СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА НУТРИЙ Российский патент 2010 года по МПК A61K39/104 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известен способ получения вакцины против колибактериоза поросят (патент РФ на изобретение №2022563, 26.05.88, МКИ A61K 39/125, 39/135). Данный способ предполагает раздельное выращивание штаммов Е. coli ВГНКИ №№305-37/10, 355-37/12, 357-37/12, 331-37/12, 359-37/12, 360-37/12, 299-37/10, 330-37/11 в бульоне Хоттингера, смешивают культуры в равных соотношениях, инактивируют формалином и тиомерсалом с последующим адсорбированием на гидроксиде алюминия. Применяют для профилактики колибактериоза поросят.

Известен способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза нутрий (патент РФ на изобретение №2099081 от 30.09.94, МКИ A61K 39/125, 39/135). Данный способ включает выращивание штамма Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ №К-ДЕП в жидкой питательной среде с добавлением глюкозы до достижения концентрации 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³, затем подвергают замораживанию-оттаиванию, отделяют жидкую фракцию, добавляют к ней 0,3-0,4%-ный раствор формалина, выдерживают в течение 44-50 ч и вносят 3%-ный раствор гидроокиси алюминия в количестве 10% к объему культуры. Технология получения вакцины сложная, применяется для профилактики стрептококкоза нутрий.

Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение эффективности способа изготовления вакцины против псевдомоноза, путем введения новой культуры возбудителя, новых компонентов и исключения отрицательного и побочного влияния.

Поставленная задача достигается тем, что в способе изготовления вакцины против псевдомоноза нутрий, включающем получение антигена, инактивацию, внесение адъюванта, проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя, выращивают культуру Pseudomonas aeruginosa в мясо-пептонном бульоне с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³, инактивируют путем внесения формалина до 0,4-0,5%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 48-72 часов, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают.

Новизна заявляемого предложения обусловлена тем, что в отличие от известных способов проводят отбор органов от павших нутрий в период заболевания и гибели животных от псевдомоноза, приготавливают суспензию из патологического материала, выделяют чистую культуру посевом на дифференциально-диагностические среды, это позволяет выделить чистую культуру возбудителя. Использование при выращивании чистой культуры Pseudomonas aeruginosa мясо-пептонной питательной среды позволяет получать концентрацию микробных клеток не менее 5-6 млрд. в 1 см³. Инактивация культуры путем внесения формалина до 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 48-72 часов надежно подавляет патогенность возбудителя, сохраняя иммуногенность. Способ обеспечивает получение безвредной, высокоиммуногенной, специфичной вакцины для защиты нутрии против псевдомоноза.

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: инструкция по изготовлению и контролю формолвакцины поливалентной гидроокисьалюминиевой против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят и ягнят, утвержденная ГУВ МСХ СССР 26.04.1984 г.; инструкция по изготовлению и контролю вакцины против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека овец и дизентерии ягнят, поливалентная концентрированная гидроокисьалюминиевая, утвержденная Главным управлением ветеринарии с государственной ветеринарной инспекцией 10.10.1991 г.

Предложенная вакцина против псевдомоноза нутрий проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

Методы выделения и характеристика микроорганизмов рода Pseudomonas описаны в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр.259-261; в справочнике «Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных» авторы: Скородумов Д.И., Субботин В.В., Сидоров М.А., Костенко Т.С., М.: «ИзограФъ», 2005, на стр.522-525.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя, выращивают культуру Pseudomonas aeruginosa в мясо-пептонном бульоне до концентрации с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³, инактивируют путем внесения формалина до 0,4-0,5%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 48-72 часов, вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают.

Пример конкретного осуществления способа изготовления вакцины.

При изготовлении вакцины против псевдомоноза нутрий проводят отбор пораженных органов от павших нутрий в период эпизоотии псевдомоноза, приготавливают суспензию из патологического материала и проводят бактериологические исследования. Для определения морфологии и тинкториальных свойств возбудителя псевдомоноза готовят мазки-отпечатки из пораженных органов павших нутрий, окрашивают их по методу Грама. При микроскопии препаратов под иммерсионной системой микроскопа видны прямые или изогнутые палочки размером 1,5-3,0 мкм, располагающиеся одиночно, парами, в виде цепочек, окрашенные в розовый цвет, характерные для Pseudomonas aeruginosa.

Для определения культуральных свойств возбудителя псевдомоноза делают посевы выделенной культуры из патматериала в мясо-пептонный бульон, в чашки Петри с мясо-пептонным агаром (МПА), кровяной МПА и селективную среду, на которой другие псевдомонады не растут.

Через 12-14 часов инкубирования в термостате при температуре 37°С наблюдают поверхностную серебристо-белую пленку в МПБ, характерный признак и помутнение среды. В чашках Петри с кровяным МПА наблюдают рост сероватых, полупрозрачных колоний, окруженных зеленоватой зоной гемолиза, что характерно для Pseudomonas aeruginosa.

Выращивание чистой культуры возбудителя Pseudomonas aeruginosa проводят в мясо-пептонной питательной среде. Для заражения берут 1-2 см³ свежей культуры и засевают 80-100 мл жидкой питательной среды, и выращивают при 37°С в течение 12-14 часов. Концентрацию микробных клеток в бактериальной массе определяют по стандарту мутности и разводят стерильной дистиллированной водой до концентрации 5-6 млрд. в 1 см³. Инактивацию полученного баксырья проводят внесением формалина 0,4-0,5%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 48-72 часов при периодическом перемешивании, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему и тщательно перемешивают, фасуют и укупоривают.

Таким образом, использование для изготовления вакцины против псевдомоноза нутрий чистой культуры Pseudomonas aeruginosa, выделенной из пораженных органов нутрий из местного эпизоотического очага, позволяет получать специфичную, высокоиммуногенную вакцину для защиты нутрий от псевдомоноза. Выращивание чистой культуры возбудителя в мясо-пептонной питательной среде позволяет получать концентрацию бактериальных клеток не менее 5-6 млрд. в 1 см³ в течение 12-14 часов культивирования. Использование формалина для инактивации в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации позволяет в течение 48-72 часов при температуре 37°С подавить патогенность и сохранить высокую иммуногенность в течение 12 месяцев хранения. Адсорбирование антигена на гидроокиси алюминия позволяет через 12-15 суток после введения нутриям обеспечить у привитых формирование напряженного иммунитета продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). После однократного введения нутриям внутримышечно не вызывает поствакцинальных осложнений. Результаты по сравнительной характеристике вакцин представлены в таблице 1.

Предложенный способ прост в исполнении, доступен и является промышленно применимым.

Таблица 1 Сравнительная характеристика изготовления вакцины по предлагаемому способу и прототипу № п/п Отличительные признаки Прототип Предлагаемый способ 1. Возбудители штамм Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ №К-ДЕП культура возбудителя Pseudomonas aeruginosa, выделенная из пораженных органов от павших нутрий из местного
эпизоотического очага при псевдомонозе 2. подвергают замораживанию-оттаиванию, отделяют жидкую фракцию обязательно проводится не проводится 3. Инактивация бактериальной массы 0,3-0,4%-ный раствор формалина, выдерживают в течение 44-50 ч 0,4-0,5%-ной концентрации формалина в течение 48-72 часов при температуре 37°С 4. Адъювант 3%-ный раствор гидроокиси алюминия в количестве 10% к объему раствор гидроокиси алюминия 20% к объему 5. Поствакцинальные осложнения у нутрий после введения вакцины хромота, воспалительные процессы нет 6. Длительность иммунитета 6 мес 9 мес

Таким образом, предлагаемый способ изготовления вакцины против псевдомоноза нутрий имеет ряд преимуществ по сравнению с прототипом.

Изобретение относится к ветеринарной медицине. Проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию. Делают посев на дифференциально-диагностические среды. Выделяют чистую культуру возбудителя. Выращивают культуру Pseudomonas aeruginosa в мясо-пептонном бульоне с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³, инактивируют путем внесения формалина до 0,4-0,5%-ной конечной концентрации. Выдерживают при температуре 37°С в течение 48-72 часов. Затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают. Способ прост в исполнении, позволяет получить высокоиммуногенную безвредную вакцину. 1 табл.

Способ изготовления вакцины против псевдомоноза нутрий, включающий получение антигена, инактивацию, внесение адъюванта, отличающийся тем, что проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя, выращивают культуру Pseudomonas aeruginosa в мясо-пептонном бульоне с титром 5-6 млрд микробных клеток в 1 см³, инактивируют путем внесения формалина до 0,4-0,5%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 48-72 ч, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают.