Вакцина ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота Российский патент 2019 года по МПК A61K39/108 A61K39/09 A61K39/104 A61K47/26 A61K47/08 A61K47/04 A61P31/04 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности, к вакцинам и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известна аналоговая вакцина, ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота (патент на изобретение РФ № Патент №2406533 РФ, МПК А61К 39/116, А61К 39/112, А61К 39/108, А61К 39/12 от 04.06.2009 г.). данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у крупного рогатого скота, вызываемых микробами рода Streptococcus pneumoniae и Staphylococcus aureus. Данная вакцина содержит в качестве антигенов смесь инактивированных формалином вирулентных штаммов рода Streptococcus pneumoniae и Staphylococcus aureus в соотношении 1:1 и адъювант гидрат окиси алюминия. Указанная вакцина используется для профилактики стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота.

Известна вакцина, ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота (патент на изобретение РФ № Патент №2553556 РФ, МПК А61К 39/116, А61К 39/112, А61К 39/108, А61К 39/12 от 30.12.2013 г.). Прототип вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у крупного рогатого скота, вызываемых микробами рода Streptococcus pneumoniae и Staphylococcus aureus. Данная вакцина содержит в качестве антигенов смесь инактивированных формалином вирулентных штаммов Е. coli, Streptococcus pneumoniae и Staphylococcus aureus в соотношении 1:1 и адъювант гидрат окиси алюминия. Указанная вакцина используется только для профилактики эшерихиоза, стрептококкоза крупного рогатого скота.

Технология изготовления указанной вакцины сложная. Данная вакцина применяется для профилактики сальмонеллеза телят. Использование масло ланолиновой смеси в вакцине вызывает у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.).

Техническим результатом изобретения является повышение специфичности, безвредности, эффективности вакцины для профилактики эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота, путем введения новых чистых культур возбудителей, исключив отрицательное и побочное влияние.

Технический результат достигается тем, что в вакцине ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота, содержащей антигены в виде суспензии клеток чистых культур возбудителя эшерихиоза E.coli, стрептококкоза взятых в равных соотношениях, полученных путем отбора патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотологмческого очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ и инактивированных формалином, глюкозу и адъювант - гидроокись алюминия, отличающаяся тем, что имеет дополнительно антиген в виде суспензии клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделяемого из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотологичсекого очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ и для суспензии клеток чистых культур возбудителя стрептококкоза используют вид бактерий Streptococcus galloliticus при следующем соотношении компонентов, мас. %

суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза E.coli - 24,0-29,0; суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus galloliticus - 24,0-29,0; суспензия клеток чистой культуры возбудителя Pseudomonas aeruginosa - 24,0-29,0; глюкоза - 1,0-2,0; формалин - 1,5-2,0; гидроокись алюминия остальное.

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей эшерихиоза Escherichia coli, стрептококкоза Streptococcus galloliticus и псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно на мясо-пептонном бульоне, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.

При раздельном культивировании клеток чистых культур возбудителей и добавление в питательную среду глюкозы до 0,2%-ной концентрации позволяет получать концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд. в 1 мл в течение 14-24 часов инкубирования. Инактивирование культур возбудителей формалином в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных антигенов эшерихкй, стрептококков и псевдомонад в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание позволяет получить вакцину, которая не вызывает у привитых животных поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета у привитых животных (через 12-15 суток после внутримышечно или подкожно двукратного введения с интервалом 7-14 дней в дозе коровам по 5,0 см³, телятам в возрасте 1,0-1.5 месяца - в дозе 1,5-2,0 см³). Использование клеток чистых культур возбудителей Escherichiacoli, стрептококкоза Streptococcus galloliticus и псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших животных, позволяет значительно повысить специфичность вакцины, обеспечивает защиту животных сразу от трех опасных инфекционных болезней эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения).

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Методы выделения клеток чистой культуры возбудителя эшерихтоза и характеристика описаны в «Методических указаниях по бактериологической диагностике эшерихиоза животных», утвержденных 27.07.2000 г. №13-7-2/2117, Департаментом ветеринарии МСХ РФ, описана характеристика эшерихий в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва. - Колос, 1995, стр. 196-201, а также в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр. 219-222.

Методы выделения и характеристика стрептококков и псевдомонад описаны в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва. - Колос, 1995, стр. 90-95; в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр. 165 - 171; в справочнике «Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных» авторы: Скородумов Д.И., Субботин В.В., Сидоров М.А., Костенко Т.С., М.: «ИзограФъ», 2005, на стр. 246-257; в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г., Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам.

Предложенная вакцина, ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

Вакцина ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота содержит инактивированные формалином чистые культуры возбудителей Е. coli, Str. galloliticus и Pseudomonas aeruginosa, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний крупного рогатого скота против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза. Она вызывает образование специфического иммунитета против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота. Вакцина безвредна и ареактогенна. Вакцину применяют в неблагополучных и угрожаемых по эшерихиозу, стрептококкозу и псевдомонозу крупного рогатого скота хозяйствах. Продукты убоя вакцинированного крупного рогатого скота используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.

Примеры конкретного изготовления вакцины, содержащей заявляемые компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.

Пример 1.

Берут патологический материал от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, из которого приготавливают суспензию, и далее делают посев на дифференциально-диагностические среды, после чего выделяют клетки чистых культур возбудителей эшерихиоза Escherichia coli, стрептококкоза Streptococcus galloliticus и псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и отдельно выращивают в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³, после этого раздельно инактивируют клетки чистых культур возбудителей болезней внесением формалина до 0,4-%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72 часов и периодическом перемешивании, потом смешивают клетки чистых культур в равных соотношениях, затем в смесь инактивированных культур вносят адъювант - гидроокись алюминия, тщательно смешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, мас. %:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е. coli, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 22,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus galloliticus, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 22,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 22,0 глюкоза 0,5 формалин 1,0 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота обладает слабой иммуногенной активностью.

Пример №2.

Берут патологический материал от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, из которого приготавливают суспензию, и далее делают посев на дифференциально-диагностические среды, после чего выделяют клетки чистых культур возбудителей эшерихиоза Escherichia coli, стрептококкоза Streptococcus galloliticus и псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и отдельно выращивают в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³, после этого раздельно инактивируют клетки чистых культур возбудителей болезней внесением формалина до 0,4-%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72 часов и периодическом перемешивании, потом смешивают клетки чистых культур в равных соотношениях, затем в смесь инактивированных культур вносят адъювант - гидроокись алюминия, тщательно смешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, мас. %:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е. coli, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 24,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus galloliticus, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 24,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 24,0 глюкоза 1,0 формалин 1,5 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота обладает достаточной иммуногенной активностью.

Пример 3.

Берут патологический материал от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, из которого приготавливают суспензию, и далее делают посев на дифференциально-диагностические среды, после чего выделяют клетки чистых культур возбудителей эшерихиоза Escherichia coli, стрептококкоза Streptococcus galloliticus и псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и отдельно выращивают в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³, после этого раздельно инактивируют клетки чистых культур возбудителей болезней внесением формалина до 0,4-%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72 часов и периодическом перемешивании, потом смешивают клетки чистых культур в равных соотношениях, затем в смесь инактивированных культур вносят адъювант - гидроокись алюминия, тщательно смешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, мас. %:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е. coli, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 28,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus galloliticus, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 28,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 28,0 глюкоза 1,7 формалин 1,3 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота обладает незначительной иммуногенной эффективностью.

Пример 4.

Берут патологический материал от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, из которого приготавливают суспензию, и далее делают посев на дифференциально-диагностические среды, после чего выделяют клетки чистых культур возбудителей эшерихиоза Escherichia coli, стрептококкоза Streptococcus galloliticus и псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и отдельно выращивают в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³, после этого раздельно инактивируют клетки чистых культур возбудителей болезней внесением формалина до 0,4-%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72 часов и периодическом перемешивании, потом смешивают клетки чистых культур в равных соотношениях, затем в смесь инактивированных культур вносят адъювант - гидроокись алюминия, тщательно смешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, мас. %:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е. coli, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 29,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus galloliticus, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 29,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 29,0 глюкоза 1,0 формалин 1,5 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота обладает высокой иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица 1).

Пример 5.

Берут патологический материал от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, из которого приготавливают суспензию, и далее делают посев на дифференциально-диагностические среды, после чего выделяют клетки чистых культур возбудителей эшерихиоза Escherichia coli, стрептококкоза Streptococcus galloliticus и псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и отдельно выращивают в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³, после этого раздельно инактивируют клетки чистых культур возбудителей болезней внесением формалина до 0,4-%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72 часов и периодическом перемешивании, потом смешивают клетки чистых культур в равных соотношениях, затем в смесь инактивированных культур вносят адъювант - гидроокись алюминия, тщательно смешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, мас. %:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза Е. coli, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 30,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus galloliticus, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 30,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 30,0 глюкоза 2,0 формалин 1,5 гидроокись алюминия остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина, ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота обладает иммуногенной активностью, у отдельных животных на месте введение препарата вызывает слабое раздражение.

Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина, ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота, имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам ассоциированным против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота. Вакцина содержит при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза E.coli - 24,0-29,0; суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus galloliticus - 24,0-29,0; суспензия клеток чистой культуры возбудителя Pseudomonas aeruginosa - 24,0-29,0; глюкоза - 1,0-2,0; формалин - 1,5-2,0; гидроокись алюминия - остальное. Изобретение обеспечивает повышение специфичности, безвредности, эффективности вакцины для профилактики эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота путем введения новых чистых культур возбудителей, исключив отрицательное и побочное влияние. 1 табл., 5 пр.

Вакцина ассоциированная против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота, содержащая антигены в виде суспензии клеток чистых культур возбудителя эшерихиоза E.coli, стрептококкоза, взятых в равных соотношениях, полученных путем отбора патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотологического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ и инактивированных формалином, глюкозу и адъювант - гидроокись алюминия, отличающаяся тем, что имеет дополнительно антиген в виде суспензии клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделяемого из патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотологического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ и для суспензии клеток чистых культур возбудителя стрептококкоза используют вид бактерий Streptococcus galloliticus при следующем соотношении компонентов, мас. %

суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза E.coli 24,0-29,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus galloliticus 24,0-29,0 суспензия клеток чистой культуры возбудителя Pseudomonas aeruginosa 24,0-29,0 глюкоза 1,0-2,0 формалин 1,5-2,0 гидроокись алюминия остальное