СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНЪЕКЦИОННОГО ГИДРОГЕЛЯ НА ОСНОВЕ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ, СОДЕРЖАЩЕГО ЛИДОКАИН И ЩЕЛОЧНОЙ АГЕНТ, СТЕРИЛИЗОВАННОГО ТЕПЛОМ Российский патент 2018 года по МПК A61K9/00 A61K8/73 A61K31/728 A61K31/167 A61P23/02 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к способу приготовления инъекционного гидрогеля на основе гиалуроновой кислоты, содержащего лидокаин и щелочной агент, стерилизованного теплом, к полученному таким способом гелю, а также к его применению в терапевтической и эстетической медицине.

Уровень техники

Применение инъекционных гидрогелей на основе гиалуроновой кислоты широко используется для разделения, замены или заполнения биологической ткани или увеличения объема такой ткани, а также для дополнения или замены биологической жидкости.

Таким образом, вязкоупругие препараты на основе гиалуроновой кислоты используются во многих терапевтических процедурах и в дерматологической косметологии.

Например, эти препараты на основе сшитой или несшитой гиалуроновой кислоты используются:

- в ревматологии в качестве средства замены, временного пополнения синовиальной жидкости,

- в урологии/гинекологии в качестве средства, позволяющего увеличить объем сфинктера или уретры,

- в офтальмологии в качестве адъюванта при операции по поводу катаракты или при лечении глауком,

- в фармацевтике в качестве геля для высвобождения активных веществ,

- в хирургии для восстановления костной ткани, увеличения объема голосовых связок или для создания хирургических тканей,

- в дерматологии и косметологии для заполнения морщин, маскирования шрамов или увеличения объема губ.

Концентрация гиалуроновой кислоты и свойства текучести гидрогеля являются основными свойствами инъекционного препарата на основе гиалуроновой кислоты. Эти свойства в значительной степени обусловливают структуру этого препарата и, вследствие этого, его применение и функциональные характеристики. Таким образом, модуль упругости (G’) и модуль вязкости (G”) являются важными характеристиками для инъекционного гидрогеля на основе гиалуроновой кислоты, как указано в следующей публикации:

Sundaram Н. et al., Comparison of the rheological properties of viscosity and elasticity in two categories of soft tissue fillers: calcium hydroxyapatite and hyaluronic acid, Dermatologic surgery, 2010, 36 (S3), 1859-1865. (Сундарам X. и др., Сравнение реологических свойств вязкости и упругости у двух категорий наполнителей мягких тканей: гидроксиапатита кальция и гиалуроновой кислоты, Dermatologic surgery, 2010, 36 (S3), 1859-1865).

Лидокаин является местным анестетиком, используемым в настоящее время в областях эстетической медицины и общей медицины. Это вещество, в частности, использовали в течение многих лет в препаратах, применяемых в эстетических целях, таких как препараты для заполнения морщин, для уменьшения болезненных ощущений во время или после инъекций. Например, уже более 20 лет продаются препараты Zyderm®/Zyplast® на основе коллагена и 0,3% лидокаина.

Недавно лидокаин был введен в новые составы на основе гиалуроновой кислоты, используемые в дерматологической косметологии для заполнения морщин и восстановления объемов (досье препаратов Juvéderm® Ultra 2/3/4, Prevelle® Silk /15 Shape, Elevess®, …). Во всех этих препаратах присутствие лидокаина не затрудняет выполнение известных функций этих медицинских препаратов, то есть заполнения углублений в коже. Лидокаин вследствие своей анестезирующей активности позволяет повысить комфорт для пациента за счет уменьшения болезненных ощущений во время и после введения препарата.

Интересно отметить, что многие практикующие врачи либо не используют гели на основе гиалуроновой кислоты, содержащие лидокаин (например, когда имеются противопоказания к использованию лидокаина у пациентов с известной чувствительностью к этому соединению), либо считают, что им не требуется такое обезболивающее действие, поскольку они используют другие средства для устранения болевых ощущений, например, анестезию путем блокады нервного ствола, использование менее травматического способа или устройства введения препарата, или, в особенности, использование обезболивающего препарата для местного применения.

Тем не менее, в настоящее время доступные практикующим врачам препараты для заполнения морщин и восстановления объемов на основе гиалуроновой кислоты не обеспечивают возможность использования лидокаина в качестве опции, так как у врачей отсутствует возможность выбора такого препарата с лидокаином или без лидокаина. Данный препарат может предлагаться в виде гелей с лидокаином или без лидокаина с, по существу, одинаковыми концентрациями гиалуроновой кислоты и (эквивалентными) свойствами текучести, и, таким образом, практикующие врачи могут иметь те же самые клинические применения и функциональные характеристики во время и после инъекции для варианта с лидокаином и без лидокаина (кроме положительного влияния на боль вследствие наличия лидокаина). В частности, на рынке большое количество этих препаратов предлагается только в форме с лидокаином (случаи препаратов Juvéderm® Ultra 2/3/4, Prevelle® и Elevess®).

Такая ситуация, в частности, приводит к тому, что многие врачи самостоятельно вводят лидокаин в коммерческие препараты, не содержащие лидокаин, чтобы иметь возможность проводить лечение своих пациентов с использованием инъекционных препаратов, выбранных ими, имея преимущества обезболивания. Для этого врачу приходится смешивать гель на основе инъекционной гиалуроновой кислоты с раствором лидокаина (например, инъекционный Xylocaine®) непосредственно перед его введением пациенту, что приводит к значительному разжижению гидрогеля (уменьшению концентрации гиалуроновой кислоты) и существенному изменению свойств текучести коммерческого препарата.

Для коммерческих препаратов на основе гиалуроновой кислоты, содержащих лидокаин (анестетик, введенный во время приготовления препарата), в предшествующем уровне техники известны способы, позволяющие ввести лидокаин в форме водного раствора в гель на основе гиалуроновой кислоты.

Тем не менее, эти способы не являются полностью удовлетворительными, так как они также фактически приводят к разжижению инъекционного гидрогеля и к значительному изменению свойств текучести. В частности, наблюдаются увеличение упругости (увеличение значения модуля упругости G’) и увеличение упругого характера (уменьшение соотношения G”/G’) гидрогеля, что может быть нежелательно в зависимости от состояний, по поводу которых применяется терапия (например, слишком упругий инъекционный препарат, т.е. имеющий слишком большой модуль упругости G’ и/или слишком низкое соотношение G”/G’ может привести к формированию участков, которые пациент будет ощущать как твердые и/или те, в которых будет ощущаться дискомфорт или даже болезненность.

Таким образом, задача настоящего изобретения состоит в предложении способа получения инъекционного гидрогеля на основе гиалуроновой кислоты, или одной из ее солей, и лидокаина путем введения лидокаина и щелочного агента в гель гиалуроновой кислоты без значительных изменений основных свойств препарата, которыми являются концентрация гиалуроновой кислоты и свойства вязкоупругости, т.е. значения модулей G’ и G” соответствующего гидрогеля.

Раскрытие изобретения

С этой целью способ получения инъекционного гидрогеля (следовательно, стерильного) на основе сшитой гиалуроновой кислоты, или одной из ее солей, и на основе лидокаина в соответствии с настоящим изобретением включает в себя следующие последовательные этапы:

i) образование геля на основе сшитой гиалуроновой кислоты или одной из ее солей,

ii) добавление в указанный гель гидрохлорида лидокаина в виде порошка или в виде раствора и затем перемешивание,

iii) доведение рН до значения в диапазоне от 6,5 до 7,6 путем добавления щелочного агента в смесь гель + гидрохлорид лидокаина и гомогенизация всей смеси, обеспечивающие возможность получения гидрогеля, не содержащего взвешенные твердые частицы лидокаина,

iv) стерилизация гидрогеля теплом.

Этот способ по изобретению отличается, в частности, в плане времени и формы (твердое вещество/жидкость) добавления лидокаина.

Такой способ добавления гидрохлорида лидокаина, в частности, в твердой форме (порошок), связанный с добавлением щелочного агента, совершенно неожиданно позволяет на основе данного геля сшитой гиалуроновой кислоты получить концентрацию гиалуроновой кислоты и свойства текучести G’ и G” этого геля, содержащего гидрохлорид лидокаина, эквивалентные концентрации и свойствам такого же геля без гидрохлорида лидокаина. Таким образом, при использовании этого способа возможно избежать изменения основных свойств, обусловливающих функциональные характеристики данного геля.

Способ приготовления по настоящему изобретению предусматривает получение геля на основе гиалуроновой кислоты или соли гиалуроновой кислоты, предпочтительно подготовленной и сшитой в соответствии с приемами, описанными в предшествующем уровне техники. Например, можно упомянуть сшитые гели по WO 2005/085329, а также сшитые и привитые гели по WO 2005/012364.

По одному частному варианту осуществления настоящего изобретения сшивание осуществляют с помощью би- или полифункциональных веществ, например, выбранных из эпоксидов эпигалогидринов и дивинилсульфона, действующих на гиалуроновую кислоту или одну из ее солей, несшитых или уже сшитых с одним или несколькими другими полисахаридами природного происхождения или без таких полисахаридов. Предпочтительнее, чтобы сшивание осуществлялось с помощью бутандиол-диглицидилового эфира.

Степень сшивания гидрогеля на основе гиалуроновой кислоты или одной из ее солей определяют как выраженное в процентах отношение массы сшивающего агента к массе гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, введенных в реакционную смесь в ходе приготовления препарата.

В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения степень сшивания гидрогеля по изобретению составляет от 0,1% до 25%, предпочтительно от 0,5% до 15% и предпочтительнее от 1,5% до 14%.

В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения гель может также содержать и другие биосовместимые полимеры (например, полисахариды природного происхождения) и/или другие активные или неактивные вещества, оказывающие положительное воздействие на организм или на гель.

Среди предпочтительных солей гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению следует назвать соли гиалуроновой кислоты с катионом, в частности, моно- или дивалентным катионом, выбранным из натрия, калия, магния, кальция, марганца и/или цинка. В частности, наиболее предпочтительными являются соли натрия.

В способе по настоящему изобретению концентрация гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, полученная на этапе i), может составлять от 1 мг/мл до 50 мг/мл, предпочтительно от 4 до 14 мг/мл, еще более предпочтительно от 14 до 35 мг/мл.

Молекулярная масса гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, используемых для получения гидрогеля, составляет от 1000 Да до 10×10⁶ Да, предпочтительно от 2.10⁵ Да до 5.10⁶ Да, еще более предпочтительно от 5.10⁵ Да до 4.10⁶ Да.

Важное значение имеет порядок добавления компонентов в гель на основе гиалуроновой кислоты: необходимо ввести гидрохлорид лидокаина в гель и затем перемешать перед добавлением щелочного агента для доведения рН до значений, указанных выше (этап iii). При нарушении этой последовательности часть добавленного гидрохлорида лидокаина (добавленного в виде порошка или в виде раствора с наличием нерастворенных частиц гидрохлорида лидокаина) остается в виде твердых частиц, которые не растворяются. В дальнейшем невозможно получить прозрачный гель, то есть без каких-либо частиц лидокаина, видимых невооруженным глазом (взвешенных частиц в геле), что, как правило, требуется для большого количества вариантов использования, таких, например, как процедуры в сфере дерматологической косметологии.

Концентрация гидрохлорида лидокаина в геле составляет предпочтительно от 0,1 до 50 мг/мл, предпочтительнее от 1 до 30 мг/мл, еще более предпочтительно от 2 до 20 мг/мл.

Щелочной агент можно вводить в гель в твердой форме или в виде чистой или разбавленной жидкости. В случае разбавленной жидкости щелочной агент предпочтительно добавлять в виде водного раствора, достаточно концентрированного, чтобы, таким образом, не вызвать разжижение геля гиалуроновой кислоты.

Количество щелочного агента, введенного в гель, в частности, зависит от типа выбранного щелочного агента, от концентрации гидрохлорида лидокаина в геле, от рН геля перед добавлением гидрохлорида лидокаина, от таких характеристик геля, как концентрация гиалуроновой кислоты, и от желаемых свойств текучести G’ и G” для конечных препаратов, стерилизованных теплом. Специалист в данной области техники сможет выбрать подходящее количество щелочного агента в соответствии с требованиями для разрабатываемого состава.

Щелочной агент предпочтительно выбирают из гидроксида натрия, гидроксида калия или бикарбоната натрия, предпочтительнее в качестве щелочного агента выбирать гидроксид натрия.

Гель с лидокаином по настоящему изобретению имеет концентрацию гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, эквивалентную концентрации гиалуроновой кислоты в геле, не содержащем лидокаин. Таким образом, для того чтобы гель можно было считать эквивалентным с точки зрения концентрации гиалуроновой кислоты, процентная доля разбавления геля по настоящему изобретению, потенциально до некоторой степени разбавленного вследствие добавления щелочного агента (если последний был добавлен в виде раствора), не должна быть больше 2,5% для того, чтобы такой гель можно было считать эквивалентным соответствующему гелю, не содержащему лидокаина.

Процентная доля разбавления геля определяется следующим образом:

Пусть V1 = объем добавленного щелочного раствора,

Пусть V2 = объем геля после добавления гидрохлорида лидокаина и перед добавлением щелочного раствора.

Процент разбавления = V1*100/(V1+V2).

Предпочтительно, чтобы эта процентная доля разбавления геля после добавления щелочного агента была меньше или равна 2,5%, предпочтительно меньше или равна 1,5%, еще более предпочтительно меньше или равна 1%.

Предпочтительно, чтобы значение рН гидрогеля до и после стерилизации составляло от 6,5 до 7,6, предпочтительно от 6,9 до 7,5, еще более предпочтительно от 7,0 до 7,4 и еще более предпочтительно от 7,1 до 7,3.

Стерилизацию геля осуществляют теплом, предпочтительно влажным теплом. Специалист в данной области техники знает, как выбрать цикл тепловой стерилизации (температуру и продолжительность цикла стерилизации), подходящий для стерилизации его препарата. Например, стерилизацию влажным теплом можно проводить при 131°C в течение 1-2 минут, при 130°C - в течение 3 мин, при 125°C - в течение 7 минут, при 121°C - в течение 20 мин, при 121°C - в течение 10 мин или при 100°C в течение 2 часов.

Настоящее изобретение также относится к стерильному инъекционному гидрогелю на основе гиалуроновой кислоты, или одной из ее солей, гидрохлорида лидокаина и щелочного агента, приготовленному по способу, описанному выше, имеющему свойства текучести (в частности, модули С и G”), которые, по существу, соответствуют свойствам текучести такого же гидрогеля, но не содержащего гидрохлорид лидокаина. В частности, неожиданно, гель на основе гиалуроновой кислоты, гидрохлорида лидокаина и щелочного агента, полученный в соответствии с настоящим изобретением, имеет концентрацию гиалуроновой кислоты и реологические свойства (и, следовательно, структуру геля), эквивалентные указанным характеристикам геля без гидрохлорида лидокаина. С более практической точки зрения, доля разбавления гидрогеля по настоящему изобретению, полученного в соответствии со способом, описанным выше, не превышает 2,5%, предпочтительно меньше или равна 1,5%, еще более предпочтительно меньше или равна 1%, относительно такого же гидрогеля без гидрохлорида лидокаина.

Инъекционный гидрогель по настоящему изобретению может быть использован в эстетической медицине (дерматологической косметологии) или в терапии, в частности, для заполнения или замены биологических тканей или дополнительно для разделения, замены или заполнения биологической ткани или разделения объема указанной ткани или дополнительно для дополнения или замены биологической жидкости. Таким образом, он может быть использован, например, для заполнения морщин, ремоделирования лица или тела, или для увеличения объема губ.

Согласно еще одному варианту инъекционный гидрогель по изобретению может быть использован в методике для регидратирования кожи с помощью мезотерапии.

Гидрогель по настоящему изобретению также может быть использован в различных терапевтических процедурах, таких как, например:

- в ревматологии в качестве средства замены, временного пополнения синовиальной жидкости;

- в урологии/гинекологии в качестве средства, позволяющего увеличить объем сфинктера или уретры;

- в офтальмологии в качестве адъюванта при операции по поводу катаракты или при лечении глауком;

- в фармацевтике в качестве геля для высвобождения активных веществ;

- в хирургии для восстановления костной ткани, увеличения объема голосовых связок или для создания хирургических тканей;

- в дерматологии и косметологии для заполнения морщин, маскирования шрамов или увеличения объема губ.

В отношении всех показаний для применения, перечисленных выше, наличие лидокаина в гидрогеле позволяет повысить ощущение комфорта для пациента во время введения и после введения.

Изобретение представляет большой интерес для инъекционных препаратов на основе гиалуроновой кислоты, стерилизованных теплом, совместимых с препаратами, уже продаваемыми на рынке и в состав которых необходимо вводить лидокаин для уменьшения болезненных ощущений во время и после инъекции. Способ по настоящему изобретению, таким образом, обеспечивает возможность предлагать коммерческие препараты с лидокаином, эквивалентные препаратам, которые не содержат лидокаин, в плане концентрации гиалуроновой кислоты и реологических свойств (в частности, модулей G’ и G”), и при этом без изменения структуры гелей и, следовательно, функциональных характеристик этих препаратов.

Способ по настоящему изобретению с добавлением лидокаина, предпочтительно в виде порошка, позволяет варьировать концентрацию анестетика без изменения концентрации гиалуроновой кислоты, при этом возможно введение щелочного агента в более концентрированной форме без изменения реологических свойств указанного гидрогеля.

Таким образом, практикующий врач может использовать на выбор ряд гелей на основе одной и той же концентрации гиалуроновой кислоты: без анестетика, с одной стороны, и с различными концентрациями анестетика, такого как лидокаин, в зависимости от желаемого применения, с другой стороны.

Осуществление изобретения

Изобретение поясняют следующие неограничивающие примеры.

Приготовленные препараты представляют собой гели на основе сшитого гиалуроната натрия (NaHA) в буферном водном растворе (состав: NaCl: 8,0 г/Na₂HPO₄, 12 H₂O: 2,4 г/NaH₂PO₄, 2 H₂O: 0,5 г/1 л воды для инъекционного препарата), содержащие или не содержащие гидрохлорид лидокаина и щелочной агент.

Гиалуронат натрия, используемый для приготовления этих гелей, имеет молекулярную массу, равную 2,5×10⁶ Да или 3,1×10⁶ Да. В качестве сшивающего агента используют бутандиол диглицидиловый эфир (БДДЭ) и используемую степень сшивания определяют следующим образом: масса (БДДЭ)/масса (сухого NaHA).

Введение в гель гидрохлорида лидокаина в виде порошка осуществляют путем добавления необходимого количества соединения (% в пересчете по массе) в гель и перемешивания шпателем в течение 5 минут (для 50 г геля).

Введение щелочного агента в гель осуществляют путем добавления необходимого количества соответствующего соединения (% в пересчете по массе) в виде щелочного водного раствора в гель и перемешивания шпателем в течение 5 минут (для 50 г геля).

Полученные гели помещают в стеклянные шприцы и затем стерилизуют влажным теплом в течение 20 минут при температуре 121°C или в течение 2 минут при температуре 131°C.

Для определения реологических характеристик (в динамическом режиме) используют вискозиметр AR2000 (ТА Instruments) с плоской геометрией 40 мм, воздушным зазором размером 1000 мкм и температурой анализа 25°C.

Пример 1: Демонстрация на основе реологических свойств структурного различия после стерилизации влажным теплом между гелями на основе гиалуроновой кислоты с гидрохлоридом лидокаина и без гидрохлорида лидокаина и с гидрохлоридом лидокаина и гидроксидом натрия.

Пусть А будет гелем на основе сшитого NaHA.

Этот гель получают путем гидратирования гиалуроната натрия с молекулярной массой 2,5×10⁶ Да в 1%-ном по массе водном растворе гидроксида натрия путем добавления сшивающего агента БДДЭ для получения степени сшивания 9%, путем сшивания в течение 2 часов при 50°C и путем диализа геля в течение 24 часов (регенерированная целлюлоза, предел разделения: молярная масса =60 кДа). Гель, полученный таким образом, имеет концентрацию гиалуроната натрия 22,5 мг/мл и рН 7,07.

После перемешивания в течение 10 минут с помощью шпателя гель А, полученный таким образом, разделяют на три фракции равной массы (50 г).

Пусть В будет фракцией №1. В эту фракцию добавляют 0,3% гидрохлорида лидокаина в виде порошка. Гель перемешивают шпателем в течение 5 минут. Теперь значение рН равно 6,81.

Пусть С будет фракцией №2. В эту фракцию добавляют 0,3% гидрохлорида лидокаина в виде порошка и перемешивают шпателем в течение 5 минут. Затем добавляют 275 мкл 1%-ного по массе водного раствора гидроксида натрия и перемешивают шпателем в течение 5 минут. Теперь значение рН равно 7,27.

Пусть D будет фракцией №3. Гель перемешивают шпателем в течение 10 минут. Измеренное значение рН равно 7,07.

Приготовленные гели помещают в стеклянные шприцы и затем стерилизуют теплом (121°C, 20 мин).

Пусть В, С и D будут гелями, полученными на основе фракций В, С и D, соответственно.

Проводят измерение реологических свойств (частотное сканирование - от 0,01 до 100 Гц) для каждого из гелей В, С и D.

Проводят сравнение значений G’ (=модуля упругости), G” (= модуля вязкости) и тангенса δ=G”/G’ при частоте 1 Гц, результаты представлены в таблице 1.

Гели С (по изобретению) и D (эталонный гель без лидокаина) имеют эквивалентные реологические свойства (текучести) в отличие от гелей существующего уровня техники с лидокаином.

Гель В с одним только лидокаином имеет свойства текучести, которые отличны (G’ выше, тангенс 5 меньше) от свойств текучести гелей С и D. Его поведение в тканях во время и после инъекции, таким образом, отлично от поведения эталонного геля D без лидокаина.

Гели С и Д имеют эквивалентные концентрации гиалуроната натрия (гель С был только незначительно разбавлен (порядка 0,5%) из-за добавления раствора гидроксида натрия).

Пример 2: Демонстрация на основе реологических свойств структурного различия после стерилизации влажным теплом между гелями на основе гиалуроновой кислоты с гидрохлоридом лидокаина и без гидрохлорида лидокаина и с гидрохлоридом лидокаина и гидроксидом натрия.

Пусть Е будет гелем на основе сшитого NaHA.

Этот гель получают путем гидратирования гиалуроната натрия с молекулярной массой 2,5×10⁶ Да в 1%-ном по массе растворе гидроксида натрия, путем добавления сшивающего агента БДДЭ для получения степени сшивания 11%, путем сшивания в течение 2 часов при 50°C и путем диализа геля в течение 24 часов (регенерированная целлюлоза, предел разделения: молярная масса =60 кДа). Гель, полученный таким образом, имеет концентрацию гиалуроната натрия 22,7 мг/мл и рН 7,12.

После перемешивания в течение 10 минут с помощью шпателя полученный таким образом гель Е разделяют на три фракции равной массы (50 г).

Пусть F будет фракцией №1. В эту фракцию добавляют 0,3% гидрохлорида лидокаина в виде порошка. Гель перемешивают шпателем в течение 5 минут. Теперь значение рН равно 6,79.

Пусть g будет фракцией №2. В эту фракцию добавляют 0,3% гидрохлорида лидокаина в виде порошка и затем перемешивают шпателем в течение 5 минут. Затем добавляют 138 мкл 2%-ного по массе водного раствора гидроксида натрия и перемешивают шпателем в течение 5 минут. Значение рН равно 7,25.

Пусть Н будет фракцией №3. Гель перемешивают шпателем в течение 10 минут. Измеренное значение рН равно 7,12.

Приготовленные гели помещают в стеклянные шприцы и затем стерилизуют теплом (121°C, 20 мин). Пусть F, g и Н будут гелями, полученными на основе фракций F, g и Н, соответственно.

Проводят измерение реологических свойств (частотное сканирование - от 0,01 до 100 Гц) для каждого из гелей F, g и Н.

Проводят сравнение значений G’ (=модуля упругости), G” (=модуля вязкости) и тангенса δ=G”/G’ при частоте 1 Гц, результаты приведены в таблице 2 ниже.

Следует отметить, что гели g (по изобретению) и Н (эталонный гель без лидокаина) имеют эквивалентные свойства текучести.

Геля F с одним только лидокаином имеет свойства текучести, которые отличаются (G’ выше, тангенс 8 меньше) от реологических свойств гелей g и Н. Его поведение в тканях во время и после инъекции, таким образом, отлично от поведения эталонного геля Н без лидокаина.

Гели g и Н имеют эквивалентные концентрации гиалуроната натрия (гель g был только незначительно разбавлен (порядка 0,3%) вследствие добавления раствора гидроксида натрия).

Сравнительный пример 3: Разбавление геля, полученного в соответствии с известным уровнем техники.

Гель получают в соответствии со способом приготовления, описанным в заявке на патент WO 2010/015901, в соответствии с которым лидокаин добавляют в виде водного раствора.

В 50 мл геля Е из примера 2, имеющего значение рН, равное 7,12, добавляют 32 мкл 1%-ного по массе водного раствора гидроксида натрия и затем перемешивают шпателем в течение 5 минут. Измеренное значение рН равно 7,22.

Также готовят водный раствор гидрохлорида лидокаина. Для этого вводят 1 г гидрохлорйда лидокаина в 10 мл воды для инъекционного препарата и фильтруют этот раствор через фильтр с размером пор 0,2 мкм. Можно видеть, что эта концентрация гидрохлорида лидокаина в растворе близка к пределу насыщения, так как если в раствор добавить больше гидрохлорида лидокаина, как представляется, эта дополнительная порция гидрохлорида лидокаина не сможет раствориться.

Затем вводят 1,72 мл раствора гидрохлорида лидокаина, приготовленного заранее, в 50 мл геля и затем перемешивают шпателем в течение 5 минут (что приводит к увеличению объема геля приблизительно на 3,4%).

Приготовленный гель помещают в стеклянный шприц, а затем стерилизуют влажным теплом (121°C, 20 мин). Можно видеть, что гель прозрачен, не содержит частиц, видимых невооруженным глазом.

Способ приготовления, описанный в заявке на патент WO 2010/015901, таким образом, в частности, позволяет получить гель на основе сшитой гиалуроновой кислоты и лидокаина. Тем не менее, этот способ подразумевает добавление раствора гидрохлорида лидокаина, что приводит к значительно большему увеличению объема геля, чем увеличение объема по настоящему изобретению, в котором предполагается добавление лидокаина гидрохлорида не в виде раствора, а в виде порошка.

Сравнительный пример 4: Наличие белых частиц в геле.

В 50 мл геля Е из примера 2, имеющего рН, равное 7,12, добавляют 32 мкл 1%-ного по массе водного раствора гидроксида натрия и затем перемешивают шпателем в течение 5 минут. Измеренное значение рН равно 7,22.

Затем добавляют 0,3% гидрохлорида лидокаина и перемешивают шпателем в течение 5 минут. Видно, что, в отличие от способа приготовления по настоящему изобретению, добавление гидрохлорида лидокаина в виде порошка после доведения рН до уровня приблизительно 7,2 приводит к появлению в смеси белых частиц лидокаина, которые в дальнейшем не растворяются в геле. Это также показывает, насколько важен порядок введения соединений в гель на основе гиалуроновой кислоты.

Пример 5: Стабильность геля по изобретению - сравнение со стабильным гелем по предшествующему уровню техники.

Гель на основе сшитого NaHA получают путем гидратирования гиалуроната натрия с молекулярной массой 3,1×10⁶ Да в 1%-ном по массе растворе гидроксида натрия, путем добавления сшивающего агента БДДЭ для получения степени сшивания 9,2%, путем сшивания в течение 2 часов при 50°C и путем диализа в течение 24 часов (регенерированная целлюлоза, предел разделения: молярная масса =60 кДа). Гель, полученный таким способом, имеет концентрацию гиалуроната натрия 24,9 мг/мл и рН 7,08.

Затем добавляют 0,3% гидрохлорида лидокаина и перемешивают гель шпателем в течение 5 минут. Измеренное значение рН составляет 6,77.

Наконец, добавляют 144 мкл 2%-ного по массе водного раствора гидроксида натрия и перемешивают шпателем в течение 5 минут. Конечное значение рН составляет 7,26.

Приготовленный таким образом гель помещают в стеклянные шприцы и затем стерилизуют теплом (131°C, 2 мин).

Пусть X будет полученным гелем. Гель X имеет однородный вид, прозрачен, не содержит частиц, видимых невооруженным глазом.

Измеряют рН и осмолярность геля X. Полученные результаты:

- рН=7,23 при температуре 23°C

- осмолярность =316 мОсм/кг

Концентрацию гидрохлорида лидокаина геля X анализируют путем ВЭЖХ (HPLC) в трех различных шприцах для подтверждения однородности активного ингредиента в геле. Для трех испытанных шприцев получено среднее значение 0,29±0,01 мг/мл.

Измеряют реологические свойства геля X (частотное сканирование - от 0,01 до 100 Гц), которые сгруппированы в таблице 3 ниже.

Стабильность геля X во времени затем сравнили с препаратом с лидокаином по предшествующему уровню техники, считающимся стабильным.

Препаратом для сравнения является Juvederm® Ultra 3, коммерческий препарат на основе сшитого NaHA (25 мг/мл) и лидокаина (3 мг/мл, т.е. 0,3% по массе), полученный с помощью способа приготовления (WO 2010/015901), отличного от способа приготовления по настоящему изобретению.

Стабильность обоих препаратов во времени оценивают по реологическим свойствам в t=0, t=3 месяца и t=6 месяцев, при этом препараты хранятся при температуре хранения 40°C. Получены следующие значения G’ (= модуль упругости) при 1 Гц, сгруппированные в таблице 4 ниже:

Оба препарата: Гель X и Juvéderm® Ultra 3 - показывают эквивалентные, зависимые от времени изменения реологических свойств.

Способ по настоящему изобретению, таким образом, позволяет получить гидрогель гиалуроновой кислоты, который характеризуется с реологической точки зрения ухудшением свойств, эквивалентным ухудшению таких свойств гелей по предшествующему уровню техники, которые считаются стабильными во времени.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения инъекционного гидрогеля на основе сшитой гиалуроновой кислоты или одной из ее солей и лидокаина, включающий в себя следующие последовательные этапы: приготовление геля на основе сшитой гиалуроновой кислоты или одной из ее солей; добавление в указанный гель гидрохлорида лидокаина в виде порошка и затем перемешивание; доведение pH добавлением щелочного агента в полученную смесь и гомогенизация с последующей стерилизацией гидрогеля теплом. Также изобретения представлены стерильным инъекционным гидрогелем на основе гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, гидрохлорида лидокаина и щелочного агента, полученным представленными способами и имеющим свойства текучести, эквивалентные свойствам текучести такого же гидрогеля, но не содержащего гидрохлорид лидокаина. Группа изобретений обеспечивает получение концентрации гиалуроновой кислоты и свойств текучести G’ и G” этого геля, содержащего гидрохлорид лидокаина, эквивалентных концентрации и свойствам такого же геля без гидрохлорида лидокаина. 2 н. и 27 з.п. ф-лы, 4 табл., 5 пр.

1. Способ получения инъекционного гидрогеля на основе сшитой гиалуроновой кислоты или одной из ее солей и лидокаина, включающий в себя следующие последовательные этапы:

i) приготовление геля на основе сшитой гиалуроновой кислоты или одной из ее солей,

ii) добавление в указанный гель гидрохлорида лидокаина в виде порошка и затем перемешивание,

iii) доведение рН до значения в диапазоне от 6,5 до 7,6 путем добавления щелочного агента в смесь гель + гидрохлорид лидокаина и гомогенизация всей смеси, обеспечивающие получение гидрогеля, не содержащего взвешенные твердые частицы лидокаина,

iv) стерилизация гидрогеля теплом.

2. Способ по п. 1, в котором концентрация гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, полученная на этапе i), составляет от 1 мг/мл до 50 мг/мл.

3. Способ по п. 2, в котором концентрация гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, полученная на этапе i), составляет от 4 до 40 мг/мл.

4. Способ по п. 3, в котором концентрация гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, полученная на этапе i), составляет от 14 до 35 мг/мл.

5. Способ по п. 1 или 2, в котором молекулярная масса гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, используемых для получения гидрогеля, составляет от 1000 Да до 10×10⁶ Да.

6. Способ по п. 5, в котором молекулярная масса гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, используемых для получения гидрогеля, составляет от 2×10⁵ Да до 5×10⁶ Да.

7. Способ по п. 6, в котором молекулярная масса гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, используемых для получения гидрогеля, составляет от 5×10⁵ Да до 4×10⁶ Да.

8. Способ по п. 1, в котором гиалуроновую кислоту или одну из ее солей сшивают с помощью би- или полифункциональных веществ.

9. Способ по п. 8, в котором би- или полифункциональные вещества выбирают из эпоксидов, эпигалогидринов и дивинилсульфона.

10. Способ по п. 8, в котором степень сшивания гиалуроновой кислоты или одной из ее солей составляет от 0,1% до 25%.

11. Способ по п. 10, в котором степень сшивания гиалуроновой кислоты или одной из ее солей составляет от 0,5% до 15%.

12. Способ по п. 11, в котором степень сшивания гиалуроновой кислоты или одной из ее солей составляет от 1,5% до 14%.

13. Способ по п. 1, в котором концентрация гидрохлорида лидокаина в геле составляет от 0,1 до 50 мг/мл.

14. Способ по п. 13, в котором концентрация гидрохлорида лидокаина в геле составляет от 1 до 30 мг/мл.

15. Способ по п. 14, в котором концентрация гидрохлорида лидокаина в геле составляет от 2 до 20 мг/мл.

16. Способ по п. 1, в котором щелочной агент выбирают из бикарбоната натрия, гидроксида натрия или гидроксида калия.

17. Способ по п. 1, в котором процентная доля разбавления геля после добавления щелочного агента меньше или равна 2,5%.

18. Способ по п. 17, в котором процентная доля разбавления геля после добавления щелочного агента меньше или равна 1,5%.

19. Способ по п. 18, в котором процентная доля разбавления геля после добавления щелочного агента меньше или равна 1%.

20. Способ по п. 1, в котором рН гидрогеля до и после стерилизации составляет от 6,5 до 7,6.

21. Способ по п. 20, в котором рН гидрогеля до и после стерилизации составляет от 6,9 до 7,5.

22. Способ по п. 21, в котором рН гидрогеля до и после стерилизации составляет от 7,0 до 7,4.

23. Способ по п. 22, в котором рН гидрогеля до и после стерилизации составляет от 7,1 до 7,3.

24. Способ по п. 1, в котором стерилизацию гидрогеля осуществляют влажным теплом.

25. Стерильный инъекционный гидрогель на основе гиалуроновой кислоты или одной из ее солей, гидрохлорида лидокаина и щелочного агента, полученный способом по одному из предыдущих пунктов, имеющий свойства текучести, эквивалентные свойствам текучести такого же гидрогеля, но не содержащего гидрохлорид лидокаина.

26. Инъекционный гидрогель по п. 25, применяемый в эстетической медицине или терапевтической медицине.

27. Инъекционный гидрогель по п. 25, применяемый для заполнения или замены биологических тканей, или применяемый для заполнения морщин, ремоделирования лица или тела, маскирования шрамов или увеличения объема губ, или применяемый в методике для регидратации кожи путем мезотерапии.

28. Инъекционный гидрогель по п. 25, применяемый для разделения, замены или заполнения биологической ткани или увеличения объема указанной ткани.

29. Инъекционный гидрогель по п. 25, применяемый:

- в ревматологии в качестве средства замены, временного пополнения синовиальной жидкости,

- в урологии/гинекологии в качестве средства, позволяющего увеличить объем сфинктера или уретры,

- в офтальмологии в качестве адъюванта при операции по поводу катаракты или при лечении глауком,

- в фармацевтике в качестве геля для высвобождения активных веществ или

- в хирургии для восстановления костной ткани, увеличения объема голосовых связок или для создания хирургических тканей.