УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ, ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ ИЗОБРЕТЕНИЮ

1. Область изобретения

[0001] Настоящее изобретение относится к циклическому пептиду, подложка для аффинной хроматографии, меченое антитело, конъюгат антитела и лекарственного средства и фармацевтический препарат.

2. Описание предшествующего уровня техники

[0002] В настоящее время лекарственные средства на основе антител привлекают внимание как наиболее надежные молекулярно-направленные лекарственные средства и быстро расширяют область применения новых фармацевтических продуктов. В большей части лекарственных средств на основе антител, которые разрабатываются или используются в настоящее время, используют антитела, принадлежащие к классу иммуноглобулин G (IgG).

[0003] В известном уровне техники для очистки антител IgG используют белки, такие как белок A или белок G, получаемые из Staphylococcus aureus. Вследствие того, что эти белки также связываются с IgG мыши и кролика, белки часто использовали для очистки IgG на уровне реагентов для исследования. В последние годы в фармацевтической области использовали лекарственные средства на основе антител, главным образом применяя IgG1 человека, и таким образом, дополнительно возросла важная роль лекарственных средств на основе антител в промышленном и фармацевтическом применении. В частности, колонка с белком A играет ключевую роль в очистке лекарственного средства на основе антитела, и многие производители лекарственных средств на основе антител адаптируют систему очистки в основном с использованием этой колонки.

[0004] Тем не менее, для колонки с белком A были выявлены определенные проблемы. Одной из проблем является то, что белок A смешивают с очищенными антителами. Белок A представляет собой белок, получаемый из бактерий, и характеризуется высокой иммуногенностью после введения в организм человека, и существует вопросы безопасности, связанные со смешиванием эндотоксина с этим белком. Для аффинного лиганда, такого как белок A, в качестве лиганда, используемого для очистки фармацевтических препаратов, во избежание смешивания нежелательных веществ, требуется высокая степень очистки. Таким образом, увеличивается стоимость колонки с белком A, используемой для очистки фармацевтических препаратов.

[0005] Для решения проблемы разрабатывают новую систему очистки антитела IgG.

[0006] Например, в патенте США номер заявки 2004/0087765 описан связывающий иммуноглобулин полипептид, который содержит аминокислотную последовательность R¹-X01-X02-X03-X04-X05-X06-X07-X08-X09-X10-X11-X12-X13-R² и содержит приблизительно от 11 до 13 остатков. В патенте США номер заявки 2004/0087765 описано, что полипептид может представлять собой циклический пептид, циклизированный посредством образования дисульфидной связи (в случае, когда X02=X12=C) или амидной связи (в случае, когда один из X02 и X12 представляет собой Dpr, Dab, K или Orn, а другой представляет собой D или E; здесь Dab представляет собой диаминобутановую кислоту, Dpr представляет собой диаминопропионовую кислоту, и Orn представляет собой орнитин) между X02 и X12 ([0017]-[0034]).

[0007] Кроме того, например, в WO2013/027796A описан связывающий IgG полипептид, который предоставлен (X_1-3)-C-(X₂)-H-R-G-(Xaa1)-L-V-W-C-(X_1-3) и содержит от 13 до 17 аминокислотных остатков. В WO2013/027796A описано, что полипептид может представлять собой циклический пептид, в котором дисульфидная связь образуется между двумя остатками цистеина (C) ([0042]-[0044]).

[0008] Кроме того, например, в JP2007-289200A описан связывающий IgG-Fc пептид, который имеет формулу Xaa₁-Xaa₂-Xaa₃-Xaa₄-Cys-Xaa₅-Xaa₆-Xaa₇-Xaa₈-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Xaa₉-Xaa₁₀-Xaa₁₁-Xaa₁₂-Xaa₁₃ и содержит от 11 до 20 аминокислот (пункт формулы изобретения 39). В JP2007-289200A описано, что пептид может циклизироваться посредством образования дисульфидной связи или лактамной связи, где остатки, которые могут образовывать дисульфидную связь включают Cys, Pen, Mpr, Mpp и т.п., и остатки, которые могут образовывать лактамную связь включают Asp, Glu, Lys, Orn, αβ-диаминомасляную кислоту, диаминоуксусную кислоту, аминобензойную кислоту, меркаптобензойную кислоту и т.п. ([0039]).

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0010] Уделив особое внимание улучшению свойств связывания антитела путем регуляции пространственной структуры, автор настоящего изобретения исследовал активность связывания и устойчивость к химическому воздействию связывающих антитело циклических пептидов, описанных в патенте США номер заявки 2004/0087765, WO2013/027796A и JP2007-289200A. В результате, автор изобретения выявил, что активность связывания и устойчивость к химическому воздействию пептидов необходимо дополнительно улучшать.

[0011] Целью настоящего изобретения является предоставление циклического пептида, обладающего очень хорошими свойствами связывания антитела и улучшенной устойчивостью к химическому воздействию, подложки для аффинной хроматографии, меченого антитела, конъюгата антитела и лекарственного средства и фармацевтического препарата.

[0012] Для достижения указанной выше цели автор настоящего изобретения повторно проводил глубокие исследования. В результате, автор изобретения выявил, что аминокислотные остатки в поперечно-сшитых участках играют важные роли в устойчивости к химическому воздействию, и выполнил настоящее изобретение.

[0013] Таким образом, настоящее изобретение относится к [1]-[50], описанным ниже.

[1] Циклический пептид, представленной формулой (I).

R^N-X_g-[X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j]_k-X_h-R^C (I)

В формуле (I) R^N представляет собой N-концевую группу; R^C представляет собой C-концевую группу; X¹ представляет собой остаток L-лейцина, остаток L-изолейцина, остаток L-метионина, остаток L-лизина или остаток L-аргинина; X² представляет собой остаток L-валина или остаток L-изолейцина; X³ представляет собой остаток L-триптофана; каждый из X^a и X^b независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, и они связаны друг с другом дисульфидной связью, или, один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, а другой представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи; каждый из X_g, X_h, X_i, X_j, X_m и X_n представляет собой g последовательных X; h последовательных X, i последовательных X, j последовательных X, m последовательных X и n последовательных X; X представляет собой аминокислотный остаток, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из g, h, i и j независимо представляет собой целое число равное или больше 0; m и n представляют собой целые числа, удовлетворяющие 0≤m≤9, 0≤n≤9 и 3≤m+n≤9 одновременно; и k представляет собой целое число равное или больше 1, и в случае, когда k≥2, каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X_i, X_j, X_m и X_n в повторяющейся единице [X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j] может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[2] Циклический пептид, описанный в [1], который представлен формулой (IA).

R^N-X_g-[X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X^5s-X_q2]_k-X_h-R^C (IA)

В формуле (IA), R^N, R^C, X¹, X², X³, X^a, X^b, X_g, X_h, X_m, X_n, X, g, h, m, n и k имеют такие же определения как определения в формуле (I); каждый из X⁴_r, X⁵_s, X_p1, X_p2, X_q1 и X_q2 представляет собой r последовательных X⁴, s последовательных X⁵, p1 последовательных X, p2 последовательных X, q1 последовательных X и q2 последовательных X; каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из p1, p2, q1 и q2 независимо представляет собой целое число, равное или больше 0; каждый из r и s независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤5, 0≤s≤5 и 1≤Max (r, s)≤5, где Max (r, s) представляет собой большее число из двух чисел, представленных r и s, в случае, когда r≠s и представляет собой r или s, в случае, когда r=s; и в случае, когда k≥2, каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X⁴_r, X⁵_s, X_m, X_n, X_p2, X_p1, X_q1 и X_q2 в повторяющейся единице [X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2] может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[3] Циклический пептид, описанный в [1], который представлен формулой (IB).

R^N-X_v1-X⁶_t-X_v2-[X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j]_k-X_w2-X⁷_u-X_w1-R^C (IB)

В формуле (IB), R^N, R^C, X¹, X², X³, X^a, X^b, X_i, X_j, X_m, X_n, X, i, j, m, n и k имеют такие же определения как определения в формуле (I); каждый из X⁶_t, X⁷_u, X_v1, X_v2, X_w1 и X_w2 представляет собой t последовательных X⁶, u последовательных X⁷, v1 последовательных X, v2 последовательных X, w1 последовательных X и w2 последовательных X; каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из t и u независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤5, 0≤u≤5 и 1≤Max (t,u)≤5, где Max (t,u) представляет собой большее число из двух чисел, представленных t и u в случае, когда t≠u и представляет собой t или u в случае, когда t=u; каждый из v1, v2, w1 и w2 независимо представляет собой целое число, равное или больше 0; и в случае, когда k≥2, каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X_i, X_j, X_m и X_n в повторяющейся единице [X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j] может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[4] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[3], который представлен формулой (IC).

R^N-X_v1-X⁶_t-X_v2-[X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2]_k-X_w2-X⁷_u-X_w1-R^C (IC)

В формуле (IC), R^N, R^C, X¹, X², X³, X^a, X^b, X_m, X_n, X, m, n и k имеют такие же определения как определения в формуле (I);

Каждый из X_p1, X_p2, X_q1, X_q2, X⁴_r, X⁵_s, X⁶_t, X⁷_u, X_v1, X_v2, X_w1 и X_w2 представляет собой p1 последовательных X, p2 последовательных X, q1 последовательных X, q2 последовательных X, r последовательных X⁴, s последовательных X⁵, t последовательных X⁶, u последовательных X⁷, v1 последовательных X, v2 последовательных X, w1 последовательных X и w2 последовательных X; каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из p1, p2, q1 и q2 независимо представляет собой целое число, равное или больше 0; каждый из r и s независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤5, 0≤s≤5 и 1≤Max (r, s)≤5, где Max (r, s) представляет собой большее число из двух чисел, представленное r и s в случае, когда r≠s и представляет собой r или s в случае, когда r=s; каждый из t и u независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤5, 0≤u≤5 и 1≤Max (t,u)≤5, где Max (t,u) представляет собой большее число из двух чисел представленных t и u в случае, когда t≠u и представляет собой t или u в случае, когда t=u; каждый из v1, v2, w1 и w2 независимо представляет собой целое число, равное или больше 0; и в случае, когда k≥2, каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X⁴_r, X⁵_s, X_m, X_n, X_p2, X_p1, X_q1 и X_q2 в повторяющейся единице [X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2] может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[5] Циклический пептид, описанный в [1], где 8≤g+h+k×(i+j+m+n+5)≤50.

[6] Циклический пептид, описанный в [2], где 8≤g+h+k×(m+n+p1+p2+q1+q2+5)≤50.

[7] Циклический пептид, описанный в [3], где 8≤v1+v2+w1+w2+t+u+k×(i+j+m+n+5)≤50.

[8] Циклический пептид, описанный в [4], где 8≤v1+v2+w1+w2+t+u+k×(m+n+p1+p2+q1+q2+5)≤50.

[9] Циклический пептид, описанный в [2], [4], [6] или [8], где аминокислота, содержащая карбоксигруппу в боковой цепи относится по меньшей мере к одному типу аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-аспарагиновой кислоты, D-аспарагиновой кислоты, L-глутаминовой кислоты, D-глутаминовой кислоты, L-гомоглутаминовой кислоты и D-гомоглутаминовой кислоты, и аминокислота, содержащая гидроксигруппу в боковой цепи, относится по меньшей мере к одному типу аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-тирозина, D-тирозина, L-треонина, D-треонина, L-аллотреонина и D-аллотреонина.

[10] Циклический пептид, описанный в [9], где аминокислота, содержащая карбоксигруппу в боковой цепи, представляет собой L-аспарагиновую кислоту, и аминокислота, содержащая гидроксигруппу в боковой цепи, представляет собой L-треонин.

[11] Циклический пептид, описанный в [3], [4], [7] или [8], где имобилизирующая функциональная группа представляет собой аминогруппу или тиоловую группу.

[12] Циклический пептид, описанный в [3], [4], [7] или [8], где аминокислота, содержащая иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, относится по меньшей мере к одному типу аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-лизина, D-лизина, L-цистеина, D-цистеина, L-гомоцистеина и D-гомоцистеина.

[13] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[12], где X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранную из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина, X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина или D-гомоцистеина, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[14] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[12], где X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина или D-гомоцистеина, X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[15] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[14], где неполная аминокислотная последовательность X_m-X¹-X²-X³-X_n в формуле (I), (IA), (IB) или (IC) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:1), представленная формулой (1), обладают гомологией последовательности, равной или более 70%.

A-Y-H-L-G-E-L-V-W (1)

В формуле (1) A представляет собой остаток L-аланина; Y представляет собой остаток L-тирозина; H представляет собой остаток L-гистидина; L представляет собой остаток L-лейцина; G представляет собой остаток глицина; E представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты; V представляет собой остаток L-валина, и W представляет собой остаток L-триптофана.

[16] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[15], где в формуле (I), (IA), (IB) или (IC) k=1.

[17] Циклический пептид, описанный в [1], который представлен формулой (II).

R^N-X_v0-X⁶_t0-X_e0-X⁴_r0-X_p0-X^a-A-Y-H-X⁸-G-E-L-V-W-X^b-X_q0-X⁵_s0-X_f0-X⁷_u0-X_w0-R^C (II)

В формуле (II) X^a, X^b, X, R^N и R^C имеют такие же определения как определения в формуле (I); каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; X⁸ представляет собой остаток L-лейцина, остаток D-лейцина, остаток L-аргинина или остаток D-аргинина; каждый из e0 и f0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤e0≤10 и 0≤f0≤10; каждый из p0 и q0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤p0≤5 и 0≤q0≤5; каждый из r0 и s0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r0≤5 и 0≤s0≤5; каждый из t0 и u0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t0≤5 и 0≤u0≤5; каждый из v0 и w0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤v0≤5 и 3≤w0≤5; p0, q0, r0, s0, t0, u0, v0 и w0 удовлетворяют 0≤p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤39; A представляет собой остаток L-аланина или остаток D-аланина; Y представляет собой остаток L-тирозина или остаток D-тирозина; H представляет собой остаток L-гистидина или остаток D-гистидина; G представляет собой остаток глицина; E представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты или остаток D-глутаминовой кислоты; L представляет собой остаток L-лейцина; V представляет собой остаток L-валина, и W представляет собой остаток L-триптофана.

[18] Циклический пептид, описанный в [17], где каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-лизина, D-лизина, L-цистеина, D-цистеина, L-гомоцистеина и D-гомоцистеина

[19] Циклический пептид, описанный в [17] или [18], где X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина, X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина или D-гомоцистеина, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[20] Циклический пептид, описанный в [17] или [18], где X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина или D-гомоцистеина, X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[21] Циклический пептид, представленный формулой (I')

R^N-X_g-[X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j]_k-X_h-R^C (I')

В формуле (I') R^N представляет собой N-концевую группу; R^C представляет собой C-концевую группу; X¹ представляет собой остаток L-лейцина, остаток L-изолейцина, остаток L-метионина, остаток L-лизина или остаток L-аргинина; X² представляет собой остаток L-валина или остаток L-изолейцина; X³ представляет собой остаток L-триптофана; один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, а другой представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи, или один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, а другой представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи; каждый из X_g, X_h, X_i, X_j, X_m, и X_n представляет собой g последовательных X, h последовательных X, i последовательных X, j последовательных X, m последовательных X и n последовательных X; в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, X представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, X представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из g, h, i и j независимо представляет собой целое число равное или больше 0; m и n представляют собой целые числа, удовлетворяющие одновременно 0≤m≤9, 0≤n≤9 и 3≤m+n≤9; и k представляет собой целое число равное или больше 1, и в случае, когда k≥2, каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X_i, X_j, X_m, и X_n в повторяющейся единице [X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j] может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[22] Циклический пептид, описанный в [21], который представлен формулой (I'A).

R^N-X_g-[X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s-X_q2]_k-X_h-R^C (I'A)

В формуле (I'A) R^N, R^C, X¹, X², X³, X^a, X^b, X_g, X_h, X_m, X_n, g, h, m, n и k имеют такие же определения как определения в формуле (I'); каждый из X⁴_r, X⁵_s, X_p1, X_p2, X_q1, и X_q2 представляет собой r последовательных X⁴, s последовательных X⁵, p1 последовательных X, p2 последовательных X, q1 последовательных X и q2 последовательных X; в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, X представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, X представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина и D-гомосерина, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина или D-серина, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из p1, p2, q1 и q2 независимо представляет собой целое число, равное или больше 0; каждый из r и s независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤5, 0≤s≤5 и 1≤Max (r, s)≤5, где Max (r, s) представляет собой большее число из двух чисел, представленное r и s в случае, когда r≠s и представляет собой r или s в случае, когда r=s; и в случае, когда k≥2, каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X⁴_r, X⁵_s, X_m, X_n, X_p2, X_p1, X_q1 и X_q2 в повторяющейся единице [X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2] может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[23] Циклический пептид, описанный в [21], который представлен формулой (I'B).

R^N-X_v1-X⁶_t-X_v2-[X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j]_k-X_w2-X⁷_u-X_w1-R^C (I'B)

В формуле (I'B) R^N, R^C, X¹, X², X³, X^a, X^b, X_i, X_j, X_m, X_n, i, j, m, n и k имеют такие же определения как определения в формуле (I'); каждый из X⁶_t, X⁷_u, X_v1, X_v2, X_w1, и X_w2 представляет собой t последовательных X⁶, u последовательных X⁷, v1 последовательных X, v2 последовательных X, w1 последовательных X и w2 последовательных X; в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, X представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, X представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, или каждый из них независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из t и u независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤5, 0≤u≤5 и 1≤Max (t,u)≤5, где Max (t,u) представляет собой большее число из двух чисел представленных t и u в случае, когда t≠u и представляет собой t или u в случае, когда t=u; каждый из v1, v2, w1 и w2 независимо представляет собой целое число, равное или больше 0; и в случае, когда k≥2, каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X_i, X_j, X_m и X_n в повторяющейся единице [X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j] может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[24] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [21]-[23], который представлен формулой (I'C).

R^N-X_v1-X⁶_t-X_v2-[X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2]_k-X_w2-X⁷_u-X_w1-R^C (I'C)

В формуле (I'C) R^N, R^C, X¹, X², X³, X^a, X^b, X_m, X_n, m, n и k имеют такие же определения как определения в формуле (I'); каждый из X_p1, X_p2, X_q1, X_q2, X⁴_r, X⁵_s, X⁶_t, X⁷_u, X_v1, X_v2, X_w1 и X_w2 представляет собой p1 последовательных X, p2 последовательных X, q1 последовательных X, q2 последовательных X, r последовательных X⁴, S последовательных X⁵, t последовательных X⁶, u последовательных X⁷, v1 последовательных X, v2 последовательных X, w1 последовательных X и w2 последовательных X; в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, X представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, X представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина и D-гомосерина, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серин и D-серин, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, или каждый их них независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из p1, p2, q1 и q2 независимо представляет собой целое число, равное или больше 0; каждый из r и s независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤5, 0≤s≤5 и 1≤Max (r, s)≤5, где Max (r, s) представляет собой большее число из двух чисел, представленное r и s в случае, когда r≠s и представляет собой r или s в случае, когда r=s; каждый из t и u независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤5, 0≤u≤5 и 1≤Max (t,u)≤5, где Max (t,u) представляет собой большее число из двух чисел представленных t и u в случае, когда t≠u и представляет собой t или u в случае, когда t=u; каждый из v1, v2, w1 и w2 независимо представляет собой целое число, равное или больше 0; и в случае, когда k≥2, каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X⁴_r, X⁵_s, X_m, X_n, X_p2, X_p1, X_q1 и X_q2 в повторяющейся единице [X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2] может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[25] Циклический пептид, описанный в [21], где 8≤g+h+k×(i+j+m+n+5)≤50.

[26] Циклический пептид, описанный в [22], где 8≤g+h+k×(m+n+p1+p2+q1+q2+5)≤50.

[27] Циклический пептид, описанный в [23], где 8≤v1+v2+w1+w2+t+u+k×(i+j+m+n+5)≤50.

[28] Циклический пептид, описанный в [24], где 8≤v1+v2+w1+w2+t+u+k×(m+n+p1+p2+q1+q2+5)≤50.

[29] Циклический пептид, описанный в [22], [24], [26] или [28], где аминокислота, содержащая карбоксигруппу в боковой цепи относится по меньшей мере к одному типу аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-аспарагиновой кислоты, D-аспарагиновой кислоты, L-глутаминовой кислоты, D-глутаминовой кислоты, L-гомоглутаминовой кислоты и D-гомоглутаминовой кислоты, в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, аминокислота отличная от L-серина, D-серина, L-гомосерина и D-гомосерина, содержащая гидроксигруппу в боковой цепи, относится по меньшей мере к одному типу аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-тирозина, D-тирозина, L-треонина, D-треонина, L-аллореонина и D-аллотреонина и в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, аминокислота отличная от L-серина и D-серина, содержащая гидроксигруппу в боковой цепи относится по меньшей мере к одному типу аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-гомосерина, D-гомосерина, L-тирозина, D-тирозина, L-треонина, D-треонина, L-аллотреонина и D-аллотреонина.

[30] Циклический пептид, описанный в [22], [24], [26] или [28], где аминокислота, содержащая карбоксигруппу в боковой цепи, представляет собой L-аспарагиновую кислоту, и аминокислота отличная от L-серина, D-серина, L-гомосерина и D-гомосерина, содержащая гидроксигруппу в боковой цепи и аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, представляют собой L-треонин.

[31] Циклический пептид, описанный в [23], [24], [27] или [28], где иммобилизирующая функциональная группа представляет собой аминогруппу или тиоловую группу.

[32] Циклический пептид, описанный в [23], [24], [27] или [28], где аминокислота отличная от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, содержащая иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, содержащий иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, относятся по меньшей мере к одному типу аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-лизина, D-лизина, L-цистеина, D-цистеина, L-гомоцистеина и D-гомоцистеина.

[33] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [21]-[32], где X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина, X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, или аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[34] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [21]-[32, где X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, или аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[35] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [21]-[34], где неполная аминокислотная последовательность X_m-X¹-X²-X³-X_n в формуле (I'), (I'A), (I'B) или (I'C) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:1), представленная формулой (1), обладают общей гомологией последовательности равной 70% или выше.

A-Y-H-L-G-E-L-V-W (1)

В формуле (1) A представляет собой остаток L-аланина; Y представляет собой остаток L-тирозина; H представляет собой остаток L-гистидина; L представляет собой остаток L-лейцина; G представляет собой остаток глицина; E представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты; V представляет собой остаток L-валина, и W представляет собой остаток L-триптофана.

[36] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [21]-[35], где в формуле (I'), (I'A), (I'B) или (I'C) k=1.

[37] Циклический пептид, описанный в [21], который представлен формулой (II').

R^N-X_v0-X⁶_t0-X_e0-X⁴_r0-X_p0-X^a-A-Y-H-X⁸-G-E-L-V-W-X^b-X_q0-X⁵_s0-X_f0-X⁷_u0-X_w0-R^C (II')

В формуле (II') X^a, X^b, X, R^N и R^C имеют такие же определения как определения в формуле (I'); в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина и D-гомосерина, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, или каждый из них независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, X⁸ представляет собой остаток L-лейцина или остаток D-лейцина, в случае, когда один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, X⁸ представляет собой остаток L-лейцина, остаток D-лейцина, остаток L-аргинина, или остаток D-аргинина; каждый из e0 и f0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤e0≤10 и 0≤f0≤10; каждый из p0 и q0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤p0≤5 и 0≤q0≤5; каждый из r0 и s0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r0≤5 и 0≤s0≤5; каждый из t0 и u0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t0≤5 и 0≤u0≤5; каждый из v0 и w0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤v0≤5 и 3≤w0≤5; p0, q0, r0, s0, t0, u0, v0 и w0 удовлетворяет 0≤p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤39; A представляет собой остаток L-аланина или остаток D-аланина; Y представляет собой остаток L-тирозина или остаток D-тирозина; H представляет собой остаток L-гистидина или остаток D-гистидина; G представляет собой остаток глицина; E представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты или остаток D-глутаминовой кислоты; L представляет собой остаток L-лейцина; V представляет собой остаток L-валина, и W представляет собой остаток L-триптофана.

[38] Циклический пептид, описанный в [37], где каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-лизина, D-лизина, L-цистеина, D-цистеина, L-гомоцистеина и D-гомоцистеина.

[39] Циклический пептид, описанный в [37] или [38], где X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина, X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, или аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[40] Циклический пептид, описанный в [37] или [38], где X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, или аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[41] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[40], который представляет собой связывающий антитело лиганд.

[42] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[40], который представляет собой линкер для мечения антитела.

[43] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[40], который представляет собой линкер для конъюгатов антител c лекарственными средствами.

[44] Циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[40], который представляет собой носитель для лекарственного средства.

[45] Подложка для аффинной хроматографии, содержащий нерастворимую в воде подложку и циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[40], где нерастворимая в воде подложка и циклический пептид непосредственно или опосредованно связаны друг с другом.

[46] Меченое антитело, содержащее антитело, метящее соединение и циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[40], где антитело и метящее соединение связаны друг с другом посредством циклического пептида.

[47] Конъюгат антитела c лекарственным средством, содержащий антитело, лекарственное средство и циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[40], где антитело и лекарственное средство связаны друг с другом посредством циклического пептида.

[48] Конъюгат антитела c лекарственным средством, описанный в [47], где лекарственное средство представляет собой лекарственное средство, подвергнутое инкапсуляции в липосому, мицеллообразованию с использованием полимеров или пэгилированию.

[49] Фармацевтический препарат, содержащий лекарственное средство и циклический пептид, описанный в любом из пунктов [1]-[40], где лекарственное средство и циклический пептид являются непосредственно или опосредованно связанными друг с другом.

[50] Фармацевтический препарат, описанный в [49], где лекарственное средство представляет собой лекарственное средство, подвергнутое инкапсуляции в липосому, мицеллообразованию с использованием полимеров или пэгилированию.

[0014] По настоящему изобретению предоставлены циклический пептид, обладающий превосходными свойствами связывания и улучшенной устойчивостью к химическому воздействию, подложка для аффинной хроматографии, меченое антитело, конъюгат антитела и лекарственного средства и фармацевтический препарат.

ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

[0015] [Циклический пептид по настоящему изобретению]

Сначала будут описаны характеристики по настоящему изобретению, которые не встречаются в предшествующем уровне техники.

В патенте США номер заявки 2004/0087765, WO2013/027796A, и JP2007-289200A описаны циклические пептиды, циклизированные посредством образования дисульфидной связи между двумя остатками цистеина. Согласно результатам оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию в сравнительном примере 2, который будет описан ниже, несмотря на то, что свойства связывания антитела циклических пептидов, циклизованных посредством образования дисульфидной связи между двумя остатками цистеина, являются превосходными, их устойчивость к химическому воздействию является слабой, и, таким образом, невозможно получать желаемых характеристик.

В патенте США номер заявки 2004/0087765 описан циклический пептид, циклизованный в результате образования амидной связи между двумя аминокислотными остатками в результате реакции между аминогруппой боковой цепи и карбоксигруппой боковой цепи. В JP2007-289200A описан циклический пептид, циклизованный посредством образования лактамной связи (амидной связь) между N-концевой аминогруппой или аминогруппой боковой цепи и карбоксигруппой боковой цепи. Согласно результатам оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию в сравнительном примере 1, который будет описан ниже, несмотря на то, что устойчивость к химическому воздействию циклического пептида, циклизованного посредством амидной связи между аминогруппой боковой цепи и карбоксигруппой боковой цепи, является улучшенной, его связывания антитела являются слабыми, и, таким образом, невозможно получать желаемых характеристик.

С другой стороны, в настоящем изобретении, вследствие того, что применяли конструкции, которые будут описаны ниже, можно получать циклический пептид, обладающий превосходными свойствами связывания антитела и улучшенной устойчивостью к химическому воздействию.

[0016] В настоящем описании, в случае, когда "до" используют для диапазона числовых значений, числовые значения, перечисленные с левой и правой сторон от "до" входят в диапазон числовых значений.

[0017] <Аминокислота и аминокислотный остаток>

В настоящем изобретении в основном аминокислоты описаны с использованием названий, кодов и т.п., принятых Объединенная комиссией по биохимической номенклатуре (JCBN) Международного союза теоретической и прикладной химии и Международного союза биохимии и молекулярной биологии IUPAC-IUB. Кроме того, аминокислотные остатки описаны с использованием кодов аминокислот, из которых получают аминокислотные остатки. Аминокислотные остатки включают N-концевые аминокислоты (N-концевые остатки) и C-концевые аминокислоты (C-концевые остатки).

[0018] Если не указано иное, аминокислотную последовательность (обозначаемую как "первичная структура") пептида или белка описывают путем выравнивания аминокислотных остатков в линию, таким образом, что левый конец линии становится N-концом, а правый конец линии становится C-концом. В случае, когда аминокислотный остаток в аминокислотной последовательности пептида или белка идентифицирован, включая его положение, в некоторых случаях число, показывающее, какое положение занимает аминокислотный остаток со стороны N-конца, помещают с правой стороны от кода аминокислотного остатка. Например, в некоторых случаях второй L-лизин от N-конца описывают как Lys2.

[0019] В случае, когда аминокислоту описывают с использованием ее названия, и аминокислота включает изомеры с энантиомерным соотношением, другими словами, в случае, когда аминокислота включает L-изомер и D-изомер, за исключением случаев, когда L-изомер и D-изомер можно четко отделять друг от друга, аминокислота представляет собой в основном L-изомер. Например, "изолейцин" представляет собой "L-изолейцин", и энантиомер "изолейцин" представляет собой "D-изолейцин". Тоже справедливо и для аминокислотных остатков.

[0020] В случае, когда аминокислоту описывают с использованием ее кода (трехбуквенный код или однобуквенный код), и аминокислота включает изомеры с энантиомерным соотношением, т.е. в случае, когда аминокислота включает L-изомер и D-изомер, за исключением случаев, когда L-изомер и D-изомер четко отличаются друг от друга, в основном аминокислота представляет собой L-изомер. Здесь "X", представляющий любую аминокислоту не является ограниченным ей. Например, "Lys" и "L-Lys" представляют собой "L-лизин", и "D-Lys" представляет собой "D-лизин". Тоже справедливо и для аминокислотных остатков.

[0021] В случае, когда аминокислоту описывают с использованием ее названия, и аминокислота включает изомеры с диастереомерным соотношением, изомеры не входят в аминокислоту, указанную ее названием. Диастереомер описывают с использованием приставки "алло" и рассматривают как другой тип аминокислоты. Например, "треонин" и "L-треонин" не включают "L-аллотреонин", и "D-треонин" не включает "D-аллотреонин". Тоже справедливо и для аминокислотных остатков.

[0022] В таблице 1 приведены названия и коды (однобуквенный код и трехбуквенный код) аминокислот с официально общепризнанными однобуквенными кодами и трехбуквенными кодами.

[0023] Таблица 1

Однобуквенный код Трехбуквенный код Название Однобуквенный код Трехбуквенный код Название A Ala L-аланин O Pyl L-пирролизин B Asx L-аспарагиновая кислота или L-аспарагин P Pro L-пролин C Cys L-цистеин Q Gln L-глутамин D Asp L-аспарагиновая кислота R Arg L-аргинин E Glu L-глутаминовая кислота S Ser L-серин F Phe L-фенилаланин T Thr L-треонин G Gly Глицин U Сек L-селеноцистеин H His L-гистидин V Val L-валин I Ile L-изолейцин W Trp L-триптофан K Lys L-лизин X Xaa аминокислота L Leu L-лейцин Y Tyr L-тирозин M Met L-метионин Z Glx L-глутаминовая кислота или L-глутамин N Asn L-аспарагин

[0024] Аминокислоты не являются ограниченными аминокислотами, приведенным в таблице 1, и также можно использовать аминокислоты, обозначаемый как нестандартные аминокислота. Примеры нестандартных аминокислот приведены в таблице 2, представленной ниже, но настоящее изобретение не ограничено ими.

[0025] Таблица 2

Трехбуквенный код Название Трехбуквенный код Название Aad гомоглутаминовая кислота Dpr 2,3-диаминопропионовая кислота bAad 3-аминоадипинов кислота Gla 4-карбоксиглутаминовая кислота Abu 2-аминобутанов кислота Glp 5-оксопролин A2bu 2,4-диаминобутановая кислота Hcy гомоцистеин Ahx 2-аминогексановая кислота Hse гомосерин Ahe 2-аминогептановая кислота Hsl гомосеринлактон Aib 2-аминоизомасляная кислота 5Hyl 5-гидроксилизин (Hyl) eAhx 6-аминогексановая кислота aHyl аллогидроксилизин bAla b-аланин 3Hyp 3-гидроксипролин Ape 2-аминопентановая кислота 4Hyp 4-гидроксипролин A2pr 2,3-диаминопропионовая кислота alle аллоизолейцин Apm 2-аминопимелиновая кислота Nle норлейцин A2pm 2,6-диаминопимелиновая кислота Nva норвалин Cit цитруллин Orn орнитин Cya цистеиновая кислота Sar саркозин Dbu 2,4-диаминобутановая кислота aThr аллотреонин Dpm 2,6-диаминопимелиновая кислота Thx тироксин Pen пеницилламин

[0026] Структура циклического пептида (I) по настоящему изобретению

Далее в настоящем описании будет подробно описан циклический пептид по настоящему изобретению.

Циклический пептид по настоящему изобретению представляет собой циклический пептид, представленный формулой (I).

R^N-X_g-[X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j]_k-X_h-R^C (I)

[0027] В формуле (I), например, X_n означает, что n X связаны друг с другом. Другими словами, X_n означает -(X)_n-. X_g, X_h, X_i, X_j, и X_m означает тоже самое что и X_n.

[0028] Циклическая часть, линейная часть, сшитая часть и антителосвязывающая часть

В отношении циклического пептида по настоящему изобретению в полипептидной цепи кольцевую часть, закрытую сшиванием, обозначают как циклическая часть, а часть, которая не входит в циклическую часть обозначают как линейная часть. Кроме того, в циклической части часть, формирующую сшитую структуру в молекуле циклического пептида по настоящему изобретению, обозначают как сшитая часть, и часть, в значительной степени определяющая свойства связывания антитела циклического пептида по настоящему изобретению, обозначают как антителосвязывающая часть.

В циклическом пептиде, представленном формулой (I), "X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b" является циклической частью, "X_g", "X_h", "X_i" и "X_j" являются линейными частями, "X^a" и "X^b" являются сшитыми частями, и "X¹-X²-X³" представляет собой антителосвязывающую часть.

В формуле (1) в некоторых случаях [X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j] обозначают как повторяющуюся часть.

[0029] N-концевая группа

В формуле (I) R^N представляет собой N-концевую группу.

Примеры N-концевой группы включают аминогруппу, и аминогруппа может претерпевать N-концевую модификацию, такую как N-ацетилирование, N-формилирование или N-ацилирование.

[0030] C-концевая группа

В формуле (I) R^C представляет собой C-концевую группу.

Примеры C-концевой группы включают карбоксигруппу, и карбоксигруппа может претерпевать модификацию на C-конце, такую как амидирование.

[0031] X¹, X² и X³

В формуле (I) X¹ представляет собой остаток L-лейцина, остаток L-изолейцина, остаток L-метионина, остаток L-лизина или остаток L-аргинина. X¹ предпочтительно представляет собой остаток L-лейцина или остаток L-изолейцина и более предпочтительно остаток L-лейцина.

В формуле (I) X² представляет собой остаток L-валина или остаток L-изолейцина и предпочтительно остаток L-валина.

В формуле (I) X³ представляет собой остаток L-триптофана.

[0032] X^a и X^b

В формуле (I) X^a и X^b являются такими, как объясняют в первом-четвертом вариантах осуществления, описанных ниже.

[0033] Первый вариант осуществления

В формуле (I) каждый из X^a и X^b независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, и они связаны друг с другом дисульфидной связью.

[0034] Type аминокислоты и аминокислотного остатка

Аминокислота, отличная от L-цистеина и D-цистеина, содержащая тиоловую группу в боковой цепи, конкретно не ограничена при условии, что она представляет собой аминокислоту, отличную от L-цистеина и D-цистеина, содержащую тиоловую группу в боковой цепи. Примеры аминокислоты включают аминокислоту, представленную следующей ниже формулой.

[0035]

[0036] В указанной выше формуле n представляет собой целое число равное или больше 2. N предпочтительно представляет собой целое число, удовлетворяющее 2≤n≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤n≤3, и даже более предпочтительно 2.

Аминокислота, представленная указанной выше формулой, может представлять собой L-изомер или D-изомер и предпочтительно представляет собой L-изомер.

[0037] В частности, примеры аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, включают L-гомоцистеин, D-гомоцистеин, L-бисгомоцистеин, D-бисгомоцистеин и т.п., но аминокислота не является ограниченной ими.

Аминокислота, отличная от L-цистеина и D-цистеина, содержащая тиоловую группу в боковой цепи, предпочтительно представляет собой L-гомоцистеин или D-гомоцистеин и более предпочтительно L-гомоцистеин.

[0038] Примеры аминокислотных остатков, получаемых из аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, включают аминокислотный остаток, представленный следующей ниже формулой.

[0039]

[0040] В указанной выше формуле n представляет собой целое число равное или больше 2. N предпочтительно представляет собой число, удовлетворяющее 2≤n≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤n≤3, и даже более предпочтительно 2; и * представляет собой точку связывания.

Аминокислотный остаток, представленный указанной выше формулой, можно получать из L-аминокислоты или D-аминокислоты и предпочтительно получают из L-аминокислоты.

[0041] В частности, примеры аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, включают аминокислотные остатки, получаемые из L-гомоцистеина, D-гомоцистеина, L-бисгомоцистеина, D-бисгомоцистеина и т.п., но аминокислотный остаток не ограничен ими.

Аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, предпочтительно представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина или D-гомоцистеина, и более предпочтительно аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина.

[0042] Дисульфидная связь

В первом варианте осуществления циклического пептида по настоящему изобретению между X^a и X^b сшитая структура образуется посредством дисульфидной связи, образованной между дисульфидными группами боковых цепей. Таким образом, дисульфидная связь образована между тиоловой группой боковой цепи первого аминокислотного остатка, который получают из аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, и тиоловой группой второго аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи.

[0043] Следующая ниже формула демонстрирует пример сшитой структуры сформированной в результате образования дисульфидной связи между тиоловыми группами боковой цепи двух аминокислотных остатков, получаемых из аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи.

[0044]

[0045] В указанной выше формуле m представляет собой целое число равное или больше 2, предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤m≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤m≤3, и даже более предпочтительно 2; n представляет собой целое число равное или больше 2, предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤n≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤n≤3, и даже более предпочтительно 2; в частности, предпочтительно m=n=2; и * представляет собой точку связывания.

[0046] Второй вариант осуществления

В формуле (I) один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, а другой представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[0047] Тип аминокислоты и аминокислотного остатка

Аминокислота, отличная от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащая тиоловую группу в боковой цепи конкретно не ограничена при условии, что она представляет собой аминокислоту, отличную от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащую тиоловую группу в боковой цепи. Примеры таких аминокислот включают аминокислоту, представленную следующей ниже формулой.

[0048]

[0049] В указанной выше формуле n представляет собой целое число равное или больше 2, предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤n≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤n≤3, и даже более предпочтительно 2.

Аминокислота, представленная указанной выше формулой, может представлять собой L-изомер или D-изомер, и предпочтительно представляет собой L-изомер.

[0050] В частности, примеры аминокислоты, отличной от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, включают L-гомоцистеин, D-гомоцистеин, L-бисгомоцистеин, D-бисгомоцистеин и т.п., но аминокислота не ограничена ими.

С точки зрения экономической эффективности аминокислота, отличная от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащая тиоловую группу в боковой цепи, предпочтительно представляет собой L-гомоцистеин или D-гомоцистеин и более предпочтительно L-гомоцистеин.

[0051] Примеры аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, отличной от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, включают аминокислотный остаток, представленный следующей ниже формулой.

[0052]

[0053] В указанной выше формуле n представляет собой целое число равное или больше 2, предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤n≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤n≤3, и даже более предпочтительно 2; и * представляет собой точку связывания.

Аминокислотный остаток, представленный указанной выше формулой, можно получать из L-аминокислоты или D-аминокислота, и предпочтительно его получают из L-аминокислоты.

[0054] В частности, примеры аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, отличной от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, включают аминокислотные остатки, получаемые из L-гомоцистеина, D-гомоцистеина, L-бисгомоцистеина, D-бисгомоцистеина и т.п., но аминокислотный остаток не ограничен ими.

С точки зрения экономической эффективности аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, предпочтительно представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина или D-гомоцистеина, и более предпочтительно аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина.

[0055] Аминокислота, содержащая галоацетильную группу в боковой цепи, конкретно не ограничена при условии, что она представляет собой аминокислоту, содержащую галоацетильную группу в боковой цепи. Примеры такой аминокислоты включают аминокислоту, представленную следующей ниже формулой.

[0056]

[0057] В указанной выше формуле m представляет собой целое число равное или больше 1, предпочтительно число, удовлетворяющее 1≤m≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 3≤m≤4, и даже более предпочтительно 4; и X представляет собой атом галогена, предпочтительно представляет собой атом хлора или атом брома и более предпочтительно представляет собой атом хлора.

Аминокислота, представленная указанной выше формулой, может представлять собой L-изомер или D-изомер и предпочтительно представляет собой L-изомер.

[0058] В случае, когда n=1, указанная выше формула представляет собой N³-галоацетил-2,3-диаминопропионовая кислота[2-амино-3-[(2-галоацетил)амино]пропионовая кислота]; в случае, когда n=2, указанная выше формула представляет собой N⁴-галоацетил-2,4-диаминобутановая кислота[2-амино-4-[(2-галоацетил)амино]бутановой кислоты]; в случае, когда n=3, указанная выше формула представляет собой N-δ-галоацетилорнитин; и в случае, когда n=4, указанная выше формула представляет собой N-ε-галоацетиллизин.

В настоящем описании аминокислота, содержащая галоацетильную группу в боковой цепи, не ограничена ими.

[0059] Примеры аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, включают аминокислотный остаток, представленный следующей ниже формулой.

[0060]

[0061] В указанной выше формуле m представляет собой целое число равное или больше 1, предпочтительно число, удовлетворяющее 1≤m≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 3≤m≤4, и даже более предпочтительно 4; X представляет собой атом галогена, предпочтительно представляет собой атом хлора или атом брома, и более предпочтительно представляет собой атом хлора; и * представляет собой точку связывания.

Аминокислотный остаток, представленный указанной выше формулой, можно получать из L-аминокислоты или D-аминокислоты, и предпочтительно его получают из L-аминокислоты.

[0062] В частности, примеры аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, включают аминокислотные остатки, получаемые из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина, N-ε-хлорацетил-D-лизина и т.п., но аминокислотный остаток не ограничен ими.

С точки зрения экономической эффективности аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, предпочтительно представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина или N-ε-хлорацетил-D-лизина, и более предпочтительно аминокислотный остаток, получаемый из N-ε-хлорацетил-D-лизина.

[0063] Тиоэфирная связь

Во втором варианте осуществления циклического пептида по настоящему изобретению между X^a и X^b сшитая структура образована тиоэфирной связью, образованной между тиоловой группой боковой цепи и галоацетильной группой боковой цепи. Таким образом, тиоэфирная связь образуется между тиоловой группой первого аминокислотного остатка, получаемый из аминокислоты, отличной от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, и галоацетильной группой второго аминокислотного остатка, который получают из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи.

[0064] Следующие ни же формулы демонстрируют примеры тиоэфирной связи, образованной между тиоловой группой боковой цепи аминокислотного остатка, который получают из аминокислоты, отличная от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, и галоацетильной группой боковой цепи аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи.

[0065]

[0066]

[0067] В указанной выше формуле m представляет собой целое число равное или больше 1, предпочтительно число, удовлетворяющее 1≤m≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 3≤m≤4, и даже более предпочтительно 4; n представляет собой целое число равное или больше 2, предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤n≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 2≤n≤3, и даже более предпочтительно 2; особенно предпочтительно m=4 и n=2; и * представляет собой точку связывания.

[0068] Касательно X^a и X^b, X^a может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, и X^b может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи; или X^a может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-цистеина, D-цистеина, L-пеницилламина и D-пеницилламина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, и X^b может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи.

[0069] Известно, что тиоэфирная связь является более стабильной связью, чем дисульфидная связь.

[0070] Третий вариант осуществления

В формуле (I) один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, а другой представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[0071] Тип аминокислоты и аминокислотного остатка

Аминокислота, содержащая галоацетильную группу в боковой цепи, конкретно не ограничена при условии, что она представляет собой аминокислоту, содержащую галоацетильную группу в боковой цепи. Примеры такой аминокислоты включают аминокислоту, представленную следующей ниже формулой.

[0072] Четвертый вариант осуществления

В формуле (I) один из X^a и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, а другой представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, и X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи.

[0073]

[0074] В указанной выше формуле m представляет собой целое число равное или больше 1, предпочтительно число, удовлетворяющее 1≤m≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 3≤m≤4, и даже более предпочтительно 4; и X представляет собой атом галогена, предпочтительно представляет собой атом хлора или атом брома, и даже более предпочтительно представляет собой атом хлора.

Аминокислота, представленная указанной выше формулой, может представлять собой L-изомер или D-изомер, и предпочтительно представляет собой L-изомер.

[0075] В случае, когда n= 1, указанная выше формула представляет собой N³-галоацетил-2,3-диаминопропионовая кислота[2-амино-3-[(2-галоацетил)амино]пропионовую кислоту]; в случае, когда n=2, указанная выше формула представляет собой N⁴-галоацетил-2,4-диаминобутановая кислота[2-амино-4-[(2-галоацетил)амино]бутановую кислоту]; в случае, когда n=3, указанная выше формула представляет собой N-δ-галоацетилорнитин; и в случае, когда n=4, указанная выше формула представляет собой N-ε-галоацетиллизин.

В настоящем описании аминокислота, содержащая галоацетильную группу в боковой цепи, не ограничена ими.

[0076] Примеры аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, включают аминокислотный остаток, представленный следующей ниже формулой.

[0077]

[0078] В указанной выше формуле m представляет собой целое число равное или больше 1, предпочтительно число, удовлетворяющее 1≤m≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 3≤m≤4, и даже более предпочтительно 4; X представляет собой атом галогена, более предпочтительно представляет собой атом хлора или атом брома, и даже более предпочтительно представляет собой атом хлора; и * представляет собой точку связывания.

Аминокислотный остаток, представленный указанной выше формулой, можно получать из L-аминокислоты или D-аминокислоты, и предпочтительно его получают из L-аминокислоты.

[0079] В частности, примеры аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, включают аминокислотные остатки, получаемые из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина, N-ε-хлорацетил-D-лизина и т.п., но аминокислотный остаток не ограничен ими.

С точки зрения экономической эффективности аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, предпочтительно представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина или N-ε-хлорацетил-D-лизина, и более предпочтительно аминокислотный остаток, получаемый из N-ε-хлорацетил-D-лизина.

[0080] Тиоэфирная связь

В третьем варианте осуществления циклического пептида по настоящему изобретению между X^a и X^b, сшитая структура образована тиоэфирной связью, образованной между тиоловой группой боковой цепи и галоацетильной группой боковой цепи. Таким образом, тиоэфирная связь образуется между тиоловой группой первого аминокислотного остатка, получаемого из L-цистеина или D-цистеина, и галоацетильной группой второго аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи.

[0081] Следующие ниже формулы демонстрируют примеры тиоэфирной связи, образованной между тиоловой группой боковой цепи аминокислотного остатка, получаемого из L-цистеина или D-цистеина, и галоацетильной группой боковой цепи аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи.

[0082]

[0083]

[0084] В указанной выше формуле m представляет собой целое число равное или больше 1, предпочтительно число, удовлетворяющее 1≤m≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 3≤m≤4, и даже более предпочтительно 4; и * представляет собой точку связывания.

[0085] Касательно X^a и X^b, X^a может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, и X^b может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина; или X^a может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, и X^b может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи.

[0086] Известно, что тиоэфирная связь является более стабильной связью, чем дисульфидная связь.

[0087] Тип аминокислоты и аминокислотного остатка

Аминокислота, содержащая галоацетильную группу в боковой цепи, конкретно не ограничена при условии, что она представляет собой аминокислоту, содержащую галоацетильную группу в боковой цепи. Примеры такой аминокислоты включают аминокислоту, представленную следующей ниже формулой.

[0088]

[0089] В указанной выше формуле m представляет собой целое число равное или больше 1, предпочтительно число, удовлетворяющее 1≤m≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 3≤m≤4, и даже более предпочтительно 4; и X представляет собой атом галогена, предпочтительно представляет собой атом хлора или атом брома, и более предпочтительно представляет собой атом хлора.

Аминокислота, представленная указанной выше формулой, может представлять собой L-изомер или D-изомер, и предпочтительно представляет собой L-изомер.

[0090] В случае, когда n= 1, указанная выше формула представляет собой N³-галоацетил-2,3-диаминопропионовая кислота[2-амино-3-[(2-галоацетил)амино]пропионовую кислоту]; в случае, когда n=2, указанная выше формула представляет собой N⁴-галоацетил-2,4-диаминобутановая кислота[2-амино-4-[(2-галоацетил)амино]бутановую кислоту]; в случае, когда n=3, указанная выше формула представляет собой N-δ-галоацетилорнитин; и в случае, когда n=4, указанная выше формула представляет собой N-ε-галоацетиллизин.

В настоящем описании аминокислота, содержащая галоацетильную группу в боковой цепи, не ограничена ими.

[0091] Примеры аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, включают аминокислотный остаток, представленный следующей ниже формулой.

[0092]

[0093] В указанной выше формуле m представляет собой целое число равное или больше 1, предпочтительно число, удовлетворяющее 1≤m≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 3≤m≤4, и даже более предпочтительно 4; X представляет собой атом галогена, предпочтительно представляет собой атом хлора или атом брома, и более предпочтительно представляет собой атом хлора; и * представляет собой точку связывания.

Аминокислотный остаток, представленный указанной выше формулой, можно получать из L-аминокислоты или D-аминокислоты, и предпочтительно получают из L-аминокислоты.

[0094] В частности, примеры аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, включают аминокислотные остатки, получаемые из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина, N-ε-хлорацетил-D-лизина и т.п., но аминокислотный остаток не ограничен ими.

С точки зрения экономической эффективности аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи предпочтительно представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина или N-ε-хлорацетил-D-лизина, и более предпочтительно аминокислотный остаток, получаемый из N-ε-хлорацетил-D-лизина.

[0095] Тиоэфирная связь

В четвертом варианте осуществления циклического пептида по настоящему изобретению между X^a и X^b сшитая структура образована тиоэфирной связью, образованной между тиоловой группой боковой цепи и галоацетильной группой боковой цепи. Таким образом, тиоэфирная связь образуется между тиоловой группой первого аминокислотного остатка, получаемого из L-пеницилламина или D-пеницилламина, и галоацетильной группы второго аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи.

[0096] Следующие ниже формулы демонстрируют примеры тиоэфирной связи, образованной между тиоловой группой боковой цепи аминокислотного остатка, получаемого из L-пеницилламина или D-пеницилламина, и галоацетильной группой боковой цепи аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи.

[0097]

[0098]

[0099] В указанной выше формуле m представляет собой целое число равное или больше 1, предпочтительно число, удовлетворяющее 1≤m≤4, более предпочтительно число, удовлетворяющее 3≤m≤4, и даже более предпочтительно 4; и * представляет собой точку связывания.

[0100] Касательно X^a и X^b, X^a может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи, и X^b может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина; или X^a может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, и X^b может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей галоацетильную группу в боковой цепи.

[0101] Известно, что тиоэфирная связь является более стабильной связью, чем дисульфидная связь.

[0102] X_g, X_h, X_i, X_j, X_m и X_n

В формуле (I) каждый из X_g, X_h, X_i, X_j, X_m и X_n представляет собой g последовательных X, h последовательных X, i последовательных X, j последовательных X, m последовательных X и n последовательных X.

[0103] В формуле (I) в случае, когда X представляет собой аминокислотный остаток, и t в настоящем описании представляет собой множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

В формуле (I) X конкретно не ограничен при условии, что он представляет собой аминокислотный остаток. X предпочтительно представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из аминокислот (за исключением B, Z и X), приведенных в таблице 1, и аминокислот, приведенных в таблице 2, и более предпочтительно аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из аминокислот (за исключением B, Z и X), приведенных в таблице 1. В случае, когда t в настоящем описании представляет собой энантиомер или диастереомер этих аминокислот, X может представлять собой аминокислотный остаток, получаемый из энантиомера или диастереомера.

[0104] В формуле (I) каждый из g, h, i и j независимо представляет собой целое число равное или больше 0.

g предпочтительно удовлетворяет 0≤g≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤g≤10 и даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤g≤5.

h предпочтительно удовлетворяет 0≤h≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤h≤10 и даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤h≤5.

i предпочтительно удовлетворяет 0≤i≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤i≤10 и даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤i≤5.

j предпочтительно удовлетворяет 0≤j≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤j≤10 и даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤j≤5.

[0105] В формуле (I) m и n представляют собой целые числа, удовлетворяющие 0≤m≤9 и 0≤n≤9. m и n удовлетворяют 3≤m+n≤9, предпочтительно удовлетворяют 4≤m+n≤8 и более предпочтительно удовлетворяют 5≤m+n≤7.

[0106] Количество аминокислотных остатков в циклической части

В формуле (I) количество аминокислотных остатков [остатки (m+n+5)] в циклической части [X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b] составляет от 8 до 14, предпочтительно от 9 до 13 и более предпочтительно от 10 до 12.

В случае, когда количество аминокислотных остатков в циклической части находится в указанном выше диапазоне, внутримолекулярное напряжение циклического пептида не увеличивается очень сильно, и структура высокого порядка, такая как α-спираль, стабилизируется. Таким образом, свойства связывания антитела циклического пептида по настоящему изобретению становятся превосходными.

[0107] Количество повторяющихся единиц

k представляет собой число, удовлетворяющее k≥1. k предпочтительно удовлетворяет 1≤k≤3, более предпочтительно удовлетворяет 1≤k≤2 и даже более предпочтительно удовлетворяет k=1.

Несмотря на то, что количество повторяющихся единиц конкретно не ограничено, чем больше количество повторяющихся единиц, тем больше циклических частей можно ввести в циклический пептид. Таким образом, возможно улучшать свойства связывания антитела циклического пептида. Чем меньше количество повторяющихся единиц, тем большее общее количество аминокислотных остатков можно восстанавливать. Таким образом, возможно ингибировать антигенность циклического пептида. С точки зрения экономических затрат на синтез циклического пептида предпочтительно, чтобы количество аминокислотных остатков и количество повторяющихся единиц являлись небольшими.

[0108] В случае, когда k≥2, таким образом, в случае, когда циклический пептид, представленный формулой (I) содержит две или более повторяющихся единиц [X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j], каждый их X¹, X², X³, X^a, X^b, X_i, X_j, X_m и X_n в повторяющейся единице может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[0109] Общее количество аминокислотных остатков в циклическом пептиде

Общее количество аминокислотных остатков в циклическом пептиде, представленном формулой (I), предпочтительно представляет собой от 8 до 50, более предпочтительно от 9 до 40, даже более предпочтительно от 10 до 30 и еще более предпочтительно от 10 до 20.

Таким образом, в формуле (I) g, h, i, j, m, n и k предпочтительно удовлетворяют 8≤g+h+(i+j+m+n+5)×k≤50, более предпочтительно удовлетворяют 9≤g+h+(i+j+m+n+5)×k≤40, даже более предпочтительно удовлетворяют 10≤g+h+(i+j+m+n+5)×k≤30, и еще более предпочтительно удовлетворяют 10≤g+h+(i+j+m+n+5)×k≤20.

Как правило, чем больше количество аминокислотных остатков, тем выше экономические затраты на производство. Таким образом, с точки зрения экономической эффективности предпочтительно, чтобы общее количество аминокислотных остатков являлось небольшим.

[0110] Молекулярная масса циклического пептида

Молекулярная масса циклического пептида, представленного формулой (I), конкретно не ограничена. Однако с точки зрения антигенности молекулярная масса циклического пептида по настоящему изобретению предпочтительно приблизительно равна или является меньше 5000, более предпочтительно приблизительно равна или является меньше 4000, даже более предпочтительно приблизительно равна или является меньше 3000, и наиболее предпочтительно приблизительно равна или является меньше 2000. "Приблизительно" означает, что молекулярная масса включает предел ±2%.

[0111] Исключение в третьем варианте осуществления

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения X в формуле (I) представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения вследствие такого различия в некоторых случаях формулу (I) обозначают как формула (I').

[0112] Исключение в четвертом варианте осуществления

В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения X в формуле (I) представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения вследствие такого различия в некоторых случаях формулу (I) обозначают как формула (I').

[0113] Структура циклического пептида (IA) по настоящему изобретению

Циклический пептид по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой циклический пептид, представленный формулой (IA).

R^N-X_g-[X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2]_k-X_h-R^C (IA)

[0114] В формуле (IA) все R^N, R^C, X¹, X², X³, X^a, X^b, X_g, X_h, X_m, X_n, X, g, h, m, n и k имеют такие же определения как определения в формуле (I).

В формуле (IA) аналогично X_n в формуле (I) X_n означает, что n X являются связанными друг с другом. Тоже справедливо для X_m, X_p1, X_p2, X_q1 и X_q2.

В формуле (IA) каждый из X⁴_r и X⁵_s означает, что r X⁴ являются связанными друг с другом, и s X⁵ являются связанными друг с другом.

[0115] Циклическая часть, линейная часть, сшитая часть и антителосвязывающая часть

В циклическом пептиде, представленном формулой (IA), "X_g", "X_h", "X_p2-X⁴_r-X_p1" и "X_q1-X⁵_s^-X_q2" являются линейными частями. Циклическая часть, сшитая часть и антителосвязывающая часть являются такими же ка части в циклическом пептиде, представленном формулой (I).

В формуле (IA) [X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2] представляет собой повторяющуюся единицу.

[0116] X⁴_r и X⁵_s

В формуле (IA) каждый из X⁴_r и X⁵_s означает r последовательных X⁴ и s последовательных X⁵.

[0117] В формуле (IA) каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи.

В случае, когда t в настоящем описании представляет собой множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

[0118] В формуле (IA) каждый из r и s независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤5, 0≤s≤5 и 1≤Max (r, s)≤5. Каждый из r и s предпочтительно независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤4, 0≤s≤4 и 1≤Max (r, s)≤4, и более предпочтительно каждый независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤3, 0≤s≤3 и 1≤Max (r, s)≤3.

Max (r, s) представляет собой большее число из двух чисел, представленных r и s в случае, когда r≠s, и представляет собой r или s в случае, когда r=s.

[0119] Аминокислота, содержащая карбоксигруппу в боковой цепи

Примеры аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, включают L-аспарагиновую кислоту, D-аспарагиновую кислоту, L-глутаминовую кислоту, D-глутаминовую кислоту, L-гомоглутаминовую кислоту, D-гомоглутаминовую кислоту и т.п.

[0120] Аминокислота, содержащая гидроксигруппу в боковой цепи

Примеры аминокислоты, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, включают L-серин, D-серин, L-гомосерин, D-гомосерин, L-тирозин, D-тирозин, L-треонин, D-треонин, L-аллотреонин, D-аллотреонин и т.п.

[0121] Предпочтительные аминокислотные остатки

Каждый из X⁴ и X⁵ предпочтительно независимо представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из остатка L-серина, остатка D-серина, остатка L-гомосерина, остатка D-гомосерина, остатка L-аспарагиновой кислоты, остатка D-аспарагиновой кислоты, остатка L-глутаминовой кислоты, остатка D-глутаминовой кислоты, остатка L-гомоглутаминовая кислота, остатка D-гомоглутаминовой кислоты, остатка L-тирозина, остатка D-тирозина, остатка L-гомотирозина, остатка D-гомотирозина, остатка L-треонина, остатка D-треонина, остатка L-аллотреонина и остатка D-аллотреонина, и более предпочтительно каждый независимо представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из остатка L-аспарагиновой кислоты, остатка D-аспарагиновой кислоты, остатка L-треонина и остатка D-треонина. Даже более предпочтительно X⁴ представляет собой остаток L-аспарагиновой кислоты, и X⁵ представляет собой остаток L-треонин.

[0122] Полагают, что в случае, когда каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, вследствие водородной связи и/или электростатического взаимодействия, взаимодействие между антителосвязывающей части циклической части и антителом может становиться сильнее, и, таким образом, свойства связывания антитела улучшаются.

[0123] X_p1, X_p2, X_q1 и X_q2

В формуле (IA) каждый из X_p1, X_p2, X_q1 и X_q2 представляет собой p1 последовательных X, p2 последовательных X, q1 последовательных X и q2 последовательных X.

В формуле (IA) каждый из p1, p2, q1 и q2 независимо представляет собой целое число, равное или больше 0.

p1 предпочтительно удовлетворяет 0≤p1≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤p1≤10, даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤p1≤5 и еще более предпочтительно удовлетворяет 0≤p1≤2.

p2 предпочтительно удовлетворяет 0≤p2≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤p2≤10, даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤p2≤5 и еще более предпочтительно удовлетворяет 0≤p2≤2.

q1 предпочтительно удовлетворяет 0≤q1≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤q1≤10, даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤q1≤5 и еще более предпочтительно удовлетворяет 0≤q1≤2.

q2 предпочтительно удовлетворяет 0≤q2≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤q2≤10, даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤q2≤5 и еще более предпочтительно удовлетворяет 0≤q2≤2.

[0124] Количество аминокислотных остатков в циклической части

В формуле (IA) количество аминокислотных остатков [остатки (m+n+5)] в циклической части [X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b] составляет от 8 до 14, предпочтительно от 9 до 13 и более предпочтительно от 10 до 12, аналогично формуле (I).

В случае, когда количество аминокислотных остатков в циклической части находится в указанном выше диапазоне, внутримолекулярное напряжение циклического пептида значительно не увеличивается, и структура высшего порядка, такая как α-спираль, стабилизируется. Таким образом, свойства связывания антитела циклического пептида по настоящему изобретению становятся превосходными.

[0125] Количество повторяющихся единиц

Таким образом, в случае, когда k≥2, в случае, когда циклический пептид, представленный формулой (IA), содержит две или более повторяющихся единиц [X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2], каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X⁴_r, X⁵_s, X_m, X_n, X_p2, X_p1, X_q1 и X_q2 в повторяющейся единице может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[0126] Общее количество аминокислотных остатков в циклическом пептиде

Общее количество аминокислотных остатков в циклическом пептиде, представленном формулой (IA), предпочтительно представляет собой от 8 до 50, более предпочтительно от 9 до 40, даже более предпочтительно от 10 до 30 и еще более предпочтительно от 10 до 20.

Таким образом, в формуле (IA) g, h, m, n, p1, p2, q1, q2, r, s, и k предпочтительно удовлетворяют 8≤g+h+(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k≤50, более предпочтительно удовлетворяют 9≤g+h+(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k≤40, даже более предпочтительно удовлетворяют 10≤g+h+(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k≤30 и еще более предпочтительно удовлетворяют 10≤g+h+(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k≤20.

Как правило, чем больше количество аминокислотных остатков, тем выше стоимость производства. Таким образом, с точки зрения экономической эффективности предпочтительно, чтобы общее количество аминокислотных остатков являлось небольшим.

[0127] Исключение в третьем варианте осуществления

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения X в формуле (IA) представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из X⁴ и X⁵ в формуле (IA) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи" или "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "за исключением L-серина, D-серина, L-гомосерина и D-гомосерина", содержащей гидроксигруппу в боковой цепи", и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения вследствие этих различий в некоторых случаях формулу (IA) обозначают как формула(I'A).

[0128] Исключение в четвертом варианте осуществления

В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения X в формуле (IA) представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из X⁴ и X⁵ в формуле (IA) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи" или "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "за исключением L-серина и D-серина", содержащий гидроксигруппу в боковой цепи", и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения вследствие этих различий в некоторых случаях формулу (IA) обозначают как формула(I'A).

[0129] Структура циклического пептида (IB) по настоящему изобретению

Циклический пептид по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой циклический пептид, представленный формулой (IB).

R^N-X_v1-X⁶_t-X_v2-[X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j]_k-X_w2-X⁷_u-X_w1-R^C (IB)

[0130] В формуле (IB) все R^N, R^C, X¹, X², X³, X^a, X^b, X_i, X_j, X_m, X_n, X, i, j, m, n и k имеют такие же определения как определения в формуле (I).

В формуле (IB) аналогично X_n в формуле (I) X_n означает, что n X являются связанными друг с другом. Тоже справедливо для X_m, X_v1, X_v2, X_w1 и X_w2.

В формуле (IB) каждый из X⁶_t и X⁷_u означает, что t X⁶ являются связанными друг с другом, и u X⁷ являются связанными друг с другом.

[0131] Циклическая часть, линейная часть, сшитая часть и антителосвязывающая часть

В циклическом пептиде, представленном формулой (IB), "X_i", "X_j", "X_v1-X⁶_t-X_v2" и "X_w2-X⁷_u-X_w1" являются линейными частями. Циклическая часть, сшитая часть и антителосвязывающая часть являются такими же как части в циклическом пептиде, представленном формулой (I).

В формуле (IB) [X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j] представляет собой повторяющуюся единицу, аналогично формуле (I).

[0132] X⁶_t и X⁷_u

В формуле (IB) каждый из X⁶_t и X⁷_u представляет собой t последовательных X⁶ и u последовательных X⁷.

[0133] В формуле (IB) каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи.

В случае, когда t в настоящем описании представляет собой множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

[0134] В формуле (IB) каждый из t и u независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤5, 0≤u≤5 и 1≤Max (t,u)≤5, предпочтительно каждый независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤4, 0≤u≤4 и 1≤Max (t,u)≤4, и более предпочтительно каждый независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤3, 0≤u≤3 и 1≤Max (t,u)≤3.

Max (t,u) представляет собой большее число из двух чисел представленных t и u в случае, когда t≠u и представляет собой t или u в случае, когда t=u.

[0135] Иммобилизирующая функциональная группа

Указанная выше "иммобилизирующая функциональная группа" представляет собой функциональную группу, которая может образовывать ковалентную связь в результате взаимодействия с функциональной группой на подложке (описанном ниже).

Примеры иммобилизирующей функциональной группы включают аминогруппу, карбоксигруппу, гидроксигруппу, тиоловую группу, альдегидную группу (формильную группу), карбамоильную группу, азидную группу, алкинильную группу и т.п.

Примеры комбинации иммобилизирующей функциональной группы, которую содержит циклический пептид по настоящему изобретению, и функциональной группы на подложке включают аминогруппу и карбоксигруппу (реакция образования амидной связи), аминогруппу и альдегидную группу (реакция восстановительного аминирования), аминогруппу и эпоксигруппу, гидроксигруппу и эпоксигруппу, карбоксигруппу и гидроксигруппу (реакция образования сложноэфирной связи), тиоловую группу и тиоловую группу (дисульфидная связь), тиоловую группу и эпоксигруппу, азидную группу и алкинильную группу (реакция циклоприсоединения Хьюсгена) и т.п.

В случае, когда иммобилизирующая функциональная группа, которую содержит циклический пептид по настоящему изобретению, и функциональная группа на подложке образуют ковалентную связь, взаимодействуя друг с другом, циклический пептид по настоящему изобретению является иммобилизованным на подложке. По меньшей мере определенные иммобилизирующие функциональные группы, которые содержит циклический пептид по настоящему изобретению, могут образовывать ковалентную связь, взаимодействуя с функциональной группой на подложке, и необязательно, что все иммобилизирующие функциональные группы взаимодействуют с функциональной группой на подложке.

[0136] В указанной выше аминокислоте, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, иммобилизирующая функциональная группа предпочтительно представляет собой по меньшей мере один тип функциональной группы, выбранной из группы, состоящей из аминогруппы, тиоловой группы и альдегидной группы, и более предпочтительно по меньшей мере один тип функциональной группы, выбранной из группы, состоящей из аминогруппы и тиоловой группы.

[0137] Аминокислота, содержащая иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи

Аминокислота, содержащая иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, предпочтительно представляет собой по меньшей мере один тип аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-лизина, D-лизина, L-цистеина, D-цистеина, L-гомоцистеина и D-гомоцистеина.

[0138] В случае, когда в качестве иммобилизирующей функциональной группы используют аминогруппу, аминогруппу можно связывать с карбоксигруппой на подложке посредством амидной связи, и циклический пептид по настоящему изобретению можно легко иммобилизовать в качестве аффинного лиганда.

[0139] В случае, когда в качестве иммобилизирующей функциональной группы используют тиоловую группу, тиоловую группу можно связывать с эпоксигруппой на подложке посредством ковалентной связи, и циклический пептид по настоящему изобретению можно легко иммобилизовать в качестве аффинного лиганда.

[0140] Примеры аминокислоты, содержащей аминогруппу в боковой цепи, включают L-лизин, D-лизин и т.п., и примеры аминокислоты, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, включают L-цистеин и D-цистеин. Вследствие т ого, что эти аминокислоты являются относительно недорогими, затраты на производство циклического пептида по настоящему изобретению можно снижать. Таким образом, с точки зрения экономической эффективности эти аминокислоты являются предпочтительными.

[0141] Подложка

В настоящем изобретении "подложка" относится к субстрату, на котором можно иммобилизовать циклический пептид по настоящему изобретению. Подложка содержит функциональную группу, которая может образовывать ковалентную связь, взаимодействуя с иммобилизирующей функциональной группой, которую содержит циклический пептид по настоящему изобретению. Функциональную группу соответствующим образом выбирают в зависимости от иммобилизирующей функциональной группы.

[0142] Вещества, из которых состоит подложка

Примеры веществ, из которых состоит подложка, включают полисахариды, таких как агароза, декстран, крахмал, целлюлоза, пуллулан, хитин, хитозан, триацетат целлюлозы и диацетат целлюлоз, их производные, полимеры на основе винила, такие как полиакриламид, полиметакриламид, полиакрилат, полиметакрилат, полиалкилвиниловый эфир и поливиниловый спирт, и т.п. Эти вещества могут образовывать сшитую структуру, вследствие этого можно обеспечивать механическую прочность. Предпочтительно подложка сформирована из одного типа вещества или двух или более типов веществ из перечисленных.

Подложка предпочтительно является пористой, более предпочтительно пористой пленкой или пористой частицей, и даже более предпочтительно пористой частицей.

[0143] X_v1, X_v2, X_w1 и X_w2

В формуле (IB) каждый из X_v1, X_v2, X_w1 и X_w2 представляет собой v1 последовательных X, v2 последовательных X, w1 последовательных X и w2 последовательных X.

В формуле (IB) каждый из v1, v2, w1 и w2 независимо представляет собой целое число равное или больше 0.

v1 предпочтительно удовлетворяет 0≤v1≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤v1≤10, даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤v1≤5 и еще более предпочтительно удовлетворяет 0≤v1≤2.

v2 предпочтительно удовлетворяет 0≤v2≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤v2≤10, даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤v2≤5 и еще более предпочтительно удовлетворяет 0≤v2≤2.

w1 предпочтительно удовлетворяет 0≤w1≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤w1≤10, даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤w1≤5 и еще более предпочтительно удовлетворяет 0≤w1≤2.

w2 предпочтительно удовлетворяет 0≤w2≤20, более предпочтительно удовлетворяет 0≤w2≤10, даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤w2≤5 и еще более предпочтительно удовлетворяет 0≤w2≤2.

[0144] Количество аминокислотных остатков в циклической части

В формуле (IB) количество аминокислотных остатков [остатки (m+n+5)] в циклической части [X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b] составляет от 8 до 14, предпочтительно от 9 до 13 и более предпочтительно от 10 до 12 аналогично формуле (I).

В случае, когда количество аминокислотных остатков в циклической части находится в указанном выше диапазоне, внутримолекулярное напряжение циклического пептида значительно не увеличивается, и структура высшего порядка, такая как α-спираль, стабилизируется. Таким образом, свойства связывания антитела циклического пептида по настоящему изобретению становятся превосходными.

[0145] Количество повторяющихся единиц

В случае, когда k≥2, таким образом, в случае, когда циклический пептид, представленный формулой (IB) содержит две или более повторяющиеся единицы [X_i-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_j], каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X_m, X_n, X_i и X_j в повторяющейся единице может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[0146] Общее количество аминокислотных остатков в циклическом пептиде

Общее количество аминокислотных остатков в циклическом пептиде, представленном формулой (IB), предпочтительно составляет от 8 до 50, более предпочтительно от 9 до 40, даже более предпочтительно от 10 до 30 и еще более предпочтительно от 10 до 20.

Таким образом, в формуле (IB) i, j, m, n, t, u, v1, v2, w1, w2 и k предпочтительно удовлетворяют 8≤(i+j+m+n+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤50, более предпочтительно удовлетворяют 9≤(i+j+m+n+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤40, даже более предпочтительно удовлетворяют 10≤(i+j+m+n+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤30 и еще более предпочтительно удовлетворяют 10≤(i+j+m+n+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤20.

Как правило, чем больше количество аминокислотных остатков, тем выше стоимость производства. Таким образом, с точки зрения экономической эффективности, предпочтительно, чтобы общее количество аминокислотных остатков являлось небольшим.

[0147] Исключение в третьем варианте осуществления

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения X в формуле (IB) представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; и каждый из X⁶ и X⁷ в формуле (IB) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина", содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи", и в случае, когда присутствует множество X⁶ и X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения вследствие этих различий в некоторых случаях формулу (IB) обозначают как формула (I'B).

[0148] Исключение в четвертом варианте осуществления

В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения X в формуле (IB) представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; и каждый из X⁶ и X⁷ в формуле (IB) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "отличной от L-серина и D-серина", содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения вследствие этих различий, в некоторых случаях формулу (IB) обозначают как формула (I'B).

[0149] Структура циклического пептида (IC) по настоящему изобретению

Циклический пептид по настоящему изобретению более предпочтительно представляет собой циклический пептид, представленный формулой (IC).

R^N-X_v1-X⁶_t-X_v2-[X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2]_k-X_w2-X⁷_u-X_w1-R^C (IC)

[0150] В формуле (IC) все R^N, R^C, X¹, X², X³, X^a, X^b, X_m, X_n, X, m, n и k имеют такие же определения как определения в формуле (I) all of X⁴, X⁵, p1, p2, q1, q2, r и s имеют такие же определения как определения в формуле (IA), и все X⁶, X⁷, t, u, v1, v2, w1 и w2 имеют такие же определения как определения в формуле (IB).

В формуле (IC) аналогично X_n в формуле (I) X_n означает, что n X являются связанными друг с другом. Тоже справедливо для X_m, X_p1, X_p2, X_q1, X_q2, X_v1, X_v2, X_w1 и X_w2.

В формуле (IC) каждый из X⁴_r, X⁵_s, X⁶_t и X⁷_u означает, что r X⁴ являются связанными друг с другом, s X⁵ являются связанными друг с другом, t X⁶ являются связанными друг с другом и u X⁷ являются связанными друг с другом.

[0151] Циклическая часть, линейная часть, сшитая часть и антителосвязывающая часть

В циклическом пептиде, представленном формулой (IC), "X_v1-X⁶_t-X_v2", "X_w2-X⁷_u-X_w1", "X_p2-X⁴_r-X_p1" и "X_q1-X⁵_s^-X_q2" являются линейными частями. Циклическая часть, сшитая часть и антителосвязывающая часть являются такими же, как в циклическом пептиде, представленном формулой (I).

В формуле (IC) [X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2] представляет собой повторяющуюся единицу аналогично формуле (IA).

[0152] Количество аминокислотных остатков в циклической части

В формуле (IC) количество аминокислотных остатков [остатки (m+n+5)] в циклической части [X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b] составляет от 8 до 14, предпочтительно от 9 до 13 и даже более предпочтительно от 10 до 12, аналогично формуле (I).

В случае, когда количество аминокислотных остатков в циклической части находится в указанном выше диапазоне, внутримолекулярное напряжение циклического пептида значительно не увеличивается, и структура высшего порядка, такая как α-спираль, стабилизируется. Таким образом, свойства связывания антитела циклического пептида по настоящему изобретению становятся превосходными.

[0153] Количество повторяющихся единиц

В случае, когда k≥2, таким образом, в случае, когда циклический пептид, представленный формулой (IC) содержит две или более повторяющиеся единицы [X_p2-X⁴_r-X_p1-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X_n-X^b-X_q1-X⁵_s^-X_q2], каждый из X¹, X², X³, X^a, X^b, X⁴_r, X⁵_s, X_m, X_n, X_p2, X_p1, X_q1 и X_q2 в повторяющейся единице может являться одинаковым или различным в повторяющихся единицах.

[0154] Общее количество аминокислотных остатков в циклическом пептиде

Общее количество аминокислотных остатков в циклическом пептиде, представленном формулой (IC), предпочтительно составляет от 8 до 50, более предпочтительно от 9 до 40, даже более предпочтительно от 10 до 30 и еще более предпочтительно от 10 до 20.

Таким образом, в формуле (IC) m, n, p1, p2, q1, q2, r, s, t, u, v1, v2, w1, w2 и k предпочтительно удовлетворяют 8≤(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤50, более предпочтительно удовлетворяют 9≤(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤40, даже более предпочтительно удовлетворяют 10≤(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤30, и еще более предпочтительно удовлетворяют 10≤(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤20.

Как правило, чем больше количество аминокислотных остатков, тем выше стоимость производства. Таким образом, с точки зрения экономической эффективности, предпочтительно, чтобы общее количество аминокислотных остатков являлось небольшим.

[0155] Исключение в третьем варианте осуществления

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения X в формуле (IC) представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из X⁴ и X⁵ в формуле (IC) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи" или "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина и D-гомосерина", содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; и каждый из X⁶ и X⁷ в формуле (IC) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина", содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи", и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения вследствие этих различий в некоторых случаях формулу (IC) обозначают как формула (I'C).

[0156] Исключение в четвертом варианте осуществления

В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения X в формуле (IC) представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из X⁴ и X⁵ в формуле (IC) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи" или "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "отличной от L-серина и D-серина", содержащей гидроксигруппу в боковой цепи", и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; и каждый из X⁶ и X⁷ в формуле (IC) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "отличной от L-серина и D-серина", содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи", и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения вследствие этих различий в некоторых случаях формулу (IC) обозначают как формула (I'C).

[0157] Предпочтительная неполная аминокислотная последовательность

Неполная аминокислотная последовательность X_m-X¹-X²-X³-X_n в формуле (I) (IA), (IB) или (IC) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:1), представленная формулой (1), предпочтительно обладают общей гомологией последовательности равной или более 70%, более предпочтительно обладают общей гомологией последовательности равной или более 75%, даже более предпочтительно обладают общей гомологией последовательности равной или более 85% и еще более предпочтительно обладают общей гомологией последовательности равной или более 90%.

A-Y-H-L-G-E-L-V-W (1)

В формуле (1) A представляет собой остаток L-аланина; Y представляет собой остаток L-тирозина; H представляет собой остаток L-гистидина; L представляет собой остаток L-лейцина; G представляет собой остаток глицина; E представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты; V представляет собой остаток L-валина, и W представляет собой остаток L-триптофана.

[0158] Неполная аминокислотная последовательность X_m-X¹-X²-X³-X_n в формуле (I) (IA), (IB) или (IC) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO:2), представленная формулой (2), предпочтительно обладают общей гомологией последовательности равной или более 70%, более предпочтительно обладают общей гомологией последовательности равной или более 75%, даже более предпочтительно обладают общей гомологией последовательности равной или более 85% и еще более предпочтительно обладают общей гомологией последовательности равной или более 90%.

A-Y-H-R-G-E-L-V-W (2)

В формуле (2) A представляет собой остаток L-аланина; Y представляет собой остаток L-тирозина; H представляет собой остаток L-гистидина; R представляет собой остаток L-аргинина; G представляет собой остаток глицина; E представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты; L представляет собой остаток L-лейцина; V представляет собой остаток L-валина, и W представляет собой остаток L-триптофана.

[0159] Гомологичность последовательности двух аминокислотных последовательностей определяют так, как указано ниже.

(i) Проведение выравниваний двух аминокислотных последовательностей

Присваивая балл +1 для совпадений, балл -1 для несоответствий и балл -1 для пропусков, проводят выравнивание, таким образом, чтобы балл выравнивания был максимальным.

(ii) Вычисление гомологии последовательности

На основании получаемого выравнивания рассчитывают гомологию последовательности по следующему уравнению.

Гомология последовательности [%]=(число совпадающих положений/общее число положений)×100 [%]

Общее число положений является длиной выравнивания и число совпадающих положений представляет собой число положений, по которым типы аминокислот совпадают.

Совпадают или не совпадают типы аминокислотных остатков, определяют, исходя из того является или не является структура белковой цепи аминокислоты (боковой цепи аминокислоты), и которых получают аминокислотные остатки, одинаковой. Структуры боковых цепей аминокислот с энантиомерным соотношением не совпадают друг с другом.

(iii) Пример расчета гомологии последовательности

Например, допустим, что присутствуют аминокислотные последовательности, приведенные ниже.

Последовательность A AYHRGELVW

Последовательность B AWHLGELVW

В случае, когда выравнивание проводят в описанных выше условиях, получают следующий ниже результат. В настоящем описании участки, где типы аминокислот (остатков) являются одинаковыми в последовательностях A и B, отмечают символьной строкой гомологии "⏐", таким образом, участки можно легко распознавать. Кроме того, "-" является пропуском.

Последовательность A A Y H R G E L V W Последовательность B A W H L G E L V W

Баллы такого представляют собой такие совпадения(+1)×7+несоответствия(-1)×1+пропуски(-1)×1=5.

В этом примере общее число положений составляет 9, число совпадающих положений составляет 7. Таким образом, гомология последовательности, рассчитанная указанному выше уравнению, составляет 7/9×100=77,8%.

[0160] Предпочтительное количество повторяющихся единиц

В настоящем изобретении,k в формуле (I)-(IC) предпочтительно представляет собой 1.

[0161] В случае, когда циклический пептид содержит одну часть, содержащую циклическую часть, общая длина циклического пептида может уменьшаться, и, таким образом, циклический пептид легко синтезировать. Кроме того, посредством реакции Хьюсгена во время циклизации возможно предотвращать образование поперечной сшивки в нежелательном участке.

[0162] Структура циклического пептида (II) по настоящему изобретению

Циклический пептид по настоящему изобретению is конкретно особенно предпочтительно представляет собой циклический пептид, представленный формулой (II).

R^N-X_v0-X⁶_t0-X_e0-X⁴_r0-X_p0-X^a-A-Y-H-X⁸-G-E-L-V-W-X^b-X_q0-X⁵_s0-X_f0-X⁷_u0-X_w0-R^C (II)

В формуле (II) X^a, X^b, R^N и R^C имеют такие же определения как определения в формуле (I).

[0163] Циклическая часть, линейная часть, сшитая часть и антителосвязывающая часть

В циклическом пептиде, представленном формулой (II), "X^a-A-Y-H-X⁸-G-E-L-V-W-X^b" представляет собой циклическую часть, "X_v0-X⁶_t0-X_e0-X⁴_r0-X_p0-" и "X_q0-X⁵_s0-X_f0-X⁷_u0-X_w0" являются линейными частями, "X^a" и "X^b" представляют собой сшитые части, и "L-V-W" является антителосвязывающей частью.

[0164] X⁴_r0 и X⁵_s0

В формуле (II) каждый из X⁴_r0 и X⁵_s0 представляет собой r0 последовательных X⁴ и s0 последовательных X⁵.

В формуле (II) X⁴ и X⁵ имеют такие же определения как определения в формуле (IA).

В формуле (II) каждый из r0 и s0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r0≤5 и 0≤s0≤5.

r0 предпочтительно удовлетворяет 0≤r0≤3 и более предпочтительно удовлетворяет 0≤r0≤2.

s0 предпочтительно удовлетворяет 0≤s0≤3 и более предпочтительно удовлетворяет 0≤s0≤2.

[0165] X⁶_t0 и X⁷_u0

В формуле (II) каждый из X⁶_t0 и X⁷_u0 представляет собой t0 последовательных X⁶ и u0 последовательных X⁷.

В формуле (II) X⁶ и X⁷ имеют такие же определения как определения в формуле (IB).

В формуле (II) каждый из t0 и u0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t0≤5 и 0≤u0≤5.

t0 предпочтительно удовлетворяет 0≤t0≤3 и более предпочтительно удовлетворяет 0≤t0≤2.

u0 предпочтительно удовлетворяет 0≤u0≤3 и более предпочтительно удовлетворяет 0≤u0≤2.

[0166] X_e0, X_f0, X_p0, X_q0, X_v0 и X_w0

Каждый из X_e0, X_f0, X_p0, X_q0, X_v0 и X_w0 представляет собой e0 последовательных X, f0 последовательных X, p0 последовательных X, q0 последовательных X, v0 последовательных X и w0 последовательных X.

X имеют такое же определение как в формуле (I).

Каждый из e0 и f0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤e0≤10 и 0≤f0≤10.

e0 предпочтительно удовлетворяет 0≤e0≤5, более предпочтительно удовлетворяет 0≤e0≤3 и даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤e0≤2.

f0 предпочтительно удовлетворяет 0≤f0≤5, более предпочтительно удовлетворяет 0≤f0≤3 и даже более предпочтительно удовлетворяет 0≤f0≤2.

Каждый из p0 и q0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤p0≤5 и 0≤q0≤5.

p0 предпочтительно удовлетворяет 0≤p0≤3 и более предпочтительно удовлетворяет 0≤p0≤2.

q0 предпочтительно удовлетворяет 0 q0≤3 и более предпочтительно удовлетворяет 0≤q0≤2.

Каждый из v0 и w0 независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤v0≤5 и 3≤w0≤5.

v0 предпочтительно удовлетворяет 0≤v0≤3 и более предпочтительно удовлетворяет 0≤v0≤2.

w0 предпочтительно удовлетворяет 0 w0≤3 и более предпочтительно удовлетворяет 0≤w0≤2.

[0167] X⁸ представляет собой остаток L-лейцина, остаток D-лейцина, остаток L-аргинина или остаток D-аргинина.

[0168] В формуле (II) A представляет собой остаток L-аланина или остаток D-аланина; Y представляет собой остаток L-тирозина или остаток D-тирозина; H представляет собой остаток L-гистидина или остаток D-гистидина; G представляет собой остаток глицина; E представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты или остаток D-глутаминовой кислоты; L представляет собой остаток L-лейцина; V представляет собой остаток L-валина, и W представляет собой остаток L-триптофана.

[0169] Общее количество аминокислотных остатков в циклическом пептиде

В формуле (II) общее количество аминокислотных остатков в циклическом пептиде составляет от 11 до 50, предпочтительно от 11 до 40, более предпочтительно от 11 до 30 и даже более предпочтительно от 11 до 20.

Таким образом, в формуле (II) e0, f0, p0, q0, r0, s0, t0, u0, v0 и w0 удовлетворяют 0≤e0+f0+p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤39, предпочтительно удовлетворяют 0≤e0+f0+p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤29, более предпочтительно удовлетворяют 0≤e0+f0+p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤19 и даже более предпочтительно удовлетворяют 0≤e0+f0+p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤9.

[0170] Свойства связывания антитела

Циклический пептид по настоящему изобретению обладает прекрасными свойствами связывания антитела. Свойства связывания антитела относятся к активности связывания в отношении антител и/или производных антитела. Чем выше активность связывания, больше антител адсорбируется на циклическом пептиде в случае, когда циклический пептид используют в качестве аффинного лиганда для аффинной хроматографии для очистки антител, и, таким образом, большое количество антител можно очищать за один раз. Антитело относится к иммуноглобулину или аналогу, фрагменту или конъюгату антитела. Аналог относится к природному белку или конъюгату белка или к искусственно полученному белку или конъюгату белка, который сохраняет структуру или функцию иммуноглобулина по меньшей мере в его части. Фрагмент относится к белку, который получают ферментативной обработкой или конструируют генетической инженерией, и который содержит неполную структуру иммуноглобулина. Конъюгат относится к белку, получаемому слиянием функциональной части белков, обладающих биологической активностью, таких как различные цитокины или рецепторы цитокинов, с полным иммуноглобулином или частью иммуноглобулина посредством генетической инженерии. Антитело предпочтительно представляет собой моноклональное антитело или конъюгат, содержащий Fc-область иммуноглобулина, и более предпочтительно моноклональное антитело. В настоящем изобретении иммуноглобулин может являться иммуноглобулином любого из пяти классов (изотипов), включая иммуноглобулин G (IgG), иммуноглобулин M (IgM), иммуноглобулин A (IgA), иммуноглобулин D (IgD) и иммуноглобулин E (IgE). Среди них предпочтительным является IgG или IgM, и наиболее предпочтительным является IgG.

[0171] Устойчивость к щелочи

Циклический пептид по настоящему изобретению обладает прекрасной временной стабильностью или устойчивостью к химическому воздействию. В частности, циклический пептид по настоящему изобретению обладает прекрасной устойчивостью щелочи. Вследствие того, что циклический пептид обладает прекрасной устойчивостью к химическому воздействию, например, в случае, когда подложка для аффинной хроматографии, в которой циклический пептид по настоящему изобретению используют в качестве аффинного лиганда, используют для очистки антитела, даже если подложка повторно промывают химическим препаратом, в частности, щелочью, свойства связывания антитела сохраняются. Таким образом, можно дополнительно снижать стоимость очистки антитела.

[0172] Исключение в третьем варианте осуществления

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения X в формуле (II) представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, и в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из X⁴ и X⁵ в формуле (II) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи", или "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина и D-гомосерина", содержащей гидроксигруппу в боковой цепи", и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из X⁶ и X⁷ в формуле (II) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина", содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; и X⁸ в формуле (II) представляет собой остаток L-лейцина или остаток D-лейцина.

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения вследствие этих различий в некоторых случаях формулу (II) обозначают как формула (II').

[0173] Исключение в четвертом варианте осуществления

В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения X в формуле (II) представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, в случае, когда присутствует множество X, множество X может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; каждый из X⁴ и X⁵ в формуле (II) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи", или "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "отличной от L-серина и D-серина", содержащей гидроксигруппу в боковой цепи", и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов; и каждый из X⁶ и X⁷ в формуле (II) независимо представляет собой "аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, "отличной от L-серина и D-серина", содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи", и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов.

В четвертом варианте осуществления настоящего изобретения вследствие этих различий, формула (II) обозначают как формула (II') в некоторых случаях.

[0174] Способ синтеза циклического пептида

Способ синтеза циклического пептида по настоящему изобретению конкретно не ограничен. Например, циклический пептид можно синтезировать способом пептидного синтеза на основе синтетической органической химии или способом пептидного синтеза на основе генетической инженерии.

В качестве способа пептидного синтеза на основе синтетической органической химии можно использовать любой способ жидкофазного синтеза и способ твердофазного синтеза. В качестве способа синтеза полипептида по настоящему изобретению предпочтительным является способ твердофазного синтеза, в котором используют устройство пептидного синтеза, т.к. этот способ является общепринятым.

Способ пептидного синтеза на основе генетической инженерии представляет собой способ синтеза пептида путем введения гена в клетку. В качестве клетки используют бактерии, клетки нематоды, клетки насекомых, клетки млекопитающих, клетки животных и т.п.

Например, циклический пептид можно синтезировать путем введения неприродный аминокислоты в клетку с помощью способа на основании кодона из 4 оснований. Кроме того, путем синтеза линейного пептида и индукции реакцией сшивания функциональной группы в боковой цепи аминокислотного остатка, вводимого в циклическую часть, циклический пептид можно синтезировать.

В случае, когда должна образовываться дисульфидная связь, например, в результате взаимодействия тиоловых групп боковых цепей двух аминокислотных остатков, которые получают из аминокислоты, содержащей тиоловую группу в боковой цепи, в восстановительных условиях может образовываться дисульфидная связь. Конкретно, например, путем образования дисульфидной связи между тиоловыми группами боковой цепи двух остатки L-гомоцистеина, линейный полипептид можно циклизовать.

В случае, когда необходимым является образование тиоэфирной связи, например, в результате взаимодействия тиоловой группы аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты содержащей тиоловую группу в боковой цепи, с хлорацетильной группой боковой цепи аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, тиоэфирная связь может образовываться. Конкретно, например, путем образования тиоэфирной связи между тиоловой группой остатка L-гомоцистеина и хлорацетильной группой боковой цепи остатка N-ε-хлорацетил-L-лизина, линейный полипептид циклизоваться.

Вместо аминокислоты, содержащей галоацетильную группу, такую как хлорацетильная группа в боковой цепи, можно использовать аминокислоту, содержащую галоалканоильную группу, такую как хлорпропиониловая группа, которая содержит больше метиленовых единиц по сравнению с галоацетильной группой, в боковой цепи. Однако предпочтительно использовать аминокислоту, содержащую галоацетильную группу в боковой цепи, т.к. чем меньше количество метиленовых единиц, тем выше эффективность циклизации. Например, из галопропионилой группы (-C(=O)-(CH₂)₂-X; X представляет собой атом галогена, содержащей две метиленовые единицы), и ацетильной группы (-C(=O)-CH₂-X; X представляет собой атом галогена, содержащей одну метиленовую единицу), ацетильная группа является предпочтительной вследствие того, что она обладает большей эффективностью циклизации.

[0175] Использование циклического пептида по настоящему изобретению

Циклический пептид по настоящему изобретению можно использовать в качестве связывающего антитела лиганда, линкера для мечения антител, линкера для конъюгата антитела и лекарственного средства, носителя лекарственного средства (линкера для фармацевтических препаратов) и т.п., однако использование циклического пептида по настоящему изобретению не ограничено указанным выше.

[0176] Связывающий антитело лиганд и подложка для аффинной хроматографии

Циклический пептид по настоящему изобретению можно использовать в качестве связывающего антитела лиганда в области техники аффинной хроматографии.

Примеры применений циклического пептида по настоящему изобретению, используемого в качестве связывающего антитела лиганда, включают адсорбирующий антитело или производное антитела материал, в котором циклический пептид по настоящему изобретению иммобилизован на нерастворимой в воде подложке и подложке для аффинной хроматографии.

[0177] "Нерастворимая в воде подложка" относится к подложке, которая является по существу нерастворимой в воде. Примеры такой подложки включают полисахариды, такие как кристаллическая целлюлоза, сшитая целлюлоза, сшитая агароза, сшитый декстран и сшитый пуллулан, органические подложки, такие как полимер на основе акрилата и полимер на основе стирола, неорганические подложки, такие как стеклянные гранулы и силикагель, композитные подложки, такие как композитная подложка на основе органическое вещество-органическое вещество и композитная подложка на основе органическое вещество-неорганическое вещество, получаемые объединением указанных выше подложек и т.п. С точки зрения устойчивости к щелочи в качестве нерастворимой в воде подложки полисахариды или полимер на основе акрилата является наиболее предпочтительным, и полисахариды, такие как агароза или целлюлоза, являются наиболее предпочтительными. Примеры коммерческих продуктов, которые можно использовать в качестве нерастворимой в воде подложки, включают гель на основе пористой целлюлозы, такой как Cellufine GCL2000 (выпускаемый JNC Corporation) (CELLUFINE является зарегистрированным товарным знаком) и Cellfine MAX (выпускаемый JNC Corporation), Sephacryl S-1000 SF (выпускаемый GE Healthcare), получаемый сшиванием аллилдекстрана с метиленбисакриламидом посредством ковалентной связи (SEPHACRYL является зарегистрированным товарным знаком), подложки на основе акрилата, такие как TOYOPEARL (выпускаемый Tosoh Corporation) (TOYOPEARL является зарегистрированным товарным знаком), TOYOPEARL AF-Carboxy-650 (выпускаемый Tosoh Corporation) и TOYOPEARL GigaCap CM-650 (выпускаемый Tosoh Corporation), сшитая подложка на основе агарозы, такой как Sepharose CL4B (выпускаемый GE Healthcare) (SEPHAROSE является зарегистрированным товарным знаком), полиметилакриламид, активированная эпоксигруппой, такой как Eupergit C250l (выпускаемый Sigma-Aldrich Co., LLC.) (EUPERGIT является зарегистрированным товарным знаком) и т.п. В настоящем описании нерастворимая в воде подложка в настоящем изобретении не ограничена подложками или активированными подложками, описанными выше. С учетом цели использования исходного адсорбирующего материала и пути использования исходного абсорбирующего вещества, предпочтительно, чтобы нерастворимая в воде подложка, используемая в настоящем изобретении, имела большую площадь поверхности и являлась пористой подложкой с рядом пор подходящего размера. Форма подложки конкретно не ограничена. Подложка может быть любой из гранулоподобной подложки, волокнистой подложки, пленкообразной подложки и полой волокнистой подложки, и возможно выбирать любую форму.

[0178] Способ иммобилизации циклического пептида по настоящему изобретению на нерастворимой в воде подложке конкретно не ограничен. Например, как правило, можно применять способ, который применяют в случае, когда белок или полипептид иммобилизуют на подложке.

Например, циклический пептид можно иммобилизовать способом активации подложки посредством взаимодействия подложки с бромистым цианом, эпихлоргидрином, диглицидиловым простым эфиром, тозилхлоридом, трезилхлоридом, гидразином и т.п. или введения реакционноспособной функциональной группы на поверхность подложки и иммобилизации подложки посредством взаимодействия подложки с соединением, иммобилизованным как лиганд, или способом, вызывающим конденсацию в результате добавления конденсирующего реагента, такого как карбодиимид, или реагента, содержащего множество функциональных групп в молекуле, такого как глицеральдегид, с системой, содержащей подложку и соединение, иммобилизованное в качестве лиганда, и сшивания продукта конденсации.

[0179] В настоящем изобретении "лиганд" относится к молекуле, которая обладает определенной степенью аффинности к конкретному веществу и связывается с веществом. Конкретное вещество конкретно не ограничено, и предпочтительно представляет собой антитело или производное антитела. Участок связывания, в котором лиганд связывается с антителом или производным антитела, конкретно не ограничен. С точки зрения разнообразия, участок связывания предпочтительно представляет собой константную область антитела или производного антитела. Константная область конкретно не ограничена, и предпочтительно представляет собой область кристаллизующегося (Fc) фрагмента, константные области легкой цепи (CL-области) или константные области тяжелой цепи (CH-области). В настоящем изобретении лиганд, который может связываться с антителом или производным антитела, в некоторых случаях обозначают как "связывающий антитело лиганд".

[0180] В момент времени иммобилизации лиганда на подложке предпочтительно растворят (диспергировать) лиганд в водном растворителе (водной диспергирующей среде) или в органическом растворителе (органической диспергирующей среде). Водный растворитель (водная диспергирующая среда) конкретно не ограничен, и его примеры включают буферный раствор 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоты (HEPES), буферный раствор уксусной кислоты, буферный раствор фосфорной кислоты, буферный раствор лимонной кислоты, буферный раствор трис-соляной кислоты и т.п. Органический растворитель (органическая диспергирующая среда) конкретно не ограничен. Органический растворитель особенно предпочтительно представляет собой органический полярный растворитель, такой как диметилсульфоксид (DMSO), N,N-диметилформамид (DMF) или спирт, и его примеры включают метанол, этанол, изопропиловый спирт (IPA), 2,2,2-трифторэтанол (TFE), 1,1,1,3,3,3-гексафтор-2-пропанол (HFIP) и т.п.

Условия pH в момент времени иммобилизации лиганд конкретно не ограничен, и можно применять любую из кислой, нейтральной и щелочных условий. Например, условие pH можно соответствующим образом подбирать в зависимости от используемого растворителя (диспергирующая среда).

Например, в случае, когда условия pH необходимо делать щелочными, можно добавлять основание, такое как диазабициклоундецен (DBU), к диметилсульфоксиду (DMSO) или спирту.

[0181] В случае, когда указанный выше адсорбирующий материал используют в качестве наполнителя для аффинной хроматографии, плотность связывающих антитело лигандов конкретно не ограничена. Однако плотность предпочтительно составляет от 0,1 до 1,000 ммоль/1 л наполнителя, более предпочтительно от 0,1 до 100 ммоль/1 л наполнителя, и даже более предпочтительно от 0,5 до 20 ммоль/1 л наполнителя. В случае, когда плотность находится в указанном выше диапазоне, количество используемого связывающего антитело лиганда и характеристики очистки антитела являются хорошо уравновешенными, и можно эффективно очищать антитела при низких показателях стоимости.

[0182] Линкер для мечения антител и меченое антитело

В области техники иммунологического анализа циклический пептид по настоящему изобретению можно использовать в качестве линкера для мечения антител.

Примеры применений циклического пептида по настоящему изобретению, используемого в качестве линкера для мечения антител, включают меченое антитело, которое включает антитело, метящее соединение и циклический пептид по настоящему изобретению, и где антитело и метящее соединение связаны друг с другом посредством циклического пептида по настоящему изобретению.

Иммунологический анализ представляет собой способ анализа детекции или количественного определения следового вещества с использованием иммунного ответа (реакции антиген-антитело), и характеризуется высокой специфичностью и высокой чувствительностью.

В иммунологическом анализе для детекции антитела (первичного антитела), связанного со следовым веществом (антигеном), способ прямого мечения первичного антитела, способ мечения антитела (вторичного антитела), связанного с первичным антителом и т.п. Циклический пептид по настоящему изобретению можно использовать в качестве линкера для обеспечения связывания метящего вещества с первичным антителом или в качестве линкера для обеспечения связывания метящего вещества со вторичным антителом. Циклический пептид по настоящему изобретению обладает свойствами связывания антитела (свойства связывания иммуноглобулина G (IgG)). Таким образом, меченый циклический пептид по настоящему изобретению также можно использовать вместо меченого вторичного антитела.

Существует различные метки. Система, в которой используют радиоактивный изотоп в качестве метки, называется радиоиммунологическим анализом (RIA), система, в которой используют фермент, такой как пероксидаза, в качестве метки, называется ферментативным иммунологическим анализом (EIA), система, в которой используют хемилюминесцентное вещество, такое как люминол, в качестве метки, называется хемилюминесцентным иммунологическим анализом (CLIA), и система, в которой флуоресцентное вещество (флуоресцентный краситель), такое как флуоресцеинизотиоцианат (FITC), используют в качестве метящего вещества, называется флуоресцентным иммунологическим анализом (FIA). Циклический пептид по настоящему изобретению можно использовать в качестве линкера для мечения антител в любой из систем.

Для улучшения чувствительности детекции иммунологического анализа к одной молекуле антитела необходимо присоединить несколько меток. С линкером для мечения антител предшествующего уровня техники, в случае, когда несколько линкеров связываются с антителом, ухудшается активность связывания антитела. Таким образом, специфичность и чувствительность, которые являются преимуществом иммунологического анализа, вероятно будут ослаблены. В противоположность этому, в соответствии с циклическим пептидом по настоящему изобретению даже в случае, когда несколько циклических пептидов связываются с антителом, структурную целостность антитела может сохраняться, и активность связывания антитела не снижается. Таким образом, даже в случае, когда несколько циклических пептидов связываются с антителом, можно улучшать чувствительность детекции без ухудшения специфичности и чувствительности, которые являются преимуществом иммунологического анализа. Кроме того, вследствие того, что циклический пептид связывается с антителом в результате взаимодействия антиген-антитело, можно проводить отделение циклического пептида после мечения, что было трудно проводить в предшествующем уровне техники, и, таким образом, можно проводить обратимое мечение.

[0183] Линкер для конъюгатов антител c лекарственными средствами и конъюгата антитела и лекарственного средства

В области техники конъюгатов антител c лекарственными средствами циклический пептид по настоящему изобретению можно использовать в качестве линкера для конъюгатов антител c лекарственными средствами.

Примеры применений циклического пептида по настоящему изобретению, используемого в качестве линкера для конъюгатов антител c лекарственными средствами, включают конъюгат антитела и лекарственного средства, который содержит антитело, лекарственное средство и циклический пептид по настоящему изобретению, и в котором антитело связывается с лекарственным средством через циклический пептид по настоящему изобретению.

Конъюгат антитела c лекарственным средством (ADC) также называют другим названием "заряженное антитело". ADC представляет собой лекарственное средство, получаемое путем связывания антитела, распознающего клетку, с лекарственным средством (низкомолекулярным лекарственным средством), которое является основным активным компонентом, с использованием подходящего линкера. Механизм действия конъюгата антитела и лекарственного средства приблизительно является таким, как указано ниже.

(1) Участок антитела конъюгата антитела и лекарственного средства связывается с молекулой-мишенью на поверхности клетки-мишени.

(2) Конъюгат антитела c лекарственным средством проникает в клетку.

(3) Линкер конъюгата антитела и лекарственного средства отщепляется в клетке.

(4) Лекарственное средство (низкомолекулярное лекарственное средство) проявляет свою эффективность в клетке.

С использованием конъюгата антитела и лекарственного средства, вследствие того, что эффективность проявляется только в клетке, экспрессирующей молекулу, которая направленно воздействует на антитело, можно ингибировать системные побочные эффекты и обеспечивать проявление эффективность в основном в клетке-мишени. Таким образом, конъюгат антитела и лекарственного средства является более эффективным и вызывает меньше побочных эффектов по сравнению с простыми лекарственными средствами. Например, средство против злокачественных опухолей, разрабатываемое для атаки на злокачественные клетки, в которой активно происходит клеточное деление, а также атаковать клетки, в которых клеточное деление происходит активно, как в злокачественных клетках, но сохраняется их функция, в частности, клетки, ответственные за иммунитет, клетки желудочно-кишечного тракта, клетки волосяных фолликул и т.п. Таким образом, в качестве побочных эффектов, в некоторых случаях наблюдают симптомы, такие как восприимчивость к инфекционным заболеваниям, диарея и потеря волос. Однако с использованием конъюгата антитела и лекарственного средства, средство против злокачественных опухолей можно селективно для направленного воздействия на злокачественные клетки, и, таким образом, можно ингибировать побочные эффекты, возникающие в случае, когда средство против злокачественных опухолей атакует клетки, отличные от клеток-мишеней.

[0184] Линкер для конъюгатов антитела c лекарственными средствами является необходимым для связывания участка антитела конъюгатов антител c лекарственными средствами с участком лекарственного средства, должен являться стабильным в крови и отщеплять лекарственное средство от антитела в клетке, таким образом, что высвобождается лекарственное средство. Кроме того, линкер для конъюгатов антител c лекарственными средствами также не должен нарушать активность связывания антитела. Для улучшения эффективности доставки лекарственного средства ряд лекарственных средств необходимо прикреплять к одной молекуле антитела. Однако с использованием линкера для конъюгатов антитела c лекарственными средствами предшествующего уровня техники, в случае, когда ряд линкеров связывается с антителом, активность связывания антитела ухудшается. В результате, селективность, которая является преимуществом конъюгата антитела и лекарственного средства, ухудшается, и лекарственное средство, вероятно, доставляется в клетки-мишени с низкой эффективностью. Однако с циклическим пептидом по настоящему изобретению, даже в случае, когда несколько циклических пептидов связывается с антителом, структурная целостность антитела может сохраняться, и активность связывания антитела не уменьшается. Таким образом, даже в случае, когда несколько циклических пептидов связывается с антителом, селективность, которая является преимуществом конъюгата антитела и лекарственного средства, не ухудшается, и лекарственное средство можно доставлять в клетки-мишени с улучшенной эффективностью. Кроме того, вследствие того, что временная стабильность циклического пептида по настоящему изобретению является выше, чем временная стабильность циклического пептида предшествующего уровня техники, можно улучшать стабильность циклического пептида в крови. Кроме того, модификацией части боковой цепи дисульфидной связи, которая является циклической частью, свойства высвобождения лекарственного средства в клетке можно регулировать.

[[0185] Лекарственное средство может представлять собой инкапсулированное в липосому лекарственное средство, инкапсулированное в полимерную мицеллу лекарственное средство или полиэтиленгликолированное (пегилированное) лекарственное средство.

Путем инкапсулирования в липосому, инкапсулирования в полимерную мицеллу или PEG-гилирования лекарственного средства, во многих случаях, может улучшать стабильность in vivo активных компонентов, фармакокинетику, включая профиль миграции ткани, внутриклеточную фармакокинетику и т.п.

[0186] Носитель лекарственного средства и фармацевтический препарат

Циклический пептид по настоящему изобретению можно использовать в качестве лекарственное средство носитель в системах доставки лекарственных средств.

Примеры применений циклического пептида по настоящему изобретению, используемого в качестве носителя лекарственного средства, включают фармацевтический препарат, который содержит лекарственное средство и циклический пептид по настоящему изобретению, и в котором лекарственное средство и циклический пептид по настоящему изобретению являются непосредственно или опосредованно связанными друг с другом.

В случае, когда циклический пептид по настоящему изобретению связывается с IgG, присутствующему в биологическом организме, можно получать такие же эффекты, как эффекты, вызываемые указанным выше конъюгатом антитела и лекарственного средства. Лекарственное средство может связываться с циклическим пептидом в том качестве как оно есть или связываться с циклическим пептидом в качестве лекарственного средства после того, как подвергнется инкапсуляции в липосому, образованию мицелл с использованием полимера или полиэтиленгликолированию (пэгилированию). Кроме того, лекарственное средство может связываться с циклическим пептидом через полисахариды, такие как декстран или гидрофильный полимер.

[0187] В качестве способа связывания лекарственного средства с циклическим пептидом по настоящему изобретению можно рассматривать использование дисульфидной связи между аминокислотными остатками в сшитой части.

В частности, это является способом восстановления дисульфидной связи (-S-S-) вследствие того, что расщепляют (-S^-S^--) и добавляют два иона к соединению посредством сшивания.

В качестве такого способа известен, например, ThioBridge (торговое наименование).

Примеры

[0188] Далее в настоящем описании настоящее изобретение будет более конкретно описано на основании примеров, но настоящее изобретение не ограничено примерами.

[0189] Пример 1

(1) Синтез циклического пептида

Циклический пептид (SEQ ID NO:3; далее в настоящем описании в некоторых случаях этот циклический пептид обозначают как "циклический пептид 1"), представленный формулой (3), синтезировали с использованием полностью автоматического устройства пептидного синтеза (PSSM-8, выпускаемый Shimadzu Corporation).

DX^aAYHRGELVWX^bTKK (3)

X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из N-ε-хлорацетил-L-лизина, и X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина. Между X^a и X^b тиоэфирная связь образуется в результате взаимодействия хлорацетильноы группы боковой цепи N-ε-хлорацетил-L-лизина с тиоловой группой L-гомоцистеина.

[0190] (2) Иммобилизация лиганда

Коммерчески доступный сенсорный чип CM5 (типа введения карбоксиметилдекстрана, выпускаемый GE Healthcare) устанавливали в Biacore 3000 (Biacore является зарегистрированным товарным знаком) в качестве устройства поверхностнго плазмонного резонанса, производимого GE Healthcare, буферный раствор 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоты (HEPES) (20 мМ HEPES-HCl, 150 мМ NaCl, pH 7,4) для поверхностного плазмонного резонанса (SPR) стабилизировали при скорости потока 10 мл/мин, и добавляли к нему 70 мл 0,2 M смешанного с водой раствора 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (EDC) и 0,04 M N-Гидроксисукцинимида (NHS). Затем, наносили 100 мл раствора образца циклического пептида 1, который разбавляли буферным раствором HEPES при 0,2 г/л и фильтровали через политетрафторэтилен (PTFE) (выпускаемый Advantec MFS, Inc.) с диаметром 0,20 мм, на сенсорный чип, затем проводили блокирующую обработку с использованием раствора этаноламина, и промывали сенсорный чип водным раствором гидроксида натрия, таким образом, проводя иммобилизацию. Подобным образом, добавляли 70 мл смешанного с водой раствора 0,2 M EDC и 0,04 M NHS к тому же сенсорному чипу без иммобилизирующего образца в другой поточный канал, а затем проводили блокирующую обработку и обработку промыванием. Далее в настоящем описании получаемый иммобилизованный сенсорный будет обозначен как "иммобилизованный сенсорный чип A".

[0191] (3) Оценка активности связывания

При 25°C добавляли 3000 нМ иммуноглобулина человека G (антитела IgG) в течение 10 минут к иммобилизованному сенсорному чипу A, получаемому на этапе (1), описанном выше. Сразу после добавления измеряли количество связывания антитела и на основании разницы количества связывания антитела между поточным каналом, в котором циклический пептид был иммобилизован, и поточным каналом, в котором циклический пептид не был иммобилизован, и количества иммобилизованного циклического пептида рассчитывали активность циклического пептида. Кроме того, принимая активность циклического пептида 5 в сравнительном примере 1 за 1, рассчитывали относительную активность связывания по отношению к антителу IgG человека.

Стандарты оценки относительной активности связывания

Относительная активность связывания являлась выше на 2000% активности связывания циклического пептида 5. ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ S

Относительная активность связывания являлась выше на 800% активности связывания циклического пептида 5. ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ A

Относительная активность связывания являлась выше на 400% и была равна или ниже на 800% активности связывания циклического пептида 5. ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ B

Относительная активность связывания являлась выше на 200% и была равна или ниже на 400% активности связывания циклического пептида 5. ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ C

Относительная активность связывания являлась выше на 100% и была равна или ниже на 200% активности связывания циклического пептида 5. ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ D

Относительная активность связывания была равна или ниже на 100% активности связывания циклического пептида 5. ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ E

Профили A, B и C демонстрируют, что иммобилизация приводит к достаточному улучшающему действию, и профили D и E демонстрируют, что достаточная активность не проявляется. Профиль S демонстрирует, что циклический пептид приводит к особенно превосходному улучшающему действию среди циклических пептидов, относящихся к профилю A, и такой циклический пептид описывают как "A (S)".

В случае, когда используют циклический пептид, проявляющий достаточную активность связывания, циклический пептид может специфически связываться с антителами, антитела более эффективно очищают, и можно уменьшать затраты на очистку антител.

[0192] (4) Иммобилизация лиганда

1 мл активированной HiTrap NHS HP Columns (колонки для связывания для иммобилизации лиганда, выпускаемый GE Healthcare) (HITRAP является зарегистрированным товарным знаком) взаимодействовал с 1 мл 10 мг/мл раствор циклического пептида, который получали растворением циклического пептида 1 в буфера для иммобилизации (200 мМ NaHCO₃, 500 мМ NaCl, pH 8,3), в течение 1 часа при 25°C. Продукт реакции блокировали водным раствором этаноламина и промывали, таким образом, получая иммобилизованную подложку с циклическим пептидом 1. Далее в настоящем описании получаемую иммобилизованную подложку обозначают как "иммобилизованная подложка A".

[0193] (5) Оценка устойчивости к химическому воздействию

Иммобилизованную подложку A, получаемую на этапе (4), описанном выше, присоединяли к хроматографической системе AKTA avant 25 (выпускаемой Healthcare) (AKTAAVANT является зарегистрированным товарным знаком), и измеряли способность связывания антитела. Колонки уравновешивали с использованием уравновешивающего раствора (20 мМ буфера фосфорной кислоты, 150 мМ NaCl, pH 7,4), а затем добавляли 15 мл раствора антитела IgG человека, концентрацию которого доводили так, чтобы она составляла 5 мг/мл, с использованием стандартного буфера (20 мМ буфера фосфорной кислоты, 150 мМ NaCl, pH 7,4) при скорости потока 0,21 мл/мин. Затем отмывали колонки 5 мл раствора для промывки после внесения образца (20 мМ буфер фосфорной кислоты, 150 мМ NaCl, pH 7,4), прогоняя его при той же скорости потока, а затем промывали 5 мл раствора для промывания перед элюированием образца (20 мМ буфер фосфорной кислоты, 1 M NaCl, pH 7,4) при той же скорости потока. Затем 5 мл элюирующего раствора (100 мМ буфер лимонной кислоты, pH 3,2) прогоняли при той же скорости потока. Затем прогоняли 5 мл раствора для безразборной мойки (CIP) (0,1 M гидроксида натрия) при той же скорости потока, а затем прогоняли 5 мл уравновешивающего раствора (20 мМ буфер фосфорной кислоты, 150 мМ NaCl, pH 7,4) при той же скорости потока. На этот раз с использованием пика элюирирования иммуноглобулина G (IgG), получаемого посредством мониторинга оптической плотности при 280 нм, измеряли количество антител, связанных с подложкой, до тех пор, пока 10% исходного раствора антитела не вытекали из подложки, как способность связывания антитела. Затем иммобилизованную подложку A наполняли 0,2 M водным раствором NaOH в течение 6 часов при 25°C и оставляли уравновешиваться, аналогичным образом измеряли способность связывать антитело подложки и рассчитывали на основании количества связывания антитела до обработки щелочью и после нее.

Стандарты оценки скорости связывания в количестве связывания

Скорость изменения количества связывания являлась выше на 90% ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅- A

Скорость изменения количества связывания являлась выше на 80% и была равна или ниже на 90% ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ B

Скорость изменения количества связывания являлась выше на 70% и была равна или ниже на 80% ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ C

Скорость изменения количества связывания являлась выше на 50% и была равна или ниже на 70% ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ D

Скорость изменения количества связывания была равна или ниже на 50% ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ E

Профили A, B и C демонстрируют, что устойчивость к химическому воздействию является достаточной, и профили D и E демонстрируют, что достаточная устойчивость к химическому воздействию не проявляется. В случае, когда используют циклический пептид, обладающий достаточной устойчивостью к химическому воздействию, циклический пептид может повторно специфически связываться с антителами даже после отмывки, антитела можно очищать в течение длительного периода времени, и можно уменьшать затраты на очистку антител.

[0194] В таблице 3 приведены структуры циклических пептидов из примера 1 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0195] Примеры 2 и 6

На основании примера 1 синтезировали циклический пептид 2 и циклический пептид 6 и оценивали относительную активность связывания и устойчивость к химическому воздействию.

Указанный код в таблице 3 означает указанное ниже вещество.

Hcy: аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина

Вследствие взаимодействия между тиоловыми группами боковой цепи образуется дисульфидная связь между аминокислотными остатками в сшитой части, и, таким образом, аминокислотные остатки являются сшитыми.

В таблице 3 приведены структуры циклических пептидов из примера 2 и примера 6 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0196] Примеры 3-5

На основании примера 1 синтезировали циклические пептиды 3-5 и оценивали относительную активность связывания и устойчивость к химическому воздействию.

Указанные коды в таблице 3 означают указанные ниже вещества.

Hcy: аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина

Orn (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N-δ-хлорацетил-L-орнитина

Lys (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N-ε-хлорацетил-L-лизина

Вследствие взаимодействия между хлорацетильной группой и тиоловой группой в сшитой части образуется тиоэфирная связь, и, таким образом, аминокислотные остатки являются сшитыми.

В таблице 3 продемонстрированы структуры циклических пептидов из примеров 3-5 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0197] Примеры 7-12

На основании примера 1 синтезировали циклические пептиды 7-12 и оценивали относительную активность связывания и устойчивость к химическому воздействию.

Указанные коды в таблице 3 означают указанные ниже вещества.

Dap (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N³-галоацетил-L-2,3-диаминопропионовая кислота[(2S)-2-амино-3-[(2-галоацетил)амино]пропионовой кислоты]

Dab (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N⁴-галоацетил-L-2,4-диаминобутановая кислота[(2S)-2-амино-4-[(2-галоацетил)амино]бутановой кислоты]

Orn (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N-δ-хлорацетил-L-орнитина

Lys (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N-ε-хлорацетил-L-лизина

Hcy: аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина

Вследствие взаимодействия между хлорацетильной группой и тиоловой группой в сшитой части образуется тиоэфирная связь, и, таким образом, аминокислотные остатки являются сшитыми.

В таблице 3 продемонстрированы структуры циклических пептидов из примеров 7-12 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0198] Таблица 3

Циклический пептид Оценка характеристик SEQ ID NO: Идентификационное название Аминокислотная последовательность
(N-конец→C-конец) Аминокислотный остаток в сшитой части Конкретный аминокислотный остаток Сшитая структура Относительная активность связывания Устойчивость к химическому воздействию X^a X^b X^α Пример 1 Циклический пептид 1 DX^aAYHRGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 3 2 Циклический пептид 2 DX^aAYHRGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A B 4 3 Циклический пептид 3 DX^aAYHRGELVWX^bTKK Hcy Orn (ацетил) - Тиоэфирная связь A A 5 4 Циклический пептид 4 KKDX^aAYHRGELVWX^bT Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 6 5 Циклический пептид 5 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 7 6 Циклический пептид 6 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 8 7 Циклический пептид 7 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Dap (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 9 8 Циклический пептид 8 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Dab (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 10 9 Циклический пептид 9 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Orn (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 11 10 Циклический пептид 10 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Hcy Dab (ацетил) - Тиоэфирная связь A A 12 11 Циклический пептид 11 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Hcy Orn (ацетил) - Тиоэфирная связь A A 13 12 Циклический пептид 12 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Hcy Lys (ацетил) - Тиоэфирная связь A A 14

[0199] Примеры 13-22

На основании примера 1 синтезировали циклические пептиды 13-22 и оценивали относительную активность связывания и устойчивость к химическому воздействию.

Указанные коды в таблице 4 означают указанные ниже вещества.

Lys (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N-ε-хлорацетил-L-лизина

Hcy: аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина

HmS: аминокислотный остаток, получаемый из L-гомосерина

HmY: аминокислотный остаток, получаемый из L-гомотирозина

Вследствие взаимодействия между хлорацетильной группой и тиоловой группой в сшитой части образуется тиоэфирная связь, и, таким образом, аминокислотные остатки являются сшитыми.

В таблице 4 продемонстрированы структуры циклических пептидов из примеров 13-22 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0200] Таблица 4

Циклический пептид Оценка характеристик SEQ ID NO: Идентификационное название Аминокислотная последовательность
(N-конец→C-конец) Аминокислотный остаток в сшитой части Конкретный аминокислотный остаток Сшитая структура Относительная активность связывания Устойчивость к химическому воздействию X^a X^b X^α Пример 13 Циклический пептид 13 DX^aAYHLGELVWX^bSKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A B 15 14 Циклический пептид 14 DX^aAYHLGELVWX^bXαKK Lys (ацетил) Hcy HmS Тиоэфирная связь A A 16 15 Циклический пептид 15 DX^aAYHLGELVWX^bDKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 17 16 Циклический пептид 16 DX^aAYHLGELVWX^bEKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 18 17 Циклический пептид 17 DX^aAYHLGELVWX^bYKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 19 18 Циклический пептид 18 DX^aAYHLGELVWX^bXαKK Lys (ацетил) Hcy HmY Тиоэфирная связь A A 20 19 Циклический пептид 19 SX^aAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A B 21 20 Циклический пептид 20 TX^aAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 22 21 Циклический пептид 21 XαX^aAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy HmS Тиоэфирная связь A A 23 22 Циклический пептид 22 EX^aAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 24

[0201] Примеры 23-53

На основании примера 1 синтезировали циклические пептиды 23-53 и оценивали относительную активность связывания и устойчивость к химическому воздействию.

Указанные коды в таблице 5 означают указанные ниже вещества.

Lys (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N-ε-хлорацетил-L-лизина

Hcy: аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина

Вследствие взаимодействия между хлорацетильной группой и тиоловой группой в сшитой части образуется тиоэфирная связь, и, таким образом, аминокислотные остатки являются сшитыми.

В Таблице 5 продемонстрированы структуры циклических пептидов из примеров 23-53 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0202] Таблица 5

Циклический пептид Оценка характеристик SEQ ID NO: Идентификационное название Аминокислотная последовательность
(N-конец→C-конец) Аминокислотный остаток в сшитой части Конкретный аминокислотный остаток Сшитая структура Относительная активность связывания Устойчивость к химическому воздействию X^a X^b X^α Пример 23 Циклический пептид 23 DX^aAAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 25 24 Циклический пептид 24 DX^aAAAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 26 25 Циклический пептид 25 DX^aAAAAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь B A 27 26 Циклический пептид 26 DX^aSYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A B 28 27 Циклический пептид 27 DX^aTYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 29 28 Циклический пептид 28 DX^aAFHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 30 29 Циклический пептид 29 DX^aAHHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 31 30 Циклический пептид 30 DX^aAVHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 32 31 Циклический пептид 31 DX^aAMHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 33 32 Циклический пептид 32 DX^aAYYLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 34 33 Циклический пептид 33 DX^aAYWLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 35 34 Циклический пептид 34 DX^aAYHMGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 36 35 Циклический пептид 35 DX^aAYHFGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 37 36 Циклический пептид 36 DX^aAYHHGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 38 37 Циклический пептид 37 DX^aAYHVGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 39 38 Циклический пептид 38 DX^aAYHIGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 40 39 Циклический пептид 39 DX^aAYHNGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 41 40 Циклический пептид 40 DX^aAYHWGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 42 41 Циклический пептид 41 DX^aAYHLDELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 43 42 Циклический пептид 42 DX^aAYHLEELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 44 43 Циклический пептид 43 DX^aAYHLGDLVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 45 44 Циклический пептид 44 DX^aAYHLGKLVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 46 45 Циклический пептид 45 DX^aAYHLGRLVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 47 46 Циклический пептид 46 DX^aAYHLGHLVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 48 47 Циклический пептид 47 DX^aAYHLGMLVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 49 48 Циклический пептид 48 DX^aAYHLGNLVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 50 49 Циклический пептид 49 DX^aAYHLGEIVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 51 50 Циклический пептид 50 DX^aAYHLGEMVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 52 51 Циклический пептид 51 DX^aAYHLGEKVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 53 52 Циклический пептид 52 DX^aAYHLGERVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь B B 54 53 Циклический пептид 53 DX^aAYHLGELIWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy - Тиоэфирная связь A A 55

[0203] Примеры 54-71

На основании примера 1 синтезировали циклические пептиды 54-71 и оценивали относительную активность связывания и устойчивость к химическому воздействию.

Указанный ниже код в таблице 6 означает указанное ниже вещество.

Hcy: аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина

Вследствие взаимодействия между тиоловыми группами боковой цепи, образуется дисульфидная связь между аминокислотными остатками в сшитой части, и, таким образом, аминокислотные остатки являются сшитыми.

В таблице 6 продемонстрированы структуры циклических пептидов из примеров 54-71 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0204] Сравнительный пример 1

На основании примера 1 синтезировали циклический пептид 91 и оценивали относительную активность связывания и устойчивость к химическому воздействию.

Указанные коды в таблице 6 означают указанные ниже вещества.

Glu: аминокислотный остаток, получаемый из L-глутаминовой кислоты

Lys: аминокислотный остаток, получаемый из L-лизина

Вследствие взаимодействия карбоксигруппы и аминогруппы образуется амидная связь между аминокислотными остатками в сшитой части, и, таким образом, аминокислотные остатки являются сшитыми.

В таблице 6 продемонстрирована структура циклического пептида сравнительного примера 1 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0205] Сравнительный пример 2

На основании примера 1 синтезировали циклический пептид 92 и оценивали относительную активность связывания и устойчивость к химическому воздействию.

Указанный ниже код в таблице 6 означает указанное ниже вещество.

Cys: аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина

Вследствие взаимодействия между тиоловыми группами боковой цепи образуется дисульфидная связь между аминокислотными остатками в сшитой части, и, таким образом, аминокислотные остатки являются сшитыми.

В таблице 6 продемонстрирована структура циклического пептида сравнительного примера 2 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0206] Таблица 6

Циклический пептид Оценка характеристик SEQ ID NO: Идентификационное название Аминокислотная последовательность
(N-конец→C-конец) Аминокислотный остаток в сшитой части Конкретный аминокислотный остаток Сшитая структура Относительная активность связывания Устойчивость к химическому воздействию X^a X^b X^α Пример 54 Циклический пептид 54 DX^aSYHLGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A B 56 55 Циклический пептид 55 DX^aTYHLGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A B 57 56 Циклический пептид 56 DX^aAWHLGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 58 57 Циклический пептид 57 DX^aAFHLGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 59 58 Циклический пептид 58 DX^aAHHLGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь B A 60 59 Циклический пептид 59 DX^aAYYLGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 61 60 Циклический пептид 60 DX^aAYHMGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 62 61 Циклический пептид 61 DX^aAYHFGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 63 62 Циклический пептид 62 DX^aAYHHGELVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 64 63 Циклический пептид 63 DX^aAYHLGDLVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 65 64 Циклический пептид 64 DX^aAYHLGMLVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 66 65 Циклический пептид 65 DX^aAYHLGHLVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 67 66 Циклический пептид 66 DX^aAYHLGNLVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 68 67 Циклический пептид 67 DX^aAYHLGEIVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 69 68 Циклический пептид 68 DX^aAYHLGEMVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь A A 70 69 Циклический пептид 69 DX^aAYHLGEKVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь B A 71 70 Циклический пептид 70 DX^aAYHLGERVWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь B B 72 71 Циклический пептид 71 DX^aAYHLGELIWX^bTKK Hcy Hcy - Дисульфидная связь B A 73 Сравнительный пример 1 Циклический пептид 91 DX^aAYHRGELVWX^bTKK Glu Lys - Амидн связь E (standard) D 86 2 Циклический пептид 92 DX^aAYHRGELVWX^bTKK Cys Cys - Дисульфидная связь A E 87

[0207] Примеры 72-75 и сравнительный пример 3

На основании примера 1 синтезировали циклические пептиды 72-75 и циклический пептид 93 и оценивали относительную активность связывания и устойчивость к химическому воздействию.

Указанные коды в таблице 7 означают указанные ниже вещества.

Lys (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N-ε-хлорацетил-L-лизина

Pen: аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина

HmS: аминокислотный остаток, получаемый из L-гомосерина

Вследствие взаимодействия хлорацетильной группы с тиоловой группой в сшитой части образуется тиоэфирная связь, и, таким образом, аминокислотные остатки являются сшитыми.

В таблице 7 продемонстрированы структуры циклических пептидов из примеров 72-75 и сравнительного примера 3 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0208] Примеры 76-83 и сравнительные примеры 4-6

На основании примера 1 синтезировали циклические пептиды 78-91 и оценивали относительную активность связывания и устойчивость к химическому воздействию.

Указанные коды в таблице 7 означают указанные ниже вещества.

Dap (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N³-галоацетил-L-2,3-диаминопропионовая кислота[(2S)-2-амино-3-[(2-галоацетил)амино]пропионовой кислоты]

Dab (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N⁴-галоацетил-L-2,4-диаминобутановая кислота[(2S)-2-амино-4-[(2-галоацетил)амино]бутановой кислоты]

Orn (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N-δ-хлорацетил-L-орнитина

Lys (ацетил): аминокислотный остаток, получаемый из N-ε-хлорацетил-L-лизина

HmS: аминокислотный остаток, получаемый из L-гомосерина

Вследствие взаимодействия хлорацетильной группы с тиоловой группой в сшитой части образуется тиоэфирная связь, и, таким образом, аминокислотные остатки являются сшитыми.

В таблице 7 продемонстрированы структуры циклических пептидов из примеров 72, 73, 74 и 75 и сравнительного примера 3 и результаты оценки относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию.

[0209] Таблица 7

Циклический пептид Оценка характеристик SEQ ID NO: Идентификационное название Аминокислотная последовательность
(N-конец→C-конец) Аминокислотный остаток в сшитой части Конкретный аминокислотный остаток Сшитая структура Относительная активность связывания Устойчивость к химическому воздействию X^a X^b X^α Пример 72 Циклический пептид 72 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Pen - Тиоэфирная связь A (S) A 74 73 Циклический пептид 73 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Pen K (ацетил) - Тиоэфирная связь A A 75 74 Циклический пептид 74 DX^aAYHRGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Pen - Тиоэфирная связь A (S) B 76 75 Циклический пептид 75 DX^aAYHLGELVWX^bXαKK Lys (ацетил) Pen HmS Тиоэфирная связь A (S) B 77 76 Циклический пептид 76 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Dap (ацетил) Cys - Тиоэфирная связь A (S) B 78 77 Циклический пептид 77 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Dab (ацетил) Cys - Тиоэфирная связь A (S) B 79 78 Циклический пептид 78 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Orn (ацетил) Cys - Тиоэфирная связь A B 80 79 Циклический пептид 79 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Cys - Тиоэфирная связь A (S) B 81 80 Циклический пептид 80 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Cys Dap (ацетил) - Тиоэфирная связь A (S) B 82 81 Циклический пептид 81 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Cys Dab (ацетил) - Тиоэфирная связь A (S) B 83 82 Циклический пептид 82 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Cys Orn (ацетил) - Тиоэфирная связь A B 84 83 Циклический пептид 83 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Cys Lys (ацетил) - Тиоэфирная связь A (S) B 85 Сравнительный пример 3 Циклический пептид 93 DX^aSYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Pen - Тиоэфирная связь A D 88 4 Циклический пептид 94 DX^aSYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Cys - Тиоэфирная связь A E 89 5 Циклический пептид 95 DX^aAYHRGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Cys - Тиоэфирная связь A E 90 6 Циклический пептид 96 XαX^aAYHRGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Cys HmS Тиоэфирная связь A E 91

[0210] Описание результатов примеров и сравнительных примеров

Примеры 1-6

Все циклические пептиды 1-6 примеров 1-6 относили к классу A по оценке относительной активности связывания, и они обладали прекрасной относительной активностью связывания.

За исключением циклического пептида 2 из примера 2 циклические пептиды 1-6 из примеров 1-6 относили к классу A по оценке устойчивости к химическому воздействию, и они обладали прекрасной устойчивостью к химическому воздействию.

Несмотря на то, что циклический пептид 2 из примера 2 и циклический пептид 6 из примера 6 обладали сшитой структурой, образованной дисульфидной связью, они характеризовались различием, которое заключалось в том, что циклический пептид 2 относили к классу B по оценке устойчивости к химическому воздействию, тогда как циклический пептид 6 относили к классу A по оценке устойчивости к химическому воздействию. Вероятно, это обусловлено тем, что циклический пептид 2 обладал аминокислотной последовательностью AYHRGELVW в циклической части, тогда как циклический пептид 6 обладал аминокислотной последовательностью AYHLGELVW в циклической части. На данный момент времени механизм, который обуславливает различные уровни устойчивости к химическому воздействию циклических пептидов, невозможно четко объяснить.

[0211] Примеры 7-12

Примеры 7-9 и примеры 10-12 получают изменением типа аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи. Примеры 7-9 и примеры 10-12 имеют зависимость, получаемую в результате изменения положений аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, и аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, отличной от L-цистеина и D-цистеина, содержащей тиоловую группу в боковой цепи.

Все циклические пептиды 7-12 из примеров 7-12 относили к классу A по оценке относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию, и они обладали прекрасной относительной активностью связывания и устойчивостью к химическому воздействию.

[0212] Примеры 13-22

Циклические пептиды 13-22 из примеров 13-22 являются примерами, получаемыми заменой аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи вне циклической части, или аминокислотного остатка, получаемого из аминокислоты, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи.

Циклический пептид 13 (пример 13), содержащий аминокислотный остаток, получаемый из L-серина (аминокислоты, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи) со стороны C-конца циклической части, и циклический пептид 19 (пример 19), содержащий такой же аминокислотный остаток со стороны N-конца, относили к классу B по оценке устойчивости к химическому воздействию. За исключением этих циклических пептидов все циклические пептиды 14-18 (примеры 14-18) и циклические пептиды 20-22 (примеры 20-22) относили к классу A по оценке относительной активности связывания и устойчивости к химическому воздействию, и эти циклические пептиды обладали прекрасной относительной активностью связывания и устойчивостью к химическому воздействию.

[0213] Примеры 23-53

Циклические пептиды 23-53 из примеров 23-53 являются примерами, получаемыми заменой типа аминокислотного остатка внутри циклической части в случае, когда сшитая структура является тиоэфирной связью.

[0214] Примеры 54-71

Циклические пептиды 54-71 из примеров 54-71 являются примеры, получаемыми заменой типа аминокислотного остатка внутри циклической части в случае, когда сшитая структура является тиоэфирной связью.

[0215] Примеры 72-75 и сравнительный пример 3

Циклические пептиды 72-75 из примеров 72-75 и циклический пептид 93 сравнительного примера 3 являются примеры, получаемыми в случае, когда сшитая структура является тиоэфирной связью. В этих циклических пептидах аминокислота, содержащая тиоловую группу в боковой цепи, представляет собой L-пеницилламин.

Циклический пептид 93 сравнительного примера 3, содержащий L-серин в циклической части, относили к классу A по оценке относительной активности связывания, но относили к классу D по оценке устойчивости к химическому воздействию.

[0216] Примеры 76-83 и сравнительные примеры 4-6

Циклические пептиды 76-83 из примеров 76-83 и циклические пептиды 94-96 сравнительных примеров 4-6 являются примеры, получаемыми в случае, когда сшитая структура является тиоэфирной связью. В этих циклических пептидах, аминокислота, содержащая тиоловую группу в боковой цепи, представляет собой L-цистеин.

Все примеры из сравнительного примера 4, содержащего L-серин в циклической части, сравнительного примера 5, содержащего L-аспарагиновую кислоту в циклической части, и сравнительного примера 6, содержащего L-гомосерин вне циклической части со стороны N-конца, относили к классу E по оценке устойчивости к химическому воздействию, и они обладали слабой устойчивостью к химическому воздействию.

Вероятно, это обусловлено тем, что гидроксигруппа или карбоксигруппа или гидроксигруппа и карбоксигруппа в боковой цепи аминокислотного остатка оказывают влияние. Однако на данный момент времени невозможно четко объяснить, почему устойчивость к химическому воздействию указанных выше примеров значительно хуже, чем устойчивость к химическому воздействию примеров 76-83.

[0217] Обобщение

Обобщая, таким образом, сшитая структура, тиоэфирная связь, в которой участвует остаток L-гомоцистеина, как правило, проявляет самую высокую стабильность, дисульфидная связь между остатками L-гомоцистеина, как правило, обладает второй самой высокой стабильностью, тиоэфирная связь, в которой участвует L-пеницилламин, как правило, обладает третьей самой высокой стабильностью, и тиоэфирная связь, в которой участвует L-цистеин, как правило, обладает четвертой самой высокой стабильностью.

[0218] Пример A

Результаты эксперимента, проводимого с использованием плазмы человека

Оценка стабильности в плазме

Оценивали стабильность циклического пептида 5, получаемого в примере 5 с использованием плазмы человека (выпускаемого ProMedDX).

Каждый из пептидов получали в виде 5 мМ водного раствора и 2 мл каждого из водных растворов добавляли к 20 мл плазмы человека, и оставляли уравновешиваться в течение 20 минут при комнатной температуре. Через 20 минут к ним добавляли 100 мл метанола (выпускаемого Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), таким образом, чтобы остановить реакцию. После перемешивания раствор подвергали центрифугированию и собирали супернатант, и называли как образец 20-минут. При этом 100 мл метанола добавляли к 20 мл плазмы человека, к нему добавляли 2 мл водного раствор пептида, раствор перемешивали и подвергали центрифугированию, и собирали супернатант. Собранный супернатант называли образец 0-минут.

Каждый из образцов количественно определяли с использованием масс-спектрометра TRIPLE QUAD 5500 (выпускаемого AB Sciex Pte. Ltd.). Принимая количественное значение образца 0-минут как 100%, рассчитывали количественное значение образца 20-минут как остаточная скорость.

[0219] Стандарты оценки для остаточной скорости

Скорость изменения количества связывания являлась выше на 90% ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ A

Скорость изменения количества связывания являлась выше на 80% и была равна или ниже на 90% ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ B

Скорость изменения количества связывания являлась выше на 70% и была равна или ниже на 80% ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ C

Скорость изменения количества связывания являлась выше на 50% и была равна или ниже на 70% ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ D

Скорость изменения количества связывания была равна или ниже на 50% ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ E

Структура циклического пептида и результат оценки приведены в соответствующем столбце в таблице 8.

[0220] Пример B

Стабильность циклического пептида 6, получаемого в примере 6 в плазме человека, оценивали таким же образом, как в примере A. Структура циклического пептида и результат оценки приведены в соответствующем столбце в таблице 8.

[0221] Сравнительный пример C

Стабильность циклического пептида 91, получаемого в сравнительном примере 1 в плазме человека, оценивали таким же образом, как в примере A. Структура циклического пептида и результат оценки приведены в соответствующем столбце в таблице 8.

[0222] Таблица 8

Циклический пептид Изменение показателя количества связывания
(оценка) SEQ ID NO: Идентификационное название Аминокислотная последовательность (N-конец→C-конец) Аминокислотный остаток в сшитой части Сшитая структура X^a X^b Пример A Циклический пептид 5 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Lys (ацетил) Hcy Тиоэфирная связь A 7 Пример B Циклический пептид 6 DX^aAYHLGELVWX^bTKK Hcy Hcy Дисульфидная связь A 8 Сравнительный пример C Циклический пептид 91 DX^aAYHRGELVWX^bTKK Glu Lys Амидн связь E 86

[0223] Описание результатов

Скорость изменения количества связывания (остаточная скорость) циклического пептида 5 (пример A) и циклического пептида 6 (пример B) в плазме человека являлась выше на 90%. Циклический пептиды 5 и 6 характеризовались высокой стабильностью в плазме человека.

В противоположность этому, скорость изменения количества связывания (остаточная скорость) циклического пептида 91 (сравнительный пример C) была равна или ниже на 50%. Циклический пептид 91 обладал слабой стабильностью в плазме человека.

Стабильность в плазме человека является характеристикой, которая является важной в случае, когда циклический пептид по настоящему изобретению используют в качестве конъюгата антитела и лекарственного средства или фармацевтического препарата. Чем выше скорость изменения количества связывания (остаточная скорость), тем труднее циклическому пептиду диссоциировать из лекарственного средства в крови. Таким образом, высокая остаточная скорость является предпочтительной для точной доставки лекарственного средства в мишень и для ингибирования побочных эффектов.

Список последовательностей

Международная патентная заявка № W-5923PCT в соответствии с международным сотрудничеством в области патентов, циклический пептид, аффинность ChroJP16081353 20161021----00260157151602210379normal20161021161101201609151052110950_P1AP101_W-_25.app

Изобретение относится к циклическому пептиду, который обладает свойствами связывания антитела и улучшенной устойчивостью к химическому воздействию, а также к подложке для аффинной хроматографии, содержащей циклический пептид. 5 н. и 4 з.п. ф-лы, 8 табл., 83 пр.

1. Циклический пептид, представленный формулой (IC)

R^N-X⁶_t-X⁴_r-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X^b-X⁵_s-X⁷_u-R^C, (IC)

в формуле (IC)

R^N представляет собой аминогруппу;

R^C представляет собой карбоксигруппу;

X¹ представляет собой остаток L-лейцина, остаток L-изолейцина, остаток L-метионина, остаток L-лизина или остаток L-аргинина;

X² представляет собой представляет собой остаток L-валина или остаток L-изолейцина;

X³ представляет собой остаток L-триптофана;

X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина;

X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина или D-гомоцистеина;

X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи;

X_m выбран из группы, состоящей из A-Y-H-R-G-E, A-Y-H-L-G-E, A-A-Y-H-L-G-E, A-A-A-Y-H-L-G-E, A-A-A-A-Y-H-L-G-E, S-Y-H-L-G-E, T-Y-H-L-G-E, A-F-H-L-G-E, A-H-H-L-G-E, A-V-H-L-G-E, A-M-H-L-G-E, A-Y-Y-L-G-E, A-Y-W-L-G-E, A-Y-H-M-G-E, A-Y-H-F-G-E, A-Y-H-H-G-E, A-Y-H-V-G-E, A-Y-H-I-G-E, A-Y-H-N-G-E, A-Y-H-W-G-E, A-Y-H-L-D-E, A-Y-H-L-E-E, A-Y-H-L-G-D, A-Y-H-L-G-K, A-Y-H-L-G-R, A-Y-H-L-G-H, A-Y-H-L-G-M, A-Y-H-L-G-N и A-W-H-L-G-E;

каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов;

каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов;

каждый из r и s независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤5, 0≤s≤5 и 1≤Max (r, s)≤5, где Max (r, s) представляет собой большее число из двух чисел, представленных r и s в случае, когда r≠s, и представляет собой r или s в случае, когда r=s;

каждый из t и u независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤5, 0≤u≤5 и 1≤Max (t,u)≤5, где Max (t,u) представляет собой большее число из двух чисел, представленных t и u в случае, когда t≠u, и представляет собой t или u в случае, когда t=u;

A представляет собой остаток L-аланина;

Е представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты;

F представляет собой остаток L-фенилаланина;

G представляет собой остаток глицина;

H представляет собой остаток L-гистидина;

I представляет собой остаток L-изолейцина;

K представляет собой остаток L-лизина;

L представляет собой остаток L-лейцина;

М представляет собой остаток L-метионина;

N представляет собой остаток L-аспарагина;

R представляет собой остаток L-аргинина;

S представляет собой остаток L-серина;

Т представляет собой остаток L-треонина;

V представляет собой остаток L-валина;

W представляет собой остаток L-триптофана; и

Y представляет собой остаток L-тирозина.

2. Циклический пептид, представленный формулой (IC)

R^N-X⁶_t-X⁴_r-X^a-X_m-X¹-X²-X³-X^b-X⁵_s-X⁷_u-R^C, (IC)

в формуле (IC)

R^N представляет собой аминогруппу;

R^C представляет собой карбоксигруппу;

X¹ представляет собой остаток L-лейцина, остаток L-изолейцина, остаток L-метионина, остаток L-лизина или остаток L-аргинина;

X² представляет собой остаток L-валина или остаток L-изолейцина;

X³ представляет собой остаток L-триптофана;

X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина или D-гомоцистеина;

X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина;

X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи;

X_m выбран из группы, состоящей из A-Y-H-R-G-E, A-Y-H-L-G-E, A-A-Y-H-L-G-E, A-A-A-Y-H-L-G-E, A-A-A-A-Y-H-L-G-E, S-Y-H-L-G-E, T-Y-H-L-G-E, A-F-H-L-G-E, A-H-H-L-G-E, A-V-H-L-G-E, A-M-H-L-G-E, A-Y-Y-L-G-E, A-Y-W-L-G-E, A-Y-H-M-G-E, A-Y-H-F-G-E, A-Y-H-H-G-E, A-Y-H-V-G-E, A-Y-H-I-G-E, A-Y-H-N-G-E, A-Y-H-W-G-E, A-Y-H-L-D-E, A-Y-H-L-E-E, A-Y-H-L-G-D, A-Y-H-L-G-K, A-Y-H-L-G-R, A-Y-H-L-G-H, A-Y-H-L-G-M, A-Y-H-L-G-N и A-W-H-L-G-E;

каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов;

каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов;

каждый из r и s независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤5, 0≤s≤5 и 1≤Max (r, s)≤5, где Max (r, s) представляет собой большее число из двух чисел, представленных r и s в случае, когда r≠s, и представляет собой r или s в случае, когда r=s;

каждый из t и u независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤5, 0≤u≤5 и 1≤Max (t,u)≤5, где Max (t,u) представляет собой большее число из двух чисел, представленных t и u в случае, когда t≠u, и представляет собой t или u в случае, когда t=u;

A представляет собой остаток L-аланина;

Е представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты;

F представляет собой остаток L-фенилаланина;

G представляет собой остаток глицина;

H представляет собой остаток L-гистидина;

I представляет собой остаток L-изолейцина;

K представляет собой остаток L-лизина;

L представляет собой остаток L-лейцина;

М представляет собой остаток L-метионина;

N представляет собой остаток L-аспарагина;

R представляет собой остаток L-аргинина;

S представляет собой остаток L-серина;

Т представляет собой остаток L-треонина;

V представляет собой остаток L-валина;

W представляет собой остаток L-триптофана; и

Y представляет собой остаток L-тирозина.

3. Циклический пептид, который представлен формулой (I'C)

R^N-X⁶_t-X⁴_rX^a-X_m-X¹-X²-X³-X^b-X⁵_sX⁷_u-R^C, (I'C)

в формуле (I'C)

R^N представляет собой аминогруппу;

R^C представляет собой карбоксигруппу;

X¹ представляет собой остаток L-лейцина, остаток L-изолейцина, остаток L-метионина, остаток L-лизина или остаток L-аргинина;

X² представляет собой остаток L-валина или остаток L-изолейцина;

X³ представляет собой остаток L-триптофана;

X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитина, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина;

X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-гомоцистеина или D-гомоцистеина;

X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи;

X_m выбран из группы, состоящей из A-Y-H-R-G-E, A-Y-H-L-G-E, A-A-Y-H-L-G-E, A-A-A-Y-H-L-G-E, A-A-A-A-Y-H-L-G-E, S-Y-H-L-G-E, T-Y-H-L-G-E, A-F-H-L-G-E, A-H-H-L-G-E, A-V-H-L-G-E, A-M-H-L-G-E, A-Y-Y-L-G-E, A-Y-W-L-G-E, A-Y-H-M-G-E, A-Y-H-F-G-E, A-Y-H-H-G-E, A-Y-H-V-G-E, A-Y-H-I-G-E, A-Y-H-N-G-E, A-Y-H-W-G-E, A-Y-H-L-D-E, A-Y-H-L-E-E, A-Y-H-L-G-D, A-Y-H-L-G-K, A-Y-H-L-G-R, A-Y-H-L-G-H, A-Y-H-L-G-M, A-Y-H-L-G-N и A-W-H-L-G-E;

в случае, когда X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина и D-гомосерина, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи,

в случае, когда X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и

в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов;

в случае, когда X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, или каждый независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи,

в случае, когда X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и

в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов;

каждый из r и s независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤5, 0≤s≤5 и 1≤Max (r, s)≤5, где Max (r, s) представляет собой большее число из двух чисел, представленных r и s в случае, когда r≠s, и представляет собой r или s в случае, когда r=s;

каждый из t и u независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤5, 0≤u≤5 и 1≤Max (t,u)≤5, где Max (t,u) представляет собой большее число из двух чисел, представленных t и u в случае, когда t≠u, и представляет собой t или u в случае, когда t=u;

A представляет собой остаток L-аланина;

Е представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты;

F представляет собой остаток L-фенилаланина;

G представляет собой остаток глицина;

H представляет собой остаток L-гистидина;

I представляет собой остаток L-изолейцина;

K представляет собой остаток L-лизина;

L представляет собой остаток L-лейцина;

М представляет собой остаток L-метионина;

N представляет собой остаток L-аспарагина;

R представляет собой остаток L-аргинина;

S представляет собой остаток L-серина;

Т представляет собой остаток L-треонина;

V представляет собой остаток L-валина;

W представляет собой остаток L-триптофана; и

Y представляет собой остаток L-тирозина.

4. Циклический пептид, который представлен формулой (I'C)

R^N-X⁶_t-X⁴_rX^a-X_m-X¹-X²-X³-X^b-X⁵_sX⁷_u-R^C, (I'C)

в формуле (I'C)

R^N представляет собой аминогруппу;

R^C представляет собой карбоксигруппу;

X¹ представляет собой остаток L-лейцина, остаток L-изолейцина, остаток L-метионина, остаток L-лизина или остаток L-аргинина;

X² представляет собой остаток L-валина или остаток L-изолейцина;

X³ представляет собой остаток L-триптофана;

X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, или аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина;

X^b представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей хлорацетильную группу в боковой цепи, выбранной из группы, состоящей из (2S)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2R)-2-амино-3-[(2-хлорацетил)амино]пропионовой кислоты, (2S)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, (2R)-2-амино-4-[(2-хлорацетил)амино]бутановой кислоты, N-δ-хлорацетил-L-орнитин, N-δ-хлорацетил-D-орнитина, N-ε-хлорацетил-L-лизина и N-ε-хлорацетил-D-лизина;

X^a и X^b связаны друг с другом посредством тиоэфирной связи;

X_m выбран из группы, состоящей из A-Y-H-R-G-E, A-Y-H-L-G-E, A-A-Y-H-L-G-E, A-A-A-Y-H-L-G-E, A-A-A-A-Y-H-L-G-E, S-Y-H-L-G-E, T-Y-H-L-G-E, A-F-H-L-G-E, A-H-H-L-G-E, A-V-H-L-G-E, A-M-H-L-G-E, A-Y-Y-L-G-E, A-Y-W-L-G-E, A-Y-H-M-G-E, A-Y-H-F-G-E, A-Y-H-H-G-E, A-Y-H-V-G-E, A-Y-H-I-G-E, A-Y-H-N-G-E, A-Y-H-W-G-E, A-Y-H-L-D-E, A-Y-H-L-E-E, A-Y-H-L-G-D, A-Y-H-L-G-K, A-Y-H-L-G-R, A-Y-H-L-G-H, A-Y-H-L-G-M, A-Y-H-L-G-N и A-W-H-L-G-E;

в случае, когда X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина и D-гомосерина, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи,

в случае, когда X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, каждый из X⁴ и X⁵ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей карбоксигруппу в боковой цепи, или аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, содержащей гидроксигруппу в боковой цепи, и

в случае, когда присутствует множество X⁴ или X⁵, множество X⁴ или X⁵ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов;

в случае, когда X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-цистеина или D-цистеина, каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина, D-серина, L-гомосерина, D-гомосерина, L-аргинина и D-аргинина, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, или каждый независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи,

в случае, когда X^a представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из L-пеницилламина или D-пеницилламина, каждый из X⁶ и X⁷ независимо представляет собой аминокислотный остаток, получаемый из аминокислоты, отличной от L-серина и D-серина, содержащей иммобилизирующую функциональную группу в боковой цепи, и

в случае, когда присутствует множество X⁶ или X⁷, множество X⁶ или X⁷ может состоять из одинаковых или отличающихся друг от друга элементов;

каждый из r и s независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤r≤5, 0≤s≤5 и 1≤Max (r, s)≤5, где Max (r, s) представляет собой большее число из двух чисел, представленных r и s в случае, когда r≠s, и представляет собой r или s в случае, когда r=s;

каждый из t и u независимо представляет собой целое число, удовлетворяющее 0≤t≤5, 0≤u≤5 и 1≤Max (t,u)≤5, где Max (t,u) представляет собой большее число из двух чисел, представленных t и u в случае, когда t≠u, и представляет собой t или u в случае, когда t=u;

A представляет собой остаток L-аланина;

Е представляет собой остаток L-глутаминовой кислоты;

F представляет собой остаток L-фенилаланина;

G представляет собой остаток глицина;

H представляет собой остаток L-гистидина;

I представляет собой остаток L-изолейцина;

K представляет собой остаток L-лизина;

L представляет собой остаток L-лейцина;

М представляет собой остаток L-метионина;

N представляет собой остаток L-аспарагина;

R представляет собой остаток L-аргинина;

S представляет собой остаток L-серина;

Т представляет собой остаток L-треонина;

V представляет собой остаток L-валина;

W представляет собой остаток L-триптофана; и

Y представляет собой остаток L-тирозина.

5. Циклический пептид по любому из пп. 1-4, который представляет собой связывающий антитело лиганд.

6. Циклический пептид по любому из пп. 1-4, который представляет собой линкер для мечения антител.

7. Циклический пептид по любому из пп. 1-4, который представляет собой линкер для конъюгатов антител c лекарственными средствами.

8. Циклический пептид по любому из пп. 1-4, который представляет собой носитель для лекарственного средства.

9. Подложка для аффинной хроматографии, содержащая

нерастворимую в воде подложку и

циклический пептид по любому из пп. 1-4,

где нерастворимая в воде подложка и циклический пептид являются непосредственно или опосредованно связанными друг с другом.

название	год	авторы	номер документа
ПЕПТИДЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С РЕЦЕПТОРОМ КАЛЬЦИТОНИНА	1998	Дин Ричард Т. Буш Лэрри Р. Пирсон Дэниел А. Листер-Джеймс Джон	RU2205187C2
КОНЪЮГАТЫ СКОНСТРУИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ С ЦИСТЕИНОВЫМИ ЗАМЕНАМИ	2016	Йодер Николас С. Баи Чэнь Миллер Майкл Луис	RU2733740C2
КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ, ОТНОСЯЩИЕСЯ К КОНЪЮГАТАМ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ С АНТИТЕЛАМИ ПРОТИВ CD19	2019	Сонг, Хо Йоунг Парк, Юн Хи Ким, Сунг Мин Ким, Хиоунг Рэй Ох, Дзи Хе Рю, Хюн Мин Чае, Дзейвоок Ох, Йеонг Соо Ким, Йонг Зу Дихан, Морин Фишер, Николас	RU2806333C2
КОНЪЮГАТ АНТИ-TROP2 АНТИТЕЛО-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО	2014	Агацума Тосинори Такахаси Су Хасегава Дзун Окадзима Даисуке Хамада Хирофуми Ямагути Мики	RU2705367C2
ПЕПТИДЫ	2007	Нью Роджер	RU2496789C2
Новые способы дисплея циклических пептидов на частицах бактериофага	2015	Урбан Иоганнес Герберт Мосмайер Маркус Андреас Босма Тьиббе Прасслер Йозеф	RU2702087C2
ПЕПТИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ	2005	Катбертсон Алан Нэарн Роберт Джеймс	RU2393167C2
АНТИТЕЛА И ИММУНОКОНЪЮГАТЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ	2007	Эбенс Аллен Дж. Мл. Грэй Алан М. Лян Вэй-Чин У Янь Юй Шан-Фань	RU2436796C9
ГУМАНИЗАЦИЯ АНТИТЕЛ КРОЛИКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ УНИВЕРСАЛЬНОГО КАРКАСА АНТИТЕЛА	2009	Боррас Леонардо Урех Дэвид	RU2567006C2
ГУМАНИЗАЦИЯ АНТИТЕЛ КРОЛИКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ УНИВЕРСАЛЬНОГО КАРКАСА АНТИТЕЛА	2014	Боррас Леонардо Урех Дэвид	RU2652907C2

ОСЕВОЙ МНОГОСТУПЕНЧАТЫЙ КОМПРЕССОР	1999	Журавлев Ю.И.	RU2180054C2
US 20040087765 A1, 06.05.2004.

Описание патента на изобретение RU2694050C1

Похожие патенты RU2694050C1

Формула изобретения RU 2 694 050 C1

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2019 года RU2694050C1

RU 2 694 050 C1