Способ производства пробиотической добавки Российский патент 2019 года по МПК A23K10/16 C12N1/20 A23K50/75 

Описание патента на изобретение RU2689680C1

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, а конкретно к способу производства пробиотической добавки на основе молочнокислых бактерий для кормления перепелов с целью повышения их мясной продуктивности птицы.

Современное птицеводство многими путями решает проблему максимальной реализации биоресурсного потенциала птицы и сохранения при этом ее продуктивного здоровья. Ускорение динамики роста и повышение суточных приростов живой массы птицы при снижении экономических затрат на 1 кг прироста живой массы тела является одной из основных задач птицеводства, в частности, перепеловодства.

Существуют способы повышения мясной продуктивности птицы за счет введение микроэлементов, витаминов, пробиотиков в корма птице. При этом в составе кормовых добавок микробного происхождения чаще используют микроорганизмы, которые проявляют пробиотические свойства, однако не являются естественной микрофлорой желудочно-кишечного тракта данного вида птицы.

Известно использование для выращивания микробной культуры мелассной среды в составе на 1 л: 45 г свекловичной мелассы, 2 г KH2PO4, 0,02 г дрожжевого экстракта (Патент РФ №2437864, МПК C05F 3/00, А01С 3/00, C05F 11/08, 27.12. 2011 г.).

Известен способ предусматривающий применение в составе комбикормов для перепелов пробиотической кормовой добавки, включающей три вида молочнокислых бактерий: Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus B-5788, Lactobacillus acidophilus B-3235, Lactococcus lactis ssp. lactis B-3145, выращенных на среде, состоящей из воды, мелассы свекловичной, молока или молочной сыворотки, которая обеспечивает повышение сохранности и продуктивности перепелов (Кобыляцкая Г.В. Получение и эффективность применения пробиотика Трилактобакт в перепеловодстве: автореф. дис. … канд. с.-х. наук / Г.В. Кобыляцкая. - Краснодар, 2013. - 24 с.).

Недостатком данного способа является то, что в состав пробиотика входят микроорганизмы, которые не являются естественными представителями микробиома желудочно-кишечного тракта перепелов, а используемая питательная среда позволяет достичь титра каждой культуры всего лишь до не менее 5,0×107 КОЕ/мл, тем самым добавка не будет обеспечивать максимальную реализацию биологического потенциала птицы.

Наиболее близким является способ предусматривающий, выращивание молочнокислых культур на мелассной среде (Интенсификация процесса культивирования физиологически-адаптированных штаммов лактобацилл как основа создания биопрепаратов микробного происхождения для птицеводства / А.Г. Кощаев, Ю.А. Лысенко, Мищенко В.А. [и др.] // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета. - 2017. - №04 (128). - С. 1102-1115).

Недостатком данного способа является то, что отсутствует информация о том, из какой конкретно мелассы состоит данная среда, какой вносится титр культуры молочнокислых микроорганизмов в среду, что в совокупности не может гарантировать достоверность полученных результатов.

Техническим результатом является повышение титра молочнокислых культур Lactobacillus salivarius, за счет культивирования лактобактерий, являющиеся представителями естественной микрофлоры ЖКТ перепелов.

Технический результат достигается тем, что в способе производства пробиотической добавки, включающем культивирование микроорганизмов Lactobacillus salivarius в среде состоящей из мелассы кормовой 45,0 г, K2HPO4 - 2,0 г и дрожжевого экстракта - 0,02 г из расчета на 1 литр воды, согласно изобретению меласса кормовая состоит из свекловичной и кукурузной меласс, взятых в соотношении 1:1, затем в полученную смесь добавляют микроорганизмы Lactobacillus salivarius с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл и культивируют при температуре 37 С, в течение 24 ч.

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что используется среда из свекловичной и кукурузной меласс, для выращивания молочнокислых микроорганизмов - Lactobacillus salivarius, которые независимыми микробиологическим методом, методом количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени и метагеномными методами были выделены из ЖКТ перепелов (Идентификация штаммов автохтонной микрофлоры - основы биопрепаратов лечебно-профилактического действия / В.В. Радченко, Е.В. Ильницкая, А.С. Родионова, Т.М. Шуваева, Ю.А. Лысенко, Г.А. Плутахин, А.И. Манолов, И.М. Донник, А.Г. Кощаев // Биофармацевтический журнал. - 2016. Том. - 8, №1. - С. 3-12; Метагеномное профилирование бактериозеноза пищеварительного тракта различных линий перепелов / Е.Р. Кириллова, Т.В. Григорьева, М.Н. Синягина и др. // Материалы всероссийской конференции с международным участием, посвященная 40-летию кафедры генетики Института фундаментальной медицины и биологии Казанского университета. - Казань. - 2016. - С. 55-56; Автохтонная микрофлора дикой птицы - основа препаратов лечебно-профилактического действия для промышленной птицы / А.С. Родионова, Е.В. Ильницкая, В.В. Радченко, А.В. Лихоман, Ю.А. Лысенко, А.Г. Кощаев // XXVIII зимняя молодежная научная школа «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии». Сборник тезисов. - М.: ФАНО России, 2016. - С. 151).

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Эти отличия позволяют сделать вывод о соответствии заявляемых технических решений критерию «новизна».

Соответствие заявляемого решения критерию патентоспособности «промышленная применимость» обусловлено тем, что предлагаемое техническое решение работоспособно и возможно его использование для выращивания перепелов.

Сущность изобретения поясняется чертежами, где на рис. 1 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от состава мелассной среды; на рис. 2 - представлен график зависимости количества редуцирующих веществ от времени культивирования микроорганизмов на мелассной среде №3; на рис. 3 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от состава питательных сред; на рис. 4 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от времени их культивирования при температуре 36°С; на рис. 5 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от времени их культивирования при температуре 38°С.

Способ производства пробиотической добавки осуществляется следующим образом.

Культивирование микроорганизмов Lactobacillus salivarius осуществляют в среде состоящей из мелассы кормовой 45,0 г, которая состоит из свекловичной и кукурузной меласс, K2HPO4 - 2,0 г и дрожжевого экстракта - 0,02 г в расчете на 1 литр воды. Затем в полученную смесь добавляют микроорганизмы Lactobacillus salivarius с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл и культивируют при температуре 37 С, в течение 24 ч.

При использовании засевной культуры Lactobacillus salivarius с титром менее 1,0×105 КОЕ/мл, не будет обеспечиваться достижение необходимого титра культуры в пробиотической добавке.

При использовании засевной культуры Lactobacillus salivarius с титром более 1,0×105 КОЕ/мл достигается тот же титр и не имеет смысла брать большее количество. Таким образом, для осуществления способа берется титр засевной культуры Lactobacillus salivarius с титром 1,0×105 КОЕ/мл. Первый этап исследований включает выращивание бактерий на мелассной питательной среде различного состава. Время выращивания культуры составляло 48 ч, температурный оптимум 37°С.

Для подбора питательного субстрата для Lactobacillus salivarius использовали мелассную питательную среду следующих составов:

1. Состав мелассной среды №1: 45 г/л мелассы кормовой (100% свекловичной мелассы), K2HPO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

2. Состав мелассной среды №2: 45 г/л мелассы кормовой (100% кукурузной мелассы), K2HPO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

3. Состав мелассной среды №3: 45 г/л мелассы кормовой (50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы), K2HPO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

4. Состав мелассной среды №4: 45 г/л мелассы кормовой (25% свекловичной и 75% кукурузной мелассы), K2HPO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

5. Состав мелассной среды №5: 45 г/л мелассы кормовой (75% свекловичной и 25% кукурузной мелассы), K2HPO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

Определение титра микрофлоры проводили согласно ГОСТа 10444.11-89 (пункт 4.2.2). Брали 1,0 мл выращенной каждой культуры и помещали в колбу объемом 100 см и заливали 99,0 мл стерильным физиологическим растворов, оставляли на 1 ч. При этом получали разведение 1:100. После этого готовили ряд последовательных десятикратных разведений до 10-10. Для каждого разведения применяли отдельные стерильные наконечники. Посев в чашки Петри проводили согласно (на Лактобакагар из разведений 10-7, 10-8, 10-9, 10-10. Из разведений 10-7, 10-8, 10-9, 10-10 стерильным наконечником автоматического дозатора по 1 мл суспензии переносли в 4 чашки Петри, в которые заливают стерильную, расплавленную питательную среду, охлажденную до 38-40°С. Круговым движением чашек Петри в них перемешивали среду и оставляют до застывания агара. Чашки с засеянными средами помещали в термостат и выдерживали при (37±1)°С в течении 72 ч. По количеству выросших колоний согласно (ГОСТ 9225-84 (пункт 4.5.3) определяли общий титр микроорганизмов. Число жизнеспособных клеток в 1 мл препарата (X), вычисляли по формуле:

X=N×Р,

где: N - среднеарифметическое значение числа колоний в чашках Петри; Р - порядковый номер десятикратного разведения, в котором отмечается рост бактерий.

В процессе культивирования проводился анализ динамики потребления редуцирующих веществ (РВ) с исходной концентрацией 4%. Метод определения редуцирующих веществ основан на восстанавливающей способности моноформ сахаров - глюкозы и фруктозы.

Результаты по количеству исследуемых микробных культур, полученные в лабораторных условиях при культивировании в мелассной среде, представлены на рисунке 1, где по оси абсцисс указаны номера составов мелассной среды, а по оси ординат - количество микроорганизмов.

В результате проведенного исследования наиболее эффективной оказалась мелассная среда №3, где в качестве кормовой мелассы использовалось 50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы, титр Lb. salivarius составил 4,2×1010 КОЕ/мл, в то время как на других вариантах титр используемых культур не превысил 1,0×1010 КОЕ/мл. Так на мелассной питательной среде №1 количество Lb. salivarius составило 3,3×109 КОЕ/мл; на варианте №2 Lb. salivarius - 6,1×109 КОЕ/мл, вариант №4 Lb. salivarius - 9,2×109 КОЕ/мл, вариант №5 Lb. salivarius - 7,7×109 КОЕ/мл.

Также в процессе культивирования снимали динамику потребления редуцирующих веществ (РВ) на мелассной среде №3, результаты которой представлены на рисунке 2, где по оси абсцисс указано время культивирования микроорганизмов, а по оси ординат - количество редуцирующих веществ.

По результатам контроля потребления углеродного субстрата можно сделать вывод о его истощении уже к 24 ч от начала культивирования.

Следующим этапом исследований являлось определение влияния на рост используемых культур различных питательных сред, которые часто используют для культивирования лактобактерий. Время выращивания для всех культур составляло 48 ч, температурный оптимум 37°С.

Для подбора питательного субстрата для молочнокислых микроорганизмов использовали среды следующего состава:

1. Среда для молочнокислых бактерий (г. Углич): дрожжевой экстракт - 0,2%; кукурузный экстракт - 0,3%; глюкозный сироп -2%; аскорбиновая кислота (цитрат натрия) - 4 г/л; KH2PO4 - 2 г/л.

2. Состав среды МРС, г/л: пептон - 10,0; дрожжевой экстракт - 20,0; глюкоза - 20,0; дикалия гидрофосфат - 2,0; натрия ацетат - 5,0; триаммония цитрат - 2,0; магния сульфат - 0,2; марганца сульфат 4-водный - 0,05.

3. Состав среды ГПС, г/л: Na2HPO4 1 2-водный - 3,2; K2HPO4- 0,3; MgSO4 - 0,5; NaCl - 0,5; пептон - 2,0; дрожжевой экстракт - 0,05; глюкоза - 25.

4. Состав мелассной среды: 45 г/л мелассы кормовой (50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы), K2HPO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

Результаты по количеству исследуемых микробных культур, полученные в лабораторных условиях при культивировании в различных питательных средах, представлены на рисунке 3, где по оси абсцисс указаны различные питательные среды, а по оси ординат - количество микроорганизмов.

В результате проведенного исследования наиболее эффективной оказалась мелассная среда, в которой титр Lb. salivarius составил 3,4×1010 КОЕ/мл. Менее эффективной оказалась среда для молочнокислых бактерий г.Углич - Lb. salivarius - 9,1×109 КОЕ/мл. При выращивании лактобактерий на среде ГПС были получены следующие результаты: Lb. salivarius -2,1×109 КОЕ/мл, а на МРС: Lb. salivarius - 4,3×109 КОЕ/мл.

Далее определяли оптимальную температуру культивирования испытуемых микроорганизмов с целью повышения титра клеток в наиболее короткие сроки. Представленные выше результаты культивирования получены при температуре выращивания 37°С.

Была заложена серия опытов по определению максимальной термотолерантности данных культур при выращивании на мелассной среде №3 в течение 48 ч. Результаты зависимости количества клеток молочнокислых бацилл от температуры представлены на рисунках 4 и 5, где по оси абсцисс указано время культивирования микроорганизмов, а по оси ординат -количество микроорганизмов.

Итог культивирования при 39°С не представлен, так как при этой температуре ни одна культура не выявила роста относительно засевного титра. Однако после снижения температуры культивирования до 37°С рост восстановился в прежнем объеме, что свидетельствует о том, что культура не отмерла, а перешла в фазу задержки роста, продолжавшуюся до снижения температуры на 2-3°С.

На основании приведенных результатов культивирования на различных средах и при различных температурах установлено, что наибольший титр клеток достигался к 24 ч от начала выращивания независимо от состава сред. Более длительное выращивание и повышение температуры ведет к снижению титра и, как правило, увеличению количества нежизнеспособных клеток.

Результаты проведенных исследований показали, что наиболее эффективной питательной средой является мелассная среда следующего состава: 45 г/л мелассы кормовой (50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы), K2HPO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л, при этом оптимум температурного и временного режимов составляют 37°С и 24 ч, соответственно. Разработанная мелассная среда может быть использована в производственных условиях при дальнейшей разработки биопрепаратов для животноводства, в том числе птицеводства.

Пример конкретного осуществления способа.

Для повышения продуктивности перепелов использовали пробиотическую добавку на основе микроорганизмов Lactobacillus salivarius. Для подбора оптимальной дозы использования пробиотической добавки был проведен научный эксперимент на перепелах японской породы.

Методом групп аналогов было сформировано пять групп перепелов по 20 голов в каждой: контрольная группа - в рационе присутствовал только основной полноценный комбикорм и питьевая вода; 1-я опытная группа - с основным рационом и питьем воды птице, также выпаивали пробиотическую добавку в дозе 0,2 мл/гол; 2-я опытная группа - с основным рационом и питьем воды птице, также выпаивали пробиотическую добавку в дозе 0,5 мл/гол;

3-я опытная группа - с основным рационом и питьем воды птице, также выпаивали пробиотическую добавку в дозе 1,0 мл/гол. Применение пробиотической добавки в опытных группах осуществлялось ежедневно (таблица 2).

Перепела выращивались в полупромышленных многоярусных металлических клетках.

Результаты хозяйственных показателей при выращивании перепелов представлены в таблице 3.

Как видно из таблицы, значительное повышение по живой массе перепелов в сравнении с группой контроля было выявлено на 14-е сутки в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах, соответственно, на 4,72; 10,40 и 12,83%. На 21-е сутки в 1-й опытной группе живая масса перепелов была больше, чем в контроле на 5,35%, во 2-й - на 10,80% и 3-й - на 12,02%. На 28-й день выращивания птицы значительное повышение живой массы наблюдалось во 2-й и 3-й опытных группах на 12,36 и 13,17%. Аналогичная тенденция в этих опытных группах по изучаемому показателю наблюдалась на 35-е сутки, в которой живая масса была выше на 12,57 и 13,05%. А на 42-е сутки живая масса в 3-й группе была выше, чем во 2-й - 9,78% и 10,28% соответственно.

Сохранность перепелов во всех группах была одинакова и составила 100,0%. Прирост живой массы перепелов за весь период выращивания в 1-3-й опытных группах также был больше, чем в контрольной, на 6,09; 10,17 и 10,67%.

Как видно из данных таблицы 3, с ростом живой массы опытных птиц повышается и потребление ими комбикормов. При этом затраты корма на 1 кг прироста живой массы в опытных группах оставались ниже, чем в контрольной, на 4,97; 9,26 и 6,48%.

В целом, обосновать повышенную динамику живой массы перепелов в опытных группах, можно за счет положительного воздействия биопрепаратов на основе культур Lactobacillus salivarius, которые с пособствуют лучшему усвоению энергии и питательных веществ комбикорма птицей.

Таким образом, результаты испытаний показали, что выращивание перепелов с использованием разработанной пробиотической добавки на основе культуры вида Lactobacillus salivarius, выделенная из ЖКТ перепела, а также выращенная на мелассной среде, в испытуемых дозах обеспечивает повышение продуктивности перепелов, что особенно выявлено в дозе 0,5 мл/гол.

Похожие патенты RU2689680C1

название год авторы номер документа
Среда для получения пробиотической добавки для птицы 2018
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Лоретц Ольга Геннадиевна
  • Радченко Виталий Владиславович
  • Забашта Николай Николаевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Шевкопляс Владимир Николаевич
  • Дмитриев Владимир Игоревич
  • Дорожкин Василий Иванович
  • Волчанская Анна Андреевна
  • Хмара Ирина Николаевна
RU2698213C1
Способ кормления перепелов 2018
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Кочиш Иван Иванович
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Джавадов Эдуард Джавадович
  • Кононенко Сергей Иванович
  • Шхалахов Дамир Сафербиевич
  • Семененко Марина Петровна
  • Исаева Альбина Геннадьевна
  • Шаравьев Павел Викторович
RU2689730C1
Способ получения пробиотической добавки для перепелов 2018
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Клименко Александр Иванович
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Дмитриев Владимир Игоревич
  • Салеева Ирина Павловна
  • Шхалахов Дамир Сафербиевич
  • Волчанская Анна Андреевна
  • Мищенко Валентин Андреевич
  • Лебедева Ирина Анатольевна
RU2688429C1
Питательная среда для культивирования лактобактерий 2018
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Донник Ирина Михаиловна
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Дмитриев Владимир Игоревич
  • Горковенко Наталья Евгеньевна
  • Волчанская Анна Андреевна
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Шантыз Азамат Хазретович
  • Дельцов Александр Александрович
  • Кощаева Ольга Викторовна
RU2686326C1
Способ выращивания перепелов 2018
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Радченко Виталий Владиславович
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Морозов Виталий Юрьевич
  • Волчанская Анна Андреевна
  • Уша Борис Вениаминович
  • Коломиец Сергей Николаевич
  • Неверова Ольга Петровна
  • Юрина Наталья Александровна
  • Кузминова Елена Васильевна
RU2689701C1
Среда для получения пробиотической добавки для птицы 2020
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Донник Ирина Михайловна
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Салеева Ирина Павловна
  • Клименко Александр Иванович
  • Нестеренко Антон Алексеевич
  • Кенийз Надежда Викторовна
RU2761882C1
Способ производства пробиотической добавки для птицы 2020
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Гулюкин Михаил Иванович
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Дорожкин Василий Иванович
  • Нестеренко Антон Алексеевич
  • Кенийз Надежда Викторовна
  • Гнеуш Анна Николаевна
RU2759703C1
Способ кормления перепелов 2020
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Фисинин Владимир Иванович
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Нестеренко Антон Алексеевич
  • Муртазаев Курбан Нажмудинович
  • Юлдашбаев Юсупжан Артыкович
  • Меренкова Надежда Владимировна
RU2752993C1
Питательная среда для культивирования лактобактерий 2020
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Панин Александр Николаевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Гнеуш Анна Николаевна
  • Жучок Александра Юрьевна
  • Шантыз Алий Юсуфович
  • Клименко Александр Иванович
RU2759305C1
Способ повышения жизнеспособности лактобактерий 2020
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Уша Борис Вениаминович
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Анискина Мария Владимировна
  • Василевич Федор Иванович
  • Нестеренко Антон Алексеевич
  • Кенийз Надежда Викторовна
RU2753359C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 689 680 C1

Реферат патента 2019 года Способ производства пробиотической добавки

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, а конкретно к способу производства пробиотической добавки на основе молочнокислых бактерий для кормления перепелов. Способ производства пробиотической добавки включает культивирование микроорганизмов Lactobacillus salivarius в среде, состоящей из мелассы кормовой - 45,0 г, K2HPO4 - 2,0 г и дрожжевого экстракта - 0,02 г из расчета на 1 литр воды, при этом меласса кормовая состоит из свекловичной и кукурузной меласс, взятых в соотношении 1:1. Затем в полученную смесь добавляют микроорганизмы Lactobacillus salivarius с титром 1,0×105 КОЕ/мл и культивируют при температуре 37°С в течение 24 ч. Изобретение позволяет повысить мясную продуктивность птицы. 5 ил., 2 табл.

Формула изобретения RU 2 689 680 C1

Способ производства пробиотической добавки, включающий культивирование микроорганизмов Lactobacillus salivarius в среде, состоящей из мелассы кормовой - 45,0 г, K2HPO4 - 2,0 г и дрожжевого экстракта - 0,02 г из расчета на 1 литр воды, отличающийся тем, что меласса кормовая состоит из свекловичной и кукурузной меласс, взятых в соотношении 1:1, затем в полученную смесь добавляют микроорганизмы Lactobacillus salivarius с титром 1,0×105 КОЕ/мл и культивируют при температуре 37°С в течение 24 ч.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2019 года RU2689680C1

КОЩАЕВ А.Г
и др
"Интенсификация процесса культивирования физиологически-адаптированных лактобацилл как основа создания биопрепаратов микробного происхождения для птицеводства", Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета, 2017, Ν 128, с
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРЕНА 1915
  • Бызов Б.В.
SU1102A1
СПОСОБ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ПЕРЕРАБОТКИ ПТИЧЬЕГО ПОМЕТА 2010
  • Дмитриев Владимир Игоревич
  • Мартынова Ирина Валерьевна
  • Кочкина Лидия Ивановна
RU2437864C1
US 20150344839 A1, 03.12.2015
JP 5246864 A, 24.09.1993
WO 2006133472 A1, 21.12.2006.

RU 2 689 680 C1

Авторы

Лысенко Юрий Андреевич

Кощаев Андрей Георгиевич

Фисинин Владимир Иванович

Лунева Альбина Владимировна

Дмитриев Владимир Игоревич

Кривоногова Анна Сергеевна

Волчанская Анна Андреевна

Мищенко Валентин Андреевич

Суханова Светлана Фаилевна

Шкредов Владимир Викторович

Даты

2019-05-28Публикация

2018-07-11Подача