СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВЫХ ФРАКЦИЙ СЫВОРОТКИ КРОВИ Российский патент 2018 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к лабораторной диагностике, и может применяться для определения белковых фракций сыворотки крови.

Известен способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови. Сущность способа состоит в следующем: из сыворотки крови пациента получают два контрольных образца №1 и №2, затем в акустические ячейки двух аналогичных подключенных к компьютеру устройств для контроля биологических жидкостей с постоянно поддерживаемой в них температурой от 15 до 40°С, которая в первом устройстве ниже, чем во втором, последовательно помещают дистиллированную воду, сыворотку крови и контрольные образцы №1 и №2, пропускают через них ультразвук с частотой, изменяющейся в диапазоне от 2 до 40 МГц, и определяют скорость его прохождения в каждой из сред, относительные изменения скоростей ультразвука в сыворотке крови в первом и втором устройствах при соответствующих температурах и в контрольных образцах №1 и №2 относительно дистиллированной воды, а также частотный коэффициент скорости ультразвука и частотный коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови. На основании полученных данных определяют концентрацию общего белка, белковых фракций и липидных компонентов в сыворотке крови.

(Пат. 2253115 Российская Федерация, МПК G01N 33/49, N 29/18. Способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови / Клемин В.А., Долгов В.В., Клемина А.В.;

патентообладатель Клемин В.А., Долгов В.В., Клемина А.В. - №2003115002/15; заявл. 22.05.2003; опубл. 27.05.2005, Бюл. №15. - 17 с.)

Однако данный способ определения компонентов сыворотки крови обладает недостаточной точностью и длительным временем проведения анализа.

Известен турбодиметрический (нефелометрический) способ определения белковых фракций сыворотки крови, включающий осаждение белковых фракций сыворотки крови фосфатными растворами определенной концентрации в 6-ти пробирках, определение оптической плотности и вычисление содержания каждой фракции сыворотки крови в относительных процентах, отличающийся тем, что концентрацию белков в исследуемой пробе определяют по степени мутности растворов, устанавливаемой с помощью фотоэлектроколориметра (ФЭК), при этом измерение оптической плотности проводят в обратной последовательности.

(Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник / под ред. И.И. Кондрахина. - М.: КолосС, 2004. - С. 97-98).

Однако этот способ достаточно трудозатратен, занимает много времени, лабораторной посуды. Способ не адаптирован к современным биохимическим анализаторам.

Техническая задача, решаемая предполагаемым изобретением, заключается в расширении номенклатуры способов определения белковых фракций сыворотки крови, снижении трудозатрат, уменьшении трудоемкости, сокращении времени анализа, уменьшении расхода рабочих растворов, сыворотки и реагентов.

Технический результат заключается в расширении номенклатуры способов определения белковых фракций сыворотки крови, снижении трудозатрат, уменьшении трудоемкости подготовки проб, сокращении времени анализа, уменьшении в 5 раз количества рабочих растворов, сыворотки и реагентов, удешевлении способа.

Указанный результат достигается тем, что для определения белковых фракций сыворотки крови готовят 6 пробирок, при этом вносят 1 мл дистиллированной воды в пробирку №0, по 1 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов в пробирки №№1, 2, 3, 4 и дополнительно 0,1 мл сыворотки крови, 0,15 мл дистиллированной воды, 0,75 мл основного фосфатного раствора в пробирку №5 с последующим перемешиванием путем перевертывания смеси в пробирке №5 и перенесением этой смеси по 0,1 мл в пробирки №№0, 1, 2, 3, 4. Содержимое пробирок №№0, 1, 2, 3, 4 тщательно перемешивают. Через 15 минут проводят измерение оптической плотности по степени мутности растворов на биохимическом анализаторе «Stat fax 1904+» в каждой пробирке, в прямой последовательности, начиная с пробирки №1, затем в пробирках №2, 3, 4 против контроля (пробирка №0) или в обратной последовательности, начиная с пробирки №4.

На основании полученных данных вычисляют содержание каждой белковой фракции сыворотки крови в относительных процентах.

Способ осуществляется следующим образом.

Пример 1.

Для анализа использовали биохимический анализатор «Stat Fax 1904+» - компактный, управляемый микропроцессором, фотометр общего назначения с возможностью двух-волнового измерения, с шестью фильтрами и температурой инкубации 37°С.

(«Stat fax 1904+». Биохимический анализатор. Руководство пользователя. - Режим доступа: http://doc.westmedica.com/54RU/инструкции_пользователя/sf1904+_ru.pdf).

Провели анализ крови коровы с клиническими признаками жировой дистрофии печени.

Для проведения анализа подготовили основной фосфатный раствор, для этого взяли 33,5 г натрия гидроксида, растворили в 400 мл дистиллированной воды, добавили 226,8 г калия фосфата однозамещенного. После растворения раствор охладили до комнатной температуры и добавили дистиллированную воду до объема 500 мл.

В мерные колбы на 100 мл взяли 92,4 мл (№1), 74,9 мл (№2), 58,8 мл (№3), 48,7 мл (№4) основного фосфатного раствора и довели объем дистиллированной водой до метки. Тщательно размешали путем встряхивания.

Приготовили 6 боросиликатных пробирок с расстоянием между рабочими гранями 10 мм, обозначив их №№0, 1, 2, 3, 4, 5.

В пробирку №0 внесли 1,0 мл дистиллированной воды. В пробирки №№1, 2, 3, 4 внесли по 1,0 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов (№1-4). В пробирку №5 внесли 0,1 мл сыворотки крови, 0,15 мл дистиллированной воды и 0,75 мл основного фосфатного раствора. Закрыли пробкой и перемешали путем перевертывания. После этого перенесли по 0,1 мл смеси в пробирки №№0, 1, 2, 3, 4. Содержимое пробирок осторожно и тщательно перемешали.

Через 15 минут провели измерение оптической плотности по степени мутности растворов на биохимическом анализаторе «Stat fax 1904+» в каждой пробирке-кювете из боросиликатного стекла, начиная с пробирки №1, затем в пробирках №2, 3, 4 против контроля (пробирка №0) в режиме абсорбции при длине волны (фильтре) 600 нм.

Установленные оптические плотности растворов записали и произвели расчет.

Пример расчета:

Оптическая плотность пробирки №1 составила 0,675

Оптическая плотность пробирки №2 составила 0,554

Оптическая плотность пробирки №3 составила 0,519

Оптическая плотность пробирки №4 составила 0,398

Расчет оптической плотности белковых фракций провели по схеме:

- оптическая плотность пробирки №1 равна сумме всех фракций белка;

- оптическая плотность альбуминов равна оптическая плотность пробирки №1 минус оптическая плотность пробирки №2;

- оптическая плотность альфа-глобулинов равна оптическая плотность пробирки №2 минус оптическая плотность пробирки №3;

- оптическая плотность бета-глобулинов равна оптическая плотность пробирки №3 минус оптическая плотность пробирки №4;

- оптическая плотность гамма-глобулинов равна оптическая плотность пробирки №4.

Результаты расчета оптической плотности

альбуминов 0,675-0,554=0,121;

альфа-глобулинов 0,554-0,519=0,350;

бета-глобулинов 0,519-0,398=0,121;

гамма-глобулинов 0,398.

Принимая сумму оптической плотности всех фракций белка (0,675) за 100%, вычислили содержание каждой фракции в относительных процентах.

Относительный процент альбуминов

Относительный процент альфа-глобулинов

Относительный процент бета-глобулинов

Относительный процент гамма-глобулинов

Таким образом, предлагаемый способ расширяет номенклатуру способов определения белковых фракций сыворотки крови, позволяет в короткие сроки провести анализ и определить содержание белковых фракций, снизить трудозатраты, уменьшить трудоемкость подготовки проб, экономить количество рабочих растворов, сыворотки и реагентов, тем самым удешевить анализ.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к лабораторной диагностике, и может применяться для определения белковых фракций сыворотки крови. Способ определения белковых фракций сыворотки крови, включающий осаждение белковых фракций сыворотки крови фосфатными растворами в 6-ти пробирках, определение оптической плотности по степени мутности растворов и вычисление содержания белковых фракций сыворотки крови, отличается тем, что в пробирку №0 вносят 1,0 мл дистиллированной воды, по 1,0 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов в пробирки №№1, 2, 3, 4 и 0,1 мл сыворотки крови, 0,15 мл дистиллированной воды, 0,75 мл основного фосфатного раствора в пробирку №5 с последующим перемешиванием путем перевертывания пробирки №5 и перенесением смеси по 0,1 мл в пробирки №№0, 1, 2, 3, 4, при этом измерение оптической плотности проводят на биохимическом анализаторе. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.

1. Способ определения белковых фракций сыворотки крови, включающий осаждение белковых фракций сыворотки крови фосфатными растворами в 6-ти пробирках, определение оптической плотности по степени мутности растворов и вычисление содержания белковых фракций сыворотки крови, отличающийся тем, что в пробирку N 0 вносят 1,0 мл дистиллированной воды, по 1,0 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов в пробирки NN 1, 2, 3, 4 и 0,1 мл сыворотки крови, 0,15 мл дистиллированной воды, 0,75 мл основного фосфатного раствора в пробирку N 5 с последующим перемешиванием путем перевертывания пробирки N 5 и перенесением смеси по 0,1 мл в пробирки NN 0, 1, 2, 3, 4, при этом основной фосфатный раствор готовят путем растворения 33,5 г натрия гидроксида в 400 мл дистиллированной воды, затем добавляют 226,8 г калия фосфата однозамещенного, охлаждают до комнатной температуры и добавляют дистиллированную воду до объема 500 мл, рабочие фосфатные растворы готовят путем добавления в колбы на 100 мл 92,4 мл (N 1), 74,9 мл (N 2), 58,8 мл (N 3), 48,7 мл (N 4) основного фосфатного раствора и доведением объема дистиллированной водой до метки, при этом измерение оптической плотности проводят на биохимическом анализаторе.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для определения оптической плотности растворов используют биохимический анализатор «Stat fax 1904 +» в режиме абсорбции при длине волны 600 нм