке и если специально не указано иначе, термин "пролекарство" обозначает производное соединения формулы I, которое может быть гидролизовано, окислено или по-другому реагировать в биологических условиях (in-vitro или in-vivo) с обеспечением активного соединения, в частности соединения формулы I. Примеры пролекарств включают, но не ограничиваются только ими, производные и метаболиты соединения формулы I, которые включают биогидролизируемые компоненты, такие как биогидролизируемые амиды, биогидролизируемые сложные эфиры, биогидролизируемые карбаматы, биогидролизируемые карбонаты, биогидролизируемые уреиды и биогидролизируемые фосфатные аналоги. В определенных вариантах осуществления, пролекарства соединений с карбоксильными функциональными группами представляют собой низшие алкиловые сложные эфиры карбоновой кислоты. Карбоксилатные сложные эфиры легко образуются путем эстерификации любых фрагментов карбоновой кислоты, присутствующих в молекуле. Пролекарства типично можно приготавливать, используя хорошо известные методы, такие как методы, описанные в Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6-ое изд. (Donald J. Abraham ред., 2001, Wiley) и Design and Application of Prodrugs (H. Bundgaard ред., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh).

Выражение "эффективное количество" обозначает количество лекарственного средства или фармацевтического активного компонента, которое вызывает в ткани, системе, животном или человеке биологическую или медицинскую ответную реакцию, которую предполагает или желает получить, например, исследователь или лечащий врач.

Дополнительно, выражение "терапевтически эффективное количество" обозначает то количество, которое имеет следующие последствия по сравнению с соответствующим субъектом, который не получал этого количества:

улучшение лечения, излечение, предотвращение или элиминация заболевания, синдрома, состояния, жалобы, расстройства или побочных действий, или также уменьшение прогрессирования заболевания, жалобы или расстройства.

Термин "терапевтически эффективное количество" также охватывает количества, которые эффективны для повышения нормальной физиологической функции.

Изобретение также относится к применению смесей соединений формулы I, например, смесей двух диастереомеров, например, в соотношении 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 или 1:1000.

Особенно предпочтительными являются смеси стереоизомерных соединений.

"Таутомеры" относятся к изомерным формам соединения, которые находятся в равновесии друг с другом. Концентрации изомерных форм будут зависеть от окружения, в котором находится соединение, и могут отличаться в зависимости от того, например, будет ли соединение представлять собой твердое вещество или находится в органическом или водном растворе.

Изобретение относится к соединениям формулы I и их солям, и к способу получения соединений формулы I и их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, таутомеров и стереоизомеров, который отличается тем, что

а) соединение формулы II

,

в которой R¹, R² и R³ имеют значения, указанные в пункте 1, подвергают реакции

I) с соединением формулы III

,

в которой X¹, X² и Y имеют значения, указанные в пункте 1,

или

II) с соединением формулы IV

,

в которой X¹, X² и Y имеют значения, указанные в пункте 1,

или

б) радикал Y превращают в другой радикал Y путем

I) превращения спиртовой группы в простоэфирную группу,

II) превращения сложноэфирной группы в спиртовую группу,

III) превращения нитрогруппы в аминогруппу,

IV) превращения аминогруппы в алкилированную аминогруппу

и/или

основание или кислоту формулы I превращают в одну из его(ее) солей.

Выше и ниже радикалы R¹, R², R³, X¹, X² и Y имеют значения, указанные для формулы I, если специально не указано иное.

А означает алкил, который является неразветвленным (линейным) или разветвленным, и содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомов С. А предпочтительно означает этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил или трет-бутил, кроме того, также пентил, 1-, 2- или 3-метилбутил, 1,1-, 1,2- или 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, гексил, 1-, 2-, 3- или 4-метилпентил, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- или 3,3-диметилбутил, 1- или 2-этилбутил, 1-этил-1-метилпропил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2- или 1,2,2-триметилпропил, кроме того, предпочтительно, например, трифторметил.

А особенно предпочтительно означает алкил, содержащий 2, 3, 4, 5 или 6 атомов С, предпочтительно этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил, трифторметил, пентафторэтил или 1,1,1-трифторэтил.

Кроме того, А предпочтительно означает СН₂ОСН₃, СН₂СН₂ОН или СН₂СН₂ОСН₃.

Cyc означает циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил или циклогептил, предпочтительно незамещенный или монозамещенный посредством ОН, Hal или А'.

А' означает алкил, который является неразветвленным (линейным) или разветвленным, и содержит 1, 2, 3 или 4 атомов С, где одна группа СН₂ может быть заменена на атом О и/или один атом Н может быть заменен на ОН.

X¹ предпочтительно означает СН.

Y предпочтительно означает 1-гидрокси-1-метилэтил, (2-метоксиэтокси)-1-метилэтил, (2-гидроксиэтокси)-1-метилэтил, трет-бутил, 4-метилпиперазинил, 1-этил, 1-гидроксипропил, 2-метилтетрагидрофуран-2-ил, 1-гидроксициклопентил, 3-гидроксиоксетан-3-ил, (2-аминоэтокси)-1-метилэтил, пиперазин-1-ил, 4-метилпиперазин-1-ил, пиперидин-4-ил, 1-метилпиперидин-4-ил, 1-(2-гидроксиэтокси)-1-метилэтил, 1,1-диоксо-1l6-тиоморфолин-4-ил, 4-гидроксиметилпиперидин-1-ил или 4-метил-[1,4]диазепан-1-ил.

Y особенно предпочтительно означает 1-гидрокси-1-метилэтил или трет-бутил.

Hal предпочтительно означает F, Cl или Br, а также I, особенно предпочтительно F или Cl.

Для всего изобретения, все радикалы, которые встречаются более одного раза, могут быть одинаковыми или различными, то есть являться независимыми друг от друга.

Соединения формулы I могут иметь один или несколько хиральных центров и поэтому могут встречаться в различных стереоизомерных формах. Формула I охватывает все эти формы.

Соответственно, изобретение относится, в частности, к соединениям формулы I, в которой по меньшей мере один из указанных радикалов имеет одно из предпочтительных значений, указанных выше. Некоторые предпочтительные группы соединений могут быть изображены с помощью следующих подформул Ia-Id, которые соответствуют формуле I и в которых радикалы, не определенные более подробно, имеют значения, указанные для формулы I, но в которых

в Ia X¹ означает СН;

в Ib Y означает 1-гидрокси-1-метилэтил, (2-метоксиэтокси)-1-метилэтил, (2-гидроксиэтокси)-1-метилэтил, трет-бутил, 4-метилпиперазинил, 1-этил, 1-гидроксипропил, 2-метилтетрагидрофуран-2-ил, 1-гидроксициклопентил, 3-гидроксиоксетан-3-ил, (2-аминоэтокси)-1-метилэтил, пиперазин-1-ил, 4-метилпиперазин-1-ил, пиперидин-4-ил или 1-метилпиперидин-4-ил;

в Id R¹, R² каждый, независимо друг от друга, означает Н, F или Cl,

R³ означает Н, F, Cl, СН₃ или ОСН₃,

X¹ означает СН,

X² означает СН или N,

Y означает А, Cyc или

оксиранил, оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперазинил, пиперидинил, морфолинил, пирролидинил, тиоморфолинил или диазепанил, который может быть незамещен или моно- или дизамещен посредством =O, Hal, ОН и/или А',

А' означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 4 атомов С, где одна группа СН₂ может быть заменена на атом О и/или один атом Н может быть заменен на ОН,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 2 до 10 атомов С, где одна или две не расположенные рядом СН- и/или СН₂-группы могут быть заменены на атомы N и/или О и где от 1 до 7 атомов Н могут быть заменены на F, Cl и/или ОН,

Cyc означает циклоалкил, содержащий от 3 до 7 атомов С, который незамещен или монозамещен посредством ОН, Hal или А',

Hal означает F, Cl, Br или I,

при условии, что по меньшей мере один из R¹, R², R³ не означает Н,

и при условии, что Y не означает 4-изопропил-1-пиперазинил,

и включают их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.

Соединения формулы I, а также исходные вещества для их получения, кроме того, получают при помощи методов, известных per se, как описано в литературе (например, в стандартных работах, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Методы органической химии], Georg-Thieme-Verlag, Штутгарт), точнее, в условиях реакций, которые известны и являются пригодными для указанных реакций. Также при этом можно применять разнообразные модификации, которые известны per se, но о которых здесь подробно не упоминается.

Исходные соединения формул II, III и IV как правило, известны. Тем не менее, если они являются новыми, то их можно получить при помощи методов, известных per se.

Соединения формулы I предпочтительно можно получить по реакции соединения формулы II с соединением формулы III или с соединением формулы IV в присутствии окислителя, подобного дисульфиту натрия.

В зависимости от применяемых условий, время реакции находится в интервале от нескольких минут до 14 дней, температура реакции находится между приблизительно -10° и 160°, обычно между 30° и 160°, в частности, между приблизительно 100° и приблизительно 160°. Реакцию проводят в инертном растворителе.

Примерами пригодных инертных растворителей являются углеводороды, такие как гексан, петролейный эфир, бензол, толуол или ксилол; хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен, 1,2-дихлорэтан, четыреххлористый углерод, хлороформ или дихлорметан; спирты, такие как метанол, этанол, изопропанол, н-пропанол, н-бутанол или трет-бутанол; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран (ТГФ) или диоксан; простые гликолевые эфиры, такие как монометиловый или моноэтиловый эфир этиленгликоля, диметиловый эфир этиленгликоля (диглим); кетоны, такие как ацетон или бутанон; амиды, такие как ацетамид, диметилацетамид (DMA), N-метилпирролидон (NMP) или диметилформамид (ДМФА); нитрилы, такие как ацетонитрил; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид (ДМСО); сероуглерод; карбоновые кислоты, такие как муравьиная кислота или уксусная кислота; нитросоединения, такие как нитрометан или нитробензол; сложные эфиры, такие как этилацетат, или смеси вышеуказанных растворителей.

Особое предпочтение отдают ДМФА, NMP или DMA.

Кроме того, соединения формулы I можно получить с помощью превращения радикала Y в другой радикал Y путем

I) превращения спиртовой группы в простоэфирную группу,

II) превращения сложноэфирной группы в спиртовую группу,

III) превращения нитрогруппы в аминогруппу,

IV) превращения аминогруппы в алкилированную аминогруппу.

Стадия I):

Превращение спиртовой группы в простоэфирную группу проводят в стандартных условиях.

Стадия II):

Превращение сложноэфирной группы в спиртовую группу предпочтительно проводят в присутствии хлорида церия(III) с помощью алкилмагнийхлорида в ТГФ в стандартных условиях, или с помощью алюмогидрида лития в ТГФ.

Стадии III) и IV):

Превращение нитрогруппы в аминогруппу или превращения аминогруппы в алкилированную аминогруппу проводят в стандартных условиях.

Сложные эфиры можно омылить, например, применяя уксусную кислоту или применяя NaOH или KOH в воде, смеси вода/ТГФ или вода/диоксан, при температурах между 0 и 100°.

Фармацевтические соли и другие формы

Указанные соединения в соответствии с изобретением могут применяться в своей заключительной, несолевой форме. С другой стороны, настоящее изобретение также охватывает применение таких соединений в форме их фармацевтически приемлемых солей, которые могут быть получены с помощью разнообразных органических и неорганических кислот и оснований в соответствии со способами, хорошо известными в данной области техники. Фармацевтически приемлемые солевые формы соединений формулы I получают, главным образом, при использовании традиционных способов. В случае, если соединение формулы I содержит карбоксильную группу, то его приемлемая соль может быть образована с помощью реакции соединения с приемлемым основанием для получения соответствующей соли присоединения основания. Примерами таких оснований являются гидроксиды щелочных металлов, включая гидроксид калия, гидроксид натрия и гидроксид лития; гидроксиды щелочноземельных металлов, такие, как гидроксид бария и гидроксид кальция; алкоксиды щелочных металлов, например, этанолят калия и пропанолят натрия; а также различные органические основания, такие, как пиперидин, диэтаноламин и N-метилглутамин. Сюда также включены соли алюминия соединений формулы I. Для некоторых соединений формулы I соли присоединения кислоты могут быть образованы путем обработки указанных соединений фармацевтически приемлемыми органическими и неорганическими кислотами, например, гидрогалогенидами, такими, как гидрохлорид, гидробромид или гидройодид; другими минеральными кислотами, и их соответствующими солями такими, как, сульфат, нитрат или фосфат, и т.п.; и алкил- и моноарилсульфонатами, такими, как этансульфонат, толуолсульфонат и бензолсульфонат; и другими органическими кислотами и их соответствующими солями, такими, как ацетат, трифторацетат, тартрат, малеат, сукцинат, цитрат, бензоат, салицилат, аскорбат и т.п. Таким образом, фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты соединений формулы I включают следующие соли, но не ограничиваются только ими: ацетат, адипат, альгинат, аргинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат (безилат), бисульфат, бисульфит, бромид, бутират, камфорат, камфорсульфонат, каприлат, хлорид, хлорбензоат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, дигидрофосфат, динитробензоат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, формиат, галактерат (из слизевой кислоты), галактуронат, глюкогептаноат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гемисукцинат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, йодид, изетионат, изобутират, лактат, лактобионат, малат, малеат, малонат, манделат, метафосфат, метансульфонат, метилбензоат, моногидрофосфат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, олеат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилацетат, 3-фенилпропионат, фосфат, фосфонат, фталат.

Кроме того, основные соли соединений в соответствии с изобретением включают, но не ограничиваются только ими, соли алюминия, аммония, кальция, меди, железа(III), железа(II), лития, магния, марганца(III), марганца(II), калия, натрия и цинка. Предпочтительными среди перечисленных выше солей являются аммонийные; соли щелочных металлов - натрия и калия; и соли щелочноземельных металлов - кальция и магния. Соли соединений формулы I, которые имеют происхождение от фармацевтически приемлемых органических нетоксических оснований, включают, но не ограничиваются только ими, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, также включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, например, аргинин, бетаин, кофеин, хлорпрокаин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин (бензатин), дициклогексиламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, N-этилморфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лидокаин, лизин, меглумин, N-метил-D-глюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминные смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтаноламин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин и трис-(гидроксиметил)метиламин (трометамин).

Соединения в соответствии с настоящим изобретением, которые включают основные азотсодержащие группы, могут быть кватернизированы с помощью таких агентов, как (С₁-С₄)-алкилгалогениды, например, метил-, этил-, изопропил- и трет-бутилхлорид, бромид и йодид; ди-(С₁-С₄)-алкилсульфаты, например, диметил-, диэтил- и диамилсульфат; (С₁₀-С₁₈)-алкилгалогениды, например, децил-, додецил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлорид, бромид и йодид; и арил-(С₁-С₄)-алкилгалогениды, например, бензилхлорид и фенетилбромид. Указанные соли позволяют получать как растворимые в воде, так и растворимые в масле соединения в соответствии с изобретением.

Предпочтительные фармацевтические соли, указанные выше, включают, но не ограничиваются только ими, ацетат, трифторацетат, безилат, цитрат, фумарат, глюконат, гемисукцинат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, изетионат, манделат, меглумин, нитрат, олеат, фосфонат, пивалат, фосфат натрия, стеарат, сульфат, сульфосалицилат, тартрат, тиомалат, тозилат и трометамин.

Особенно предпочтительными являются гидрохлорид, дигидрохлорид, гидробромид, малеат, мезилат, фосфат, сульфат и сукцинат.

Кислотно-аддитивные соли оснóвных соединений формулы I получают путем приведения в контакт формы свободных оснований с достаточным количеством желаемой кислоты для получения соли традиционным способом. Свободное основание можно регенерировать путем приведения в контакт солевой формы с основанием и выделения свободного основания традиционным способом. Формы свободного основания в некоторой степени отличаются от своих соответствующих солевых форм своими определенными физическими свойствами, такими, как растворимость в полярных растворителях, однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим формам свободных оснований для целей настоящего изобретения.

Как было указано, фармацевтически приемлемые соли присоединения основания соединений формулы I образуют с металлами или аминами, такими, как щелочные металлы и щелочноземельные металлы или органические амины. Предпочтительные металлы представляют собой натрий, калий, магний и кальций. Предпочтительные органические амины представляют собой N,N'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, N-метил-D-глюкамин и прокаин.

Соли присоединения основания кислых соединений в соответствии с изобретением получают путем приведения в контакт формы свободной кислоты с достаточным количеством желаемого основания для получения соли традиционным способом. Форма свободной кислоты может быть регенерирована путем приведения в контакт солевой формы с кислотой и выделения формы свободной кислоты известным способом. Формы свободной кислоты в некоторой степени отличаются от своих соответствующих солевых форм определенными физическими свойствами, такими, как растворимость в полярных растворителях, однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим формам свободных кислот для целей настоящего изобретения.

Если соединение в соответствии с изобретением включает более, чем одну группу, которая способна к образованию фармацевтически приемлемых солей этого типа, то изобретение также охватывает составные соли. Примеры типичных составных солевых форм включают, но не ограничиваются только ими, битартрат, диацетат, дифумарат, димеглумин, дифосфат, динатрий и тригидрохлорид.

В свете описанного выше можно увидеть, что выражение "фармацевтически приемлемая соль" в контексте данной заявки предназначено для обозначения активного компонента, который включает соединение формулы I в форме одной из его солей, особенно в том случае, если указанная солевая форма обеспечивает указанному активному компоненту улучшенные фармакокинетические свойства по сравнению со свободной формой указанного активного компонента или любой другой солевой формой указанного активного компонента, которые использовались ранее. Фармацевтически приемлемая солевая форма активного компонента может также изначально обеспечивать желаемое фармакокинетическое свойство указанному активному компоненту, которым он ранее не обладал, а также может даже положительно влиять на фармакодинамику указанного активного компонента в отношении его терапевтической активности в организме.

Изотопы

Далее также предполагается, что соединение формулы I включает его изотопно-меченные формы. Изотопно-меченная форма соединения формулы I является идентичной указанному соединению, за исключением того факта, что один или более атомов указанного соединения были замещены атомом или атомами, которые имеют атомную массу или атомное число, отличное от атомной массы или атомного числа упомянутого атома, которое обычно существует в природе. Примеры изотопов, которые являются легко доступными коммерчески и которые могут быть введены в соединение формулы I хорошо известными способами, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, например, ²Н, ³Н, ¹³С, ¹⁴С, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³¹Р, ³²Р, ³⁵S, ¹⁸F и ³⁶CI, соответственно. Соединение формулы I, его пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль, которые содержат один или более указанных выше изотопов и/или другие изотопы других атомов также составляют объем настоящего изобретения. Изотопно-меченное соединение формулы I может использоваться в ряде выгодных способов. Например, меченное изотопами соединение формулы I, например, в которое введен радиоактивный изотоп, такой, как ³Н или ¹⁴С, будет полезным в анализах исследования распределения лекарственного средства и/или субстрата в ткани. Такие радиоактивные изотопы, например, тритий (³Н) и углерод-14 (¹⁴С), являются особенно предпочтительными вследствие простоты получения и высокой способности к выявлению. Введение более тяжелых изотопов, например, дейтерия (²Н), в соединение формулы I, будет обеспечивать терапевтические преимущества, основывающиеся на большей метаболической стабильности указанного соединения, меченного изотопами. Большая метаболическая стабильность проявляется непосредственно в повышении времени полураспада in-vivo или снижении требуемой дозы, что при большинстве условий будет составлять предпочтительное воплощение указанного изобретения. Меченное изотопом соединение формулы I обычно получают путем осуществления методик, раскрытых в схемах синтеза и в описании, относящемся к ним, в разделах, касающихся примеров и способов получения, описанных в данной заявке, путем замены немеченого изотопами реагента его соответствующим легко доступным реагентом, меченным изотопом.

Дейтерий (²Н) также может быть введен в соединение формулы I с целью изменения окислительного метаболизма соединения путем первичного кинетического изотопного эффекта. Первичный кинетический изотопный эффект представляет собой изменение скорости химической реакции, которое происходит по причине замещения изотопного ядра, что, в свою очередь, вызывается изменением энергий основного состояния, что необходимо для образования ковалентной связи после указанного изотопного замещения. Замещение тяжелым изотопом обычно приводит к снижению энергии основного состояния для химической связи, вызывая, таким образом, уменьшение скорости скорость-лимитирующей стадии разрушения связи. Когда происходит разрушение связи в или поблизости участка седлообразной конфигурации вдоль координаты реакции образования нескольких продуктов, коэффициент распределения продуктов может существенно изменяться. Например, в случае, если дейтерий связывается с атомом углерода в положении, в котором не происходит обмен, различия скорости k_M/k_D=2-7 являются типичными. Такое отличие в скорости, которое успешно применяется к соединению формулы I, чувствительному к окислению, может в значительной степени влиять на профиль указанного соединения in-vivo и приводить к улучшению фармакокинетических свойств.

В процессе обнаружения и совершенствования терапевтических агентов специалист в данной области ищет пути оптимизации фармакокинетических параметров при сохранении желательных in-vitro свойств. Является рациональным предположить, что многие соединения со слабыми фармакокинетическими профилями страдают неустойчивостью к окислительному метаболизму. Анализы in-vitro микросом печени, которые сейчас являются доступными, обеспечивают ценную информацию о процессе окислительного метаболизма такого типа, что, в свою очередь, позволяет получить рациональную модель меченных дейтерием соединений формулы I с улучшенной стабильностью вплоть до резистентности к такому окислительному метаболизму. Таким образом, получают значительное улучшение фармакокинетических профилей соединений формулы I, что может быть количественно выражено в величинах увеличения периода полураспада in-vivo (t/2), в концентрации при максимальном терапевтическом эффекте (C_max), площадью под кривой ответа на определенную дозу (AUC) и F; в величинах уменьшения клиренса, дозы и материальных затрат.

Приведенное далее предназначено для иллюстрации сказанного выше: соединение формулы I, которое имеет многочисленные потенциальные сайты для окислительного метаболизма, например, атомы водорода бензила и атомы водорода, соединенные с атомом азота, получают как серии аналогов, в которых различные комбинации атомов водорода заменяются атомами дейтерия так, что некоторые, большинство или все указанные атомы водорода заменяются на атомы дейтерия. Определение периода полураспада обеспечивает подходящее и точное определение степени улучшения резистентности к окислительному метаболизму. Таким образом определяют, что период полураспада исходного соединения может быть продлен вплоть до 100% как результат такого замещения водорода дейтерием.

Замещение водорода дейтерием в соединении формулы I может также использоваться для достижения благоприятного изменения профиля метаболитов исходного соединения как пути уменьшения или устранения нежелательных токсических метаболитов. Например, когда токсический метаболит возникает при окислительном расщеплении углерод-водородной связи С-Н, то с достаточной вероятностью предполагается, что меченый дейтерием аналог значительно уменьшит или устранит выработку нежелательного метаболита, даже в случае, когда отдельное окисление не является лимитирующей скорость стадией. Дополнительная информация, относящаяся к уровню техники в отношении замещения водорода дейтерием, может быть найдена, например, в работе Hanzlik и др., J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990; Reider и др., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987; Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985; Gillette и др., Biochemistry 33 (10) 2927-2937, 1994; и Jarman и др. Carcinogenesis 16 (4), 683-688, 1993.

Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые производные, сольваты и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и необязательно наполнители и/или вспомогательные вещества.

Фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Такая единица может включать, например, от 0.5 мг до 1 г, предпочтительно от 1 мг до 700 мг, особенно предпочтительно от 5 мг до 100 мг, соединения в соответствии с изобретением, в зависимости от состояния, подвергаемого лечению, способа введения, а также возраста, веса тела и состояния пациента, или фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Предпочтительными составами дозированных единиц являются те, которые содержат суточную дозу или часть суточной дозы, как указано выше, или соответствующую ей порцию активного компонента. Кроме того, фармацевтические составы этого типа могут быть получены способом, который хорошо известен в области фармацевтики.

Фармацевтические составы могут адаптироваться для введения при помощи любого подходящего способа, например, путем перорального (включая буккальное или подъязычное), ректального, назального, местного (включая буккальное, подъязычное или трансдермальное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное или внутрикожное) введения. Такие препараты могут быть приготовлены с помощью любого способа, известного в области фармацевтики, например, путем объединения активного компонента с наполнителем(ями) или вспомогательным(ыми) веществом(ами).

Фармацевтические составы, адаптированные для перорального введения, могут вводиться в виде отдельных единиц, таких как, например, капсулы или таблетки; порошки или гранулы; растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях; пищевых пен или пенистых пищевых продуктов; или жидких эмульсий масло-в-воде или жидких эмульсий вода-в-масле.

Так, например, в случае перорального введения в виде таблетки или капсулы, активный компонент может быть объединен с пероральным, нетоксичным и фармацевтически приемлемым инертным наполнителем, таким как, например, этанол, глицерин, вода и т.п. Порошки получают путем измельчения соединения до подходящего небольшого размера и смешивания его с фармацевтическим наполнителем, измельченным аналогичным способом, таким как, например, пищевой углеводород, такой как, например, крахмал или маннит. Также можно добавлять ароматизатор, консервант, диспергирующее вещество и краситель.

Капсулы получают путем приготовления порошковой смеси, как описано выше, и заполнения ею желатиновых капсул определенной формы. Перед заполнением капсул к порошковой смеси можно добавлять скользящие и смазывающие вещества, такие как, например, высокодисперсная кремниевая кислота, тальк, стеарат магния, стеарат кальция или полиэтиленгликоль в твердой форме. Для улучшения доступности лекарственного средства, заключенного в капсулу, также можно добавлять дезинтегрирующее вещество или солюбилизатор, такой как, например, агар-агар, карбонат кальция или карбонат натрия.

Дополнительно, если это является желательным или необходимым, в смесь также можно добавлять подходящие связующие, смазывающие вещества, дезинтеграторы, а также красители. Подходящие связующие включают крахмал, желатин, природные сахара, такие как, например, глюкоза или бета-лактоза, подсластители, полученные из кукурузы, природных и синтетических смол, такие как, например, аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воски и т.п. Смазывающие вещества, которые могут применяться в таких дозированных формах, включают олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т.п. Дезинтеграторы включают, но не ограничиваются только ими, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п. Лекарственные средства в виде таблеток получают, например, путем приготовления порошковой смеси, гранулирования или сухого прессования смеси, добавления смазывающего вещества и дезинтегратора и прессования полученной смеси в таблетки. Порошковую смесь готовят путем смешивания соединения, измельченного подходящим образом, с разбавителем или основанием, как описано выше, и необязательно со связующим, таким как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинат, желатин или поливинилпирролидон, замедлителем растворения, таким как, например, парафин, усилителем поглощения, таким как, например, четвертичная соль, и/или абсорбентом, таким как, например, бентонит, каолин или дикальцийфосфат. Порошковую смесь можно гранулировать путем смачивания связующим, таким как, например, сироп, крахмальная паста, слизь акации или растворы целлюлозы или полимерных веществ, и прессования ее через сито. В качестве альтернативы грануляции, порошковую смесь можно пропускать через таблетировочную машину, получая куски неправильной формы, которые распадаются, образуя гранулы. Гранулы можно замасливать путем добавления стеариновой кислоты, стеарата, талька или минерального масла для предотвращения слипания в таблетировочной литейной форме. После этого смазанную смесь спрессовывают, получая таблетки. Соединения в соответствии с изобретением также можно объединять с сыпучим инертным наполнителем и затем подвергать прямому прессованию, получая таблетки без осуществления стадий грануляции или сухого прессования. Таблетки также можно покрывать прозрачным или светонепроницаемым защитным слоем, состоящим из шеллакового запечатывающего слоя, слоя сахара или полимерного вещества и глянцевого слоя воска. К этим покрытиям также можно добавлять красители для возможности различения между разными дозируемыми единицами.

Жидкости для перорального введения, такие как, например, раствор, сиропы и эликсиры, могут быть приготовлены в виде дозируемых единиц таким образом, чтобы они содержали заранее установленное количество соединения. Сиропы могут быть получены путем растворения соединения в водном растворе с подходящим ароматизатором, тогда как эликсиры готовят с применением нетоксичного спиртового наполнителя. Суспензии могут быть приготовлены путем диспергирования соединения в нетоксичном наполнителе. Также можно добавлять солюбилизаторы и эмульсификаторы, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты и полиоксиэтиленовые эфиры сорбита, консерванты, ароматические добавки, такие как, например, масло мяты перечной, или натуральные заменители сахара или сахарин, или другие искусственные заменители сахара и т.п.

Составы для перорального введения в виде дозированных единиц могут быть инкапсулированы в микрокапсулы, если это является желательным. Также состав может быть приготовлен таким образом, чтобы пролонгировать или замедлить высвобождение, например, путем применения покрытий или заделывания требуемого вещества в полимеры, воск и т.п.

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры также могут вводиться в виде липосомных систем доставки, таких как, например, небольшие однослойные пузырьки, большие однослойные пузырьки и многослойные пузырьки. Липосомы могут быть образованы с помощью различных фосфолипидов, таких как, например, холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Соединения формулы I и их соли, таутомеры и стереоизомеры также могут доставляться с использованием моноклональных антител в качестве индивидуальных носителей, к которым присоединены молекулы соединения. Соединения также могут быть соединены с растворимыми полимерами в качестве нацеливающих носителей лекарственных средств. Такими полимерами могут являться поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидофенол, полигидроксиэтиласпартамидофенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный пальмитоиловыми радикалами. Кроме того, соединения можно связывать с биоразлагаемыми полимерами, которые пригодны для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например полимолочной кислотой, поли-эпсилон-капролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидроксипиранами, полицианоакрилатами и перекрестно-сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.

Фармацевтические составы, адаптированные для трансдермального введения, могут вводиться в виде независимых пластырей для удлиненного, тесного контакта с эпидермисом реципиента. Таким образом, например, активный компонент может доставляться из пластыря путем ионофореза, как в общем описано в Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986).

Фармацевтические соединения, адаптированные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, лосьонов, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел.

Для лечения глаз или других наружных тканей, например рта и кожи, предпочтительно применяются составы в виде местной мази или крема. Для приготовления состава в виде мази, активный компонент может применяться с парафиновым или смешивающимся с водой мазевым основанием. Альтернативно, для получения крема активный компонент может быть приготовлен с основой для крема типа масло-в-воде или основой вода-в-масле.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в глаза, включают глазные капли, в которых активный компонент растворен или суспендирован в подходящем носителе, предпочтительно в водном растворителе.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в полость рта, включают лепешки, пастилки и жидкости для полоскания рта.

Фармацевтические составы, адаптированные для ректального введения, могут вводиться в виде суппозиториев или клизм.

Фармацевтические составы, адаптированные для назального введения, в которых носитель представляет собой твердое вещество, включают крупный порошок, имеющий размер частичек, например, в интервале 20-500 микрон, который вводится путем вдыхания, то есть путем быстрого вдоха через нос из контейнера, содержащего порошок, который придерживают возле носа. Подходящие составы для введения в виде назального спрея или носовых капель с жидкостью в качестве носителя включают растворы активного вещества в воде или в масле.

Фармацевтические составы, адаптированные для введения путем ингаляции, включают тонкоизмельченные частички в виде пыли или тумана, которые могут быть получены с помощью различных диспергирующих устройств под давлением с аэрозолями, распылителей или инсуффляторов.

Фармацевтические составы, адаптированные для вагинального введения, могут вводиться в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или аэрозолей.

Фармацевтические составы, адаптированные для парентерального введения, включают водные или неводные стерильные растворы для инъекций, содержащие антиоксиданты, буферы, бактериостатические вещества и растворенные вещества, с помощью которых состав поддерживается изотоническим по отношению к крови реципиента, подвергаемого лечению; и водные или неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспензионную среду и загустители. Составы могут вводиться с помощью емкостей для однократного или многократного введения, например, запечатанных ампул и флаконов, и храниться в лиофилизированном состоянии, при этом непосредственно перед введением необходимо только добавить стерильную жидкость-носитель, например, воду для инъекций. Растворы и суспензии для инъекций, приготовленные согласно рецептуре, могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.

Также является очевидным, что дополнительно к предпочтительным вышеописанным составляющим, составы также могут содержать другие вещества, которые используются в данной области для конкретных типов составов; например, составы, пригодные для перорального введения, могут содержать ароматизаторы.

Терапевтически эффективное количество соединения формулы I зависит от многих факторов, включая, например, возраст и вес животного, определенное состояние, которое необходимо лечить, и его тяжесть, природу лекарственного средства и способ введения, и в конечном счете оно может быть определено лечащим врачом или ветеринаром. Тем не менее, эффективное количество соединения в соответствии с изобретением, как правило, находится в интервале от 0.1 до 100 мг/кг веса тела реципиента (млекопитающего) в сутки и предпочтительно обычно находится в интервале от 1 до 10 мг/кг веса тела в сутки. Следовательно, действующее суточное количество для взрослого млекопитающего весом 70 кг обычно может составлять от 70 до 700 мг, причем это количество может вводиться в виде отдельной дозы один раз в день или обычно в виде циклов частичных доз (таких как, например, два, три, четыре, пять или шесть раз) в день, таким образом, что общая суточная доза является аналогичной. Эффективное количество его соли, сольвата или физиологически функционального производного может быть определено в виде доли эффективного количества соединения в соответствии с изобретением per se. Также можно предположить, что аналогичные дозы пригодны для лечения других состояний, описанных выше.

Комбинированное лечение этого типа можно осуществлять с помощью одновременного, последовательного или раздельного дозирования индивидуальных компонентов лечения. В комбинированных продуктах такого типа применяются соединения в соответствии с изобретением.

Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и по меньшей мере один дополнительный активный компонент лекарственного средства.

Изобретение также относится к комплекту (набору), состоящему из отдельных упаковок

(а) эффективного количества соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях,

и

(б) эффективного количества дополнительного активного компонента лекарственного средства.

Комплект включает подходящие емкости, такие как коробки, индивидуальные бутылки, пакеты или ампулы. Комплект может включать, например, отдельные ампулы, каждая из которых содержит эффективное количество соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях,

и эффективное количество дополнительного активного компонента лекарственного средства в растворенной или лиофиллизированной форме.

"Лечение", как используется в настоящей заявке, обозначает облегчение, полностью или частично, симптомов, связанных с нарушением или заболеванием, или замедление, или остановку дальнейшего прогрессирования или ухудшения этих симптомов, или предотвращение или профилактику заболевания или нарушения у субъекта, имеющего риск развития такого заболевания или нарушения.

Термин "эффективное количество" применительно к соединению формулы (I) может обозначать количество, способное облегчать, полностью или частично, симптомы, связанные с нарушением или заболеванием, или замедлять или останавливать дальнейшее прогрессирование или ухудшение этих симптомов, или предотвращать или обеспечивать профилактику заболевания или нарушения у субъекта, имеющего заболевание или с риском развития заболевания, описанного в настоящей заявке, такого как воспалительные состояния, иммунологические состояния, злокачественные новообразования или метаболические состояния.

В одном варианте осуществления эффективное количество соединения формулы (I) представляет собой количество, которое ингибирует танкиразу в клетке, например, in-vitro или in-vivo. В некоторых вариантах осуществления, эффективное количество соединения формулы (I) ингибирует танкиразу в клетке на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 99%, по сравнению с активностью танкиразы в необработанной клетке. Эффективное количество соединения формулы (I), например, в фармацевтической композиции, может находиться на уровне, который превышает желательный эффект; например, от приблизительно 0,005 мг/кг веса тела субъекта до приблизительно 10 мг/кг веса тела субъекта в единичной лекарственной форме как для перорального, так и для парентерального введения.

ПРИМЕНЕНИЕ

Соединения согласно настоящему изобретению пригодны в качестве фармацевтически активных компонентов для млекопитающих, в особенности для людей, для лечения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Настоящее изобретение охватывает применение соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Примеры воспалительных заболеваний включают ревматоидный артрит, псориаз, контактный дерматит, аллергическую реакцию замедленного типа и другие.

Также охватывается применение соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения заболевания, индуцированного танкиразой, или состояния, индуцированного танкиразой у млекопитающего, при котором в этом способе терапевтически эффективное количество соединения в соответствии с изобретением вводят больному млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении. Терапевтическое количество изменяется в зависимости от конкретного заболевания и легко может быть определено специалистом в данной области.

Выражение "заболевания или состояния, индуцированные танкиразой" относится к патологическим состояниям, которые зависят от активности одной или нескольких танкираз. Заболевания, связанные с активностью танкиразы, включают злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечнососудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях,

для применения для лечения заболеваний, при которых ингибирование, регуляция и/или модуляция ингибирования танкиразы играет роль.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для ингибирования танкиразы.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для лечения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к способам лечения или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления, которые включают введение субъекту, который в этом нуждается, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или сольвата.

Характерные злокачественные новообразования, для лечения или предотвращения которых являются полезными соединения формулы I, включают, но не ограничиваются таковыми, рак головы, шеи, глаз, рта, горла, пищевода, бронхов, гортани, глотки, груди, костей, легких, ободочной кишки, прямой кишки, желудка, предстательной железы, мочевого пузыря, матки, шейки матки, молочной железы, яичников, яичек или других репродуктивных органов, кожи, щитовидной железы, крови, лимфатических узлов, почек, печени, поджелудочной железы, головного мозга, центральной нервной системы, солидных опухолей и злокачественного перерождения крови.

Характерные сердечно-сосудистые заболевания, для лечения или предотвращения которых являются полезными соединения формулы I, включают, но не ограничиваются таковыми, рестеноз, атеросклероз и его последствия, такие как инсульт, инфаркт миокарда, ишемические повреждения сердца, легких, кишечника, почек, печени, поджелудочной железы, селезенки или мозга.

Настоящее изобретение относится к способу лечения пролиферативного, аутоиммунного, противовоспалительного или инфекционного заболевания или нарушения, который включает введение субъекту, который в этом нуждается, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Предпочтительно, настоящее изобретение относится к способу, где заболевание представляет собой злокачественное новообразование.

Особенно предпочтительно, настоящее изобретение относится к способу, где заболевание представляет собой злокачественное новообразование, где введение является одновременным, последовательным или чередующимся с введением по меньшей мере одного другого активного лекарственного средства.

Описанные соединения формулы I могут вводиться в комбинации с другими известными лекарственными средствами, включая противораковые средства. Как используется в настоящем изобретении, термин "противораковое средство" относится к любому средству, которое вводят пациенту со злокачественным новообразованием для лечения рака.

Противораковое лечение, определенное в данном документе, может применяться в виде монотерапии, или, дополнительно к соединению по изобретению, можно также применять обычные хирургические методы или радиотерапию или химиотерапию. Такая химиотерапия может включать один или несколько следующих классов противоопухолевых средств:

(I) антипролиферативные/противоопухолевые/повреждающие ДНК лекарственные средства и их комбинации, которые применяются в медицинской онкологии, такие как алкилирующие средства (например, цисплатин, карбоплатин, циклофосфамид, азотный иприт, мельфалан, хлорамбуцил, бусульфан и нитрозомочевины); антиметаболиты (например, антифолаты, такие как фторпиримидины, такие как 5-фторурацил и тегафур, ралтитрексед, метотрексат, арабинозид цитозина, гидроксимочевина и гемцитабин); противоопухолевые антибиотики (например, антрациклины, такие как адриамицин, блеомицин, доксорубицин, дауномицин, эпирубицин, идарубицин, митомицин-С, дактиномицин и митрамицин); антимитотические средства (например, алкалоиды барвинка, такие как винкристин, винбластин, виндезин и винорелбин и таксоиды, такие как таксол и таксотер); ингибиторы топоизомеразы (например, эпиподофиллотоксины, такие этопозид и тенипозид, амсакрин, топотекан, иринотекан и камптотецин); и средства, влияющие на дифференциацию клеток (например, ретиноевая кислота, полностью находящаяся в транс-конфигурации, 13-цис-ретиноевая кислота и фенретинид);

(II) цитостатические средства, такие как антиэстрогены (например, тамоксифен, торемифен, ралоксифен, дролоксифен и йодоксифен), ингибиторы рецептора эстрогена (например, фульвестрант); антиандрогены (например, бикалутамид, флутамид, нилутамид и ципротерон ацетат), антагонисты LHRH или агонисты LHRH (например, гозерелин, лейпрорелин и бузерелин), прогестогены (например, мегестрол ацетат), ингибиторы ароматазы (например, анастрозол, летрозол, воразол и эксеместан) и ингибиторы 5α-редуктазы, такие как финастерид;

(III) средства, которые ингибируют инвазию злокачественных клеток (например, ингибиторы металлопротеиназы, такие как маримастат, и ингибиторы функции рецептора урокиназного активатора плазминогена);

(IV) ингибиторы действия фактора роста, например, такие ингибиторы включают антитела к фактору роста, антитела к рецептору фактора роста (например, анти-erbb2 антитело трастузумаб [Herceptin™] и анти-erbb1 антитело цетуксимаб [С225]), ингибиторы фарнезилтрансферазы, ингибиторы тирозинкиназы и ингибиторы серин/треонин киназы, например, ингибиторы семейства фактора роста эпидермиса (например, ингибиторы EGFR семейства тирозинкиназ, такие как N-(3-хлор-4-фторфенил)-7-метокси-6-(3-морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (гефитиниб, AZD1839), N-(3-этинилфенил)-6,7-бис(2-метоксиэтокси)хиназолин-4-амин (эрлотиниб, OSI-774) и 6-акриламидо-N-(3-хлор-4-фторфенил)-7-(3-морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (CI 1033)), например, ингибиторы семейства фактора роста производных тромбоцитов и, например, ингибиторы семейства фактора роста гепатоцитов;

(V) антиангиогенные вещества, такие как те, которые ингибируют действие фактора роста эндотелия сосудов (например, антитело к фактору роста клеток эндотелия сосудов бевацизумаб [Avastin™], соединения, которые описаны в опубликованных международных заявках на патент WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 и WO 98/13354) и соединения, которые действуют по другому механизму (например, линомид, ингибиторы действия интегрина αvβ3 и ангиостатин);

(VI) вещества, повреждающие сосуды, такие как комбретастатин А4 и соединения, описанные в международных заявках на патент WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 и WO 02/08213;

(VII) антисмысловая терапия, например, такая, которая направлена на вышеперечисленные мишени, такая как ISIS 2503, антисмысловая терапия на основе гена Ras;

(VIII) способы генной терапии, включая, например, способы замены аберрантных генов, такие как способы аберрации р53 или аберрации BRCA1 или BRCA2, GDEPT (пролекарственная терапия, направленная на ген фермента), способы с использованием деаминазы цитозина, тимидинкиназы или бактериальной нитроредуктазы и способы повышения устойчивости пациента к химиотерапии или радиотерапии, такие как генная терапия резистентности ко многим лекарственным средствам; и

(IX) способы иммунотерапии, включая, например, способы повышения иммуногенности опухолевых клеток пациента в условиях ex vivo и in-vivo, такие как трансфекция цитокинами, такими как интерлейкин 2, интерлейкин 4 или фактор стимуляции колоний гранулоцитов-макрофагов, способы снижения активности Т-клеток, способы с использованием трансфектированных иммунных клеток, таких как цитокин-трансфектированные дендритные клетки, способы с использованием цитокин-трансфектированных линий опухолевых клеток и способы с использованием анти-идиотипичных антител.

Лекарственные средства, приведенные ниже в таблице 1, предпочтительно, но не исключительно, комбинируют с соединениями формулы I.

Следующие сокращения относятся соответственно к определениям, приведенным ниже:

водн. (водн), ч (час), г (грам), л (литр), мг (миллиграм), МГц (мегагерц), мин. (минута), мм (милиметр), ммоль (милимоль), мМ (милимолярный), т.пл. (температура плавления), экв. (эквивалент), мл (милилитр), мкл (микролитр), ACN (ацетонитрил), АсОН (уксусная кислота), CDCl₃ (дейтерированный хлороформ), CD₃OD (дейтерированный метанол), CH₃CN (ацетонитрил), c-hex (циклогексан), DCC (дициклогексил карбодиимид), ДХМ (дихлорметан), DIC (диизопропил карбодиимид), DIEA (диизопропилэтил-амин), ДМФА (диметилформамид), ДМСО (диметилсульфоксид), ДМСО-d₆ (дейтерированный диметилсульфоксид), EDC (1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид), ЭРИ (электрораспылительная ионизация), EtOAc (этилацетат), Et₂O (простой диэтиловый эфир), EtOH (этанол), HATU гексафторфосфат (диметиламино-([1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-илокси)-метилен]-диметиламмония), ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография), i-PrOH (2-пропанол), K₂CO₃ (карбонат калия), ЖХ (жидкостная хроматография), МеОН (метанол), MgSO₄ (сульфат магния), МС (масс-спектрометрия), МТВЕ (метил-трет-бутиловый эфир), NaHCO₃ (бикарбонат натрия), NaBH₄ (борогидрид натрия), NMM (N-метилморфолин), ЯМР (ядерный магнитный резонанс), PyBOP (гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окси-трис-пирролидино-фосфония), КТ (комнатная температура), Rt (время удержания), SPE (твердофазная экстракция), TBTU (тетрафторборат 2-(1-Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония), TEA (триэтиламин), ТФУ (трифторуксусная кислота), ТГФ (тетрагидрофуран), ТСХ (тонкослойная хроматография), УФ (ультрафиолет).

Описание исследований in-vitro

Сокращения:

GST = глутатион-S-трансфераза

FRET = резонансный перенос энергии флуоресценции

HTRF® = (гомогенная флуоресценция с временным разрешением)

HEPES = буфер 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин - этансульфоновая кислота

DTT = дитиотреитол

BSA = бычий сывороточный альбумин

CHAPS = детергент;

CHAPS = 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфонат

Стрептавидин-XLent® представляет собой высококачественный конъюгат стрептавидин-XL665, для которого были оптимизированы условия сочетания для получения конъюгата с улучшенными характеристиками для некоторых исследований, в частности тех, для которых требуется высокая чувствительность.

Тестирование биохимической активности танкираз 1 и 2: Исследование аутопарсилирования

Исследование аутопарсилирования осуществляют за две стадии: ферментативная реакция, в которой GST-меченая танкираза-1, соотв. танкираза-2 переносит биотинилированную ADP-рибозу на себя из биотинилированного NAD в качестве ко-субстрата, и реакция обнаружения, где анализируют FRET с временным разрешением между меченными криптатом анти-GST, которые связаны с GST меткой фермента и Xlent® меченным - стрептавидин связанным биотин-парсилированным остатком. Аутопарсилирующую активность определяют непосредственно через повышение HTRF сигнала.

Исследование аутопарсилирования осуществляют в формате анализа на 384 лунок HTRF® (Cisbio, Codolet, France) в микротитровальных низкообъемных планшетах на 384 лунки Greiner nb и используют для экрана с высокой пропускной способностью. 250 нМ GST-меченную танкиразу-1 (1023-1327 а/к), соответственно приблизительно 250 нМ GST-меченную танкиразу-2 (873-1166 а/к) и 5 мкМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) в качестве ко-субстрата инкубируют в общем объеме 5 мкл (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 1.4 мМ DTT, 0.5% ДМСО, pH 7.7) при отсутствии или в присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 90 мин при 30°С. Реакцию останавливают путем добавления 1 мкл 50 мМ EDTA раствора. Добавляют 2 мкл раствора для обнаружения (1.6 мкМ SA-Xlent® (Cisbio, Codolet, France), 7.4 нМ Анти-GST-K® (Eu-меченные анти-GST, Cisbio, Codolet, France) в 50 мМ HEPES, 800 мМ KF, 0.1% BSA, 20 мМ EDTA, 0.1% CHAPS, pH 7.0). После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре HTRF измеряют с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при длине волны возбуждения 340 нм (лазерный режим) и длинах волн эмиссии 615 нм и 665 нм. Определяют соотношение сигналов эмиссии. Полное используемое значение представляет реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляет собой XAV-939 (Tocris) в конечной концентрации 5 мкМ. Ингибирующие значения (IC50) определяют, используя либо программу Symyx Assay Explorer®, либо Condosseo® от GeneData.

Измерение клеточного ингибирования танкиразы

Поскольку было описано, что танкиразы модулируют клеточный уровень Axin2 (Huang и др., 2009; Nature), то повышение уровня Axin2 используют в качестве анализируемых данных для определения клеточного ингибирования танкираз в анализе на основе Luminex.

Клетки клеточной линии карциномы ободочной кишки DLD1 высевают в планшеты на 96 лунок при плотности 1.5×10⁴ клеток на лунку. На следующий день, клетки обрабатывают серийными разведениями тестируемого соединения за семь стадий в виде трех повторов с конечной концентрацией ДМСО 0.3%. Через 24 часа, клетки лизируют в лизирующем буфере (20 мМ Tris/HCl pH 8.0, 150 мМ NaCl, 1% NP40, 10% глицерин) и лизаты очищают путем центрифугирования через фильтровальный планшет на 96 лунок (0.65 мкм). Белок Axin2 выделяют из клеточных лизатов путем инкубирования с моноклональным анти-Axin2 антителом (R&D Systems #МАВ6078), которое связывается с флуоресцентными карбоксишариками. После этого, связанный Axin2 специфически обнаруживают с помощью поликлонального анти-Axin2 антитела (Cell Signaling #2151) и подходящего РЕ-флуоресцентного вторичного антитела. Количество выделенного Axin2 белка определяют с помощью прибора Luminex²⁰⁰ (Luminex Corporation) в соответствии с инструкциями производителя путем подсчитывания 100 событий на лунку. Ингибирование танкиразы тестируемыми соединениями приводит к более высоким уровням Axin2, которые прямо коррелируют с повышением обнаруживаемой флуоресценции. В качестве контролей клетки обрабатывают только растворителем (нейтральный контроль) и сравнительным ингибитором танкиразы IWR-2 (3Е-06 М), который служит в качестве контроля для максимального повышения Axin2. Для анализа, полученные данные нормализуют по отношению к необработанному контролю с растворителем и подгоняют для определения значений ЕС₅₀, используя программное обеспечение Assay Explorer (Accelrys).

Описание исследования PARP1

Тестирование биохимической активности PARP-1: Исследование аутопарсилирования

Исследование аутопарсилирования осуществляют за две стадии: ферментативная реакция, в которой His-меченная Parp-1 переносит биотинилированную ADP-рибозу/ADP-рибозу на себя с биотинилированного NAD/NAD в качестве ко-субстрата, и реакция обнаружения, где анализируют FRET с временным разрешением между меченным криптатом анти-His антителом, связанным с His меткой фермента и Xlent® меченным-стрептавидин связанным биотин-парсилированным остатком. Аутопарсилирующую активность определяют непосредственно через повышение HTRF сигнала.

Исследование аутопарсилирования осуществляют в формате анализа на 384 лунок HTRF® (Cisbio, Codolet, France) в микротитровальных низкообъемных планшетах на 384 лунки Greiner nb. 35 нМ His-меченную Parp-1 (человеческая, рекомбинантная, Enzo Life Sciences GmbH, Lörrach, Germany) и смесь 125 нМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) и 800 нМ NAD в качестве ко-субстрата инкубируют в общем объеме 6 мкл (100 мМ Tris/HCl, 4 мМ Mg-хлорид, 0,01% IGEPAL® СА630, 1 мМ DTT, 0,5% ДМСО, pH 8, 13 нг/мкл активированной ДНК (BPS Bioscience, San Diego, US)) при отсутствии или в присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 150 мин при 23°С. Реакцию останавливают путем добавления 4 мкл раствора стоп/обнаружение (70 нМ SA-Xlent® (Cisbio, Codolet, France), 2.5 нМ анти-His-K® (Eu-меченные анти-His, Cisbio, Codolet, France) в 50 мМ HEPES, 400 мМ KF, 0.1% BSA, 20 мМ EDTA, pH 7.0). После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре HTRF измеряют с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при длине волны возбуждения 340 нм (лазерный режим) и длинах волн эмиссии 615 нм и 665 нм. Определяют соотношение сигналов эмиссии. Полное используемое значение представляет реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляет собой Olaparib (LClabs, Woburn, US) в конечной концентрации 1 мкМ. Определяют ингибирующие значения (IC50), используя либо программу Symyx Assay Explorer®, либо Condosseo® от GeneData.

Описание ELISA исследования TNKS1 и TNKS2

Тестирование биохимической активности TNK 1 и 2: активности ELISA (исследование аутопарсилирования)

Для анализа аутопарсилирующей активности TNKS 1 и 2 осуществляют ELISA: На первой стадии GST меченную TNKS захватывают на покрытом глутатионом планшете. После этого осуществляют анализ активности с биотинилированным NAD при отсутствии / в присутствии соединений. В процессе ферментативной реакции GST меченная TNKS переносит биотинилированную ADP-рибозу на себя с биотинилированного NAD в качестве ко-субстрата. Для обнаружения добавляют конъюгат стрептавидин-HRP, который связывается с биотинилированной TNKS и таким образом захватывается на планшеты. Определяют количество биотинилированной соотв. аутопарсилированной TNKS с люминесцентным субстратом для HRP. Уровень сигнала люминесценции прямо коррелируется с количеством аутопарсилированной TNKS и, следовательно, с активностью TNKS.

Активность ELISA осуществляют в микротитровальных планшетах на 384 лунки, покрытых глутатионом (планшеты для захвата Express, покрытые глутатионом, Biocat, Heidelberg, Germany). Планшеты предварительно уравновешивают с помощью PBS. Затем планшеты инкубуют с 50 мкл 20 нг/лунку GST-меченной Tnks-1 (1023-1327 а/к, собственного производства), соответственно GST-меченной Tnks-2 (873-1166 а/к, собственного производства) в буфере для анализа (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 2 мМ DTT, pH 7.7) в течение ночи при 4°С. Планшеты промывают 3 раза с помощью PBS-Tween-20. Лунки блокируют путем инкубирования при комнатной температуре в течение 20 минут с 50 мкл блокирующего буфера (PBS, 0.05% Tween-20, 0.5% BSA). После этого планшеты промывают 3 раза с помощью PBS-Tween-20. Ферментативную реакцию осуществляют в 50 мкл реакционного раствора (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 1.4 мМ DTT, 0.5% ДМСО, рН 7.7) с 10 мкМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) в качестве ко-субстрата при отсутствии или присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 1 часа при 30°С. Реакцию останавливают путем промывания 3 раза с PBS-Tween-20. Для обнаружения добавляют 50 мкл 20 нг/мкл стрептавидин, HRP конъюгата (MoBiTec, Göttingen, Germany) в PBS/0.05%Tween-20/0.01% BSA и планшеты инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре. После трехразового промывания PBS-Tween-20 добавляют 50 мкл SuperSignal ELISA Femto Maximum чувствительного субстратного раствора (ThermoFisherScientific (Pierce), Bonn, Germany). После инкубирования в течение 1 минуты при комнатной температуре, измеряют люминесцентные сигналы с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при 700 нм. Полное используемое значение представляет реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляет собой XAV-939 (Tocris) в конечной концентрации 5 мкМ. Определяют ингибирующие значения (IC50), используя либо программу Symyx Assay Explorer®, либо Condosseo® от GeneData.

Выше и ниже, все температуры указаны в градусах Цельсия °С. В последующих примерах "обычная обработка" обозначает: при необходимости добавляют воду, рН устанавливают, при необходимости, на значение от 2 до 10, в зависимости от строения конечного продукта, смесь экстрагируют этилацетатом или дихлорметаном, фазы разделяют, органическую фазу высушивают над сульфатом натрия и упаривают, и остаток очищают при помощи хроматографии на силикагеле и/или кристаллизации. Rf значения на силикагеле; элюент: этилацетат/метанол 9:1.

ВЭЖХ/МС условия А

колонка: Chromolith PerformanceROD RP-18e, 100×3 мм²

градиент: А:Б=99:1-0:100 за 1.8 мин

скорость потока: 2.0 мл/мин

элюент А: вода + 0.05% муравьиной кислоты

элюент Б: ацетонитрил + 0.04% муравьиной кислоты

длина волны: 220 нм

масс-спектроскопия: положительный режим

ВЭЖХ/МС условия Б

колонка: Chromolith PerformanceROD RP-18e, 100×3 мм²

градиент: А:Б=99:1-0:100 за 3.5 мин

скорость потока: 2.0 мл/мин

элюент А: вода + 0.05% муравьиной кислоты

элюент Б: ацетонитрил + 0.04% муравьиной кислоты

длина волны: 220 нм

масс-спектроскопия: положительный режим

ВЭЖХ/МС условия В

колонка: Chromolith PerformanceROD RP-18e, 50×4.6 мм²

градиент: А:Б=96:4-0:100 за 2.8 мин

скорость потока: 2.40 мл/мин

элюент А: вода + 0.05% муравьиной кислоты

элюент Б: ацетонитрил + 0.04% муравьиной кислоты

длина волны: 220 нм

масс-спектроскопия: положительный режим

¹Н ЯМР записывали на спектрометре Bruker DPX-300, DRX-400 или AVII-400, используя остаточный сигнал дейтерированного растворителя в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги (δ) представлены в виде м.д. относительного остаточного сигнала растворителя (δ=2.49 м.д. для ¹Н ЯМР в ДМСО-d₆). Данные ¹H ЯМР представляли следующим образом: химический сдвиг (мультиплетность, константы взаимодействия и число водородов). Мультиплетность сокращали следующим образом: s (синглет), d (дублет), t (триплет), q (квартет), m (мультиплет), br (широкий).

Микроволновую химию выполняли в однорежимном микроволновом реакторе EmrysTM Optimiser от Personal Chemistry.

Пример 1

Синтез 6-фтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-она ("А1")

Суспензию 2-амино-5-фторбензамида (1.00 г, 6.49 ммоль), метил 4-формилбензоата (1.06 г, 6.49 ммоль) и дисульфита натрия (1.26 г, 6.62 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (13 мл) нагревают до 150°С и перемешивают при этой температуре в течение 3 часов. Реакционной смеси дают возможность достичь комнатной температуры и выливают в воду со льдом. Получающийся осадок собирают путем фильтрования, промывают водой и сушат в вакууме с получением сложного метилового эфира 4-(6-фтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-бензойной кислоты в виде желтого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 2.08 мин (В), [М+Н] 299.

К суспензии сложного метилового эфира 4-(6-фтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-бензойной кислоты (1.53 г, 5.13 ммоль) в ТГФ (20 мл) добавляют хлорид церия(III) (1.33 г, 5.38 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Затем добавляют метилмагнийхлорид (20%-ный раствор в ТГФ, 7.54 мл, 20.5 ммоль), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение другого часа. Реакционную смесь разбавляют ТГФ и осторожно добавляют насыщенный раствор хлорида натрия. Смесь тщательно перемешивают и фильтруют с отсасыванием. Органическую фазу фильтрата отделяют, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем с помощью смеси метанол/дихлорметан в качестве элюента с получением 6-фтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-она в виде белого кристаллического вещества; ВЭЖХ/МС 2.22 мин (Б), [М+Н] 299.

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.57 (s, 1H), 8.12 (m, 2Н), 7.81 (m, 2Н), 7.71 (td, J=8.7, 3.0, 1Н), 7.63 (m, 2Н), 5.14 (s, 1H), 1.47 (s, 6H).

Следующие соединения получают аналогично:

2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-8-метокси-3Н-хиназолин-4-он ("А2")

ВЭЖХ/МС 1.61 мин (В), [М+Н] 311;

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.47 (s, 1Н), 8.13 (m, 2Н), 7.72 (dd, J=7.8, 1.5, 1Н), 7.64 (m, 2H), 7.45 (t, J=7.9, 1H), 7.39 (dd, J=8.1, 1.4, 1H), 5.16 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 1.48 (s, 6H);

8-фтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("A3")

ВЭЖХ/МС 2.11 мин (Б), [М+Н] 299;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.45 (s, 1Н), 8.12 (m, 2Н), 7.79 (td, J=8.2, 5.7, 1Н), 7.63 (m, 2Н), 7.54 (d, J=8.0, 1Н), 7.23 (ddd, J=11.0, 8.2, 0.9, 1H), 5.15 (s, 1H), 1.47 (s, 6Н);

5-фтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А4")

ВЭЖХ/МС 1.81 мин (В), [М+Н] 299;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.63 (s, 1Н), 8.14 (m, 2Н), 7.96 (d, J=8.0, 1H), 7.70 (ddd, J=10.7, 8.0, 1.3, 1Н), 7.64 (m, 2Н), 7.49 (td, J=8.0, 4.8, 1Н), 5.17 (s, 1H), 1.47 (s, 6Н);

6-хлор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А5")

ВЭЖХ/МС 2.44 мин (Б), [М+Н] 315;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.64 (s, 1Н), 8.12 (d, J=8.6, 2Н), 8.09 (d, J=2.4, 1H), 7.85 (dd, J=8.7, 2.5, 1Н), 7.76 (d, J=8.7, 1Н), 7.63 (d, J=8.6, 2Н), 5.19 (s, 1Н), 1.47 (s, 6Н);

8-хлор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А6")

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.70 (s, 1Н), 8.18 (d, J=8.6, 2Н), 8.11 (dd, J=7.9, 1.4, 1Н), 7.98 (dd, J=7.8, 1.4, 1H), 7.65 (d, J=8.6, 2H), 7.47 (t, J=7.8, 1H), 5.17 (s, 1H), 1.47 (s, 6H);

ВЭЖХ/МС 2.50 мин (Б), [М+Н] 315;

6-фтор-2-[5-(1-гидрокси-1-метилэтил)-2-пиридил]-3Н-хиназолин-4-он ("А13")

ВЭЖХ/МС 2.30 мин (Б), [М+Н] 300;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 11.96 (s, 1H), 8.86 (d, J=1.6, 1H), 8.38 (d, J=8.3, 1Н), 8.12 (dd, J=8.3, 2.2, 1H), 7.87 (m, 2H), 7.76 (td, J=8.7, 3.1, 1H), 5.42 (s, 1H), 1.52 (s, 6H);

2-[4-(l-этил-1-гидроксипропил)фенил]-6-фтор-3Н-хиназолин-4-он ("A14")

ВЭЖХ/МС 2.62 мин (Б), [М+Н] 327;

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.57 (s, 1Н), 8.17-8.08 (m, 2Н), 7.81 (m, 2Н), 7.71 (td, J=8.7, 3.0 Гц, 1H), 7.57-7.49 (m, 2Н), 4.67 (s, 1Н), 1.77 (m, 4Н), 0.66 (t, J=7.3 Гц, 6Н).

Пример 2

Синтез 6-фтор-2-{4-[1-(2-гидроксиэтокси)-1-метилэтил]-фенил}-3Н-хиназолин-4-она ("А7")

К суспензии 6-фтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-она (149 мг, 0.50 ммоль) в этан-1,2-диоле (2 мл) добавляют моногидрат толуол-4-сульфоновой кислоты (114 мг, 0.60 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 часов при температуре окружающей среды. Суспензию затем нагревают до 80°С и получающийся прозрачный раствор перемешивают при этой температуре в течение 5 часов. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют воду. Получающийся осадок отфильтровывают и промывают водой. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем с помощью смеси циклогексан/этилацетат в качестве элюента с получением 6-фтор-2-{4-[1-(2-гидроксиэтокси)-1-метилэтил]-фенил}-3Н-хиназолин-4-она в виде белых кристаллов; ВЭЖХ/МС 2.28 мин (Б), [М+Н] 343;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.60 (s, 1Н), 8.15 (d, J=8.6, 2Н), 7.82 (m, 2Н), 7.72 (td, J=8.7, 3.0, 1Н), 7.61 (d, J=8.6, 2H), 4.58 (t, J=5.7, 1H), 3.50 (q, J=5.6, 2H), 3.19 (t, J=5.6, 2H), 1.51 (s, 6H).

Следующие соединения получают аналогично:

6-фтор-2-{4-[1-(2-метоксиэтокси)-1-метилэтил]-фенил}-3Н-хиназолин-4-он ("А8")

ВЭЖХ/МС 2.61 мин (Б), [М+Н] 357;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.60 (s, 1Н), 8.15 (m, 2Н), 7.82 (m, 2Н), 7.72 (td, J=8.7, 3.0, 1Н), 7.59 (m, 2Н), 3.45 (dd, J=5.7, 4.2, 2Н), 3.29 (dd, J=5.7, 4.2, 2Н), 3.26 (s, 3Н), 1.51 (s, 6Н);

6-фтор-2-{4-[1-(2-гидроксиэтокси)-1-метилэтил]-фенил}-8-метил-3Н-хиназолин-4-он ("А21")

ВЭЖХ/МС 1.90 мин (А), [М+Н] 327;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.60 (s, 1H), 8.21 (d, J=8.5 Гц, 1H), 7.73-7.44 (m, 4Н), 4.56 (t, J=5.7 Гц, 1Н), 3.52 (q, J=5.6 Гц, 2Н), 3.21 (t, J=5.6 Гц, 2Н), 2.65 (s, 3Н), 1.52 (s, 6Н).

Пример 3

Синтез 2-(4-трет-бутилфенил)-6-фтор-3Н-хиназолин-4-она ("А9")

Суспензию 2-амино-5-фторбензамида (154 мг, 1.0 ммоль), 4-трет-бутилбензальдегида (162 мг, 1.0 ммоль) и дисульфита натрия (194 мг, 1.02 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (2 мл) нагревают до 150°С и перемешивают при этой температуре в течение 3 часов. Реакционной смеси дают возможность достичь комнатной температуры и выливают в воду со льдом. Получающийся осадок собирают путем фильтрования, промывают водой и сушат в вакууме с получением 2-(4-трет-бутилфенил)-6-фтор-3Н-хиназолин-4-она в виде светло-серого твердого вещества;

ВЭЖХ/МС 3.10 мин (Б), [М+Н] 297;

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.59 (s, 1H), 8.12 (m, 2Н), 7.81 (ddd, J=8.9, 6.4, 4.0, 2Н), 7.72 (td, J=8.7, 3.0, 1Н), 7.57 (m, 2H), 1.33 (s, 9H).

Следующие соединения получают аналогично:

6-фтор-2-[4-(4-метилпиперазин-1-ил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А10")

ВЭЖХ/МС 1.67 мин (Б), [М+Н] 339;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.36 (s, 1Н), 8.10 (d, J=9.1, 2Н), 7.76 (m, 2Н), 7.67 (td, J=8.7, 3.0, 1H), 7.04 (d, J=9.1, 2Н), 3.32 (m, 4Н), 2.47 (m, 4Н), 2.25 (s, 3Н);

6-фтор-2-(4-изопропилфенил)-3Н-хиназолин-4-он ("А22")

ВЭЖХ/МС 2.99 мин (Б), [М+Н] 283;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.57 (s, 1Н), 8.43-7.95 (m, 2Н), 7.87-7.78 (m, 2Н), 7.73 (td, J=8.7, 3.0 Гц, 1Н), 7.43 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 3.00 (hept, J=6.8 Гц, 1H), 1.26 (d, J=6.9 Гц, 6Н).

Пример 4

Синтез 6-фтор-2-[4-(2-метилтетрагидрофуран-2-ил)фенил]-3Н-хиназолин-4-она ("А15")

2-ю стадию проводили, следуя М. McConville и др., Org. Biomol. Chem., 2010, 8, 5614-5619.

Пример 5

Синтез 6-фтор-2-[4-(1-гидроксициклопентил)фенил]-3Н-хиназолин-4-она ("А16")

Раствор 2-(4-бромфенил)-[1,3]диоксолана (1.15 г, 5.00 ммоль) в ТГФ (5.0 мл) добавляют по каплям при 55°С к магниевым стружкам (146 мг, 6.0 ммоль) и кристаллу йода в ТГФ (5 мл). Смесь перемешивают в течение 1 ч при 55°С. Затем по каплям добавляют раствор циклопентанона (465 мкл, 5.25 ммоль) в ТГФ (5 мл), и смесь перемешивают в течение другого часа при 55°С. Реакционную смесь разбавляют ТГФ, подкисляют 1 н. HCl (4 мл) и три раза промывают соляным раствором. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают досуха. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем с помощью смеси циклогексан/этилацетат в качестве элюента с получением 1-(4-[1,3]диоксолан-2-илфенил)-циклопентанола в виде желтого масла; ВЭЖХ/МС 1.71 мин (А), [М+Н] 235.

Суспензию 2-амино-5-фторбензамида (135 мг, 0.88 ммоль), 1-(4-[1,3]диоксолан-2-илфенил)-циклопентанола (206 мг, 0.88 ммоль) и дисульфита натрия (170 мг, 0.89 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (2 мл) нагревают до 150°С и перемешивают при этой температуре в течение 3 часов. Реакционной смеси дают возможность достичь комнатной температуры и выливают в воду со льдом. Получающийся осадок собирают путем фильтрования и промывают водой. Его хроматографируют на колонке с силикагелем с помощью смеси метанол/дихлорметан в качестве элюента с получением 6-фтор-2-[4-(1-гидроксициклопентил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-она в виде белого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 1.80 мин (А), [М+Н] 325;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.59 (s, 1Н), 8.13 (d, J=8.5, 2Н), 7.81 (m, 2Н), 7.71 (td, J=8.7, 3.0, 1Н), 7.69 (m, 2Н), 4.93 (s, 1Н), 1.89 (s, 6Н), 1.78 (m, 2Н).

Следующее соединение получают аналогично:

6-фтор-2-[4-(3-гидроксиоксетан-3-ил)фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А17")

Пример 6

Синтез 2-[4-[1-(2-аминоэтокси)-1-метилэтил]фенил]-6-фтор-3Н-хиназолин-4-она ("А18")

Пример 7

Синтез 6-фтор-2-[4-(4-пиперидил)фенил]-3Н-хиназолин-4-она ("А19") и 6-фтор-2-[4-(1-метил-4-пиперидил)фенил]-3Н-хиназолин-4-она ("А20")

Пример 8

Синтез 6,8-дифтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-3Н-хиназолин-4-она ("А11")

Раствор 2-амино-3,5-дифторбензамида (86.2 мг, 0.50 ммоль), метил 4-формилбензоата (82.1 мг, 0.50 ммоль) и дисульфита натрия (97 мг, 0.51 ммоль) в N-метилпирролидоне (1 мл) нагревают до 150°С и перемешивают при этой температуре в течение 16 часов. Реакционной смеси дают возможность достичь комнатной температуры и выливают в воду со льдом. Получающийся осадок собирают путем фильтрования, промывают водой и сушат в вакууме с получением сложного метилового эфира 4-(6,8-дифтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-бензойной кислоты в виде коричневого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 1.88 мин (А), [М+Н] 316.

К суспензии сложного метилового эфира 4-(6,8-дифтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-бензойной кислоты (152 мг, 0.48 ммоль) в ТГФ (20 мл) добавляют хлорид церия(III) (130 мг, 0.53 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляют метилмагнийхлорид (20%-ный раствор в ТГФ, 671 мкл, 2.01 ммоль), и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 минут. Реакционную смесь разбавляют ТГФ и осторожно добавляют насыщенный раствор хлорида натрия. Смесь тщательно перемешивают и фильтруют с отсасыванием. Органическую фазу фильтрата отделяют, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем с помощью смеси метанол/дихлорметан в качестве элюента с получением 6,8-дифтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-она в виде белого порошка; ВЭЖХ/МС 2.37 мин (Б), [М+Н] 317;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.76 (s, 1Н), 8.12 (d, J=8.5, 2Н), 7.83 (ddd, J=10.4, 9.1, 2.9, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.64 (d, J=8.5, 2H), 5.17 (s, 1H), 1.47 (s, 6H).

Следующие соединения получают аналогично

5,6-дифтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А12")

ВЭЖХ/МС 2.28 мин (Б), [М+Н] 317;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.58 (s, 1H), 8.38-8.02 (m, 2Н), 8.02-7.76 (m, 1H), 7.73-7.37 (m, 3Н), 5.16 (s, 1Н), 1.46 (s, 6Н);

5-хлор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А23")

ВЭЖХ/МС 2.33 мин (Б), [М+Н] 315;

¹Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.45 (s, 1Н), 8.32-7.98 (m, 2Н), 7.73 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.66 (dd, J=8.2, 1.2 Гц, 1Н), 7.65-7.61 (m, 2Н), 7.49 (dd, J=7.7, 1.3 Гц, 1Н), 5.15 (s, 1Н), 1.47 (s, 6Н);

2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-8-метил-3Н-хиназолин-4-он ("А24")

ВЭЖХ/МС 2.52 мин (Б), [М+Н] 295;

¹Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.45 (s, 1Н), 8.22-8.08 (m, 2Н), 8.09-7.90 (m, 1H), 7.75-7.66 (m, 1H), 7.63 (d, J=8.5 Гц, 2Н), 7.39 (t, J=7.6 Гц, 1H), 5.14 (s, 1H), 2.62 (s, 3Н), 1.47 (s, 6Н);

6-фтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-8-метил-3Н-хиназолин-4-он ("А25")

ВЭЖХ/МС 1.89 мин (А), [М+Н] 313;

1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.58 (s, 1Н), 8.38-8.01 (m, 2Н), 7.75-7.42 (m, 4Н), 5.15 (s, 1Н), 2.64 (d, J=0.7 Гц, 3Н), 1.47 (s, 6Н);

5,6,8-трифтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А26")

ВЭЖХ/МС 2.39 мин (Б), [М+Н] 335;

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.73 (s, 1Н), 8.32-7.97 (m, 3Н), 7.80-7.55 (m, 2Н), 5.16 (s, 1H), 1.47 (s, 6Н);

5,8-дифтор-2-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А27")

ВЭЖХ/МС 1.68 мин (А), [М+Н] 317;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.64 (s, 1Н), 8.50-7.96 (m, 2Н), 7.70 (ddd, J=10.0, 9.0, 4.3 Гц, 1Н), 7.67-7.62 (m, 2Н), 7.24 (ddd, J=10.4, 9.0, 3.7 Гц, 1Н), 5.16 (s, 1Н), 1.47 (s, 6Н).

Пример 9

Синтез 6-фтор-8-метил-2-[4-(4-метилпиперазин-1-ил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-она ("А28")

К раствору 2-амино-5-фтор-3-метилбензойной кислоты (4.80 г, 28.4 ммоль) в ТГФ (60 мл) добавляют гидрохлорид N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида (10.9 г, 56.8 ммоль), гидрат 1-гидроксибензотриазола (4.34 г, 28.4 ммоль) и аммиак в виде 5 М раствора в диоксане (283 мл, 142 ммоль). Получающуюся взвесь перемешивают в течение 3 часов. Реакционную смесь фильтруют через целит и промывают ТГФ. Фильтрат упаривают и распределяют между водой и этилацетатом. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток кристаллизуют из 2-пропанола с получением 2-амино-5-фтор-3-метилбензамида в виде бежевых кристаллов; ВЭЖХ/МС 1.68 мин (Б), [М+Н] 169.

Раствор 2-амино-5-фтор-3-метилбензамида (84.1 мг, 0.50 ммоль), 4-(4-метилпиперазин-1-ил)-бензальдегида (123 мг, 0.60 ммоль) и дисульфита натрия (97 мг, 0.51 ммоль) в N-метилпирролидоне (1 мл) нагревают до 150°С и перемешивают при этой температуре в течение 16 часов. Реакционной смеси дают возможность достичь комнатной температуры и выливают в воду со льдом. Получающийся осадок собирают путем фильтрования, промывают водой и сушат. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем с помощью смеси метанол/дихлорметан в качестве элюента с получением 6-фтор-8-метил-2-[4-(4-метилпиперазин-1-ил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-она в виде коричневого порошка; ВЭЖХ/МС 1.47 мин (А), [М+Н] 353; ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.34 (s, 1Н), 8.69-7.90 (m, 2Н), 7.86-7.26 (m, 2Н), 7.28-6.73 (m, 2Н), 3.33-3.27 (m, 4Н), 2.61 (s, 3Н), 2.45 (t, J=5.1 Гц, 4Н), 2.23 (s, 3Н).

Следующие соединения получают аналогично:

6-фтор-2-[4-(4-гидроксипиперидин-1-ил)-фенил]-8-метил-3Н-хиназолин-4-он ("А29")

ВЭЖХ/МС 2.54 мин (Б), [М+Н] 354;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.33 (s, 1H), 8.23-8.03 (m, 2Н), 7.72-7.42 (m, 2Н), 7.16-6.91 (m, 2Н), 4.69 (d, J=4.2 Гц, 1Н), 3.74 (m, 3Н), 3.05 (ddd, J=13.0, 9.8, 3.1 Гц, 2Н), 2.62 (s, 3Н), 1.89-1.74 (m, 2Н), 1.54-1.35 (m, 2Н);

2-[4-(1,1-диоксо-116-тиоморфолин-4-ил)-фенил]-6-фтор-8-метил-3Н-хиназолин-4-он ("А30")

ВЭЖХ/МС 1.88 мин (А), [М+Н] 388;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.41 (s, 1Н), 8.46-8.01 (m, 2Н), 7.82-7.47 (m, 2Н), 7.30-6.90 (m, 2Н), 3.95 (m, 4Н), 3.15 (m, 4Н), 2.63 (s, 3Н);

6-фтор-2-[4-(4-гидроксиметилпиперидин-1-ил)-фенил]-8-метил-3Н-хиназолин-4-он ("А31")

ВЭЖХ/МС 2.57 мин (Б), [М+Н] 368;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.30 (s, 1H), 8.36-7.93 (m, 2Н), 7.73-7.39 (m, 2Н), 7.22-6.76 (m, 2Н), 4.45 (t, J=5.3 Гц, 1H), 3.93 (dt, J=12.7, 3.4 Гц, 2Н), 3.34-3.25 (m, 2Н), 2.81 (td, J=12.6, 2.7 Гц, 2Н), 2.61 (s, 3Н), 1.75 (dd, J=13.4, 3.5 Гц, 2Н), 1.61 (dtd, J=13.1, 6.6, 2.6 Гц, 1H), 1.31-1.11 (m, 2Н);

6-фтор-8-метил-2-[4-(4-метил-[1,4]диазепан-1-ил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А32")

ВЭЖХ/МС 2.00 мин (Б), [М+Н] 367;

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆, ТФУ-d₁) δ [м.д.] 8.19 (d, J=8.8 Гц, 2Н), 7.65 (dd, J=8.6, 3.1 Гц, 1Н), 7.57-7.53 (m, 1H), 7.04-6.79 (m, 2Н), 3.98 (m, 1Н), 3.88-3.69 (m, 1Н), 3.69-3.54 (m, 2Н), 3.55-3.44 (m, 2Н), 3.35-3.17 (m, 2Н), 2.90 (s, 3Н), 2.65 (s, 3Н), 2.23 (m, 2Н).

Пример 10

Синтез гидрохлорида 6-фтор-8-метил-2-(4-пиперидин-4-илфенил)-3Н-хиназолин-4-она ("А33")

К раствору сложного трет-бутилового эфира 4-(4-карбоксифенил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (828 мг, 2.71 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляют йодметан (577 мг, 4.07 мкл) и карбонат калия (375 мг, 2.71 ммоль), и реакционную смесь перемешивают в течение 4 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривают, и остаток обрабатывают дихлорметаном. Твердые вещества отфильтровывают, и фильтрат упаривают досуха с получением сложного трет-бутилового эфира 4-(4-метоксикарбонилфенил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты в виде желтого твердого вещества; ВЭЖХ/МС 2.21 мин (A), [M-tBu] 264.

К раствору сложного трет-бутилового эфира 4-(4-метоксикарбонилфенил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (776 мг, 2.43 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляют диэтилсилан (470 мкл, 3.64 ммоль) и димер-хлорбис(циклооктен)иридий(I) (22 мг, 0.025 ммоль), и смесь облучают в микроволновом реакторе в течение 1.5 часа при 50°С. Реакционную смесь энергично перемешивают с 2 н. хлористоводородной кислотой (0.6 мл) в течение 30 минут. Органический слой отделяют, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем с помощью смеси циклогексан/этилацетат в качестве элюента с получением сложного трет-бутилового эфира 4-(4-формилфенил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты в виде желтой смолы; ВЭЖХ/МС 2.10 мин (A), [M-tBu] 234.

Раствор 2-амино-5-фтор-3-метилбензамида (84.1 мг, 0.50 ммоль), сложного трет-бутилового эфира 4-(4-формилфенил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (145 мг, 0.50 ммоль) и дисульфита натрия (97 мг, 0.51 ммоль) в N-метилпирролидоне (1 мл) нагревают до 160°С и перемешивают при этой температуре в течение 2 часов. Реакционной смеси дают возможность достичь комнатной температуры и выливают в воду со льдом. Получающийся осадок собирают путем фильтрования и промывают водой. Твердое вещество растирают с метанолом и вновь фильтруют с отсасыванием. Остаток суспендируют в 4 н. HCl в диоксане (1 мл) и добавляют метанол (0.25 мл). Смесь перемешивают в течение 16 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь подвергают препаративной ВЭЖХ с получением гидрохлорида 6-фтор-8-метил-2-(4-пиперидин-4-илфенил)-3Н-хиназолин-4-она в виде светло-бежевого порошка; ВЭЖХ/МС 1.53 мин (А), [М+Н] 338; ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆, ТФУ-d₁) δ [м.д.] 8.34-8.20 (m, 2Н), 7.70 (dd, J=8.5, 3.1 Гц, 1H), 7.52 (ddd, J=9.3, 3.1, 1.0 Гц, 1Н), 7.49-7.36 (m, 2Н), 3.47 (dt, J=12.7, 2.5 Гц, 2Н), 3.09 (td, J=12.8, 3.5 Гц, 2Н), 3.00 (tt, J=11.8, 3.9 Гц, 1Н), 2.68 (s, 3Н), 2.11-1.85 (m, 4Н).

Следующее соединение получают аналогично

гидрохлорид 6,8-дифтор-2-(4-пиперидин-4-илфенил)-3Н-хиназолин-4-она ("А34")

ВЭЖХ/МС 1.44 мин (А), [М+Н] 342; ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆, ТФУ-d₁) δ [м.д.] 8.35-8.17 (m, 2Н), 7.72 (ddd, J=8.3, 2.9, 1.4 Гц, 1Н), 7.61 (ddd, J=10.2, 8.9, 2.9 Гц, 1Н), 7.52-7.31 (m, 2Н), 3.61-3.38 (m, 2Н), 3.08 (td, J=12.8, 3.2 Гц, 2Н), 3.00 (tt, J=11.8, 3.9 Гц, 1Н), 2.14-2.01 (m, 2Н), 2.01-1.86 (m, 2Н).

Пример 11

Синтез трифторацетата 6,8-дифтор-2-[4-(1-метилпиперидин-4-ил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-она ("А35")

К раствору гидрохлорида 6,8-дифтор-2-(4-пиперидин-4-илфенил)-3Н-хиназолин-4-она (238 мг, 0.63 ммоль) в муравьиной кислоте (2.0 мл) добавляют формальдегид (37%-ный водный раствор, 160 мкл, 1.27 ммоль). Смесь нагревают до 80°С и перемешивают при этой температуре в течение 18 часов. Реакционную смесь упаривают, и остаток обрабатывают 2 н. NaOH. Твердые вещества отфильтровывают и очищают с помощью препаративной ВЭЖХ с получением трифторацетата 6,8-дифтор-2-[4-(1-метилпиперидин-4-ил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-она в виде белого порошка; ВЭЖХ/МС 1.43 мин (А), [М+Н] 356. ¹Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 12.80 (s, 1Н), 9.58 (s, 1Н), 8.23-8.14 (m, 2Н), 7.85 (ddd, J=10.3, 9.0, 2.9 Гц, 1Н), 7.71 (ddd, J=8.3, 2.9, 1.2 Гц, 1Н), 7.46 (d, J=8.0 Гц, 2Н), 3.60-3.46 (m, 2Н), 3.10 (t, J=12.6 Гц, 2Н), 2.92 (td, J=10.3, 8.5, 5.9 Гц, 1Н), 2.12-2.02 (m, 2Н), 2.00-1.80 (m, 2Н).

6-Фтор-8-метил-2-[4-(1-метилпиперидин-4-ил)-фенил]-3Н-хиназолин-4-он ("А36") получают подобным образом; белый порошок; ВЭЖХ/МС 1.54 мин (А), [М+Н] 352.

Фармакологические данные

Соединения, представленные в таблице 2, являются особенно предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением.

Соединения, представленные в таблице 3, являются особенно предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением.

Следующее примеры относятся к лекарственным средствам:

Пример А: Флаконы для инъекций

pH раствора 100 г активного компонента формулы I и 5 г Na₂HPO₄ в 3 л бидистиллированной воды устанавливают на 6.5, используя 2 н. соляную кислоту, стерилизуют фильтрацией, переносят во флаконы для инъекций, лиофилизируют в стерильных условиях и запечатывают в стерильных условиях. Каждый флакон для инъекций содержит 5 мг активного компонента.

Пример Б: Суппозитории

Смесь 20 г активного компонента формулы I расплавляют с 100 г соевого лецитина и 1400 г какаового масла, разливают в пресс-формы и позволяют охладиться. Каждый суппозиторий содержит 20 мг активного компонента.

Пример В: Раствор

Раствор приготавливают из 1 г активного компонента формулы I, 9.38 г NaH₂PO₄⋅2H₂O, 28.48 г Na₂HPO₄⋅12H₂O и 0.1 г бензалконийхлорида в 940 мл бидистиллированной воды. рН раствора устанавливают на 6.8 и объем раствора доводят до 1 л и стерилизуют путем облучения. Этот раствор может использоваться в форме глазных капель.

Пример Г: Мазь

500 мг активного компонента формулы I смешивают с 99.5 г вазелина в асептических условиях.

Пример Д: Таблетки

Смесь 1 кг активного компонента формулы I, 4 кг лактозы, 1.2 кг картофельного крахмала, 0.2 кг талька и 0.1 кг стеарата магния спрессовывают для получения таблеток обычным способом таким образом, чтобы каждая таблетка содержала 10 мг активного компонента.

Пример Е: Драже

Таблетки спрессовывают аналогично примеру Д и затем покрывают обычным способом покрытием из сахарозы, картофельного крахмала, талька, трагаканта и красителя.

Пример Ж: Капсулы

2 кг активного компонента формулы I помещают в твердые желатиновые капсулы обычным способом таким образом, чтобы каждая капсула содержала 20 мг активного компонента.

Пример З: Ампулы

Раствор 1 кг активного компонента формулы I в 60 л бидистиллированной воды стерилизуют фильтрацией, переносят в ампулы, лиофилизируют в стерильных условиях и запечатывают в стерильных условиях. Каждая ампула содержит 10 мг активного компонента.

Изобретение относится к новым производным хиназолинона, выбранным из группы соединений, указанной ниже, или их фармацевтически приемлемых солей. Соединения обладают свойствами ингибитора танкираз (TANK) и могут быть использованы для лечения и/или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечно-сосудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления, опосредованных активностью танкираз (TANK). Такими заболеваниями могут быть заболевания, выбранные из группы, состоящей из рака головы, шеи, глаз, рта, горла, пищевода, бронхов, гортани, глотки, груди, костей, легких, ободочной кишки, прямой кишки, желудка, предстательной железы, мочевого пузыря, матки, шейки матки, молочной железы, яичников, яичек или других репродуктивных органов, кожи, щитовидной железы, крови, лимфатических узлов, почек, печени, поджелудочной железы, головного мозга, центральной нервной системы, солидных опухолей и злокачественного перерождения крови. Соединения настоящего изобретения выбираются из:

2 н. и 2 з.п. ф-лы, 3 табл., 19 пр.

1. Соединения, выбранные из группы:

и их фармацевтически приемлемые соли.

2. Лекарственное средство, обладающее свойствами ингибитора танкираз (TANK), содержащее терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения по п. 1 и/или его фармацевтически приемлемых солей и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель.

3. Соединения по п. 1 и их фармацевтически приемлемые соли для применения для лечения и/или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечно-сосудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления, опосредованных активностью танкираз (TANK).

4. Соединения по п. 3 для применения для лечения и/или предотвращения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из рака головы, шеи, глаз, рта, горла, пищевода, бронхов, гортани, глотки, груди, костей, легких, ободочной кишки, прямой кишки, желудка, предстательной железы, мочевого пузыря, матки, шейки матки, молочной железы, яичников, яичек или других репродуктивных органов, кожи, щитовидной железы, крови, лимфатических узлов, почек, печени, поджелудочной железы, головного мозга, центральной нервной системы, солидных опухолей и злокачественного перерождения крови.