Питательная среда для культивирования лактобактерий Российский патент 2019 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 A61P43/00 

Описание патента на изобретение RU2686326C1

Изобретение относится к микробиологии и сельскому хозяйству, а конкретно к способу культивированию микроорганизмов на основе молочнокислых бактерий для получения пробиотической добавки с целью повышения мясной продуктивности перепелов.

Современное птицеводство многими путями решает проблему максимальной реализации биоресурсного потенциала птицы и сохранения при этом ее продуктивного здоровья. Ускорение динамики роста и повышение суточных приростов живой массы птицы при снижении экономических затрат на 1 кг прироста живой массы тела является одной из основных задач птицеводства, в частности, перепеловодства.

Известно использование для выращивания микробной культуры мелассной среды в составе на 1 л воды: 45 г свекловичной, мелассы, 2 г КН2РО4, 0,02 г дрожжевого экстракта (Патент РФ №243864, МПК C05F 3/00, А01С 3/00, C05F 11/08, 27.12., 2011 г.).

Известен способ предусматривающий применение в составе комбикормов для перепелов пробиотической кормовой добавки, включающей три вида молочнокислых бактерий: Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus B-5788, Lactobacillus acidophilus B-3235, Lactococcus lactis ssp. lactis B-3145, выращенных на среде, состоящей из воды, мелассы свекловичной, молока или молочной сыворотки, которая обеспечивает повышение сохранности и продуктивности перепелов (Кобыляцкая Г.В. Получение и эффективность применения пробиотика Трилактобакт в перепеловодстве: автореф. дис. … канд. с.-х. наук / Г.В. Кобыляцкая. - Краснодар, 2013. - 24 с.).

Недостатком данного способа является то, что в состав пробиотика входят микроорганизмы, которые не являются естественными представителями микробиома желудочно-кишечного тракта перепелов, а используемая питательная среда позволяет достичь титра каждой культуры всего лишь 5,0×107 КОЕ/мл, в результате добавка не будет обеспечивать максимальную реализацию биологического потенциала птицы.

Наиболее близким является техническое решение в котором используют для получения пробиотической добавки для перепелов, среду состоящую из мелассы кормовой, К2НРO4, дрожжевого экстракта и воды (Интенсификация процесса культивирования физиологически- адаптированных штаммов лактобацилл как основа создания биопрепаратов микробного происхождения для птицеводства / А.Г. Кощаев, Ю.А. Лысенко, Мищенко В.А. [и др.] // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета. - 2017. - №04 (128). - С.1102-1115).

Недостатком известного технического решения является то, что недостаточное повышение титра молочнокислых культур Lactobacillus agilis.

Техническим результатом является повышение титра молочнокислых культур Lactobacillus agilis, являющиеся представителями естественной микрофлоры ЖКТ перепелов, за счет использования мелассной питательной среды.

Технический результат достигается тем, что в питательной среде для культивирования лактобактерий, состоящей из мелассы кормовой, К2НРO4, дрожжевого экстракта и воды, согласно изобретению меласса кормовая состоит из свекловичной и кукурузной меласс, взятых в равных частях и микроорганизмов Lactobacillus agilis с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл при следующем соотношении исходных компонентов, г/л:

Меласса свекловичная - 22-23;

Меласса кукурузная - 22-23;

К2НРО4 - 2,0;

Дрожжевой экстракт - 0,02;

Микроорганизмы Lactobacillus agilis

с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл - 99-101;

Вода - остальное

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что используется среда из свекловичной и кукурузной меласс, взятых в равных частях, для выращивания молочнокислых микроорганизмов - Lactobacillus agilis, которые независимыми микробиологическим методом, методом количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени и метагеномными методами были выделены из ЖКТ перепелов (Идентификация штаммов автохтонной микрофлоры - основы биопрепаратов лечебно-профилактического действия / В.В. Радченко, Е.В. Ильницкая, А.С. Родионова, Т.М. Шуваева, Ю.А. Лысенко, Г.А. Плутахин, А.И. Манолов, И.М. Донник, А.Г. Кощаев // Биофармацевтический журнал. - 2016. Том. - 8, №1. - С. 3-12; Метагеномное профилирование бактериозеноза пищеварительного тракта различных линий перепелов / Е.Р. Кириллова, Т.В. Григорьева, М.Н. Синягина и др. // Материалы всероссийской конференции с международным участием, посвященная 40-летию кафедры генетики Института фундаментальной медицины и биологии Казанского университета. - Казань. - 2016. - С. 55-56; Автохтонная микрофлора дикой птицы - основа препаратов лечебно-профилактического действия для промышленной птицы / А.С. Родионова, Е.В. Ильницкая, В.В. Радченко, А.В. Лихоман, Ю.А. Лысенко, А.Г. Кощаев // XXVIII зимняя молодежная научная школа «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии». Сборник тезисов. - М.: ФАНО России, 2016. - С. 151).

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Эти отличия позволяют сделать вывод о соответствии заявляемых технических решений критерию «новизна».

Соответствие заявляемого решения критерию патентоспособности «промышленная применимость» обусловлено тем, что предлагаемое техническое решение работоспособно и возможно его использование для выращивания перепелов.

Сущность изобретения поясняется чертежами, где на рис. 1 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от состава мелассной среды; на рис. 2 - представлен график зависимости количества редуцирующих веществ от времени культивирования микроорганизмов на мелассной среде №3; на рис. 3 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от состава питательных сред; на рис. 4 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от времени их культивирования при температуре 36°С; на рис. 5 - представлен график зависимости количества микроорганизмов от времени их культивирования при ратуре 38°С.

Питательная среда для культивирования лактобактерий воспроизводится следующим образом.

Культивирование микроорганизмов Lactobacillus agilis осуществляют в среде, состоящей из мелассы кормовой 45,0 г, которая состоит из свекловичной и кукурузной меласс взятых в равных частях, К2НРO4 - 2,0 г и дрожжевого экстракта - 0,02 г в расчете на 1 литр воды. Затем в полученную смесь добавляют микроорганизмы Lactobacillus agilis с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл в количестве 100,0 г/л и культивируют при температуре 37°С, в течение 24 ч.

При использовании засевной культуры Lactobacillus agilis в количестве менее 100,0 г/л, не будет обеспечиваться достижение необходимого титра культуры в пробиотической добавке.

При использовании засевной культуры Lactobacillus agilis в количестве более 100,0 г/л достигается тот же титр и не имеет смысла брать большее количество.

При использовании свекловичной мелассы в количестве менее 22,5 г/л, не будет обеспечиваться достижение необходимого титра культуры в пробиотической добавке.

При использовании свекловичной мелассы в количестве более 22,5 г/л достигается тот же титр и не имеет смысла брать большее количество.

При использовании кукурузной мелассы в количестве менее 22,5 г/л, не будет обеспечиваться достижение необходимого титра культуры в пробиотической добавке.

При использовании кукурузной мелассы в количестве более 22,5 г/л достигается тот же титр и не имеет смысла брать большее количество.

Первый этап исследований включает выращивание бактерий на мелассной питательной среде различного состава. Время выращивания культуры составляло 48 ч, температурный оптимум 37°С.

Поскольку основным компонентом в среде является состав мелассы, то для подбора питательного субстрата для Lactobacillus agilis использовали мелассную питательную среду следующих составов:

1. Состав мелассной среды №1: 45 г/л мелассы кормовой (100% свекловичной мелассы), К2НРО4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

2. Состав мелассной среды №2: 45 г/л мелассы кормовой (100% кукурузной мелассы), К2НРО4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

3. Состав мелассной среды №3: 45 г/л мелассы кормовой (50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы), К2НРO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

4. Состав мелассной среды №4: 45 г/л мелассы кормовой (25% свекловичной и 75% кукурузной мелассы), К2НРO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

5. Состав мелассной среды №5: 45 г/л мелассы кормовой (75% свекловичной и 25% кукурузной мелассы), К2НРO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

Определение титра микрофлоры проводили согласно ГОСТу 10444.11-89 (пункт 4.2.2). Брали 1,0 мл выращенной каждой культуры и помещали в колбу объемом 100 см3 и заливали 99,0 мл стерильным физиологическим растворов, оставляли на 1 ч. При этом получали разведение 1:100. После этого готовили ряд последовательных десятикратных разведений до 10-10. Для каждого разведения применяли отдельные стерильные наконечники. Посев в чашки Петри проводили согласно (на Лактобакагар из разведений 10-7, 10-8, 10-9, 10-10. Из разведений 10-7, 10-8, 10-9, 10-10 стерильным наконечником автоматического дозатора по 1 мл суспензии переносили в 4 чашки Петри, в которые заливают стерильную, расплавленную питательную среду, охлажденную до 38-40°С. Круговым движением чашек Петри в них перемешивали среду и оставляют до застывания агара. Чашки с засеянными средами помещали в термостат и выдерживали при (37±1)°С в течении 72 ч. По количеству выросших колоний согласно (ГОСТ 9225-84 (пункт 4.5.3) определяли общий титр микроорганизмов. Число жизнеспособных клеток в 1 мл препарата (X), вычисляли по формуле:

X=N×P,

где: N - среднеарифметическое значение числа колоний в чашках Петри; Р - порядковый номер десятикратного разведения, в котором отмечается рост бактерий.

В процессе культивирования проводился анализ динамики потребления редуцирующих веществ (РВ) с исходной концентрацией 4%. Метод определения редуцирующих веществ основан на восстанавливающей способности моноформ сахаров - глюкозы и фруктозы.

Результаты по количеству исследуемых микробных культур, полученные в лабораторных условиях при культивировании в мелассной среде, представлены на рисунке 1, где по оси абсцисс указаны номера составов мелассной среды, а по оси ординат - количество микроорганизмов.

В результате проведенного исследования наиболее эффективной оказалась мелассная среда №3, где в качестве кормовой мелассы использовалось 50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы, титр Lb. agilis составил 3,3×1010 КОЕ/мл, в то время как на других вариантах титр используемых культур не превысил 1,0×109 КОЕ/мл. Так на мелассной питательной среде №1 количество Lb. agilis составило 2,1×109 КОЕ/мл; на варианте №2 Lb. agilis - 6,7×109 КОЕ/мл; вариант №4 Lb. agilis - 9,0×109 КОЕ/мл и вариант №5 Lb. agilis - 6,3×109 КОЕ/мл.

Также в процессе культивирования снимали динамику потребления редуцирующих веществ (РВ) на мелассной среде №3, результаты которой представлены на рисунке 2, где по оси абсцисс указано время культивирования микроорганизмов, а по оси ординат - количество редуцирующих веществ.

По результатам контроля потребления углеродного субстрата можно сделать вывод о его истощении уже к 24 ч от начала культивирования.

Следующим этапом исследований являлось определение влияния на рост используемых культур различных питательных сред, которые часто используют для культивирования лактобактерий. Время выращивания для всех культур составляло 48 ч, температурный оптимум 37°С.

Для доказательства эффективности заявляемой среды для сравнения были использованы среды следующего состава:

1. Среда для молочнокислых бактерий (г. Углич): дрожжевой экстракт - 0,2%; кукурузный экстракт - 0,3%; глюкозный сироп - 2%; аскорбиновая кислота (цитрат натрия) - 4 г/л; КН2РO4 - 2 г/л.

2. Состав среды МРС, г/л: пептон - 10,0; дрожжевой экстракт - 20,0; глюкоза - 20,0; дикалия гидрофосфат - 2,0; натрия ацетат - 5,0; триаммония цитрат - 2,0; магния сульфат - 0,2; марганца сульфат 4-водный - 0,05.

3. Состав среды ГПС, г/л: Na2HPO4 12-водный - 3,2; КН2РO4 - 0,3; MgSO4 - 0,5; NaCl - 0,5; пептон - 2,0; дрожжевой экстракт - 0,05; глюкоза - 25.

4. Состав мелассной среды: 45 г/л мелассы кормовой (50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы), К2НРO4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л.

Результаты по количеству исследуемых микробных культур, полученные в лабораторных условиях при культивировании в различных питательных средах, представлены на рисунке 3, где по оси абсцисс указаны различные питательные среды, а по оси ординат - количество микроорганизмов.

В результате проведенного исследования наиболее эффективной оказалась мелассная среда, так как титр Lb. agilis составил 4,7×1010 КОЕ/мл. Менее эффективной оказалась среда для молочнокислых бактерий г. Углич - Lb. agilis - 8,7×109 КОЕ/мл. При выращивании лактобактерий на среде ГПС были получены следующие результаты: Lb. agilis - 2,7×109 КОЕ/мл, а на МРС: Lb. agilis - 2,0×109 КОЕ/мл.

Далее определяли оптимальную температуру культивирования испытуемых микроорганизмов с целью повышения титра клеток в наиболее короткие сроки. Представленные выше результаты культивирования получены при температуре выращивания 37°С.

Была заложена серия опытов по определению максимальной термотолерантности данных культур при выращивании на мелассной среде №3 в течение 48 ч. Результаты зависимости количества клеток молочнокислых бацилл от температуры представлены на рисунках 4 и 5, где по оси абсцисс указано время культивирования микроорганизмов, а по оси ординат - количество микроорганизмов.

Итог культивирования при 39°С не представлен, так как при этой температуре ни одна культура не выявила роста относительно засевного титра. Однако после снижения температуры культивирования до 37°С рост восстановился в прежнем объеме, что свидетельствует о том, что культура не отмерла, а перешла в фазу задержки роста, продолжавшуюся до снижения температуры на 2-3°С.

На основании приведенных результатов культивирования на различных средах и при различных температурах установлено, что наибольший титр клеток достигался к 24 ч от начала выращивания независимо от состава сред. Более длительное выращивание и повышение температуры ведет к снижению титра и, как правило, увеличению количества нежизнеспособных клеток.

Результаты проведенных исследований показали, что наиболее эффективной питательной средой является мелассная среда следующего состава: 45 г/л мелассы кормовой (50% свекловичной и 50% кукурузной мелассы), К2НРО4 - 2 г/л, дрожжевого экстракта - 0,02 г/л, при этом оптимум температурного и временного режимов составляют 37°С и 24 ч, соответственно. Разработанная мелассная среда может быть использована в производственных условиях при дальнейшей разработки биопрепаратов для животноводства, в том числе птицеводства.

Для доказательства эффективности полученной пробиотической добавки на основе микроорганизмов Lactobacillus agilis были проведены научные исследования на перепелах японской породы.

Методом групп аналогов было сформировано пять групп перепелов по 20 голов в каждой: контрольная группа - в рационе присутствовал только основной полноценный комбикорм и питьевая вода; 1-я опытная группа - с основным рационом и питьем воды птице, также выпаивали пробиотическую добавку в дозе 0,2 мл/гол; 2-я опытная группа - с основным рационом и питьем воды птице, также выпаивали пробиотическую добавку в дозе 0,5 мл/гол; 3-я опытная группа - с основным рационом и питьем воды птице, также выпаивали пробиотическую добавку в дозе 1,0 мл/гол. Применение пробиотической добавки в опытных группах осуществлялось ежедневно (таблица 1).

Перепела выращивались в полупромышленных многоярусных металлических клетках.

Результаты хозяйственных показателей при выращивании перепелов представлены в таблице 2.

Результаты хозяйственных показателей при выращивании перепелов представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы, значительное повышение по живой массе перепелов в сравнении с группой контроля было выявлено на 21-е сутки во 2-й и 3-й опытных группах, соответственно, на 7,80 и 7,16%. На 28-е сутки во 2-й опытной группе живая масса перепелов была больше, чем в контроле на 13,46%, а в 3-й - на 14,21%. На 35-й день выращивания птицы значительное повышение живой массы наблюдалось во 2-й и 3-й опытных группах на 10,60 и 10,83%. Аналогичная тенденция в этих опытных группах по изучаемому показателю наблюдалась на 42-е сутки, в которой живая масса была выше на 9,12 и 9,75%. Необходимо отметить, что в 1-й опытной группе наблюдалось незначительное повышение живой массы за весь период выращивания.

Сохранность перепелов во всех группах была одинакова и составила 100,0%. Прирост живой массы перепелов за весь период выращивания в опытных группах также был больше, чем в контрольной на 2,91; 9,45 и 10,10%.

Как видно из данных таблицы 2, с ростом живой массы опытных птиц повышается и потребление ими комбикормов. При этом затраты корма на 1 кг прироста живой массы в опытных группах оставались ниже, чем в контрольной на 2,01; 7,79; и 6,78%.

В целом, обосновать повышенную динамику живой массы перепелов в опытных группах, можно за счет положительного воздействия биопрепаратов на основе культур Lactobacillus agilis, которые способствуют лучшему усвоению энергии и питательных веществ комбикорма птицей.

Таким образом, результаты испытаний показали, что выращивание перепелов с использованием разработанной пробиотической добавки на основе культуры вида Lactobacillus agilis, выделенная из ЖКТ перепела, а также выращенная на мелассной среде, в испытуемых дозах обеспечивает повышение продуктивности перепелов, что особенно выявлено в дозе 0,5 мл/гол.

Похожие патенты RU2686326C1

название год авторы номер документа
Способ выращивания перепелов 2018
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Радченко Виталий Владиславович
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Морозов Виталий Юрьевич
  • Волчанская Анна Андреевна
  • Уша Борис Вениаминович
  • Коломиец Сергей Николаевич
  • Неверова Ольга Петровна
  • Юрина Наталья Александровна
  • Кузминова Елена Васильевна
RU2689701C1
Способ получения пробиотической добавки для перепелов 2018
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Клименко Александр Иванович
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Дмитриев Владимир Игоревич
  • Салеева Ирина Павловна
  • Шхалахов Дамир Сафербиевич
  • Волчанская Анна Андреевна
  • Мищенко Валентин Андреевич
  • Лебедева Ирина Анатольевна
RU2688429C1
Способ кормления перепелов 2018
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Кочиш Иван Иванович
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Джавадов Эдуард Джавадович
  • Кононенко Сергей Иванович
  • Шхалахов Дамир Сафербиевич
  • Семененко Марина Петровна
  • Исаева Альбина Геннадьевна
  • Шаравьев Павел Викторович
RU2689730C1
Среда для получения пробиотической добавки для птицы 2018
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Лоретц Ольга Геннадиевна
  • Радченко Виталий Владиславович
  • Забашта Николай Николаевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Шевкопляс Владимир Николаевич
  • Дмитриев Владимир Игоревич
  • Дорожкин Василий Иванович
  • Волчанская Анна Андреевна
  • Хмара Ирина Николаевна
RU2698213C1
Способ производства пробиотической добавки 2018
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Фисинин Владимир Иванович
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Дмитриев Владимир Игоревич
  • Кривоногова Анна Сергеевна
  • Волчанская Анна Андреевна
  • Мищенко Валентин Андреевич
  • Суханова Светлана Фаилевна
  • Шкредов Владимир Викторович
RU2689680C1
Питательная среда для культивирования лактобактерий 2020
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Панин Александр Николаевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Гнеуш Анна Николаевна
  • Жучок Александра Юрьевна
  • Шантыз Алий Юсуфович
  • Клименко Александр Иванович
RU2759305C1
Среда для получения пробиотической добавки для птицы 2020
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Донник Ирина Михайловна
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Салеева Ирина Павловна
  • Клименко Александр Иванович
  • Нестеренко Антон Алексеевич
  • Кенийз Надежда Викторовна
RU2761882C1
Способ повышения устойчивости лактобактерий для пробиотической добавки 2020
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Джавадов Эдуард Джавадович
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Гнеуш Анна Николаевна
  • Дорожкин Василий Иванович
  • Шантыз Алий Юсуфович
  • Анискина Мария Владимировна
RU2753363C1
Способ выращивания перепелов 2020
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Фисинин Владимир Иванович
  • Шантыз Азамат Хазретович
  • Марченко Евгений Юрьевич
  • Кочиш Иван Иванович
  • Жучок Александра Юрьевна
  • Нестеренко Антон Алексеевич
  • Гнеуш Анна Николаевна
  • Муртазаев Курбан Нажмудинович
RU2756559C1
Способ получения пробиотической добавки для перепелов 2020
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Донник Ирина Михайловна
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Анискина Мария Владимировна
  • Джавадов Эдуард Джавадович
  • Муртазаев Курбан Нажмудинович
  • Жучок Александра Юрьевна
RU2757355C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 686 326 C1

Реферат патента 2019 года Питательная среда для культивирования лактобактерий

Изобретение относится к микробиологии и сельскому хозяйству и может быть использовано для получения пробиотической добавки с целью повышения мясной продуктивности перепелов. Предложенная питательная среда для культивирования лактобактерий состоит из мелассы кормовой, K2НРО4, дрожжевого экстракта и воды. При этом меласса кормовая состоит из свекловичной и кукурузной меласс, взятых в равных частях и микроорганизмов Lactobacillus agilis с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл при следующем соотношении исходных компонентов, г/л: меласса свекловичная 22-23, меласса кукурузная 22-23, K2НРO4 2,0, дрожжевой экстракт 0,02, микроорганизмы Lactobacillus agilis с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл 99-101, вода - остальное. Использование изобретения позволяет повысить титр молочнокислых культур lactobacillus agilis, в питательной среде. 2 табл., 5 ил.

Формула изобретения RU 2 686 326 C1

Питательная среда для культивирования лактобактерий, состоящая из мелассы кормовой, К2НРО4, дрожжевого экстракта и воды, отличающаяся тем, что меласса кормовая состоит из свекловичной и кукурузной меласс, взятых в равных частях, и микроорганизмов Lactobacillus agilis с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл, при следующем соотношении исходных компонентов, г/л:

Меласса свекловичная 22-23 Меласса кукурузная 22-23 K2НРО4 2,0 Дрожжевой экстракт 0,02 Микроорганизмы Lactobacillus agilis с титром не менее 1,0×105 КОЕ/мл 99-101 Вода Остальное

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2019 года RU2686326C1

ЛЫСЕНКО Ю.А
и др
Подбор эффективной питательной среды для выращивания лактобактерий как основы создания биопрепаратов для птицеводства // Современные аспекты производства и переработки сельско-хозяйственной продукции : сб
ст
по материалам III науч.-практ
конф
студентов, аспирантов и молодых ученых, посвящ
Прибор для очистки паром от сажи дымогарных трубок в паровозных котлах 1913
  • Евстафьев Ф.Ф.
SU95A1
- Краснодар : КубГАУ, 2017, С
Способ включения усилителя в трансляцию 1923
  • Коваленков В.И.
SU403A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ ФЕРМ КМ ДЛЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ПТИЦЫ 2009
  • Правдин Валерий Геннадьевич
  • Кравцова Любовь Захарьевна
  • Ушакова Нина Александровна
  • Разумова Людмила Васильевна
RU2412612C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ 2008
  • Леляк Александр Иванович
  • Малярчук Анастасия Александровна
  • Ноздрин Григорий Антонович
RU2378000C2
КОЩАЕВ А.Г
и др
Интенсификация процесса культивирования физиологически-адаптированных лактобацилл как основа создания биопрепаратов микробного происхождения для птицеводства // Политематический Сетевой Электронный Научный Журнал Кубанского Государственного Аграрного Университета, 2017, N 128, С
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРЕНА 1915
  • Бызов Б.В.
SU1102A1
MIDILLI М
et al
Станок для изготовления деревянных ниточных катушек из цилиндрических, снабженных осевым отверстием, заготовок 1923
  • Григорьев П.Н.
SU2008A1

RU 2 686 326 C1

Авторы

Лысенко Юрий Андреевич

Кощаев Андрей Георгиевич

Донник Ирина Михаиловна

Лунева Альбина Владимировна

Дмитриев Владимир Игоревич

Горковенко Наталья Евгеньевна

Волчанская Анна Андреевна

Гринь Светлана Анатольевна

Шантыз Азамат Хазретович

Дельцов Александр Александрович

Кощаева Ольга Викторовна

Даты

2019-04-25Публикация

2018-07-11Подача