Композиция для инъекций гиалуроновой кислоты, содержащей производное гиалуроновой кислоты и ДНК фракцию, и ее применение Российский патент 2019 года по МПК A61K8/04 A61K8/73 A61K8/98 A61K9/00 A61K9/06 A61K31/711 A61K31/728 

Область изобертения

Настоящее изобретение относится к вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты, содержащей сшитое вязкоэластичное производное гиалуроновой кислоты и ДНК фракцию, для применения в косметических и терапевтических целях. Более конкретно, настоящее изобретение относится к вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты, содержащей производное гиалуроновой кислоты со специфическим интервалом степени сшивания и ДНК фракцию.

Уровень техники

Гели на основе гиалуроновой кислоты для инъекции много лет использовались в косметических целях, для наполнения или замены биологических тканей (например, наполнение морщин, ремоделирование контура лица, увеличение объема губ и т.д.), а также для обработки по регидратации кожи методом мезотерапии.

В этой связи, было предпринято много усилий для улучшения физико-химической стабильности гелей на основе гиалуроновой кислоты для увеличения in vivo срока действия геля (то есть времени пребывания геля в месте инъекции) и тем самым увеличения продолжительности терапевтической эффективности.

В целом, ДНК фракции состоят из биополимеров, таких как фосфаты, четырех (4) типов оснований и дезоксирибоз. Композиция, содержащая указанные компоненты, является важным компонентом клеток и используется в различных целях, как, например, в медицине для лечения и улучшения поверхности ран путем инъекции указанных фракций в область ран или т.п., и в косметологии для улучшения ситуации с морщинами, обусловленными клеточной активностью.

Инъекция ДНК относится к инъекциям, содержащим биоматериалы, такие как полинуклеотид (ПН) или полидезоксирибонуклеотид (ПДРН). ДНК фракции улучшают функцию кожи посредством стимуляции образования внеклеточного матрикса (ВКМ), который является внутриклеточным компонентом, путем активации заживляющей способности кожи человеческого организма, тем самым восстанавливая возрастную и атрофированную регенерируемость кожи.

Хотя были разработаны различные наполнители, известно, что до сих пор не создано комбинированного наполнителя функционализированной гиалуроновой кислоты с ДНК, обладающего эффектом регенреации кожи.

Кроме того, в обычных наполнителях с гиалуроновой кислотой производные гиалуроновой кислоты смешивают с несшитой гиалуроновой кислотой для получения хорошего ощущения во время операции. Однако существует недостаток, связанный с тем, что несшитая гиалуроновая кислота легко разрушается под действием ферментативной реакции.

При данных обстоятельствах, авторы настоящего изобретения предприняли интенсивные усилия по разработке комбинированного наполнителя функционализированной гиалуроновой кислоты с ДНК. В результате, авторы настоящего изобретения получили вводимую в виде инъекций композицию гиалуроновой кислоты, обладающую не только улучшенными физическими свойствами (вязкоэластичностью и силой выдавливания), но еще и устойчивостью к гиалуронидазе при смешивании ДНК фракций в определнном соотношении со сшитой композицией гиалуроновой кислоты с помощью специфического способа получения.

Описание

Технические проблемы

Соответственно, для решения обычных технических проблем целью настоящего изобретения является обеспечение вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты, имеющей прекрасную вязкоэластичность и силу выдавливания при смешивании ДНК фракций со сшитой гиалуроновой кислотой и обладющей ферментативной устойчивостью, а также способ ее получения.

Технические результаты изобертения

Согласно вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты и способу ее получения в настоящем изобретении, предложена вводимая в виде инъекций композиция гиалуроновой кислоты с прекрасными свойствами эластичности и силой выдавливания и обладающая устойчивостью к действию фермента, причем она может использоваться в кометических и медицинских целях.

Краткое описание чертежей

На Фиг. 1a-1i приведены результаты модуля накопления упругой деформации (G'), модуля потери упругой деформации (G''), Tan (delta), комплексной вязкости (G) из Примеров 1-5 и сравнительных Примеров 1-4 для каждой частоты, при использовании вискозиметра. На каждом чертеже показано, соответственно, следующее: на Фиг. 1а: Сравнительный пример 1, на Фиг. 1b: Сравнительный пример 2, на Фиг. 1с: Сравнительный пример 3, на Фиг. 1d: Сравнительный пример 4, на Фиг. 1е: Пример 1, на Фиг. 1f: Пример 2, на Фиг. 1g: Пример 3, на Фиг. 1h: Пример 4, на Фиг. 1i: Пример 5.

На Фиг. 2а и 2b представлены диаграммы, на которых представлены результаты испытаний на вытеснение под нагрузкой для подтверждения силы выдавливания в предварительно наполненном шприце с основной композицией гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению.

На Фиг. 3 приведен результат электрофореза ПДРН фракции в вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению.

На Фиг. 4а-4d представлены диаграммы результатов анализа размера частиц сшитой гиалуроновой кислоты при смешивании с ДНК фракциями.

На Фиг. 5 показаны изменения вязкости гиалуроновой кислоты во времени из-за разрушения гиалуроновой кислоты под действием гиалуронидазы.

На Фиг. 6а-6i представлены диаграммы сравнения реологических свойств из Примеров и Сравнительных примеров при использовании вискозиметра. На каждом из чертежей представлены, соответственно, следующие результаты; на Фиг. 6а: Пример 7, на Фиг. 6b: Пример 8, на Фиг. 6с: Пример 9, на Фиг. 6d: Пример 10, на Фиг. 6е: Пример 11, на Фиг. 6f: Пример 12, на Фиг. 6g: Пример 13, на Фиг. 6h: Пример 14, на Фиг. 6i: Пример 15.

Наилучшее воплощение настоящего изобертения

В одном воплощении настоящего изобретения для достижения поставленных целей, настоящее изобретение относится к вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты, содержащей производные гиалуроновой кислоты, имеющие степень сшивания от 0,1 до 200%, и содержащей ДНК фракции от 0,1 до 50% (масс.) от общей массы композиции.

Термин "гиалуроновая кислота", используемый в данной заявке, обозначает биополимерный материал, в котором повторяющиеся звенья, содержащие N-ацетил-D-глюкозамин и D-глюкуроновой кислоту, соединены линейно. В настоящем изобретении, термин гиалуроновая кислота используют в отношении собственно гиалуроновой кислоты, ее соли или их сочетаний. Примеры соли гиалуроновой кислоты включают, но неограничиваются указанными, неорганические соли, такие как гиалуронат натрия, гиалуронат калия, гиалуронат кальция, гиалуронат магния, гиалуронат цинка и гиалуронат кобальта, и органические соли, такие как гиалуронат тетрабутиламмония. В настоящем изобретении, гиалуроновую кислоту как таковую или ее соль можно использовать по отдельности или можно использовать сочетание двух или более веществ из гиалуроновых кислот или их солей. В настоящем изобретении молекулярная масса гиалуроновой кислоты может составлять от 100000 до 5000000 Да.

Кроме того, производные сшитой гиалуроновой кислоты можно получить путем сшивания гиалуроновой кислоты как таковой или ее соли при использовании сшивающего агента. Для сшивания можно использовать способ применения сшивающего агента в водном щелочном растворе. Водный щелочной раствор включает, не ограничиваясь указанным, водный раствор NaOH, KOH, предпочтительно NAOH. Водный раствор NaOH можно использовать при концентрации от 0,25 до 5 н. Производные сшитой гиалуроновой кислоты могут представлять собой вязкоэластичную сшитую гиалуроновую кислоту, имеющую Tan δ от 0,01 до 2,0 при частоте от 0,02 до 1 Гц и комплексную вязкость 10 Па⋅с (1 Гц) при 25°С.

Сшивающий агент может представлять собой соединение, содержащее две или более эпокси функциональные группы. Их предпочтительные примеры включают 1,4-бутандиолдиглицидиловый эфир (BDDE), этиленгликольдиглицидиловый эфир (EGDGE), 1,6-гександиолдиглицидиловый эфир, пропиленгликольдиглицидиловый эфир, полипропиленгликольдиглицидиловый эфир, политетраметиленгликольдиглицидиловый эфир, неопентилгликольдиглицидиловый эфир, полиглицеринполиглицидиловый эфир, диглициринполиглицидиловый эфир, глицеринполиглицидиловый эфир, три-метилпропанполиглицидиловый эфир, 1,2-(бис(2,3-эпоксипропокси)этилен, пентаэритритолполиглицидиловый эфир и сорбитолполиглицидиловый эфир. 1,4-Бутандиолглицидиловый эфир является особенно предпочтительным.

Термин "степень сшивания", используемый в данной заявке, обозначает % (масс.) сшивающего агента относительно мономерных звеньев гиалуроновой кислоты в сшитой части композиции на основе гиалуроновой кислоты. Степень сшивания определяют как массовое отношение сшивающего агента к массовому отношению мономера гиалуроновой кислоты. В настоящем изобретении, степень сшивания гиалуроновой кислоты предпочтительно находится в диапазоне от 0,1 до 200%, и более предпочтительно в диапазоне от 1 до 50% при сшивании с помощью сшивающего агента.

Кроме того, композиция для инъекций по настоящему изобретению включает производные гиалуроновой кислоты с определенной степенью сшивания и ДНК фракции. В настоящем изобретении ДНК фракции можно, например, выбрать из, не ограничиваясь указанным, полинуклеотида (ПН) или полидезоксирибонуклеотида (ПДРН). В предпочтительном воплощении концентрация ДНК фракций составляет от 0,01 до 20 мг/мл относительно общего объема композиции и предпочтительно содержится в композиции для инъекций в пропорции от 0,1 до 50% (масс.) относительно общей массы композиции, более предпочтительно от 5 до 30% (масс). Кроме того, соотношение смешивания производных сшитой гиалуроновой кислоты и ДНК фракций в настоящем изобретении предпочтительно составляет следующие массовые соотношения: производные сшитой гиалуроновой кислоты : ДНК фракции=от 5,0 до 9,99 : от 0,01 до 5,0, более предпочтительно от 7,0 до 9,5 : от 0,5 до 3,0.

Кроме того, в другом воплощении настоящее изобретение относится к способу производства вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты. Способ производства вводимой в виде инъекций композиции включает следующие стадии:

a) получение производных гиалуроновой кислоты путем сшивания гиалуроновой кислоты или ее соли до степени сшивания от 0,1 до 200% в водном щелочном растворе при использовании сшивающих агентов; и

b) вмешивание ДНК фракций в производные гиалуроновой кислоты, имеющие степень сшивания от 0,1 до 200%, которые получают на стадии а).

Получение производных гиалуроновой кислоты на стадии а) предпочтительно проводят путем добавления гиалуроновой кислоты или ее соли в количестве от 1 до 25% (масс.) в пересчете на водный раствор NaOH до водного ратсвора с концентрацией от 0,25 до 5 н, и путем гомогенного смешивания сшивающих агентов, имеющих степень сшивания от 0,1 до 200%, предпочтительно от 1 до 50%, в пересчете на повторяющееся звено гиалуроновой кислоты или ее соли, с гиалуроновой кислотой и ее солью. В одном воплощении реакцию сшивания с гиалуроновой кислотой и сшивающим агентом на этой стадии можно проводить при температуре от 10 до 60°С, более предпочтительно от 20 до 50°С, наиболее предпочтительно от 25 до 40°С.

В одном предпочтительном воплощении, производные сшитой гиалуроновой кислоты можно дополнительно подвергнуть процессу дробления, промывки и набухания с промывным раствором и затем распылению с помощью пульверизатора. Промывной раствор можно выбрать соответствующим образом, но физиологический раствор является предпочтительным.

Основный водный раствор может представлять собой, не ограничиваясь указанным, КОН или NaOH, предпочтительно NaOH и наиболее предпочтительно представляет собой водный раствор NaOH с концентрацией от 0,1 до 5 н, в частности от 0,25 до 2,5 н. Кроме того, сшивающий агент может представлять собой, не ограничиваясь указанным, 1,4-бутандиолдиглицидиловый эфир (BDDE), этиленгликольдиглицидиловый эфир (EGDGE), 1,6-гександиолдиглицидиловый эфир, пропиленгликольдиглицидиловый эфир и полипропиленгликольдиглицидиловый эфир.

Кроме того, вводимую в виде инъекций композицию гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению получают на стадии b) путем смешивания производных гиалуроновой кислоты, полученных на стадии а), с ДНК фракциями. ДНК фракции на этой стадии являются такими же, как ДНК фракции во вводимой в виде инъекций композиции. Процесс смешивания может предпочтительно проводиться путем смешивания фракции, имеющей концентрацию от 0,01 до 20 мг/мл, с ДНК фракциями, полученными со стадии а). Предпочтительно, производные сшитой гиалуроновой кислоты, полученные на стадии а), и ДНК фракции можно смешивать в следующем массовом соотношении: производные сшитой гиалуроновой кислоты : ДНК фракции=от 5,0 до 9,99 : от 0,01 до 5,0, предпочтительно от 7,0 до 9,5 : от 0,5 до 3,0.

В дополнительном воплощении в способе производства можно после стадии Ь) включить стадию упаковки продукта в необходимый контейнер (например, контейнер для предварительно наполненного шприца) для получения конечного продукта и стадию стерилизации упакованного продукта после упаковки.

Вводимая в виде инъекций композиция гиалуроновой кислоты, полученная способом производства по настоящему изобретению, проявляет прекрасные эластичные свойства и силу выдавливания, а также обладает устойчивостью к действию ферментов (в частности, устойчивостью к гиалуронидазе). В одном из специфических воплощений, композиция гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению обладает прекрасными свойствами эластичности, где имеет значительно меньшую величину Tan(delta) в диапазоне частот 1 Гц по сравнению с другими производными гиалуроновой кислоты и коммерчески доступными инъекционными препаратами гиалуроновой кислоты, вследствие содержания производных гиалуроновой кислоты, имеющих определенную степень сшивания, и ДНК фракций (Пример 2, Фиг. 1f), а также обладает более долгой продолжительностью регенерации тканей благодаря высокой устойчивости к действию фермента (Пример 2, Фиг. 5).

Таким образом, композицию гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению можно использовать в косметических или терапевтических целях благодаря ее характеристичным свойствам эластичности, силе выдавливания и устойчивости к действию фермента. В качестве конкретного примера, такую вводимую в виде инъекций композицию гиалуроновой кислоты можно использовать в качестве композиции для наполнения или замены биологической ткани, заполнения морщин, ремоделирования лица, комопзиции для увеличения объема губ, композиции для регидрационной терапии кожи методом мезотерапии, композиции для замены или временного наполнения синовиальной жидкости при артирите, композиции для увеличения объема сфинктера или уретры в урологии или гинекологии, композиции для вспомогательного действия или лечения при хирургическом лечении катаракты в офтальмологии, фармацевтического геля для высвобождения активного вещества или композиции для восстановления костей, увеличение объема голосовых связок, образования хирургической ткани.

В другом воплощении настоящее изобретение относится к композиции вязкой добавки, содержащей вводимую в виде инъекций композицию гиалуроновой кислоты. Композицию вязкой добавки можно использовать для дополнения биологической ткани, зпмены синовиальной жидкости при артирите, помощи при хирургическом лечении катаракты или лечении глаукомы.

В другом воплощении настоящее изобретение относится к наполнителю для подкожных инъекций, композиции для лечения синдрома сухого глаза, включающему вводимую в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты.

Воплощение изобретения

Здесь и далее настоящее изобретение будет более подробно описано с помощью примеров. Однако эти примеры приведены в качестве иллюстрации настоящего изобретения и не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения.

Примеры 1-4: Получение композиции на основе гиалуроновой кислоты, совместно вводимой в виде инъекций с ДНК фракциями и без них

Пример 1: 1 г гиалуроновой кислоты (молекулярная масса: от примерно 2 миллионов до 3 миллионов Да) растворяли в 0,2 н-ном растворе NaOH до 10% (масс.). 1,4-Бутандиолдиглицидиловый эфир (BDDE) использовали в качестве сшивающего агента, а степень сшивания определяли следующим образом: масса (BDDE)/Macca (сухого NаГК).

BDDE добавляли в количестве 5% от степени сшивания и смешивали. Гель, полученный с помощью реакции сшивания смешанного раствора при постоянной температуре водяной бани, подвергали дроблению до определенного размера, промывке и набуханию с помощью буферного раствора. Производные гиалуроновой кислоты получали после распыления набухшего геля с помощью пульверизатора. Полученные гели расфасовывали в стеклянные бутыли объемом 200 мл каждая и стерилизовали путем нагревания.

Пример 2: Гиалуроновую кислоту (молекулярная масса: от примерно 2 миллионов до 3 миллионов Да) смешивали с 0,25 н-ным раствором NaOH до 10% (масс.) и добавляли 1,4-бутандиолдиглицидиловый эфир для достижения степени сшивания 5%, и подвергали сшиванию при постоянной температуре водяной бани. Комбинированный ПДРН гель на основе гиалуроновой кислоты, содержащий 1,875 мг/мл ПДРН, получали путем добавления ПДРН фракций (12,5 мг/мл), растворенных в физиологическом солевом растворе с концентрацией 15% (масс.), в сшитый гель.

Пример 3: Гиалуроновую кислоту (молекулярная масса: от примерно 2 миллионов до 3 миллионов Да) растворяли в 1,25 н-ном растворе NaOH до 10% (масс.) и добавляли 1,4-бутандиолдиглицидиловый эфир для достижения степени сшивания 5%, и подвергали сшиванию при постоянной температуре водяной бани. Комбинированный ПДРН гель на основе гиалуроновой кислоты, содержащий 1,875 мг/мл ПДРН, получали путем добавления ПДРН фракций (12,5 мг/мл), растворенных в физиологическом солевом растворе с концентрацией 15% (масс.), в сшитый гель.

Пример 4: Гиалуроновую кислоту (молекулярная масса: от примерно 2 миллионов до 3 миллионов Да) растворяли в 2,5 н-ном растворе NaOH до 10% (масс.) и добавляли 1,4-бутандиолдиглицидиловый эфир для достижения степени сшивания 5%, и подвергали сшиванию при постоянной температуре водяной бани. Комбинированный ПДРН гель на основе гиалуроновой кислоты, содержащий 1,875 мг/мл ПДРН, получали путем добавления ПДРН фракций (12,5 мг/мл), растворенных в физиологическом солевом растворе с концентрацией 15% (масс.), в сшитый гель.

Пример 5: Гель получали путем добавления 20 мг/мл ГК (гиалуроновой кислоты) (молекулярная масса: от 0,8 миллиона до 1 миллиона Да) в гель, полученный способом из Примера 2, до концентрации 15% (масс.).

Экспериментальный пример 1: исследование свойств вязкоэластичности вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты (геля), полученной по настоящему изобретению.

Реологические свойства образцов, полученных в Примерах 1-4 и Сравнительных примерах 1-3, анализировали с помощью вискозиметра (Сравнительный пример 1: LG IVOIRE, Сравнительный пример 2: BNC Cutegel, Сравнительный пример 3: GALDERMA Restylane, Сравнительный пример 4: Humedix elravie).

Полученные величины модуля накопления упругой деформации (G'), модуля потери упругой деформации (G''), Tan (delta), комплексной вязкости (G) в зависимости от частоты при указанных выше условиях приведены на Фиг. 1a-1i и в Таблице 1.

(Сравнительный пример 1: LG IVOIRE, Сравнительный пример 2: BNC Cutegel, Сравнительный пример 3: GALDERMA Restylane, Сравнительный пример 4: Humedix elravie)

На основании данных в Таблице 1 и на Фиг. 1a-1i, считают, что образец из Примера 2 по настоящему изобретению имеет более высокую комплексную вязкость и более хорошие свойства эластичности (более низкий Tan delta), чем образцы из Примеров 1, 3 и 4, Сравнительных примеров 1-4. В Сравнительных примерах 1-4, Сравнительных примерах 2 и 3 показана высокая комплексная вязкость, но более низкие свойства эластичности, а в Сравнительных примерах 1 и 4 показаны хорошие свойства эластичности, но низкая комплексная вязкость. На основании Сравнительных примеров 2 - 4, поскольку при росте концентрации NaOH уменьшается вязкоэластичность, считают, что сшитый гель на основе гиалуроновой кислоты имеет наилучшие свойства, когда он смешан с ДНК фракциями, после сшивания в основных уловиях в присутствии 2,5 н-ного NaOH.

Экспериментальный пример 2: испытание на вытеснение под нагрузкой геля гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению

Испытание на опопрожнение под нагрузкой осуществляли для определения силы выдавливания из предварительно заполненного шприца для композиций гиалуроновой кислоты из Примера 1 и Примера 2.

Результаты, полученные в указанных выше условиях анализа, приведены на Фиг. 2а и 2b.

Как показано на Фиг. 2а и 2b, образец из Примера 2 по настоящему изобретению демонстрирует более низкие величины вытеснения под нагрузкой, чем образец из Примера 1, содержащий только производные сшитой гиалуроновой кислоты. Подтверждено, что смешивание ДНК фракций со сшитыми производными гиалуроновой кислоты демонтрирует не только прекрасную эластичность, но также и увеличение мягкости геля, что считается важным при его обработке.

Экспериментальный пример 3: Определение содержания ПДРН в геле гиалуроновой кислоты, полученном по настоящему изобретению

Определение ПДРН фракции, содержащейся в гиалуроновой кислоте из Примера 1 и вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты из Примера 2 по настоящему изобретению, осуществляли методом электрофореза. На Фиг. 3 представлен результат.

Как показано на Фиг. 3, ПДРН фракции (с), включенные в состав в Примере 2 по настоящему изобретению, имеют такую же молекулярную массу, что и ПДРН (а) сравнения перед смешиванием и в Примере 1. На основании полученного результата считают, что гель гиалуроновой кислоты не йлияет на молекулярную массу ПДРН фракций.

Экспериментальный пример 4: анализ размера частиц производных гиалуроновой кислоты при смешивании с ДНК фракциями

Чтобы определить размер частиц и распределение в композиции гиалуроновой кислоты в Примерах 1-4 и Сравнительных примерах 1-3, частицы с размером от 0,375 мкм до 2000 мкм пересчитывают после разбавления каждого образца массой 3 г дистиллированной водой объемом 15 мл при использовании анализатора размера частиц Beckman Coulter LS. Результаты представлены на Фиг. 4 и в Таблице 2 (Сравнительный пример 1: LG IVOIRE, Сравнительный пример 2: BNC Cutegel).

Как показано в Таблице 2 и на Фиг. 4а - 4d, композиция из Примера 2 по настоящему изобретению демонстрирует гомогенное распределение частиц по сравнению со Сравнительными примерами 1 и 2 и одинаковый средний размер частиц с Примером 1. Результат подтверждает, что ДНК фракция не влияет на размер частиц гиалуроновой кислоты.

Экспериментальный пример 5: анализ устойчивости к действию фермента производных гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению

5 г гиалуроновой кислоты из Примера 2 и Сравнительного примера 1 (LG life Sciences IVOIRE) и 2,5 г гиалуронидазы с концентрацией 100 МЕ/мл соответственно помещали в конические трубки и смешивали до гомогенности. Реакцию проводили при постоянной температуре водяной бани 37°С.Изменения вязкости гиалуроновой кислоты во времени измеряли с помощью вискозиметра Ubbelohde. Чем выше устойчивость к гиалуронидазе, тем меньше меняется коэффициент вязкости. Более высокий коэффициент вязкости соответствует меньшей вязкости. Результат приведен на Фиг. 5.

Как показано на Фиг. 5, композиция из Примера 2 по настоящему изобретению (содержание ГК: 19,8 мг/мл) показывает небольшое увеличение коэффициента вязкости (меньший наклон) при обработке гиалуронидазой (более высокий коэффициент вязкости соответствует меньшей вязкости раствора) по сравнению с композицией из Сравнительного примера 1 (содержание ГК: 20,3 мг/мл). Таким образом, производные гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению имеют более хорошую устойчивость к дейтсвию фермента, чем в коммерчески доступном Сравнительном примере 1.

Примеры 6-15: Получение геля на основе гиалуроновой кислоты в соответствии со степенью сшивания и соотношением смешивания с ДНК фракциями

Пример 6: Гиалуроновую кислоту (молекулярная масса: от примерно 2 миллионов до 3 миллионов Да) смешивали с 0,25 н-ным раствором NaOH до 10% (масс.) и добавляли BDDE в количестве, соответствующем достижению степени сшивания 0,05%. В результате сшивания гель не образовывался.

Примеры 7-9: Гиалуроновую кислоту (молекулярная масса: от примерно 2 миллионов до 300 миллионов Да) смешивали с 0,25 н-ным раствором NaOH до 10% (масс.) и добавляли BDDE в количестве, соответствующем достижению степени сшивания 0,1% и смешивали. ПДРН фракции, растворенные в воде (80 мл/мл), добавляли в сшитый гель до 0,1% (масс.) (Пример 7), до 50% (масс.) (Пример 8), до 70% (масс.) (Пример 9), соответственно, и получали комбинированный ПДРН гель на основе гиалуроновой кислоты, содержащий 1,875 мг/мл ПДРН.

Примеры 10-12: Гиалуроновую кислоту (молекулярная масса: от примерно 2 миллионов до 300 миллионов Да) смешивали с 0,25 н-ным раствором NaOH до 10% (масс.) и добавляли BDDE в количестве, соответствующем достижению степени сшивания 200% и смешивали. ПДРН фракции, растворенные в воде (80 мл/мл), добавляли в сшитый гель, до 0,1% (масс.) (Пример 10), до 50% (масс.) (Пример 11), до 70% (масс.) (Пример 12), соответственно, и получали комбинированный ПДРН гель на основе гиалуроновой кислоты, содержащий 1,875 мг/мл ПДРН.

Примеры 13-15: Гиалуроновую кислоту (молекулярная масса: от примерно 2 миллионов до 300 миллионов Да) смешивали с 0,25 н-ным раствором NaOH до 10% (масс.) и добавляли BDDE в количестве, соответствующем достижению степени сшивания 400% и смешивали. ПДРН фракции, растворенные в воде (80 мл/мл), добавляли в сшитый гель, до 0,1% (масс.) (Пример 13), до 50% (масс.) (Пример 14), до 70% (масс.) (Пример 15), соответственно, и получали комбинированный ПДРН гель на основе гиалуроновой кислоты, содержащий 1,875 мг/мл ПДРН.

Экспериментальный пример 6: сравнение свойств композиции гиалуроновой кислоты (геля) из Примеров 6-14

Реологические свойст капиллярного вискозиметра. Полученные величины модуля накопления упругой деформации (G'), модуля потери упругой деформации (G''), Tan (delta), комплексной вязкости (G) в зависимости от частоты показаны на Фиг. 6а-6i и в Таблице 3.

Как показано на Фиг. 6а-6i и в Таблице 3, гели из Примера 7, Примера 8, Примера 10 и Примера 11 имели и прекрасные величины вязкоэластичности и низкие величины Tan delta по сравнению с другими сшитыми гелями. Таким образом, оптимальный способ получения геля на основе гиалуроновой кислоты, содержащего ДНК фракции, был подтвержден (при использовании NaOH ниже 2,5 н, BDDE при степени сшивания от 0,1 до 200%, соотношении смешивания ДНК от 0,1 до 50% (масс.)).

Группа изобретений относится к области косметической промышленности и медицины, а именно к вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты для применения в косметических или терапевтических целях, содержащей производные гиалуроновой кислоты со степенью сшивания от 0,1 до 200% и ДНК фракции в количестве от 0,1 до 50% масс. в пересчете на общую массу композиции, где производные гиалуроновой кислоты со степенью сшивания от 0,1 до 200% получены с использованием сшивающего агента, содержащего две или более эпоксидных функциональных групп, а также относится к способу производства вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты, к композиции для дополнения биологической ткани, к вводимому в виде подкожных инъекций наполнителю, к композиции для лечения синдрома сухого глаза. Группа изобретений обеспечивает получение вводимой в виде инъекций композиции, обладающей прекрасными свойствами эластичности и силой выдавливания, при этом композиция обладает устойчивостью к действию фермента. 6 н. и 8 з.п. ф-лы, 26 ил., 3 табл., 15 пр.

1. Вводимая в виде инъекций композиция гиалуроновой кислоты для применения в косметических или терапевтических целях, содержащая производные гиалуроновой кислоты со степенью сшивания от 0,1 до 200% и ДНК фракции в количестве от 0,1 до 50% масс. в пересчете на общую массу композиции, где производные гиалуроновой кислоты со степенью сшивания от 0,1 до 200% получены с использованием сшивающего агента, содержащего две или более эпоксидных функциональных групп.

2. Вводимая в виде инъекций композиция гиалуроновой кислоты по п. 1, в которой концентрация ДНК фракции составляет от 0,001 до 40 мг/мл.

3. Вводимая в виде инъекций композиция гиалуроновой кислоты по п. 1, в которой концентрация производных гиалуроновой кислоты составляет от 1 до 50 мг/мл.

4. Вводимая в виде инъекций композиция гиалуроновой кислоты по п. 1, в которой молекулярная масса производных гиалуроновой кислоты составляет от 100000 до 5000000 Да.

5. Вводимая в виде инъекций композиция гиалуроновой кислоты по п. 1, в которой ДНК фракцию выбирают из группы, состоящей из полинуклеотида (ПН) и полидезоксирибонуклеотида (ПДРН).

6. Вводимая в виде инъекций композиция гиалуроновой кислоты по п. 1, в которой массовое отношение производные сшитой гиалуроновой кислоты: ДНК фракции составляет от 5,0 до 9,99: от 0,01 до 5,0.

7. Способ производства вводимой в виде инъекций композиции гиалуроновой кислоты по любому из пп. 1-6, включающий:

a) получение производных гиалуроновой кислоты путем сшивания гиалуроновой кислоты или ее соли в водном щелочном растворе при степени сшивания от 0,1 до 200% при использовании сшивающего агента, содержащего две или более эпоксидных функциональных групп; и

b) смешивание ДНК фракций с производными гиалуроновой кислоты со степенью сшивания от 0,1 до 200%, полученными на стадии а).

8. Способ производства по п. 7, в котором водный щелочной раствор является водным раствором NaOH.

9. Способ производства по п. 8, в котором концентрация водного раствора NaOH составляет от 0,25 до 2,5 н.

10. Способ производства по п. 8, в котором сшивающий агент является 1,4-бутандиолдиглицидиловым эфиром.

11. Композиция для дополнения биологической ткани, содержащая композицию по любому из пп. 1-6.

12. Вводимый в виде подкожных инъекций наполнитель для применения в косметических или терапевтических целях, содержащий композицию по любому из пп. 1-6.

13. Композиция для лечения синдрома сухого глаза, содержащая производные гиалуроновой кислоты со степенью сшивания от 0,1 до 200%, ДНК фракции от 0,1 до 50% масс. в пересчете на общую массу композиции и одну или более фармацевтически приемлемых добавок, где производные гиалуроновой кислоты со степенью сшивания от 0,1 до 200% получены с использованием сшивающего агента, содержащего две или более эпоксидных функциональных групп.

14. Косметическая композиция, содержащая производные гиалуроновой кислоты со степенью сшивания от 0,1 до 200%, ДНК фракции от 0,1 до 50% масс. в пересчете на общую массу композиции и одну или более косметически приемлемых добавок, где производные гиалуроновой кислоты со степенью сшивания от 0,1 до 200% получены с использованием сшивающего агента, содержащего две или более эпоксидных функциональных групп.