НАПОЛНИТЕЛЬ С ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТОЙ, ИМЕЮЩИЙ ВЫСОКУЮ ВЯЗКОУПРУГОСТЬ И ВЫСОКУЮ КОГЕЗИЮ Российский патент 2022 года по МПК A61L27/20 A61L27/52 A61K9/00 C08L5/08 A61Q19/08 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Настоящее изобретение заявляет выгоду приоритета на основании корейской патентной заявки № 10-2018-0078989, зарегистрированной 6 июля 2018, и все содержание, раскрытое в соответствующей корейской патентной заявке, включено как часть настоящего описания.

Настоящее изобретение касается наполнителя с гиалуроновой кислотой и, более конкретно, касается наполнителя с гиалуроновой кислотой, который имеет одновременно высокую когезию однофазных наполнителей с гиалуроновой кислотой (ГК) и высокую эластичность двухфазных наполнителей с гиалуроновой кислотой, и способа его получения.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Ткань человеческой кожи поддерживает свою структуру с помощью внеклеточного матрикса, включающего белки, такие как коллаген, эластин и подобные и глюкозаминогликаны, но, когда происходят дефекты мягкой ткани из-за внешнего удара, болезней или старения и т.д., применяют усиление ткани, такое как усиление мягкой ткани, в медицинских и косметических целях. Это усиление выполняют хирургически посредством пластической хирургии или восстанавливают и исправляют ее форму нехирургическим образом путем инъекции биологической ткани или синтетического полимера в данную область, чтобы увеличить и расширить объем мягкой ткани. Затем некоторое вещество, которое является компонентом, аналогичным ткани кожи, впрыскивают в конкретное место, чтобы расширить мягкую ткань, и, тем самым, оно косметически увеличивает объем щек, губ, груди, бедер и т.д., и применяется для коррекции морщин и контура путем уменьшения тонких морщин и глубоких морщин кожи, называется материалом приращения мягкой ткани и обычно называется кожным наполнителем. Кожный наполнитель первого поколения, разработанный в связи с этим наполнителем, включает в себя такие продукты, как зидерм и зипласт, приготовленные путем экстракции животных белков, происходящих из животных, то есть коров или свиней и др., и космодерм или космопласт, использующие человеческий коллаген, и подобные, но сейчас они редко применяются из-за короткой продолжительности действия и неудобства выполнения теста аллергического теста кожи за один месяц до этой процедуры.

Наполнителем второго поколения является наполнитель с гиалуроновой кислотой (далее также обозначается как ´ГК´), и он имеет большую продолжительность действия, чем коллагеновый наполнитель, и состоит из полисахаридов, подобных человеческим компонентам, N-ацетил-D-глюкозамина и D-глюкуроновой кислоты, и, следовательно, имеет меньше побочных эффектов и более легок в применении и удалении, и возможно поддерживать влажность, объем и эластичность кожи путем привлечения воды, и, таким образом, он имеет подходящие преимущества в качестве наполнителя для кожи.

Однако сама гиалуроновая кислота имеет короткий период полураспада только несколько часов в человеческом теле, и поэтому есть ограничение в применении, и, таким образом, выполняли исследования, чтобы увеличить период полураспада (внутреннюю стойкость) путем сшивания. Например, патент США № 4582865 раскрывает производное гиалуроновой кислоты, сшитое с использование дивинилсульфона (ДВС) в качестве сшивающего агента, и ее водородная форма продается под маркой Hyalfrom®, а патент США № 5827937 раскрывает способ приготовления продукта сшивания производного гиалуроновой кислоты с использованием многофункционалного эпоксидного соединения в качестве сшивающего агента, и среди них Restylane®, водородная форма продукта сшивания гиалуроновой кислоты, приготовленная с использованием диглицидилового эфира 1,4-бутандиола (БДДЭ) в качестве сшивающего агента, была одобрена FDА США и доступна повсюду в качестве наполнителя для усиления тканей.

Такой наполнитель со сшитой гиалуроновой кислотой включает в себя наполнитель, состоящий из одной фазы (однофазный ГК наполнитель), и наполнитель, состоящий из двух фаз (двухфазный ГК наполнитель). Однофазный наполнитель с гиалуроновой кислотой готовят, используя гомогенный жидкий гидрогель, содержащий сшитую гиалуроновую кислоту, и, таким образом, он обычно имеет низкую эластичность и высокую когезию. Соответственно, когда однофазный наполнитель с гиалуроновой кислотой впрыскивают в кожу, он вряд ли отходит от места введения, но есть проблемы в том, что впрыснутая форма не сохраняется в течение длительного времени и период сохранения формы составляет только приблизительно 2 месяца после процедуры.

Двухфазный наполнитель с гиалуроновой кислотой готовят перемешиванием частиц сшитой гиалуроновой кислоты, одной или с несшитой гиалуроновой кислотой, до жидкого состояния (необработанная несшитая гиалуроновая кислота (линейная ГК)), и поэтому он обычно имеет высокую эластичность и низкую когезию. Соответственно, когда впрыскивают двухфазный ГК наполнитель, он может сохранять свою форму в течение длительного времени, но есть проблема в том, что существует большая возможность отклонения от места введения. Типичным примером двухфазного ГК наполнителя является упомянутый Restylane® (продукт Galderma).

Таким образом, однофазный ГК наполнитель и двухфазный ГК наполнитель имеют преимущества и недостатки соответственно, и обычно есть пример, в котором указанные наполнители смешивают, чтобы получить все свойства однофазного наполнителя с гиалуроновой кислотой и двухфазного наполнителя с гиалуроновой кислотой, но в этом случае преимущества однофазного наполнителя с гиалуроновой кислотой и двухфазного наполнителя с гиалуроновой кислотой снижаются, и поэтому это не подходит в качестве наполнителя. Таким образом, существует потребность в наполнителе, который может сохранять свою форму в течение длительного времени, имея низкую вероятность отклонения от места введения.

СОДЕРЖАНИЕ

ТЕХНИЧЕСКАЯ ПРОБЛЕМА

Настоящее изобретение предлагается для решения указанных проблем, и целью настоящего изобретения является обеспечить наполнитель, имеющий высокую вязкоупругость и когезию как преимущества однофазных ГК наполнителей и двухфазных ГК наполнителей, то есть наполнитель, который может поддерживать форму в течение длительного времени, менее вероятно уходит от места инъекции и может впрыскиваться в кожу человека для использования для улучшения морщин и формы.

Другой целью настоящего изобретения является обеспечить способ получения такого наполнителя.

ТЕХНИЧЕСКОЕ РЕШЕНИЕ

Настоящее изобретение было сделано, чтобы решить указанные проблемы предшествующего уровня техники, и когда гиалуроновая кислота удовлетворяет таким условиям, как конкретная молекулярная масса и степень сшивания, она одновременно имеет высокую когезию однофазного наполнителя и высокую вязкоупругость двухфазного наполнителя, и соответственно доказано, что ее легко делать в желаемой форме, и она может сохраняться в течение желаемого времени при впрыскивании в кожу, выполняя, тем самым, настоящее изобретение.

Соответственно, в одном аспекте настоящее изобретение касается наполнителя с гиалуроновой кислотой, который имеет высокую вязко упругость и когезию, тем самым показывая свойства и однофазных наполнителей, и двухфазных наполнителей, шприца, заполненного данным наполнителем, биоматериала для наращивания мягкой ткани, содержащего данный наполнитель, и способа борьбы с морщинами, содержащего его инъекцию в биологическую ткань.

Гиалуроновая кислота (далее также обозначается как ´ГК´), содержащаяся в наполнителе настоящего изобретения, представляет собой биополимерный материал, в котором повторяющиеся звенья, состоящие из N-ацетил-D-глюкозамина и D-глюкуроновой кислоты, линейно соединяются, и она значительно присутствует в стекловидном теле глаза, синовиальной жидкости суставов, петушиных гребнях и подобном, и она широко применяется в медицинских средствах, таких как средства глазной хирургии, средства улучшения функции суставов, материалы для доставки лекарств, глазные капли, средства от морщин или косметические средства, так как она имеет прекрасную биосовместимость. Более конкретно, гиалуроновая кислота, содержащаяся в наполнителе настоящего изобретения, может означать ее соль в дополнение к гиалуроновой кислоте. Соль гиалуроновой кислоты включает в себя, например, неорганические соли, такие как натриевая соль гиалуроновой кислоты, калиевая соль гиалуроновой кислоты, кальциевая соль гиалуроновой кислоты, магниевая соль гиалуроновой кислоты, цинковая соль гиалуроновой кислоты, кобальтовая соль гиалуроновой кислоты и подобные, и органические соли, такие как тетрабутиламмоний гиалуроновая кислота, и так далее, но не ограничиваясь этим.

Кроме того, предпочтительно, гиалуроновая кислота или ее соли могут быть сшиты с помощью надлежащего сшивающего агента.

Сшитое производное гиалуроновой кислоты может быть получено путем сшивания самой гиалуроновой кислоты или ее солей с использованием сшивающего агента. Для сшивания может быть использован способ, использующий сшивающий агент в щелочном водном растворе. Данный щелочной водный раствор включает водный раствор NаОН, КОН, предпочтительно NаОН, но не ограничивается этим. В случае водного раствора NаОН, он может применяться в концентрации от 0,1Н до 0,5Н. Сшитая гиалуроновая кислота, содержащаяся в наполнителе настоящего изобретения, особенно демонстрирует высокую вязкоупругость и когезию, даже когда сшивающий агент используется при низкой концентрации и в небольшом количестве. Концентрация сшивающего агента может быть от 1 до 10 мол.% на 1 моль N-ацетил-D-глюкозамина и D-глюкуроновой кислоты, которые являются звеном гиалуроновой кислоты или ее соли.

Сшивающий агент представляет собой соединение, содержащее две или больше эпоксидные функциональные группы, и, в качестве предпочтительного примера, он включает в себя диглицидиловый эфир бутандиола (диглицидиловый эфир 1,4-бутандиола: БДДЭ), диглицидиловый эфир этиленгликоля (ЭГДГЭ), диглицидиловый эфир гександиола (диглицидиловый эфир 1,6-гександиола), диглицидиловый эфир пропиленгликоля, диглицидиловый эфир полипропиленгликоля, диглицидиловый эфир политетраметиленгликоля, диглицидиловый эфир неопентилгликоля, полиглицидиловый эфир полиглицерина, полиглицидиловый эфир диглицерина, полиглицидиловый эфир глицерина, полиглицидиловый эфир триметилпропана, бисэпоксипропоксиэтилен (1,2-(бис(2,3-эпоксипропокси)этилен), полиглицидиловый эфир пентаэритритола и полиглицидиловый эфир сорбитола, и подобные, и среди них особенно предпочтителен биэпоксидный глицидиловый эфир 1,4-бутандиола с точки зрения низкой токсичности.

Выражение "степень модификации (МОС)" означает здесь степень модификации гиалуроновой кислоты, вычисленную в виде численной величины (n), показывающей число молей сшивающего агента (например, БДДЭ), связанного со всей молекулой гиалуроновой кислоты, относительно числа молей N-ацетил-D-глюкозамина в звене гиалуроновой кислоты (N-ацетил-D-глюкозамин (GlсNАс) + D-глюкуроновая кислота), и она может быть выражена с помощью следующего уравнения 1.

[Уравнение 1]

Степень модификации=полное число молей сшивающего агента/полное число молей N-ацетил-D-глюкозамина

Настоящее изобретение, в частности, отличается тем, что такая степень модификации находится в интервале от 1 до 7 , предпочтительно в интервале от 3 до 5 путем сшивания с помощью указанного сшивающего агента.

Кроме того, выражение "отношение сшивания (ОСш)" означает здесь отношение числа молей сшитого сшивающего агента к числу молей всего сшивающего агента, и может быть представлено с помощью следующего уравнения 2.

[Уравнение 2]

Отношение сшивания=число молей сшитого сшивающего агента/число молей всего сшивающего агента

Настоящее изобретение отличается, в частности, тем, что имеет диапазон сшивания от 0,1 до 0,2, предпочтительно от 0,14 до 0,17. Предпочтительно, наполнитель с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению имеет характеристики, синергетически показывающие свойства одновременно однофазных и двухфазных наполнителей посредством того, что имеет указанные интервалы МОС и ОСш.

Молекулярная масса сшитой гиалуроновой кислоты может быть 2500000 Да или больше, предпочтительно от 2500000 до 3500000 Да.

Применяемый здесь термин "эластичность" означает свойство твердого тела при приложении силы к объекту, то есть свойство изменения формы при приложении силы, но с возвратом к исходной форме при удалении силы. Эта эластичность выражается модулем сохранения упругой деформации (далее модель сохранения) (G´: модуль упругости) и ее единицей является паскаль (Па). Кроме того, применяемый здесь термин вязкость означает свойство жидкости, то есть величину, которая описывает сопротивление жидкости течению. Эта вязкость может выражаться модулем потерь (G": модуль вязкости) и ее единицей является паскаль (Па).

Применяемый здесь термин вязкоупругость означает наличие одновременно упругой деформации и вязкости при приложении силы к объекту, и сшитые гидрогели гиалуроновой кислоты, содержащиеся в наполнителе настоящего изобретения, демонстрируют и вязкость, и эластичность, и поэтому они имеют вязкоупругость.

Применяемый здесь термин когезия означает притяжение (адгезию), действующее между частицами наполнителя, и она может заставлять частицы наполнителя агломерироваться вместе. Чем выше когезия, тем больше сила, которая может поддерживать ткань, в которую вводят наполнитель. Обычно когезию можно косвенно измерять с помощью теста сжатия и ее измеряют как сопротивление сжатию с определенной скоростью после загрузки на реометр, и ее единицей является гс (грамм-сила).

Обычно наполнитель с гиалуроновой кислотой в однофазной форме представляет собой когезивный гель, и поэтому он имеет высокую когезию и низкую вязкоупругость. Пример включает в себя Juvederm® от Allergan. Кроме того, наполнитель с гиалуроновой кислотой в двухфазной форме имеет форму частиц, и поэтому он отличается высокой вязкоупругостью и низкой когезией. Примеры включают Resyrane® от Garderma.

Как описано выше, наполнитель с гиалуроновой кислотой в однофазной форме и наполнитель с гиалуроновой кислотой в двухфазной форме имеют соответствующие преимущества и недостатки.

Наполнитель с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению имеет высокую вязкоупругость и когезию и таким образом, отличается тем, что имеет одновременно свойства однофазных наполнителей и свойства двухфазных наполнителей. Предпочтительно, наполнитель с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению демонстрирует комплексную вязкость (вязкоупругость) 6х10⁴ или больше, предпочтительно от 60000 до 130000 сПа, при угловой скорости 1 Гц, когда измеряется реометром, и демонстрирует модуль сохранения G´ 400 Па или больше, предпочтительно от 400 до 800 Па, и демонстрирует когезию 30 гс, предпочтительно от 30 до 60 гс.

Кроме того, частица гиалуроновой кислоты, предпочтительно частица сшитой гиалуроновой кислоты, в наполнителе с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению может иметь различные формы, но предпочтительно она может быть сферической формы. Кроме того, средний диаметр этой частицы может быть от 300 до 400 мкм.

В предпочтительном аспекте наполнитель с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению может содержать гиалуроновую кислоту от 1 до 3 масс.% в расчете на полную массу наполнителя. Кроме того, наполнитель с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать воду, анестетик или их комбинацию в добавление к гиалуроновой кислоте.

Анестетик содержит один или несколько типов анестетиков, предпочтительно местных анестетиков, известных в данной области, и концентрация одного или нескольких анестетиков является эффективным количеством для облегчения симптомов, возникающих при впрыскивании композиции. Пример анестетиков может быть выбран из группы, состоящей из амбукаина, амоланона, беноксината, бензокаина, бетоксикаина, бифенамина, бупивакаина, бутакаина, бутамбена, бутаниликаина, бутетамина, бутоксикаина, картикаина, хлоропрокаина, кокаэтилена, кокаина, циклометикаина, дибукаина, диметисокуина, диметокаина, диперодона, дициклонина, экгонидина, экгонина, этилхлорида, этидокаина, бета-эукаина, эупроцина, феналсомина, формокаина, гексилкаина, гидрокситетракаина, изобутил п-аминобензоата, мезилата лейцинокаина, левоксадрола, лидокаина, мепивакаина, меприлкаина, метабутоксикаина, метилхлорида, миртекаина, наепаина, октакаина, ортокаина, оксетазаина, паретоксикаина, фенакаина, фенола, пиперокаина, пиридокаина, полидоканола, прамоксина, прилокаина, прокаина, пропанокаина, пропаракаина, пропоксикаина, пседокаина, пиррокаина, ропивакаина, салицилового спирта, тетракаина, толикаина, тримекаина, золамина и их солей. В одном варианте осуществления анестетик может быть лидокаином, например, в форме гидрохлорида лидокаина.

Для наполнителя с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению концентрация анестетика, содержащегося в наполнителе, может быть от приблизительно 0,1 масс.% до приблизительно 1,0 масс.% в расчете на полную массу наполнителя, например, от приблизительно 0,2 масс.% до приблизительно 0,5 масс.% композиции.

Концентрация анестетика в описанном здесь наполнителе может быть терапевтически эффективной, и это означает концентрацию, которая безвредна для пациента и подходит для обеспечения преимуществ с точки зрения удобства процедур и расслабления пациентов.

Кроме того, наполнитель согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать буферный раствор, и данный буферный раствор может использовать что-то, используемое для приготовления гидрогелей гиалуроновой кислоты, без ограничения. Предпочтительным примером буферного растора может быть буферный раствор, содержащий один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из лимонной кислоты, моногидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия, уксусной кислоты, диэтилбарбитуровой кислоты, ацетата натрия, ТАРS (трис(гидроксиметил)метиламино)пропансульфоновой кислоты, бицина (2-бис(2-гидроксиэтил)амино)уксусная кислота), трис (трис(гидроксиметил)амино метан), трицина (N-(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил)глицин), НЕРЕS (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота), ТЕS (2-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]метансульфоновая кислота) и РIРЕS (пиперазин-N, N´-бис(2-этансульфоновая кислота), но не ограничивается этим. Содержание вышеуказанных компонентов, содержащихся в буферном растворе, может подстраиваться надлежащим образом, но предпочтительно они могут содержаться в концентрации от 0,3 до 2,0 г/л в расчете на буферный раствор.

Кроме того, наполнитель согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать изотонический агент, и этот изотонический агент может использоваться без ограничений, пока он применяется для приготовления гидрогелей гиалуроновой кислоты. В качестве предпочтительного изотонического агента может применяться хлорид натрия, но не ограничиваясь этим. Содержание изотонического агента можно регулировать надлежащим образом, если необходимо, и, например, он может содержать в количестве от 7,0 до 9,0 г/л в расчете на буферный раствор, но не ограничиваясь этим.

В одном примере согласно настоящему изобретению использовали буферный раствор, содержащий хлорид натрия, моногидрофосфат натрия и дигидрофосфат натрия в воде для инъекции.

В качестве дополнительного аспекта, композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать допустимые компоненты, которые могут содержаться при приготовлении наполнителя в дополнение к указанным компонентам.

Кроме того, она отличается тем, что остаточный сшивающий агент в наполнителе с гиалуроновой кислотой, имеющем высокую вязкоупругость и когезию настоящего изобретения, редко содержится, и остаточный сшивающий агент предпочтительно составляет 0,5 ч/млн или меньше, что является пределом измерения.

Этот наполнитель с гиалуроновой кислотой, имеющий высокую вязкоупругость и когезию согласно настоящему изобретению, может успешно применяться в косметических или терапевтических целях благодаря данным исключительным эластичным свойствам и когезии. В качестве конкретного примера, этот наполнитель с гиалуроновой кислотой может быть использован для наполнения биологической ткани, борьбы с морщинами путем заполнения морщин, исправления лица, или восстановления или увеличения объема мягкой ткани (контурной пластики), такой как губы, нос, бедра, щеки или грудь и подобное, в качестве биоматериала для приращения мягкой ткани. Наполнитель с гиалуроновой кислотой может назначаться в надлежащей форме, подходящей для такого применения, и предпочтительно он может быть инъекцией.

В другом аспекте настоящее изобретение касается способа получения вышеупомянутого наполнителя с гиалуроновой кислотой, имеющего высокую вязкоупругость и когезию, включающего следующие стадии:

(а) получения гидрогелей сшитой гиалуроновой кислоты путем добавления гиалуроновой кислоты или ее соли, сшивающего агента в щелочной водный раствор, перемешивания и затем реакции;

(b) разрезание гидрогелей гиалуроновой кислоты, полученных на стадии (а);

(с) приготовление буферного раствора;

(d) промывка и набухание гидрогелей гиалуроновой кислоты, разрезанных на стадии (b), с использованием буферного раствора, полученного на стадии (с);

(е) измельчение гидрогелей гиалуроновой кислоты, промытых и разбухших на стадии (d); и

(f) заполнение гидрогелем, полученным на стадии (е), шприца и затем стерилизация.

Стадия (а) представляет собой стадию получения гидрогелей сшитой гиалуроновой кислоты путем реакции сшивания гиалуроновой кислоты или ее соли в щелочном водном растворе с использованием сшивающего агента, и то, что касается гиалуроновой кислоты или ее соли, сшивающего агента и сшитого гидрогеля гиалуроновой кислоты, применяется к упомянутому в наполнителе с гиалуроновой кислотой.

Щелочной водный раствор может быть любым, известным как щелочной водный раствор, подходящим для приготовления гидрогелей гиалуроновой кислоты, без ограничения и, например, это может быть NаОН, КОН, NаНСО₃, LiОН или их комбинация, и предпочтительно это может быть NаОН. Концентрация этого щелочного водного раствора может быть от 0,1 до 0,5 Н, но не ограничивается этим. Наиболее предпочтительно, она может быть 0,25 Н. Было доказано, что гидрогели гиалуроновой кислоты наполнителя согласно настоящему изобретению имели самые лучшие физические свойства после сшивания при основности 0,25 Н NаОН.

Кроме того, концентрация гиалуроновой кислоты или ее соли представляет собой массовую долю гиалуроновой кислоты или ее соли в расчете на полную массу смеси гиалуроновой кислоты или ее соли и щелочного водного раствора, и она может быть от 10 до 25 масс.%, а концентрация сшивающего агента составляет от 1 до 10 мол.% в расчете на 1 моль добавленной гиалуроновой кислоты или ее соли. Когда сшивающий агент применяют при высокой концентрации сверх указанного интервала, получается наполнитель с очень высокой эластичностью, а когда концентрация меньше, чем указанный интервал, эластичность является очень низкой и, следовательно, невозможно продемонстрировать надлежащую вязкоупругость. Более конкретно, стадию (а) можно выполнять путем смешения и перемешивания гиалуроновой кислоты или ее соли, и сшивающий агент и щелочной водный раствор смешивают равномерно. Сшивание можно выполнять при комнатной температуре или больше, предпочтительно в интервале температур от 25 до 40°С, в течение от 15 до 22 часов.

Процесс разрезания на стадии (b) может использовать различные известные способы разрезания гидрогелей гиалуроновой кислоты. В одном примере приготовленный сшитый гель после реакции получают в форме лепешки, и ее можно разделить на полумесяцы, используя такой резак, как соломорезка и подобные, и, например, ее можно делить на шесть частей. Затем, процесс резки можно выполнять путем прохождения через гель (предпочтительно 2 раза или больше), разделенный как указано выше, предварительного измельчителя, имеющего постоянные интервалы лезвий.

Стадия (с) представляет собой стадию получения буферного раствора, используемого для промывки и набухания сшитых гидрогелей гиалуроновой кислоты, разрезанных на стадии (b), и буферный раствор может быть приготовлен с помощью известных способов получения буферного раствора. Кроме того, буферный раствор может дополнительно содержать анестетик. В одном конкретном варианте осуществления настоящего изобретения буферный раствор готовили растворением гидратов моногидрофосфата натрия, гидратов дигидрофосфата натрия, хлорида натрия и гидрохлорида лидокаина в буферном баке, наполненном водой для инъекции.

Буферный раствор может применяться без ограничения, пока он используется для приготовления гидрогелей гиалуроновой кислоты. Примером этого предпочтительного буферного раствора может быть буферный раствор, содержащий один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из лимонной кислоты, моногидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия, уксусной кислоты, диэтилбарбитуровой кислоты, ацетата натрия, ТАРS (трис(гидроксиметил)метиламино)пропансульфоновой кислоты, бицина (2-бис(2-гидроксиэтил)амино)уксусная кислота), трис (трис(гидроксиметил)амино метан), трицина (N-(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил)глицин), НЕРЕS (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота), ТЕS (2-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]метансульфоновая кислота) и РIРЕS (пиперазин-N, N´-бис(2-этансульфоновая кислота), но не ограничивается этим.

Стадия (d) представляет собой стадию промывки и набухания сшитых гидрогелей гиалуроновой кислоты, измельченных на стадии (b), буферным раствором, приготовленным на стадии (с), и эта стадия (d) может повторяться один или два раза или больше. После завершения промывки и набухания промывочный раствор можно удалять.

Стадия (е) представляет собой стадию измельчения промытого и набухшего гидрогеля, и это измельчение можно выполнять с помощью различных способов измельчения, но предпочтительно это может быть экструзионное измельчение.

Кроме того, после стадии (е), для заполнения приготовленным гидрогелем шприца и стерилизации, можно использовать известные способы заполнения и стерилизации. Например, в случае стерилизации, можно использовать автоклав или подобное, но не ограничиваясь этим, и способы, используемые для стерилизации наполнителя, могут быть выбраны и использованы надлежащим образом.

ПРЕИМУЩЕСТВЕННЫЕ ЭФФЕКТЫ

Наполнитель согласно настоящему изобретению имеет следующие эффекты. Во-первых, он может быть полезен в качестве наполнителя, имеющего все преимущества однофазных наполнителей с гиалуроновой кислотой и двухфазных наполнителей с гиалуроновой кислотой, то есть наполнитель для увеличения восстановления или объема мягких тканей, таких как щеки, губы, грудь, бедра и подобное, и улучшения морщин путем снижения тонких морщин и глубоких морщин кожи или коррекции контура, так как он демонстрирует высокую вязкоупругость и когезию и, тем самым, он может поддерживать форму в течение длительного времени, менее вероятно отклоняясь от места инъекции.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг.1 представляет собой график, показывающий результаты измерения модуля сохранения и сопротивления сжатию наполнителей с гиалуроновой кислотой согласно примерам 1 и 2 м сравнительным примерам 1-6.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно посредством примеров. Однако эти примеры предназначены иллюстрировать настоящее изобретение, и объем настоящего изобретения не ограничивается этими примерами.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Приготовление наполнителя с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению.

Для получения наполнителя с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению выполняли следующий способ.

Взвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, гидроксид натрия и БДДЭ (диглицидиловый эфир 1,4-бутандиола), имеющий молекулярную массу от 2,5 МДа до 3,5 МДа. Концентрация натриевой соли гиалуроновой кислоты во время реакции была 15 масс.%, а мол.% БДДЭ была 4 мол.% на 1 моль добавленной натриевой соли гиалуроновой кислоты (а именно, N-ацетил-D-глюкозамина и D-глюкуроновой кислоты). Отдельно готовили водный раствор гидроксида натрия с концентрацией 0,25 Н и фильтровали. Взвешенные натриевую соль гиалуроновой кислоты, 0,25 Н водный раствор гидроксида натрия и БДДЭ (диглицидиловый эфир 1,4-бутандиола) добавляли в контейнер смесителя и равномерно перемешивали, и этот контейнер смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой, и реакцию сшивания выполняли при температуре 30°С в течение ночи. Затем сшитые гидрогели гиалуроновой кислоты, в которых завершилась реакция, предварительно измельчали. Параллельно готовили буферный раствор растворением солей и анестетика в буферном баке, заполненном водой для инъекций, с концентрациями гидратов моногидрофосфата натрия (12 гидратов) 1,26 г/л, гидратов дигидрофосфата натрия (моногидраты) 0,46 г/л, хлорида натрия 7 г/л и гидрохлорина лидокаина 3 г/л.

Часть буферного раствора рассматривали как первичный буферный раствор, и ее переносили в промывочный бак через 0,22 мкм фильтр, и предварительно измельченный гель гиалуроновой кислоты, приготовленный ранее, переносили в промывочный бак, заполненный первичным буферным раствором и затем перемешивали для первичной промывки и набухания геля гиалуроновой кислоты, и затем, когда набухание завершалось, промывочный раствор удаляли. Потом вторичный буферный раствор переносили в промывочный бак через 0,22 мкм фильтр и перемешивали, вторично выполняя промывку и набухание геля гиалуроновой кислоты. Когда промывка и набухание завершались, промывочный раствор удаляли. Затем третичный буферный раствор переносили в промывочный бак через 0,22 мкм фильтр и перемешивали, в третий раз выполняя промывку и набухание геля гиалуроновой кислоты. Промывочный раствор удаляли, как только завершались промывка и набухание.

После завершения третьей промывки и набухания проверяли, находится ли рН промывочного раствора в нейтральном диапазоне, и после разрезания геля гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывку и набухание, его переносили в бак экструдера и взвешивали, достигая желаемой массы геля, буферный раствор добавляли, чтобы корректировать первичное содержание. Когда завершали исправление первичного содержания, гель гиалуроновой кислоты экструдировали и измельчали в баке экструдера. Затем измельченный гель гиалуроновой кислоты переносили в стерильный бак и гомогенизировали, и затем содержание измеряли и добавляли буферный раствор, чтобы выполнить коррекцию вторичного содержания. Гель гиалуроновой кислоты, в котором выполнили коррекцию содержания, нагревали до температуры 121°С или больше на 1 минуту или больше, и гель гиалуроновой кислоты перед заполнением подвергали декомпрессии при перемешивании, устраняя насыщение. Затем гель гиалуроновой кислоты в фиксированном количестве вакуумировали/заполняли в каждый шприц и одновременно запечатывали резиновой пробкой. Заполненные шприцы стерилизовали паром в конечном стерилизаторе при температуре 121°С или больше в течение 8 минут или больше.

Пример 2: Получение наполнителя с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению

Для получения наполнителя с гиалуроновой кислотой согласно настоящему изобретению выполняли следующий способ.

Взвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, гидроксид натрия и БДДЭ (диглицидиловый эфир 1,4-бутандиола), имеющий молекулярную массу от 2,5 МДа до 3,5 МДа. Концентрация натриевой соли гиалуроновой кислоты во время реакции была 16 масс.%, а мол.% БДДЭ была 4 мол.% на 1 моль добавленной натриевой соли гиалуроновой кислоты (а именно, N-ацетил-D-глюкозамина и D-глюкуроновой кислоты). Отдельно готовили водный раствор гидроксида натрия с концентрацией 0,25 Н и фильтровали. Взвешенные натриевую соль гиалуроновой кислоты, 0,25 Н водный раствор гидроксида натрия и БДДЭ (диглицидиловый эфир 1,4-бутандиола) добавляли в контейнер смесителя и равномерно перемешивали, и этот контейнер смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой, и реакцию сшивания выполняли при температуре 30°С в течение ночи. Затем сшитые гидрогели гиалуроновой кислоты, в которых завершилась реакция, предварительно измельчали. Параллельно готовили буферный раствор растворением солей и анестетика в буферном баке, заполненном водой для инъекций, с концентрациями гидратов моногидрофосфата натрия (12 гидратов) 1,26 г/л, гидратов дигидрофосфата натрия (моногидраты) 0,46 г/л, хлорида натрия 7 г/л и гидрохлорина лидокаина 3 г/л.

Часть буферного раствора рассматривали как первичный буферный раствор, и ее переносили в промывочный бак через 0,22 мкм фильтр, и предварительно разрезанный гель гиалуроновой кислоты, приготовленный ранее, переносили в промывочный бак, заполненный первичным буферным раствором и затем перемешивали для первичной промывки и набухания геля гиалуроновой кислоты, и затем, когда набухание завершалось, промывочный раствор удаляли. Потом вторичный буферный раствор переносили в промывочный бак через 0,22 мкм фильтр и перемешивали, вторично выполняя промывку и набухание геля гиалуроновой кислоты. Когда промывка и набухание завершались, промывочный раствор удаляли. Затем третичный буферный раствор переносили в промывочный бак через 0,22 мкм фильтр и перемешивали, в третий раз выполняя промывку и набухание геля гиалуроновой кислоты. Промывочный раствор удаляли, как только завершались промывка и набухание.

После завершения третьей промывки и набухания проверяли, находится ли рН промывочного раствора в нейтральном диапазоне, и после измельчения геля гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывку и набухание, его переносили в бак экструдера и взвешивали, достигая желаемой массы геля, добавляли буферный раствор, чтобы корректировать первичное содержание. Когда завершали исправление первичного содержания, гель гиалуроновой кислоты экструдировали и измельчали в баке экструдера. Затем измельченный гель гиалуроновой кислоты переносили в стерильный бак и гомогенизировали, и затем содержание измеряли и добавляли буферный раствор, чтобы выполнить коррекцию вторичного содержания. Гель гиалуроновой кислоты, в котором выполнили коррекцию содержания, нагревали до температуры 121°С или больше на 1 минуту или больше, и гель гиалуроновой кислоты перед заполнением подвергали декомпрессии при перемешивании, устраняя насыщение. Затем гель гиалуроновой кислоты в фиксированном количестве вакуумировали/заполняли в каждый шприц и одновременно запечатывали резиновой пробкой. Заполненные шприцы стерилизовали паром в конечном стерилизаторе при температуре 121°С или больше в течение 10 минут или больше.

Экспериментальный пример 1: Исследование вязкоупругих свойств наполнителя с гиалуроновой кислотой, полученного с помощью настоящего изобретения

Для исследования реологических свойств приготовленных примеров 1 и 2 выполняли анализ, используя реометр. Для сравнения с наполнителем настоящего изобретения также анализировали вязкоупругие свойства коммерчески доступных наполнителей и сравнивали. Коммерчески доступные наполнители в качестве сравнительных примеров и условия анализа были следующие.

<Сравнительные примеры>

- Сравнительный пример 1: Belotero Intense лидокаин

- Сравнительный пример 2: Belotero |Volume лидокаин

- Сравнительный пример 3: Stylage L лидокаин

- Сравнительный пример 4: Stylage XL лидокаин

- Сравнительный пример 5: Juvederm Volift c лидокаином

- Сравнительный пример 6: Juvederm Voluma c лидокаином

<Условия анализа>

Условия анализа колебательного и вращательного реометра

В случае теста модуля сохранения упругой деформации (G') и комплексной вязкости (ƞ*)

(1) Тестовое оборудование: реометр (Anton Paar Ltd., MCR301)

(2) Частота: 1 Гц

(3) Температура: 25°С

(4) Деформация: 4%

(5) Геометрия измерения: 25 мм пластина

(9) Промежуток измерения: 1,0 мм

В случае сопротивления при сжатии (сила сжатия)

(1) Тестовое оборудование: реометр (Anton Paar Ltd., MCR301)

(2) Промежуток: Начальное положение: 2,5 мм, конечное положение: 0,9 мм

(3) Скорость: 0,8 мм/мин

(4) Температура: 25°С

(5) Геометрия измерения: 25 мм пластина

(9) Положение промежутка при измерении нормальной силы: 1,5 мм

В данных условиях анализа, полученные величины модуля сохранения упругой деформации (G'), комплексной вязкости (ƞ*) и сопротивления при сжатии (сила сжатия) частотой показаны в таблице 1.

Таблица 1

Пример/
Сравнительный пример Настоящее изобретения Belotero Stylage Juvederm Пример 1 Пример 2 Сравнительный пример 1
Belotero Intense лидокаин Сравнительный пример 2
Belotero Volume лидокаин Сравнительный пример 3
Stylage L лидокаин Сравнительный пример 4
Stylage XL лидокаин Сравнительный пример 5
Juvederm Volift с лидокаином Сравнительный пример 6
Juvederm Voluma с лидокаином Концентрация
(мг/мл) 20 20 25,5 26 24 26 17,5 20 Модуль сохранения(Па, 1 Гц) 448 707 149 280 225 264 314 310 Комплексная вязкость
(x10^4 cПа, 1 Гц) 7,18 11,3 2,54 4,57 3,65 4,28 5,08 4,97 Сила сжатия (гс) 36 44 71 70 55 65 20 24 Исправленный по концентрации модуль сохранения(Па, 1 Гц) (модуль сохранения*(20/концентрация образца)) 448 707 117 215 188 203 359 310 Исправленная по концентрации комплексная вязкость (х10⁴ сПа, 1 Гц) (комплексная вязкость*(20/концентрация образца)) 7,18 11,30 1,99 3,52 3,04 3,29 5,81 4,97 Исправленная по концентрации сила сжатия (гс) (сила сжатия*(20/концентрация образца)) 36 44 56 54 46 50 23 24

Как подтверждается таблице 1, установлено, что примеры 1 и 2 согласно настоящему изобретению демонстрируют прекрасную вязкоупругость по сравнению со сравнительными примерами 1-6. Кроме того, что касается когезии, хотя они демонстрируют одновременно свойства однофазных наполнителей и двухфазных наполнителей, они показывают лучшую силу сжатия, чем однофазные наполнители, сравнительные примеры 5 и 6. Кроме того, рассматривая вместе вязкоупругость и когезию, можно видеть, что примеры 1 и 2 согласно настоящему изобретению показывают прекрасные физические свойства по сравнению со сравнительными примерами 1-6.

Экспериментальный пример 2: Анализ размера частиц гидрогелей гиалуроновой кислоты согласно настоящему изобретению

Чтобы подтвердить размер частиц гидрогелей гиалуроновой кислоты из примеров 1 и 2 и сравнительных примеров 1-6 и распределение, выполняли следующий тест. Результаты этого теста показаны в таблице 2.

<Условия анализа>

Условия анализа лазерного дифракционного анализатора размера частиц

(1) Тестовое оборудование: лазерный дифракционный анализатор размера частиц (Malvern Ltd., Mastersizer 3000)

(2) Диспергатор: 0,9% раствор NаСl

(3) Мешалка об/мин: 1000

(4) Лазерное затемнение: 5-25%

Таблица 2

Пример/
Сравнительный пример Настоящее изобретения Belotero Stylage Juvederm Пример 1 Пример 2 Сравнительный пример 1
Belotero Intense лидокаин Сравнительный пример 2
Belotero Volume лидокаин Сравнительный пример 3
Stylage L лидокаин Сравнительный пример 4
Stylage XL лидокаин Сравнительный пример 5
Juvederm Volift с лидокаином Сравнительный пример 6
Juvederm Voluma с лидокаином Диаметр частиц, Dv(50) (мкм) 362 343 571 469 375 358 407 408

Экспериментальный пример 3: Анализ степени модификации гидрогелей гиалуроновой кислоты согласно настоящему изобретению

Чтобы подтвердить степень модификации гидрогелей гиалуроновой кислоты из примеров 1 и 2 и сравнительных примеров 1-6, выполняли тестирование в следующих условиях. Результаты этого теста показаны в таблице 3.

<Условия анализа>

Условия анализа ядерного магнитного резонанса

(1) Тестовое оборудование: ФТ-ЯМР система (Jeol Ltd., ECA500/ECZ400S),

(2) Импульс: 30°

(3) Сканы: 512

(4) Время релаксации (задержки): 5 с

(5) Температура: 25°С

Таблица 3

Пример/
Сравнительный пример Настоящее изобретения Belotero Stylage Juvederm Пример 1 Пример 2 Сравнительный пример 1
Belotero Intense лидокаин Сравнительный пример 2
Belotero Volume лидокаин Сравнительный пример 3
Stylage L лидокаин Сравнительный пример 4
Stylage XL лидокаин Сравнительный пример 5
Juvederm Volift с лидокаином Сравнительный пример 6
Juvederm Voluma с лидокаином Степень модификации (%) 3,3 3,5 8,5 12,8 7,8 7,8 6,3 6

Как можно видеть в таблице 3, наполнители с гиалуроновой кислотой из примеров 1 и 2 согласно настоящему изобретению демонстрируют низкую степень модификации несмотря на прекрасные физические свойства, как показано ранее, и это значит, что они очень биосовместимы в качестве наполнителя, так как наполнитель, показывающий прекрасные физические свойства, может быть обеспечен даже при использовании небольшого количества сшивающего агента во время получения наполнителя.

Группа изобретений относится к наполнителю с гиалуроновой кислотой. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты содержит гиалуроновую кислоту или ее соль, имеет комплексную вязкость 6х10⁴ сПа или больше при угловой скорости 1 Гц, демонстрирует модуль сохранения упругой деформации 400 Па или больше, имеет когезию 30 гс или больше, где гиалуроновая кислота или ее соль являются сшитыми, где сшитая гиалуроновая кислота является сшитой, используя гиалуроновую кислоту или ее соль с молекулярной массой 2500000 Да или более, где отношение число молей сшитого сшивающего агента/число молей всего сшивающего агента составляет от 0,1 до 0,2, и где наполнитель имеет свойства и однофазных, и двухфазных наполнителей. Также раскрыты другой вариант наполнителя для борьбы с морщинами, способ его приготовления, заполненный шприц, биоматериал для увеличения мягкой ткани. Группа изобретений обеспечивает высокую вязкоупругость и когезию наполнителя, который поддерживает форму в течение длительного времени. 7 н. и 15 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 3 пр.

1. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты, который содержит гиалуроновую кислоту или ее соль и имеет комплексную вязкость 6х10⁴ сПа или больше при угловой скорости 1 Гц, когда измеряют реометром, и демонстрирует модуль сохранения упругой деформации G´ 400 Па или больше, и имеет когезию 30 гс или больше,

где гиалуроновая кислота или ее соль являются сшитыми,

где сшитая гиалуроновая кислота является сшитой, используя гиалуроновую кислоту или ее соль с молекулярной массой 2500000 Да или более,

где отношение число молей сшитого сшивающего агента/число молей всего сшивающего агента составляет от 0,1 до 0,2, и

где наполнитель имеет свойства и однофазных, и двухфазных наполнителей.

2. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты по пункту 1, в котором гиалуроновая кислота является сшитой сшивающим агентом, который представляет собой одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из диглицидилового эфира бутандиола (диглицидиловый эфир 1,4-бутандиола: БДДЭ), диглицидилового эфира этиленгликоля (ЭГДГЭ), диглицидилового эфира гександиола (диглицидиловый эфир 1,6-гександиола), диглицидилового эфира пропиленгликоля, диглицидилового эфира полипропиленгликоля, диглицидилового эфира политетраметиленгликоля, диглицидилового эфира неопентилгликоля, полиглицидилового эфира полиглицерина, полиглицидилового эфира диглицерина, полиглицидилового эфира глицерина, полиглицидилового эфира триметилпропана, бисэпоксипропоксиэтилена (1,2-(бис(2,3-эпоксипропокси)этилен), полиглицидилового эфира пентаэритритола и полиглицидилового эфира сорбитола.

3. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты по пункту 2, в котором сшивающий агент представляет собой диглицидиловый эфир бутандиола (диглицидиловый эфир 1,4-бутандиола: БДДЭ).

4. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты по пункту 1, дополнительно содержащий анестетик.

5. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты по пункту 4, в котором анестетик является лидокаином или его солью.

6. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты по пункту 1, где данный наполнитель предназначен для кожной инъекции.

7. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты по пункту 1, где данный наполнитель предназначен для увеличения мягкой ткани.

8. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты по пункту 1, где данный наполнитель предназначен для борьбы с морщинами, увеличения мягкой ткани или расширения объема, или коррекции контура.

9. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты, содержащий гиалуроновую кислоту или ее соль, и имеет комплексную вязкость 6х10⁴ сПа или больше при угловой скорости 1 Гц, когда измеряют реометром, и демонстрирует модуль сохранения упругой деформации G´ 400 Па или больше, и имеет когезию 30 гс или больше, и содержит сшивающий агент в концентрации от 1 до 10 мол.% в расчете на 1 моль N-ацетил-D-глюкозамина и D-глюкуроновой кислоты в гиалуроновой кислоте или ее соли,

где гиалуроновая кислота или ее соль являются сшитыми,

где сшитая гиалуроновая кислота является сшитой, используя гиалуроновую кислоту или ее соль с молекулярной массой 2500000 Да или более, и

где наполнитель имеет свойства и однофазных, и двухфазных наполнителей.

10. Наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты по пункту 9, содержащий сшивающий агент в концентрации от 1 до 5 мол.% в расчете на 1 моль N-ацетил-D-глюкозамина и D-глюкуроновой кислоты в гиалуроновой кислоте или ее соли.

11. Способ приготовления наполнителя с гиалуроновой кислотой по любому из пунктов 1-10, содержащий следующие этапы, где:

(а) готовят гидрогели сшитой гиалуроновой кислоты путем добавления гиалуроновой кислоты или ее соли и сшивающего агента в щелочной водный раствор и перемешивания;

(b) разрезают гидрогели гиалуроновой кислоты, приготовленные на этапе (а);

(с) готовят буферный раствор;

(d) промывают и выполняют набухание гидрогелей гиалуроновой кислоты, разрезанных на этапе (b), используя буферный раствор, приготовленный на этапе (с);

(е) измельчают гидрогели гиалуроновой кислоты, промытые и разбухшие на этапе (d); и

(f) заполняют гидрогели, приготовленные на этапе (е), в шприц и затем стерилизуют.

12. Способ приготовления по пункту 11, в котором щелочной водный раствор представляет собой водный раствор NаОН, КОН, NаНСО₃, LiОН или их комбинации.

13. Способ приготовления по пункту 12, в котором концентрация щелочного водного раствора составляет от 0,1 Н до 0,5 Н.

14. Способ приготовления по пункту 11, в котором сшивающий агент представляет собой диглицидиловый эфир 1,4-бутандиола

15. Способ приготовления по пункту 11, в котором концентрация гиалуроновой кислоты или ее соли составляет от 10 до 25 масс.% на полную массу смеси гиалуроновой кислоты или ее соли и щелочного водного раствора.

16. Способ приготовления по пункту 11, в котором этап (а) выполняют в интервале температур от 25 до 40°С в течение 15-22 часов.

17. Способ приготовления по пункту 11, в котором буферный раствор на этапе (с) содержит один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из лимонной кислоты, моногидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия, уксусной кислоты, диэтилбарбитуровой кислоты, ацетата натрия, ТАРS (трис(гидроксиметил)метиламино)пропансульфоновой кислоты, бицина (2-бис(2-гидроксиэтил)амино)уксусная кислота, трис (трис(гидроксиметил)амино метан, трицина (N-(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил)глицин, НЕРЕS (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота, ТЕS (2-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]метансульфоновая кислота и РIРЕS (пиперазин-N, N´-бис(2-этансульфоновая кислота).

18. Способ приготовления по пункту 11, в котором буферный раствор дополнительно содержит анестетик и изотонический агент.

19. Заполненный шприц, который заполнен наполнителем с гидрогелем гиалуроновой кислоты по любому из пунктов 1-10.

20. Биоматериал для увеличения мягкой ткани, содержащий наполнитель с гидрогелем гиалуроновой кислоты по любому из пунктов 1-10.

21. Применение наполнителя с гидрогелем гиалуроновой кислоты по любому из пунктов 1-10 в получении реагента или устройства для увеличения мягкой ткани.

22. Применение наполнителя с гидрогелем гиалуроновой кислоты по любому из пунктов 1-10 в получении реагента или устройства для борьбы с морщинами.