Способ получения комплексного микробиологического препарата санитарно-гигиенического назначения Российский патент 2018 года по МПК C12N1/20 C05F11/08 A01N63/02 C12R1/125 C12R1/10 C12R1/11 C12R1/25 

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности к способам приготовления биологически активных добавок для улучшения микроклимата в животноводческих помещениях, устранения резких и неприятных запахов, повышения качества полученного из стоков и других отходов удобрения, повышения эффективности животноводства и птицеводства, повышения урожайности сельскохозяйственных культур.

Развитие и интенсификация сельскохозяйственного производства приводят к поступлению в окружающую среду различных загрязнителей и накоплению вредных для биосферы и опасных для человека отходов.

Одним из безопасных и наиболее эффективных способов очистки окружающей среды являются методы микробиологического воздействия, основанные на способности микроорганизмов концентрировать и/или трансформировать загрязняющие вещества в безопасные (полезные) продукты.

Микробиологические методы переработки отходов отличаются избирательностью, безопасностью, высокой технологичностью и относительно небольшой стоимостью процессов.

Значительное число патентов направлено на разработку способов переработки сельскохозяйственных отходов с целью получения на их основе органических, биоорганических, биорганоминеральных удобрений. В состав получаемых препаратов кроме микроорганизмов входят ферментные комплексы, микро- и макроэлементы, другие биологически активные компоненты и стимуляторы роста растений. Препараты для микробиологической переработки отходов содержат, как правило, ассоциацию микроорганизмов целенаправленного вектора действия для ускоренной трансформации органических веществ в продукты, усваиваемые растениями.

Основными стадиями производства данных препаратов являются: выращивание микробиологических культур, создание заданной ассоциации, получение готовых товарных форм.

Из патента RU 2186753 C1, 10.08.2002 известен способ биоконверсии органических отходов для получения модифицированного удобрения и питательного субстрата, описывающий биоконверсию органических отходов биопрепаратом на основе отселектированных микроорганизмов в виде консорциума бактерий рода Lactobacillus с последующим внесением в смесь, состоящую из органических отходов и компонентов, имеющих питательную и удобрительную функцию, повторно указанного препарата и жидкой культуры бактерий Bacillus mucilaginosus. При этом не отмечено, что убираются запахи в животноводческих комплексах и окружающей территории.

Известен биопрепарат «Тамир», являющийся производным базового препарата «Байкал-ЭМ-1» (изготовитель ПО «ЭМ-Кооперация», г. Москва), который предназначен для утилизации органических отходов, устранения неприятных запахов, а также для осенней и весенней обработки почв с целью ферментирования оставленных в поле остатков собранного урожая. Широкая полифункциональность «Тамира» снижает эффективность биопрепарата в каждом отдельно взятом перечисленном выше направлении, так как максимальная эффективность достигается целенаправленным подбором эффективных микроорганизмов с известными полезными свойствами.

Наиболее близким аналогом является патент RU 2347808 C1, 27.02.2009, который предлагает способ разработки биопрепарата из эффективных микроорганизмов для деградации органических отходов. Биопрепарат представляет многовидовую, полифункциональную композицию, в состав которой входит смесь суспензий живых эффективных микроорганизмов, относящихся к различным родам, которые обладают усиленной и ускоренной способностью к биодеградации отходов растительного и животного происхождения, деструкции мочевой кислоты и утилизации аммиака, способностью к подавлению патогенных микроорганизмов за счет синтеза антибиотических и других биологически активных веществ. Биопрепарат из эффективных микроорганизмов для деградации органических отходов состоит из суспензий штаммов рода Bacillus, и он дополнительно содержит штаммы родов Pseudomonas, Enterobacter, Cellulomonas, Erwinia, Arthrobacter, Streptococcus, Propionibacterium при заданном соотношении компонентов, масс. К недостаткам способа можно отнести наличие очень большого количества видов микроорганизмов, что делает процесс производства достаточно сложным и затрудняет оперативный контроль за качеством и стабильностью продукта, особенно в период его хранения.

Технической задачей изобретения является разработка способа получения комплексного микробиологического препарата санитарно-гигиенического назначения для улучшения микроклимата животноводческих комплексов, переработки сельскохозяйственных отходов и стоков.

Технический результат от реализации изобретения заключается в повышении биологизации сельскохозяйственного производства, обеспечении значительного снижения антропогенной нагрузки, повышении удобрительной ценности удобрений, полученных на их основе, повышении качества окружающей среды.

Технический результат достигается тем, что в состав предлагаемого консорциума входят эффективные микроорганизмы из штаммов, относящихся к нескольким родам и видам, депонированные в ВКПМ. Входящие в состав живые клетки и споры непатогенных штаммов природных бактерий способны утилизировать органические отходы, устранять неприятные запахи, а также за 2-3 недели перерабатывать в высококачественный компост бытовые и сельскохозяйственные отходы.

Препарат может быть использован для обработки помещений и мест содержания животных и птицы, резервуаров накопления нечистот и т.п. с целью биодеградации органических отходов, уменьшения концентрации вредных газов, в частности аммиака, неприятных запахов, подавления размножения патогенной микрофлоры (бактерий, грибов), что способствует улучшению условий содержания животных и птицы, условий работы обслуживающего персонала, оздоровлению экологического состояния биосферы. Заявленный способ приготовления комплексного микробиологического препарата отличается от ближайшего аналога составом включенных в препарат штаммов и их соотношением, технологическими режимами производства сухих товарных форм (получение культур микроорганизмов в виде «биопленки», накопление биологически активных веществ на стадии производства препарата за счет проведения стадии твердофазной ферментации), полученными высокими эффектами от воздействия на обрабатываемые отходы, расширенным спектром применения, включающим санитарно-гигиеническое назначение.

Эти отличия позволяют сделать вывод о соответствии заявляемых технических решений критерию "новизна".

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от ближайшего аналога, направлены на достижение поставленной задачи и не выявлены при изучении патентной и научно-технической литературы в данной и смежной областях науки и техники и следовательно, соответствуют критерию "изобретательский уровень".

В заявленный состав препарата, которому присвоено название «Санвит К», входят 5 штаммов:

Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, штамм продуцент эндоглюканазы, нитрогеназы, обеспечивает трансформацию целлюлозосодержащих субстратов.

Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, продуцент высокоактивного комплекса протеолитических ферментов, амилазы и эндоглюканазы.

Bacilluslich eniformis ВКПМ B-4162 фагорезистентный штамм, продуцент протеолитических ферментов.

Bacillus megaterium ВКПМ В-204, обладает способностью превращать сложные фосфорорганические соединения (нуклеиновые кислоты, нуклеопротеиды и т.д.) и трудноусвояемые минеральные фосфаты в доступную для растений форму. Кроме этого, бактерии вырабатывают биологически активные вещества (тиамин, пиридоксин, биотин, пантотеновую и никотиновую кислоты и др.), стимулирующие рост растения.

Lactobacillus plantarum ВКПМ В-5337, продуцент молочной, уксусной, пропионовой кислот, проявляет антагонистическую активность к Pseudomonas, Escherichiacoli, Penicillium, Aspergillus.

Способ получения комплексного микробиологического препарата «Санвит К» реализуется следующим образом.

Проводят раздельное глубинное культивирование штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacilluslicheniformis ВКПМ В-4162 на питательной среде, содержащей, г/л:

меласса 24-26 кукурузный экстракт 25-30 автолизат дрожжей 3-4 калий фосфорнокислый двузамещенный 1-3 натрий хлористый 9-11 магний сернокислый 0,4-0,6 вода остальное,

Bacillus megaterium ВКПМ В-204 на питательной среде, содержащей, г/л:

меласса 18-20 кукурузный экстракт 14-16 автолизат дрожжей 1,5-2,0 аммоний сернокислый двузамещенный 1-3 вода остальное,

Lactobacillus plantarumBKnM В-5337 на питательной среде, содержащей, г/л:

меласса 30-35 30-35 кукурузный экстракт автолизат дрожжей 2-4 калий фосфорнокислый двузамещенный 1-3 магний сернокислый 2-3 натрий уксуснокислый 5-7 марганец сернокислый 0,04-0,06 вода остальное.

Полученную культуральную жидкость чистых культур Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162, Bacillus megaterium ВКПМ В-204 смешивают в соотношении 6:1:1:2:10 до объема 50 л, наносят на 250 кг стерильного свекловичного жома, который предварительно обрабатывают целлюлолитическим ферментным препаратом, растворенным в питательной среде, содержащей на 30 л воды: мелассу - 255-365 г, калий фосфорнокислый двузамещенный - 98-110 г, магний сернокислый - 25-26 г, дрожжи - 1,8-2,2 г, доводят рН до 6,5-7,0 и выдерживают в течение 4 ч при температуре 45-50°С. Смесь тщательно перемешивают и направляют в ферментационную камеру для проведения твердофазной ферментации в условиях ограниченного доступа кислорода при температуре 32-42°С в течение 48-72 ч. После завершения процесса твердофазной ферментации смесь тщательно перемешивают и выушивают при температуре 43-45°С до конечной влажности продукта 8-10%. Полученный продукт - препарат «Санвит К» отправляют на дробление, стандартизацию и фасовку.

Данный технологический процесс производства препарата «Санвит К» обеспечивает иммобилизацию клеток микроорганизмов на фитосорбенте, образование биопленок, их защищенность. Кроме эффективного оригинального состава штаммов, входящих в препарат «Санвит К», данное технологическое решение позволяет микроорганизмам препарата сохранять высокую жизнеспособность в неблагоприятных условиях начала процесса переработки стоков при высоких концентрациях загрязняющих веществ, подавлять патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, стимулировать в 5-7 раз развитие полезных микроорганизмов.

Проведение процесса ферментации стоков начинается с ввода в ванну сбора стоков, или лагун, или других сборников отходов сухого концентрата «Санвит К», в дозе 50,0-100,0 г/м³ полного объема заполнения сборника в расчете на постепенное заполнение ванны отходами (стоками). При этом препарат «Санвит К» дается сразу на весь объем, чтобы, начиная с максимальной его концентрации, в процессе постепенной ассимиляции органики, получить его минимальную концентрацию перед сливом. За этот период микроорганизмы препарата «Санвит К» получают свое развитие в водной среде и быстро биотранформируют медленно поступающие стоки. «Санвит К» содержит непатогенные штаммы эффективных микроорганизмов, полученных в виде «биопленок» на фитоносителе, что позволяет им выполнять ускоренную биотрансформацию органического вещества, подавлять патогенные микроорганизмы за счет имеющихся в составе консорциума бактерий-антагонистов и дополнительного синтеза ими антибиотических и других биологически активных веществ, утилизировать аммиак и сероводород, значительно улучшая санитарно-гигиенические показатели содержания животных, снижать накопление в стоках лактатов аммония и других хелатных форм металлов, улучшая удобрительную ценность полученных биоудобрений, стимулирующих развитие растений.

Изобретение поясняется примером.

Проводят раздельное глубинное культивирование штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162 на питательной среде, содержащей, г/л:

меласса 25 кукурузный экстракт 28 автолизат дрожжей 3 калий фосфорнокислый двузамещенный 2 натрий хлористый 10 магний сернокислый 0,5 вода остальное.

Bacillus megaterium ВКПМ В-204 на питательной среде, содержащей, г/л:

меласса 19 кукурузный экстракт 15 автолизат дрожжей 1,8 аммоний сернокислый двузамещенный 2 вода остальное

Lactobacillus plantarum ВКПМ В-5337 на питательной среде, содержащей, г/л:

меласса 33 кукурузный экстракт 32 автолизат дрожжей 3 калий фосфорнокислый двузамещенный 2 магний сернокислый 2,5 натрий уксуснокислый 6 марганец сернокислый 0,05 вода остальное.

Полученную культуральную жидкость чистых культур Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162, Bacillus megaterium ВКПМ В-204 и Lactobacillus plantarum В-5337 смешивают в соотношении 6:1:1:2:10 до объема 50 л, наносят на 250 кг стерильного свекловичного жома, который предварительно обрабатывают целлюлолитическим ферментным препаратом ЦеллоЛюкс-F, содержащим целлюлазу не менее 2000 ед./г, из расчета 1 г/кг субстрата, ксиланазу до 10000 ед./г, β-глюканазу до 10000 ед./г, растворенным в питательной среде, содержащей на 30 л воды: мелассу - 300 г, калий фосфорнокислый двузамещенный - 100 г, магний сернокислый - 25 г, дрожжи - 2,0 г, доводят рН до 6,7 и выдерживают в течение 4 ч при температуре 48°С. Смесь тщательно перемешивают и направляют в ферментационную камеру для проведения твердофазной ферментации в условиях ограниченного доступа кислорода при температуре 39°С в течение 58 ч. После завершения процесса твердофазной ферментации смесь тщательно перемешивают и сушат при температуре 44°С до конечной влажности продукта 9 мас. %. Полученный продукт отравляют на дробление, стандартизацию и фасовку.

Проведенные исследования по эффективности препарата «Санвит К» на производственном участке свиноводческого комплекса Орловка колхоза им. Горина Белгородской области подтвердили высокую эффективность работы препарата. В ходе эксперимента на племферме Орловка установлено, что внесение в ванны со свиноводческими стоками препарата «Санвит К» в экспериментальной секции обеспечило снижение содержания аммиака в воздухе производственных помещений на 4 мг/м³, или на 26%. Следовательно, улучшились условия для содержания животных и работы обслуживающего персонала. Среднесуточный привес в опытной группе повысился на 56 г по сравнению с контролем. Сохранность поголовья в опытной группе составила 97,4% в контроле - 96,4%. Отмечена однородность суспензии стоков без образования верхней «корки» и придонного осадка.

Проведенные испытания препарата «Санвит К» на базе свиноводческого комплекса АО «Троицкое» Белгородской области показали, что после добавления в ванны со свиноводческими стоками препарата «Санвит К» на экспериментальном участке массовая доля общего азота в стоке увеличилась на 164%, массовая доля аммонийного азота - на 86,48%. Дополнительно были оценены результаты по увеличению среднесуточного привеса. В опытной группе среднесуточный привес составил 408 г, в контроле - 318,6 г, что на 28,06% ниже, чем в у опытных животных.

Были оценены результаты использования препарата «Санвит К» в секторе со свиноматками второй половины супоросности. Количество опоросов в опыте 288, в контроле в среднем 250; многоплодие в опыте - 12,1 в контроле 11,4. Выход деловых в опыте 8,4, в контроле в среднем 8,1, что на 0,3 ниже опыта.

Испытания препарата «Санвит К» в ООО АПК «Пром-Агро» Белгородской области показало, что применение препарата «Санвит К» в ООО «Оскольский бекон» позволило получить содержание массовой доли общего азота в стоках опытного производства 16,98% (на а.с.в.) при содержании его в контроле 7,0% (на а.с.в.). При этом содержание доли аммонийного азота соответственно 12,73% (на а.с.в.) и 5,83% (на а.с.в.). Эти данные свидетельствуют об увеличении содержания доступной для растений формы азота, т.е. о повышении удобрительной ценности биоудобрений на основе биотрансформированных стоков.

Полученные в производстве показатели применения препарата «Санвит К» подтверждают его высокую эффективность по улучшению санитарно-гигиенической обстановки на животноводческих комплексах, улучшению удобрительной ценности биоудобрений, полученных на основе животноводческих стоков.

Применение препарата «Санвит К» обеспечивает повышение биологизации сельскохозяйственного производства, значительное снижение антропогенной нагрузки и направлено на решение одной из важнейших задач - повышение качества окружающей среды.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает раздельное глубинное культивирование штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162, Bacillus megaterium ВКПМ В-204 и Lactobacillus plantarum ВКПМ В-5337 на питательных средах заданного состава. Полученную культуральную жидкость чистых культур Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162, Bacillus megaterium ВКПМ В-204 и Lactobacillus plantarum ВКПМ В-5337 смешивают в соотношении 6:1:1:2:10 и наносят на стерильный свекловичный жом, предварительно обработанный целлюлолитическим ферментом, растворенным в питательной среде заданного состава. Проводят твердофазную ферментацию при температуре 32-42°С в течение 48-72 ч. Полученную смесь тщательно перемешивают и сушат при температуре 43-45°С до конечной влажности продукта 8-10 мас. % с получением продукта. Полученный продукт подвергают дроблению, стандартизации и фасовке. Изобретение позволяет повысить биологизации сельскохозяйственного производства, снизить антропогенную нагрузку и повысить удобрительную ценность удобрений. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.

1. Способ получения комплексного микробиологического препарата санитарно-гигиенического назначения, заключающийся в том, что осуществляют раздельное глубинное культивирование штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162 на питательной среде, содержащей, г/л:

меласса 24-26 кукурузный экстракт 25-30 автолизат дрожжей 3-4 калий фосфорнокислый двузамещенный 1-3 натрий хлористый 9-11 магний сернокислый 0,4-0,6 вода остальное,

Bacillus megaterium ВКПМ В-204 на питательной среде, содержащей, г/л:

меласса 18-20 кукурузный экстракт 14-16 автолизат дрожжей 1,5-2,0 аммоний сернокислый двузамещенный 1-3 вода остальное,

Lactobacillus plantarum ВКПМ В-5337 на питательной среде, содержащей, г/л:

меласса 30-35 кукурузный экстракт 30-35 автолизат дрожжей 2-4 калий фосфорнокислый двузамещенный 1-3 магний сернокислый 2-3 натрий уксуснокислый 5-7 марганец сернокислый 0,04-0,06 вода остальное,

полученную культуральную жидкость чистых культур Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162, Bacillus megaterium ВКПМ В-204 и Lactobacillus plantarum ВКПМ В-5337 смешивают в соотношении 6:1:1:2:10 до объема 50 л, наносят на 250 кг стерильного свекловичного жома, предварительно обработанного целлюлолитическим ферментом, растворенным в питательной среде, содержащей на 30 л воды: мелассу - 255-365 г, калий фосфорнокислый двузамещенный - 98-110 г, магний сернокислый - 25-26 г, дрожжи - 1,8-2,2 г, доводят рН до 6,5-7,0 и выдерживают в течение 4-5 ч при температуре 45-50°С, смесь тщательно перемешивают и проводят твердофазную ферментацию при температуре 32-42°С в течение 48-72 ч, полученную смесь тщательно перемешивают и сушат при температуре 43-45°С до конечной влажности продукта 8-10 мас. %, затем полученный продукт подвергают дроблению, стандартизации и фасовке.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что свекловичный жом предварительно обрабатывают ферментным препаратом ЦеллоЛюкс-F, содержащим целлюлазу - не менее 2000 ед./г, ксиланазу до 10000 ед./г, β-глюканазу до 10000 ед./г, из расчета 1 г/кг субстрата.