Способ лечения экспериментальной амилоидной кардиопатии у крыс Российский патент 2018 года по МПК G09B23/28 A61K31/315 A61P9/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, и может быть использовано для лечения экспериментальной амилоидной кардиопатии у животных с целью получения возможности изучения патогенеза и разработки лечения амилоидной кардиопатии.

Кардиопатия, cardiopathia (от греч. cardia-сердце и pathos-страдание, поражение), термин, применяемый по отношению к таким изменениям сердца, которые представляют собой длительное или стойкое патологическое состояние, являющееся следствием предшествовавших дегенеративных или воспалительных процессов.

Амилоидоз - стромально-сосудистый диспротеиноз, относящийся к группе общепатологических процессов с системной и органной полипатией, характеризующийся отложением в межуточном веществе особого труднорастворимого фибриллярного белка - амилоида.

В связи с актуальностью проблемы изучения амилоидной кардиопатии возникла необходимость разработки способов ее профилактики и лечения на основе существующей экспериментальной модели.

Известен способ воспроизведения, профилактики и лечения экспериментальной амилоидной кардиопатии (патент РФ на изобретение №2557906, авторы Яценко А.А., Лапин Д.С., Кушнарев В.А., Васильева А.В.), заключающийся в применении фармакологической композиции для лечения вторичного амилоидоза, предназначенной для приема внутрь, которая включает в себя алкалоид куркумин, бетулин и пиперин, взятые в определенном количестве.

Недостатком данного способа является использование цитостатических препаратов, которые сами по себе являются токсичными веществами.

Известен также способ профилактики системного амилоидоза и его нефропатической формы у экспериментальных животных (патент РФ на изобретение №2386415, авторы Пухова И.У., Брин В.Б., Козырев К.М., Бабаниязов Х.Х., Пронина Н.В.), заключающийся в введении белкового препарата подкожно и амилоидопротекторного препарата. При этом в качестве белкового препарата сирийским хомякам вводят нативную свиную плазму из расчета 0,025 мл/г массы тела. В качестве амилоидопротектора используют ацизол. Ацизол вводят одновременно ежедневно через зонд в дозе 30 мг/кг в течение 60 дней. Способ позволяет изучить патогенез, профилактику и лечение амилоидоза при исследовании функционального состояния системы почек, кровообращения, минерального обмена и других показателей.

Недостатком данного способа является необходимость ежедневного введения белкового препарата подкожно, это сопряжено с риском травматизации животных и развития у них асептического воспаления, что приводит к высокой летальности животных и нарушению чистоты опыта. Еще одним недостатком данного метода является то, что предложенные дозировки ацизола применяются лишь для профилактики нефропатического амилоидоза, без лечения альтеративных каскадов реакций, развивающихся при кардиопатическом системном амилоидозе.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому изобретению является способ моделирования экспериментальной амилоидной кардиопатии у крыс (патент РФ на изобретение №2556571, авторы Соколовский Н.В., Брин В.Б., Козырев К.М., Кабисов О.Т.), заключающийся в однократном введении старым крысам-самцам смеси, состоящей из гомогенезированной ткани миокарда крыс - 25%, яичного альбумина - 25% и адъюванта Фрейнда - 50%. Введение осуществляют по 0,3 мл в 5 точек инъекции: внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа. Способ, являясь легко воспроизводимым и экономически выгодным, эффективен в отношении создания модели с целью получения возможности изучения патогенеза, профилактики и лечения кардиопатии.

Недостатком данного способа является менее выраженный терапевтический эффект от применения янтарной кислоты относительно ацизола.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи, заключающейся в разработке способа лечения экспериментальной амилоидной кардиопатии у животных.

Поставленная цель достигается тем, что крысам самцам линии «Вистар» спустя 60 дней после однократного введения амилоидогенной смеси, на фоне экспериментальной модели, ежедневно однократно интрагастрально вводят 3% раствор ацизола из расчета по 0,03 мл/г массы тела. Раствор ацизола вводят в течение 60 дней с полученной состоящей из гомогената миокарда крыс, нативного яичного альбумина и полного адъюванта Фрейнда из расчета по 0,2 мл в 5 точек инъекций.

Решение этой задачи обеспечивает расширение возможностей лечения экспериментальной амилоидной кардиопатии у животных.

Предлагаемый способ отличается тем, что для лечения амилоидной кардиопатии впервые использован 3% раствор ацизола из расчета по 0,03 мл/г массы тела на фоне экспериментальной модели системного кардиопатического амилоидоза с целью изучения патогенеза и возможности лечения амилоидной кардиопатии.

Заявленный способ является эффективным, экономически выгодным и легко воспроизводимым.

По имеющимся у автора сведениям совокупность существенных признаков, характеризующих сущность заявляемого изобретения, не известна, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «новизна».

Экспериментальным животным (старые крысы-самцы в возрасте 18-24 мес, массой тела 350-400 г) однократно вводят смесь, состоящую на 20% из гомогената миокарда крыс, 40% нативного яичного альбумина и 40% полного адъюванта Фрейнда из расчета по 0,2 мл в 5 точек инъекций, после чего спустя 60 дней (время развития модели экспериментального кардиопатического амилоидоза) с лечебной целью животным ежедневно в течение двух месяцев вводится интрагастрально 3% ацизол из расчета по 0,03 мл/г массы тела, что обеспечивает расширение возможностей лечения экспериментальной амилоидной кардиопатии у животных и позволяет сделать вывод о соответствии критерию «изобретательский уровень».

Совокупность существенных признаков, характеризующих сущность изобретения, в принципе может быть многократно использована в медицине с получением результата, заключающегося в эффективном и легко воспроизводимом способе лечения экспериментальной кардиопатии у животных, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «промышленная применимость».

Данный способ осуществляется следующим образом.

Для получения экспериментальной амилоидной кардиопатии в качестве экспериментальных животных выбраны крысы-самцы линии «Вистар» массой 350-400 г в возрасте 18-24 мес, так как именно старческая брадитрофия тканей позволяет ставить вопрос о моделировании кардиопатии. Для моделирования кардиопатии экспериментальным животным однократно проводятся инъекции смеси, состоящей на 20% из гомогената миокарда крыс, 40% нативного яичного альбумина и 40% полного адъюванта Фрейнда из расчета по 0,2 мл в 5 точек инъекций (внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа). У контрольных и опытных животных под тиопенталовым наркозом исследуются гемодинамические показатели инвазивным способом.

Часть животных исследуется под наркозом в сроки: 60 дней эксперимента, после чего забиваются. Образцы тканей фиксируются в 10% нейтральном формалине, с последующим приготовлением парафиновых срезов толщиной 5-6 микрон. Срезы окрашиваются гематоксилином и эозином, конго-красным. Изучение срезов проводится в проходящем свете при помощи микроскопа Микмед-1 под увеличением × 80, × 200, × 600.

В дальнейшем, животным с подтвержденной моделью экспериментальной амилоидной кардиопатии с лечебной целью вводят 3% раствор ацизола из расчета по 0,03 мл/г массы тела интрагастрально через зонд ежедневно один раз в сутки на протяжении 60 дней.

Сущность заявляемого способа подтверждается функционально и морфологически.

Гемодинамические показатели у контрольной группы с введением ацизола достоверно не изменялись относительно интактных животных.

В группе с моделью амилоидоза отмечались достоверные изменения показателей в виде снижения сердечного и ударного индексов, а также повышения среднего артериального давления, удельного периферического сосудистого сопротивления и частоты сердечных сокращений относительно интактных животных.

У животных, которым проводилась монотерапия ацизолом на фоне экспериментального амилоидоза, был выявлен положительный терапевтический эффект, который выражался в статистически достоверном снижении среднего артериального давления за счет достоверного уменьшения показателей удельного периферического сосудистого сопротивления и частоты сердечных сокращений. Также отмечена тенденция к нормализации показателей ударного индекса (Фиг. 1).

Пример №1

Проведены серии опытов из 4 групп:

1-я группа - (20 крыс-самцов линии «Вистар») – интактные.

2-я группа (20 крыс-самцов линии «Вистар») - контрольные - старым крысам-самцам (возраст 18-24 мес, масса тела 350-380 г) ежедневно интрагастрально вводился 3% раствор ацизола из расчета по 0,03 мл/г массы тела с первого дня эксперимента.

3-я группа (20 крыс-самцов линии «Вистар») - модель - старым крысам-самцам (возраст 18-24 мес, масса тела 350-380 г) однократно вводилась смесь, состоящая на 20% из гомогената миокарда крыс, 40% нативного яичного альбумина и 40%) полного адъюванта Фрейнда из расчета по 0,2 мл в 5 точек инъекций (внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа).

4-я группа (20 крыс-самцов линии «Вистар») - лечение - старым крысам-самцам (возраст 18-24 мес, масса тела 350-380 г) с 60 дня эксперимента на фоне модели экспериментальной амилоидной кардиопатии ежедневно вводился ежедневно 3% раствор ацизола из расчета по 0,03 мл/г массы тела интрагастрально через зонд.

Морфологическому исследованию на предмет выявления кардиопатии подвергнут миокард, кровеносные сосуды.

В результате проведенных исследований получены морфологические доказательства эффективности применения ацизола для лечения экспериментальной кардиопатии у старых крыс-самцов.

Гистологически у животных с моделью экспериментальной амилоидной кардиопатии в миокарде (Фиг. 2) при окраске срезов гематоксилином и эозином, а также конго-красным отмечалась очаговая конгофилия кардиомиоцитов, частичное исчезновение поперечной исчерченности, набухание отдельных групп кардиомиоцитов. Мукоидное фибриноидное набухание с очаговым разрыхлением и гомогенизацией волокнистых элементов интерстиция. Отмечены дистрофические и некробиотические изменения микроциркуляторного русла в виде застойной гиперемии, гиперперфузии, плазматического пропитывания стенок микрососудов, периваскулярного отека, склероза отдельных участков. Во всех отделах микроциркуляции, начиная с артериол, отмечается выраженная конгофилия стенок и периваскулярных пространств микрососудистой системы.

В группе крыс с терапевтическим применением ацизола гистологически отмечалось уменьшение конгофилии периваскулярных пространств, частичное восстановление поперечной исчерченности кардиомиоцитов, а так же снижение степени плазматического пропитывания стенок микрососудов (Фиг. 3).

Исходя из полученных результатов исследования обосновывается использование 3% раствора ацизола для лечения амилоидной кардиопатии у старых крыс.

Краткое описание чертежей

На фигуре 1 представлены показатели геодинамики в различных группах эксперимента.

На фигуре 2 изображено частичное исчезновение поперечной исчерченности и набухания отдельных групп кардиомиоцитов (а). Мукоидное фибриноидное набухание с очаговым разрыхлением и гомогенизацией волокнистых элементов интерстиция (б). Во всех отделах микроциркуляции, начиная с артериол, отмечается выраженная конгофилия стенок и периваскулярных пространств микрососудистой системы (в). Окраска конго красным. Увеличение ×150.

На фигуре 3 показано уменьшение конгофилии периваскулярных пространств (а), частичное восстановление поперечной исчерченности кардиомиоцитов (б), а также снижение степени плазматического пропитывания стенок микрососудов (в).

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, и может быть использовано для лечения амилоидной кардиопатии. Способ лечения амилоидной кардиопатии у крыс заключается в том, что на фоне экспериментальной модели системного кардиопатического амилоидоза крысам вводят 3% раствор ацизола из расчета по 0,03 мл/г массы тела. Способ обеспечивает уменьшение сформированных в эксперименте морфологических признаков кардиопатии и ее функциональных проявлений, расширяя возможности лечения такой патологии. 3 ил., 1 пр.

Способ лечения экспериментальной амилоидной кардиопатии у животных, включающий введение лекарственного препарата, отличающийся тем, что в качестве лекарственного препарата вводят 3% раствор ацизола из расчета 0,03 мл/г массы тела спустя 60 дней после введения амилоидогенной смеси.