Стимулятор повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности - "Синэстрол 2%" и способ повышения клострального иммунитета и неспецифической резистентности Российский патент 2018 года по МПК A61K31/01 A61P37/04 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к средствам повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности у новорожденных телят.

Болезни молодняка сельскохозяйственных животных занимают особое положение в патологии животных. Они выявляются у значительной части молодняка и наносят ощутимый экономический ущерб животноводству. Известно, что переболевшие в раннем возрасте животные малопригодны или совсем непригодны для дальнейшего воспроизводства. Необходимо постоянно заботиться о сохранении здоровья животных на всех технологических этапах получения и выращивания молодняка, а также эксплуатации взрослого поголовья.

В условиях интенсивного воздействия неблагоприятных антропогенных факторов необходимо добиваться постоянного смягчения негативных влияний на организм животных, с одной стороны, и постоянного повышения резистентности самих животных - с другой.

Для решения проблемы болезней молодняка требуется внедрение в производство целого комплекса ветеринарных мер, особенно в биологическом комплексе «мать-плод-новорожденный», надежно обеспечивающих охрану животных от болезней и их продуктивного долголетия [1]. В настоящее время развивается теория о передаче и формировании иммунитета детеныша с помощью и под контролем иммунной системы матери [2].

Иммунологическая реактивность у новорожденных животных формируется постепенно и достигает полноценной зрелости только на определенном уровне индивидуального развития. У новорожденных в первые дни жизни преобладают клеточные факторы резистентности. Гуморальные факторы полностью зависят от поступления иммуноглобулинов с молозивом матери. Колостральный иммунитет - это иммунитет, формирующийся у новорожденных за счет молозивных иммуноглобулинов в течение первых 24-36 часов жизни. Для новорожденных видов сельскохозяйственных животных (жвачные, свиньи и лошади) антитела передаются потомству только через молозиво в постнатальный период [3]. Поэтому интенсивность поглощения адекватных количеств иммуноглобулинов молозива необходима для приобретения пассивного иммунитета. Недостаточность его переноса предопределяет у новорожденных иммунодефицитное состояние и риск заболеваний главным образом, инфекционной этиологии [4].

Пассивный транспорт колостральных иммуноглобулинов - это трансмембранный перенос простой диффузией иммуноглобулинов в неизменном виде из кишечника в кровь в течение первых 24-36 часов жизни. При формировании колострального иммунитета у новорожденных большая роль принадлежит кислотно-основному состоянию их крови (КОС), которое в большей степени определяется особенностями метаболических превращений во время внутриутробного периода развития животных и зависит от КОС крови матери [5].

Нарушение КОС (длительный респираторно-метаболический ацидоз) встречается у новорожденных телят с пониженной жизнеспособностью. Возникновение дисбаланса в соотношении интенсивности процессов пероксидного окисления липидов и функциональной активности системы антиоксидантной защиты в этот период, являясь существенным фактором нарушения пассивного транспорта колостральных иммуноглобулинов (снижает уровень колострального иммунитета), повышает риск развития иммунодефицитного состояния и возникновения постнатальных заболеваний у новорожденных животных.

Обеспеченность новорожденных колостральными антителами определяется содержанием иммуноглобулинов в молозиве, количеством выпоенного молозива и проницаемостью стенок кишечника [1].

Большую роль в образовании молочной железой высококачественного молозива играют женские половые гормоны - эстрогены (эстрон, эстриол, эстрадиол), синтезирующиеся фолликулами яичников. Биосинтез значительных количеств эстрогенов начинается после наступления половой зрелости. Структурами-мишенями для эстрогенов являются половые органы - яичники, яйцеводы, матка, влагалище, а также молочные железы. Эстрогены стимулируют их рост и развитие. Эстрогены вызывают рост молочных желез. Эстрогены участвуют в регуляции обменных процессов, повышают содержание фосфолипидов в крови, увеличивают синтез белков и накопление мышечной ткани, повышают сопротивляемость организма к вредным воздействиям, усиливают регенерацию при повреждении тканей, улучшают высшую нервную деятельность [6].

Известен способ повышения уровня колострального иммунитета у новорожденных телят, заключающийся в применении им комплексной смеси во время первой и второй выпойки молозива в дозе 250 мл. Смесь имеет следующий состав (мл/л): аллогенная иммунная сыворотка крупного рогатого скота (КРС) - 450, вытяжка из селезенки КРС - 450, вытяжка из тимуса КРС - 90, насыщенный раствор янтарной кислоты - 10 (патент RU №2180573, опуб. 20.03.2002 г.).

Однако данный способ формирования колострального иммунитета трудоемок, предлагает использование автоклавов, аппарата Сальникова, лабораторной посуды и др. Кроме того, при наличии острой или хронической инфекции у КРС кровь от таких животных для производства аллогенной иммунной сыворотки не используют. Другим недостатком данного способа является низкая эффективность при профилактике диспепсии у новорожденных телят.

Известен способ формирования колострального иммунитета у молодняка сельскохозяйственных животных, предусматривающий двукратное введение беременным самкам инактивированной вакцины, которую вводят с интервалом 3 дня соответственно за 21 и 17 дней до предполагаемых родов (патент RU №2305549, опуб. 10.09.2007).

Недостатком данного способа является низкая сохранность телят в первые двадцать дней жизни и кроме того, у новорожденных телят с пониженной жизнеспособностью затруднен пассивный транспорт колостральных иммуноглобулинов вследствие длительного респираторно-метаболического ацидоза рожденных сельскохозяйственных животных в условиях неблагополучных хозяйств.

Препаратов для повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности у телят в источниках информации не обнаружено.

Задача изобретения - снизить заболеваемость и повысить сохранность новорожденных телят в условиях неблагополучия хозяйств.

Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в повышении у стельных коров иммунореактивности в период максимально приближенный к родам и повышение колострального иммунитета и неспецифической резистентности у молодняка.

Для достижения названного технического результата, в качестве стимулятора повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности у телят используют инъецированный стельным коровам за 3-6 дней до родов препарат «Синэстрол 2%» в дозе 1 мл на животное, подкожно и однократно.

В современной ветеринарной медицине имеется дешевый синтетический аналог женского полового гормона - «Синэстрол 2%». Синэстрол (Synoestrolum). Производное стильбена. Синтетический аналог, обладает действием естественного женского полового гормона эстрона, но действует медленнее и эффективнее [7].

Вместе с гормоном желтого тела фолликулярный гормон участвует в регуляции менструального цикла. Эстрогены, взаимодействуя со специфическими рецепторами, оказывают влияние на органы-мишени. «Синэстрол 2%» усиливает кровоснабжение половых органов, создает условия для гиперплазии мышечного слоя матки, активирует процессы пролиферации эндометрия, железистого эпителия и эпителия выводящих протоков молочных желез. Повышает чувствительность мышц матки и маточных труб к возбуждающим их моторику лекарственным средствам.

«Синэстрол 2%» по степени воздействия на организм относится к малоопасным веществам (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76), в рекомендованных дозах не оказывает местнораздражающего действия [8].

Эстрогенный эффект оказывает преимущественно в родовых путях. Дополнительно к показаниям применения эстрона «Синэстрол 2%» применяют при эндометритах, вагинитах, для восстановления лактации у животных после отела, для удаления последа и мумифицированных плодов, для субинволюции матки после родов, при стойких желтых телах, кистах яичников, для стимуляции охоты [7].

Установлено воздействие препарата «Синэстрол 2%» на накопление в молочной железе коров перед отелом иммуноглобулинов и других иммуногенных факторов, выделение их в составе молозива, а также влияние этих факторов на состояние колострального иммунитета и становление неспецифической резистентности у телят при инъекции его стельным коровам в период максимально приближенный к родам.

Объектами исследования были 10 глубокостельных коров черно-пестрой породы в возрасте 2-3 отела и полученные от них новорожденные телята, которые были разделены на 2 группы по принципу парных аналогов:

I группа - контрольная, глубокостельные коровы-матери (№0538, 8805, 0003, 1254, 6657) и полученные от них новорожденные телята. Глубокостельным коровам-матерям I группы вводили подкожно физиологический раствор хлорида натрия - 0,9% в дозе 1 мл в область лопатки за 3-6 дней до отела, однократно;

II группа - опытная, глубокостельные коровы матери (№1244, 1113, 9250, 8536, 2157) и полученные от них новорожденные телята. Глубокостельным коровам-матерям II группы подкожно вводили препарат «Синэстрол-2%» в область лопатки в дозе 1 мл на животное за 3-6 дней до отела, однократно.

Время введения препаратов, выбрано неслучайно. Считается, что основная часть иммуноглобулинов поступает в секрет молочной железы из крови в неизмененном состоянии, аккумулируясь в молозиве за 3-9 дней до отела (Карпуть И.Н., Пивовар Л.М., 1983).

Теленок, рожденный от коровы контрольной группы, становится контрольным теленком, а теленок, рожденный от опытной коровы, - соответственно опытным. В итоге народилось кратное коровам-матерям количество новорожденных телят, т.е. в каждой группе по 5 телят, номера коров-матерей и полученных от них телят были одинаковыми. Формирование групп проводилось методом парных аналогов. Новорожденному теленку, сразу после появления сосательного рефлекса, выпаивали молозиво, собранное от его коровы-матери.

Телята содержались в профилакторном помещении. Вели клиническое наблюдение за подопытными животными. Взвешивание телят проводили в день рождения телят, в конце первого, второго, третьего и четвертого месяца жизни. Телята имели свободный доступ к сену и воде. Пробы крови у телят из яремной вены брали на 2 и 10 сутки жизни. У новорожденных телят проводили общий осмотр, исследовали температуру, частоту сердечных сокращений, появление сосательного рефлекса, появление уверенной позы стояния.

В ходе опыта исследовали уровень иммуноглобулинов в выпаиваемом телятам молозиве в контрольной и опытной группах. Образцы молозива отбирались из первого удоя. Отбиралась средняя проба объемом 200 мл.

Для исследования крови и молозива использовали следующие методы:

- белковые фракции крови (альбумин, α-глобулины, β-глобулины, γ-глобулины) - на анализаторе Minicap, Sebia;

- общий белок - на анализаторе AU480 Olympus, Япония;

- общий анализ крови (уровень гемоглобина; количество лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов; гематокрит; СОЭ) - на гематологическом анализаторе крови XT 2000, Sysmex, Europe, GmbH;

- выведение лейкоцитарной формулы путем подсчета в мазках крови лейкоцитов разных видов, окрашенных по Романовскому-Гимза;

- содержание иммунных глобулинов (Ig) в молозиве (молоке) с натрия сульфитом определяли методами, изложенными в Справочнике «Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики» под редакцией профессора И.П. Кондрахина [9];

- определение бактерицидной активности сыворотки крови - фотонефелометрическим методом в модификации О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой с применением тест-культуры Staphylococcus epidermidis и лизоцимной активности - с использованием тест-культуры Micrococcus lysodeikticus в модификации УНИИЭВ;

- исследование T- и B-лимфоцитов методом розеткообразования;

- активность γ-глутамилтрансферазы (γ-ГТ) и глюкозы на биохимическом анализаторе «Hitachi-902»;

- титр антител к антигенам Е. coli, вирусов ПГ-3 и ИРТ, содержание молочной и пировиноградной кислот [11];

- малонового диальдегида (МДА), активность супероксиддисмутазы (СОД), глутатион пероксидазы (ГПО) и каталазы [9].

Анализы выполнялись на кафедре «Анатомия, хирургия и внутренние незаразные болезни» ФГБОУ ВО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия», лаборатории «Гемохелп» г. Нижний Новгород; в лаборатории Всероссийского научно-исследовательского института физиологии, биохимии и питания животных, г. Боровск, Калужской обл.

Статистическая обработка полученных материалов проводилась методом парных сравнений [10].

Среднее содержание иммуноглобулинов в молозиве коров контрольной группы составило 40,6 г/л, а у коров опытной группы - 46,8 г/л, т.е. на 14,5% выше чем у животных контрольной группы (Таблица 1).

Отмечено достоверное повышение в крови телят II группы числа лейкоцитов+17,19% на 2-е сутки после рождения.

При этом содержание отдельных видов лейкоцитов оставалось сходным с контрольными (Таблицы 2 и 3).

Через 10 дней после рождения количество лейкоцитов было более высоким у телят опытной группы, при этом в основном за счет лимфоцитов (Таблицы 2 и 3).

Примечание. Здесь и далее в таблицах * - p<0,05 по парному критерию при сравнении с контролем.

Абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов было выше по сравнению с контрольной группой на 20% и 10,6%. Относительное количество В-лимфоцитов в крови опытных телят было ниже, чем у контрольных на 8,33% через сутки после рождения, а абсолютное количество было сходным.

Через 10 суток мы наблюдаем увеличение общего количества лимфоцитов подопытных животных, выравнивание количества T- и B-лимфоцитов (Таблицы 2 и 4).

Начиная с рождения и в конце каждого месяца проводилось взвешивание телят, 4 месяца подряд (Таблица 5).

Таким образом, в период опыта, продолжавшегося 4 месяца, телята II группы имели более высокий среднесуточный прирост массы тела, особенно в первые три месяца жизни. Через месяц после рождения прирост телят II группы был на 14% выше контроля соответственно. В конце второго месяца жизни прирост телят II группы был выше привеса контрольных животных на 20,3%. В конце третьего месяца жизни прирост телят II группы был выше привеса контрольных животных на 9,5% соответственно. В конце 4 месяца жизни значительных изменений в среднесуточном приросте телят опытной группы по сравнению с контрольной не было отмечено. Стимуляция колострального иммунитета и становление общей резистентности телят парентеральным введением их коровам-матерям за 3-6 дней до отела препарата «Синэстрол-2%» способствовует повышению прироста живой массы телят на 12% в сравнении с контрольной группой за 4 месяца выращивания, начиная с рождения (515 г/сут.; 576 г/сут соответственно в контрольной и опытной группе).

Проводился общий клинический осмотр, измерение температуры, частоты сердечных сокращений у новорожденных телят на 2 и 3 сутки после рождения, измерялось время появления уверенной позы стояния и появления сосательного рефлекса в минутах (Таблицы 6 и 7).

Из Таблиц 6 и 7 видно, что применение препарата «Синэстрол-2%», инъецированного стельным коровам в период, максимально приближенный к родам, оказывает благоприятный эффект на физиологический статус новорожденных телят. Температура тела у телят II группы на 2-е сутки была выше температуры тела контрольных животных на 0,6°C, а частота сердечных сокращений была меньше на 7,7 ч.с.с./мин соответственно. На 3-и сутки жизни температура тела телят II группы была выше на 0,2°C по сравнению с контролем. Частота сердечных сокращений была меньше на 7,6 ч.с.с./мин по сравнению с показателем контрольной группы. Появление уверенной позы стояния реализовалось раньше у телят II группы на 7,1 минуты в сравнении с телятами I группы. Сосательный рефлекс также появился раньше у опытных животных.

Изучались уровень колострального иммунитета и такие показатели, как титр антител к эширихиозному антигену, к антигенам вируса парагриппа-3 (ПГ-3) и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ) (Таблицы 8 и 9).

Из Таблиц 8 и 9 видно, что применение препарата «Синэстрол-2%», инъецированного стельным коровам в период, максимально приближенный к родам, способствует повышению уровня колострального иммунитета телят опытных групп. Содержание общих иммуноглобулинов на 2-е сутки было выше на 3,62 г/л у телят II группы, также можно отметить увеличение титра антител к антигену вируса ПГ-3 во II группе - в 1,8 раза и инфекционного ринотрахеита соответственно в 2 раза по сравнению с контрольной группой животных (I). На 10 сутки содержание общих иммуноглобулинов во II группе превышало контроль на 2,73 г/л. Титр антител к антигенам вируса ПГ-3 во II группе был выше в 1,6 раза, титр антител к вирусу ИРТ был выше в 1,7 раза показателя контрольной группы телят соответственно.

Были проведены биохимические и иммунологические исследования крови новорожденных телят (Таблиц 10 и 11).

На 2-е сутки бактерицидная активность сыворотки крови, отражающая суммарное влияние гуморального и клеточного звеньев защиты, у телят II группы была выше контроля на 8,65%, лизоцимная активность повысилась на 7,54%.

Через 10 суток после рождения у телят подопытных групп снизилось содержание альфа- и гамма-глобулинов в крови, но оно достоверно было более высоким у животных опытной группы. При этом повысился уровень альбуминов и сократилась разница между животными опытной и контрольной групп.

Уровень бактерицидной активности сыворотки крови у телят II группы был выше на 6,1%, лизоцимной активности на 6,6% по сравнению с контролем.

Как видно из Таблиц 10 и 11, у телят II группы на 2-е сутки жизни отмечен более высокий уровень в крови гамма-глобулинов на 21,8% (P<0,05), альбуминов на 13,7% (P<0,05) и общего белка 9,75% (P<0,05) больше по сравнению с животными контрольной группы.

Кроме того, вели учет заболеваемости телят болезнями желудочно-кишечного тракта и омфалитом (Таблицы 12 и 13).

Из Таблицы 12 видно, что применение препарата «Синэстрол-2%», инъецированного стельным коровам в период, максимально приближенный к родам, позволяет снизить заболеваемость новорожденных телят энтеритной формой эшерихиоза в 0,75 раза во II группе соответственно. Телята опытной группы заболели на 1 сутки позже и болели на 1,7 суток меньше по сравнению с контрольной группой.

Из Таблицы 13 видно, что применение препарата «Синэстрол-2%», инъецированного стельным коровам в период, максимально приближенный к родам, способствует формированию у новорожденных телят полученных от этих коров более выраженного колострального иммунитета, что обеспечило снижение заболеваемости телят омфалитом в 1,5 раза в опытной группе по сравнению с контролем.

У подопытных новорожденных телят изучали уровень метаболического статуса (Таблицы 14 и 15).

Из Таблиц 14 и 15 видно, что применение препарата «Синэстрол-2%», инъецированного стельным коровам-матерям в период, максимально приближенный к родам, способствует снижению такого процесса, как ацидоз. Это можно объяснить снижением показателя лактат/пируват на вторые сутки во II группе, на 9,75% по сравнению с интактными телятами, при снижении уровня молочной кислоты на 36,4% во II группе по сравнению с контролем. Также следует отметить, что во II группе новорожденных телят был более низкий уровень МДА как на вторые, так и на 10-е сутки жизни по сравнению с показателями животных I группы, что характеризует замедление процесса пероксидации липидов и сохранение функциональной активности системы АОЗ. У опытной группы явление эндогенной интоксикации (ЭИ) было менее выражено и на 2-е, и на 10-е сутки исследования по сравнению с контролем.

Исследования проводили в весенне-летний период 2016 г. на молочно-товарной ферме сельскохозяйственного производственного кооператива «Мир» и СПК «Ждановский» Нижегородской обл. Были задействованы в эксперименте 48 глубокостельных коров (n=48) черно-пестрой породы, исследуемые показатели которых полностью совпадают с представленными в таблицах данными.

Таким образом, применение препарата «Синэстрол-2%», инъецированного стельным коровам в период, максимально приближенный к родам, способствует нормализации метаболического статуса и кислотно-основного состояния глубокостельных коров-матерей, которое определяет КОС новорожденных телят, а также способствует накоплению в молочной железе коров перед отелом иммуноглобулинов и других иммуногенных факторов, а также выделению их в составе молозива, что приводит к повышению этологических и физиологических показателей телят, способствует усилению колострального иммунитета и неспецифической резистентности, и, как следствие, отражается на приросте их живой массы и снижении заболеваемости.

Источники информации

1. Петрянкин Ф.П. Болезни молодняка животных. / Ф.П. Петрянкин, О.Ю. Петрова // Учебное пособие. - 2-е изд., перераб. и доп. - СПб.: Изд-во «Лань», 2014. - 352 с.

2. Скопичев В.Г. Физиология репродуктивной системы млекопитающих: Учебное пособие / В.Г. Скопичев, И.О. Боголюбова / СПб.: Изд-во «Лань», 2007. - 5012 с.

3. Svendsen l. Lokal immunited og oral immunisering mod mave - tarmsygdomme hos svinet forarsaget of E. coli // Dansk. Vet. Fidsskr. - 1978. - Agr. 61. - №4. - S. 144-149.

4. Weaver D.M. Passive transfer of colostral immunoglobulins in calves / D.M. Weaver, J.W. Tyler, D.C. VanMetre et al // J. Vet intern. Med. - 2000. - v. 14. №6. - Р. 569-577.

5. Рецкий М.И. Роль кислотно-основного состояния в формировании колострального иммунитета у новорожденных телят. / М.И. Рецкий, A.Г. Шахов, А.И. Золотарев и др. // Вестник Россельхозакадемии. - 2005 - №3. - С. 69-71.

6. Лысов В.Ф. Физиология и этология животных. / В.Ф Лысов, Т.В. Ипполитова, В.И. Максимов, Н.С. Шевелев. - М.: Колос, 2004. - 568 с.

7. Соколов В.Д. Фармакология: Учебник. / 3-е изд., испр. и доп. - СПб.: Изд-во «Лань», 2013. - 576 с.

8. Наставление по применению препарата «Синэстрол-2%».

9. Кондрахин И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник. / И.П. Кондрахин. - М.: КолосС, 2004. - 520 с.

10. Асатиани, B.C. Новые методы биохимической фотометрии. / B.C. Асатиани. - М., 1965, 543 с.

11. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. / B.В. Меньшиков. - М.: Медицина, 1987. - С. 364.

Группа изобретений относится к области ветеринарии, в частности к средствам повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности у новорожденных телят. Предложено применение препарата «Синэстрол-2%», инъецированного стельным коровам в качестве стимулятора повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности у телят. Также предложен способ повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности у телят препаратом «Синэстрол-2%», который инъецируют стельным коровам, за 3-6 дней до родов в дозе 1 мл на животное, подкожно и однократно. Группа изобретений позволяет повысить иммунореактивность у стельных коров в период, максимально приближенный к родам, повысить колостральный иммунитет, увеличить сохранность новорожденных телят и снизить их заболеваемость. 2 н.п. ф-лы, 15 табл.

1. Применение препарата «Синэстрол 2%» в качестве стимулятора повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности у телят.

2. Способ повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности у телят, отличающийся тем, что препарат «Синэстрол 2%» инъецируют стельным коровам за 3-6 дней до родов в дозе 1 мл на животное, подкожно и однократно.