[ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ]
Настоящее изобретение относится к гидрогелю из гиалуроновой кислоты, сшитому при использовании полиола со сшивателем, и филлеру, содержащему его.
[УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ]
В филлерах, разработанных для улучшения состояния кожи при морщинах, широко используют гиалуроновую кислоту - природный полимер, характеризующийся высокой биосовместимостью. В целях увеличения продолжительности нахождения гиалуроновой кислоты в организме в настоящее время для филлеров используют гидрогель из гиалуроновой кислоты, сшитый при использовании различных сшивателей. Однако, поскольку сшиватель в общем случае является высокотоксичным, имеет место недостаток, заключающийся в затруднительности его использования в больших количествах. В дополнение к этому, при низкой степени сшивания несмотря на наличие сшитого гидрогеля имеет место недостаток, заключающийся в быстром его разложении гиалуронидазой или активными формами кислорода (радикалами), так что для него трудно увеличить как стабильность, так и долговечность в организме.
[РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ]
[ТЕХНИЧЕСКАЯ ПРОБЛЕМА]
В результате проведения неоднократных исследований для разрешения проблем предшествующего уровня техники, которые были описаны выше, изобретатели настоящего изобретения подтвердили, что при сшивании гиалуроновой кислоты при использовании полиола, такого как сахарный спирт, совместно с обычно используемым сшивателем превосходно улучшается стабильность в условиях действия гиалуронидазы, активных форм кислорода (радикалов) и/или нагревания, а также значительно снижается токсичность вследствие использования малого количества сшивателя, и поэтому может быть получен филлер, характеризующийся высокой биосовместимостью, совершив, тем самым, настоящее изобретение.
В соответствии с этим, одна цель настоящего изобретения заключается в предложении гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, который снижает свою токсичность во время сшивания, что обеспечивает высокую безопасность и высокую долговечность в организме, и композиции для филлера, содержащего его.
[ТЕХНИЧЕСКОЕ РЕШЕНИЕ]
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предлагаются гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, содержащий гиалуроновую кислоту или ее соль, сшиватель и полиол, в котором гиалуроновая кислота или ее соль являются сшитыми при использовании сшивателя и полиола, и филлер, содержащий гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты.
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения филлер предназначен для инъекции в мягкие ткани, например, для инъекции в кожу, и филлер может быть использован ради свойств заполнения, например, филлер используется таким образом, как при заполнении биологической ткани, улучшении состояния кожи при морщинах при заполнении морщин, ремоделировании лица или контурной пластике или восстановлении или увеличении объема мягкой ткани.
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения полиол может представлять собой сахарный спирт.
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения может быть предложен способ получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, включающий смешивание гиалуроновой кислоты или ее соли с полиолом и добавление смешанного раствора сшивателя и водного щелочного раствора к смеси гиалуроновой кислоты или ее соли и полиола и проведение реакции.
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предлагается предварительно заправленный шприц, заполненный филлером, содержащим сшитую гиалуроновую кислоту.
[ВЫГОДНЫЕ ЭФФЕКТЫ]
Увеличивается стойкость к действию гиалуронидазы, активных форм кислорода в организме и температуры хранения, поскольку в гидрогеле из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующем настоящему изобретению, используют сшиватель с полиолом. Поэтому филлер, содержащий данный гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, характеризуется увеличенной стабильностью и уменьшенной токсичностью на протяжении периода хранения, демонстрируя высокую безопасность и превосходную долговечность в организме, и, таким образом, превосходными являются эффекты восстановления или увеличения объема мягких тканей и улучшения состояния кожи при морщинах.
[КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ]
ФИГУРА 1 представляет собой график, сопоставляющий результат по стойкости к действию фермента in vitro для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя и маннита из примера 1-1, соответствующего настоящему изобретению, с соответствующим результатом из сравнительных примеров от 2 до 4.
ФИГУРА 2 представляет собой график, сопоставляющий результат по стойкости к действию радикалов in vitro для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя и маннита из примера 1-1, соответствующего настоящему изобретению, с соответствующим результатом из сравнительных примеров от 2 до 4.
ФИГУРА 3 представляет собой график, сопоставляющий результат по стойкости к действию тепла in vitro для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя и маннита из примера 1-1, соответствующего настоящему изобретению, с соответствующим результатом из сравнительных примеров от 2 до 4.
ФИГУРА 4 представляет собой график, сопоставляющий результат по испытанию на биосовместимость in vitro для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя и маннита из примера 1-1, соответствующего настоящему изобретению, с соответствующим результатом из сравнительных примеров от 2 до 4.
[ЛУЧШИЙ ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ]
Ниже в настоящем документе настоящее изобретение будет описываться подробно.
Гиалуроновая кислота (ниже в настоящем документе также обозначаемая как «НА»), содержащаяся в гидрогеле из сшитой гиалуроновой кислоты настоящего изобретения, представляет собой биополимерное вещество, в котором линейно соединяются дисахаридные повторяющиеся звенья (дисахаридные звенья), состоящие из N-ацетил-D-глюкозамина и D-глюкуроновой кислоты, и в изобилии присутствует в стекловидном теле глаза, синовиальной жидкости суставов, петушином гребне и тому подобном и характеризуется превосходной биосовместимостью, и, таким образом, она широко используется для медицинского лечения и медицинских изделий или областей применения в косметике таким образом, как в случае офтальмологического хирургического аппарата, вискосапплементарной терапии для сустава, материалов для доставки лекарственных средств, глазных капель, добавок, улучшающих состояния кожи при морщинах, и тому подобного.
Говоря конкретно, гиалуроновая кислота, содержащаяся в гидрогеле из гиалуроновой кислоты, соответствующем настоящему изобретению, может относиться к гиалуроновой кислоте или соли гиалуроновой кислоты. Соль гиалуроновой кислоты включает, например, все органические соли, такие как гиалуронат натрия, гиалуронат калия, гиалуронат кальция, гиалуронат магния, гиалуронат цинка, гиалуронат кобальта и гиалуронат тетрабутиламмония, но без ограничения только этим.
В настоящем изобретении среднемассовая молекулярная масса гиалуроновой кислоты, используемой для реакции сшивания, может составлять 1000000 Да и более, 1500000 Да и более, 2000000 Да и более, 2300000 Да и более или 2500000 Да и более, и, например, она находится в диапазоне от 1000000 до 1500000 Да, от 1000000 до 2000000 Да, от 1000000 до 3000000 Да, от 1000000 до 4000000 Да, от 1500000 до 2000000 Да, от 1500000 до 3000000 Да, от 1500000 до 4000000 Да, от 2000000 до 4000000 Да, от 2300000 до 4000000 Да, от 2000000 до 3700000 Да, от 2200000 до 3700000 Да или от 2500000 до 3500000 Да.
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, характеризуется тем, что гиалуроновая кислота или ее соль являются сшитыми при использовании сшивателя и полиола.
Термин «сшитый», используемый в настоящем изобретении, относится к межмолекулярной связи, которая связывает отдельные полимерные молекулы или мономерные звенья с образованием более стабильной структуры, такой как гель. Как таковой сшитый полимер содержит, по меньшей мере, одну межмолекулярную связь, соединяющую, по меньшей мере, одну отдельную полимерную молекулу с другой.
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, характеризуется тем, что гиалуроновая кислота или ее соль являются сшитыми при использовании сшивателя и полиола в отличие от обычного гидрогеля из гиалуроновой кислоты, сшитого только при использовании сшивателя.
Термин «сшиватель» обозначает любое соединение, способное индуцировать сшивание между цепями гиалуроновой кислоты, и в настоящем изобретении без ограничений может быть использован сшиватель, который может сшивать гиалуроновую кислоту или ее соль, и, например, он может варьироваться, например, как соединение, содержащее две и более эпоксидные функциональные группы. В качестве одного предпочтительного примера сшивателя он может включать эндогенные полиамин, альдегид, карбодиимид, дивинилсульфон в качестве неэпоксидного сшивателя. В дополнение к этому, эпоксидный сшиватель может включать бутандиолдиглицидиловый простой эфир (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир: BDDE), этиленгликольдиглицидиловый простой эфир (EGDGE), гександиолдиглицидиловый простой эфир (1,6-гександиолдиглицидиловый простой эфир), пропиленгликольдиглицидиловый простой эфир, полипропиленгликольдиглицидиловый простой эфир, политетраметиленгликольдиглицидиловый простой эфир, неопентилгликольдиглицидиловый простой эфир, полиглицеринполиглицидиловый простой эфир, диглицеринполиглицидиловый простой эфир, глицеринполиглицидиловый простой эфир, триметилпропанполиглицидиловый простой эфир, бисэпоксипропоксиэтилен(1,2-(бис(2,3-эпоксипропокси)этилен), пентаэритритполиглицидиловый простой эфир и сорбитполиглицидиловый простой эфир и тому подобное, и в их числе с точки зрения низкой токсичности в особенности предпочтительным является 1,4-бутандиолдиглициловый простой эфир на биэпоксидной основе.
Полиол, который сшивает гиалуроновую кислоту или ее приемлемую соль при использовании сшивателя, соединяется со сшивателем для сшивания гиалуроновой кислоты или ее приемлемой соли. Данный полиол относится к органической молекуле, содержащей 2 и более свободные гидрокси-группы, и это может быть полиол, содержащий от 2 до 20 атомов углерода, говоря более конкретно, сахарный спирт. Полиол, подходящий для использования в настоящем изобретении, может представлять собой насыщенное или ненасыщенное, линейное, разветвленное или циклическое алкилсодержащее соединение, которое в своей алкильной цепи содержит, по меньшей мере, 2 функциональные группы -ОН, например, 3 и более функциональные группы -ОН, а, говоря более конкретно, 4 и более функциональные группы -ОН. Неограничивающие примеры полиола представляют собой нижеследующее: глицерин, 1,3-пропандиол, изопренгликоль, пентиленгликоль, гексиленгликоль, гликоль, такой как этиленгликоль, пропиленгликоль, бутиленгликоль, диэтиленгликоль; полиглицерин, содержащий от 2 до 6 повторяющихся звеньев, например, диглицерин, эритрит, арабит, адонит, сорбит, маннит, ксилит, дульцит, глюкоза, фруктоза, ксилоза, трегалоза, мальтоза, сахароза, лактоза; и их производные и их смеси, такие как метилглюкозидфосфат. Говоря более конкретно, полиол может быть выбран из группы, состоящей из маннита, сорбита и ксилита. В настоящем изобретении в полиоле функциональная группа -ОН вступает в реакцию с активными формами кислорода, что делает активные формы кислорода неактивными, ингибируя, тем самым, разложение филлера активными формами кислорода.
В рамках одного конкретного примера гиалуроновая кислота или ее приемлемая соль могут быть соединены со сшивателем и полиолом следующим образом:
Говоря другими словами, гидрокси-группа гиалуроновой кислоты или ее приемлемой соли соединяется с одной из эпоксидных групп на обоих концах сшивателя, а эпоксидная группа другого конца сшивателя и гидрокси-группа полиола соединяются с образованием системы гиалуроновая кислота-сшиватель-полиол. Кроме того еще, еще одна гидрокси-группа полиола непрерывно соединяется с гидрокси-группой новой гиалуроновой кислоты или ее приемлемой соли следующим далее образом, и в конечном счете получают гидрогель из сшитой гиалуроновой
кислоты.
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, характеризуется степенью модифицирования (MoD) в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 100, предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 80, более предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 50.
В дополнение к этому, в настоящем изобретении термин «степень модифицирования (MoD)» относится к молярному соотношению между совокупным сшивателем, соединенным с гиалуроновой кислотой, и количеством молей совокупной единичной гиалуроновой кислоты, и это можно выразить так, как в представленном ниже уравнении 1.
[Уравнение 1]
Степень модифицирования (MoD)=Количество молей сшивателя, соединенного с гиалуроновой кислотой/количество молей единичной гиалуроновой кислоты
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, может содержать совокупную гиалуроновую кислоту в количестве в диапазоне от приблизительно 10 мг/г до приблизительно 40 мг/г, предпочтительно от приблизительно 15 мг/г до приблизительно 35 мг/г, намного более предпочтительно от приблизительно 20 мг/г до приблизительно 30 мг/г, при расчете на совокупную массу гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты.
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, демонстрирует эффект замещения разложения гиалуроновой кислоты активными формами кислорода, при котором полиол химически объединяется с гиалуроновой кислотой или ее солью и создает структурные помехи реализации механизма связывания и разложения для гиалуронидазы, и, тем самым, ему свойственно преимущество, заключающееся в том, что при инъекции филлера, содержащего гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, в организм человека обнаруживается эффект ингибирования разложения филлера, так что после инъекции в организм увеличивается долговечность. В дополнение к этому, гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты может разлагаться, когда разрывается β-1-4-глюкозидная связь, где данная химическая связь между молекулами гиалуроновой кислоты является относительно слабой, под действием не только фермента, как это представлено выше, но также и тепла, и в соответствии с настоящим изобретением полиол характеризуется термической стабильностью, которая ингибирует термическое разложение такой гиалуроновой кислоты, и обнаруживает преимущество во время хранения, так что он является очень хорошо подходящим для использования в качестве филлера.
В рамках еще одного аспекта настоящее изобретение относится к способу получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты при использовании сшивателя и полиола. Говоря конкретно, способ получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению, может включать (i) смешивание гиалуроновой кислоты или ее соли с полиолом; и (ii) добавление смешанного раствора сшивателя и водного щелочного раствора к смеси гиалуроновой кислоты или ее соли и полиола и проведение реакции.
В способе получения в том, что касается гиалуроновой кислоты или ее соли, сшивателя и полиола, равным образом может применяться то, что относится к гидрогелю из сшитой гиалуроновой кислоты, если только не будет утверждаться другого.
В дополнение к этому, среднемассовая молекулярная масса гиалуроновой кислоты или ее соли может составлять 1000000 Да и более, 1500000 Да и более, 2000000 Да и более, 2300000 Да и более или 2500000 Да и более, и, например, она находится в диапазоне от 1000000 до 1500000 Да, от 1000000 до 2000000 Да, от 1000000 до 3000000 Да, от 1000000 до 4000000 Да, от 1500000 до 2000000 Да, от 1500000 до 3000000 Да, от 1500000 до 4000000 Да, от 2000000 до 4000000 Да, от 2000000 до 3700000 Да, от 2200000 до 3700000 Да или от 2500000 до 3500000 Да.
С другой стороны, концентрация полиола, используемого в способе получения, может находиться в диапазоне от 5 до 100% (моль.), от 10 до 100% (моль.), от 10 до 90% (моль.) или от 10 до 80% (моль.), при расчете на гиалуроновую кислоту или ее соль, но без ограничения только этим, и может быть надлежащим образом подстроена в зависимости от условий реакции.
В дополнение к этому, водный щелочной раствор может быть использован без ограничений до тех пор, пока о нем будет известно, что это водный щелочной раствор, подходящий для использования при сшивании гиалуроновой кислоты, и, например, им может быть NaOH, KOH, NaHCO3, LiOH или их комбинация, а предпочтительно им может быть NaOH. Концентрация водного щелочного раствора может находиться в диапазоне от 0,1 до 0,5 н., но без ограничения только этим. Концентрация водного щелочного раствора, используемого в способе получения, может находиться в диапазоне от 5 до 100% (моль.), от 10 до 100% (моль.), от 10 до 90% (моль.) или от 10 до 80% (моль.), при расчете на гиалуроновую кислоту или ее соль, но без ограничения только этим, и она может быть надлежащим образом подстроена в зависимости от условий реакции.
При использовании концентрации сшивателя и/или полиола на уровне высокой концентрации, превышающей вышеупомянутый диапазон, получают филлер, характеризующийся избыточно высокой эластичностью, а при концентрации, меньшей, чем вышеупомянутый диапазон, эластичность чрезмерно низкая для демонстрации надлежащей вязкоэластичности. Говоря конкретно, реакция сшивания может быть проведена в результате перемешивания смеси из гиалуроновой кислоты или ее соли и полиола и сшивателя и водного щелочного раствора для их гомогенного смешивания, а после этого выдерживания их на протяжении определенного периода времени. Температура во время реакции сшивания может быть комнатной или более высокой температурой, предпочтительно находясь в температурном диапазоне от 25 до 65°С или от 27 до 55°С на протяжении от 1 до 22 часов или от 2 до 20 часов.
В способе получения, соответствующем настоящему изобретению, совокупная концентрация в реакции (то есть, соотношение между суммарной массой гиалуроновой кислоты и полиола и совокупной массой гиалуроновой кислоты, полиола и растворителя) может находиться в диапазоне от 5 до 30% (масс./масс.) или от 10 до 30% (масс./масс.).
В одном конкретном примере настоящего изобретения вещество получали в результате смешивания маннита, сорбита или ксилита в количестве 10% (моль.) при расчете на гиалуроновую кислоту с гиалуроновой кислотой, смешивания смешанного раствора из раствора NaOH и 1,4-BDDE и выдерживания при температуре в диапазоне от 30 до 50°С на протяжении 2 часов, а после этого промывания/нейтрализации/набухания сшитого геля и вслед за этим измельчения его в порошок при использовании ячеистой сетки, а затем стерилизации.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к филлеру, содержащему гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты.
Филлер может содержать гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты в количестве в диапазоне от 0,5 до 10% (масс.), предпочтительно от 1 до 5% (масс.), при расчете на совокупную массу филлера.
Кроме того еще, в дополнение к гидрогелю из сшитой гиалуроновой кислоты филлер, содержащий гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, может дополнительно содержать анестетик для уменьшения болей у пациента во время инъекции.
Анестетик включает, по меньшей мере, один анестетик, известный на современном уровне техники, предпочтительно местный анестетик, и концентрация таких одного или нескольких анестетиков представляет собой количество, эффективное для облегчения болей, испытываемых при инъекции композиции. Пример анестетика может быть выбран из группы, состоящей из амбукаина, амоланона, амилокаина, беноксината, бензокаина, бетоксикаина, бифенамина, бупивакаина, бутакаина, бутамбена, бутаниликаина, бутетамина, бутоксикаина, картикаина, хлорпрокаина, кокаэтилена, кокаина, циклометикаина, дибукаина, диметизохина, диметокаина, диперодона, дициклонина, экгонидина, экгонина, этилхлорида, этидокаина, бета-эукаина, эупроцина, феналкомина, формокаина, гексилкаина, гидрокситетракаина, изобутил-п-аминобензоата, лейцинокаинмезилата, левоксадрола, лидокаина, мепивакаина, меприлкаина, метабутоксикаина, метилхлорида, миртекаина, наэпаина, октакаина, ортокаина, оксетазаина, паретоксикаина, фенакаина, фенола, пиперокаина, пиридокаина, полидоканола, прамоксина, прилокаина, прокаина, пропанокаина, пропаракаина, пропипокаина, пропоксикаина, псевдококаина, пиррокаина, ропивакаина, салицилового спирта, тетракаина, толикаина, тримекаина, золамина и их солей. В одном варианте осуществления анестетик может представлять собой лидокаин, например, в форме лидокаингидрохлорида.
В филлере, содержащем гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, концентрация анестетика, содержащегося в филлере, может находиться в диапазоне от приблизительно 0,1% (масс.) до приблизительно 1,0% (масс.) при расчете на совокупную массу филлера, например, от приблизительно 0,2% (масс.) до приблизительно 0,5% (масс.), от композиции. Она предпочтительно может составлять 0,3% (масс.).
Концентрация анестетика в филлере, соответствующем настоящему изобретению, может быть терапевтически эффективной, и это означает концентрацию, подходящую для использования при получении преимуществ применительно к удобству методики и соблюдению пациентом режима и схемы лечения без причинения вреда пациенту.
В дополнение к этому, филлер, соответствующий настоящему изобретению, может дополнительно содержать буферный раствор, и буферный раствор может быть использован без ограничений до тех пор, пока его используют для получения гидрогеля из гиалуроновой кислоты. Пример предпочтительного буферного раствора может включать буферный раствор, содержащий один или несколько типов вариантов, выбираемых из группы, состоящей из лимонной кислоты, моногидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия, диэтилбарбитуровой кислоты, ацетата натрия, TAPS (трис(гидроксиметил)метиламино)пропансульфоната), бицина (2-бис(2-гидроксиэтил)амино)ацетата), Tris (трис(гидроксиметил)аммонийметана), трицина (N-(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил)глицина), HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоната), TES (2-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]метансульфоната) и PIPES (пиперазин-N, N’-бис(2-этансульфоната)), но без ограничения только этим. Уровень содержания вышеупомянутых компонентов, содержащихся в буферном растворе, может быть надлежащим образом подстроен, но предпочтительно он может быть заключен в диапазоне концентраций от 0,3 до 2,0 г/л при расчете на буферный раствор.
В дополнение к этому, филлер, соответствующий настоящему изобретению, может дополнительно содержать изотонический агент, и данный изотонический агент может быть использован без ограничений до тех пор, пока его используют для получения филлера, и он может содержаться в буферном растворе. В качестве предпочтительного изотонического агента может быть использован хлорид натрия, но без ограничения только этим. Уровень содержания изотонического агента может быть надлежащим образом подстроен по мере надобности, и, например, он может быть заключен диапазоне от 7,0 до 9,0 г/л при расчете на буферный раствор, но без ограничения только этим.
В одном примере, соответствующем настоящему изобретению, использовали буферный раствор, содержащий хлорид натрия, моногидрофосфат натрия и дигидрофосфат натрия в воде для инъекций.
В рамках одного дополнительного аспекта филлер, содержащий гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, в дополнение к вышеупомянутому компоненту может дополнительно содержать приемлемые компоненты, включенные в получение филлера.
Филлеру, содержащему гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, свойственно преимущество, заключающееся в возможности значительного увеличения периода хранения в сопоставлении с обычными рецептурами филлера на основе гиалуроновой кислоты вследствие высокой термической стабильности. В дополнение к этому, он характеризуется высокой стойкостью к разложению гиалуронидазой и активными формами кислорода (радикалами), так что он может значительно увеличить долговечность после инъекции в организм человека. Поскольку он обнаруживает исключительно превосходные свойства применительно к биосовместимости и токсичности, он может оказаться очень хорошо подходящим для использования в косметических или терапевтических целях.
В рамках одного конкретного аспекта филлер, содержащий гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, может быть использован для улучшения состояния кожи при морщинах в результате заполнения биологической ткани и заполнения морщин, ремоделирования лица или восстановления или увеличения объема мягкой ткани, такой как губы, нос, бедро, щека или грудь, и тому подобного. Филлер, содержащий гидрогель из гиалуроновой кислоты, может быть введен в форме введения, подходящей для такого использования, и это может быть предпочтительно инъекция, более предпочтительно инъекция из предварительно заполненного шприца (предварительно заправленного шприца).
В рамках другого аспекта настоящее изобретение относится к способу получения филлера, содержащего гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий вышеупомянутому, включающему следующие далее стадии:
(а) смешивание гиалуроновой кислоты или ее соли с полиолом;
(b) добавление смешанного раствора сшивателя и водного щелочного раствора к смеси гиалуроновой кислоты или ее соли и полиола и проведение реакции для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты;
(с) черновая резка гидрогеля из гиалуроновой кислоты, полученного на стадии (b);
(d) промывание и набухание подвергнутого черновой резке гидрогеля из гиалуроновой кислоты, полученного на стадии (b), при использовании буферного раствора; и
(е) измельчение в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, подвергнутого промыванию и набуханию на стадии (d).
Стадии (а) и (b) являются стадиями получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты в результате сшивания гиалуроновой кислоты или ее соли при использовании сшивателя и полиола применительно к водному щелочному раствору, и в том, что касается гиалуроновой кислоты или ее соли, сшивателя, полиола и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, равным образом может применяться то, что было упомянуто для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты и способа его получения.
В технологическом процессе черновой резки (стадия (с)) могут быть использованы различные технологические процессы черновой резки гидрогеля из гиалуроновой кислоты. В одном примере гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после реакции, может быть получен с профилем брусков (или цилиндров), и их можно разделить до профиля полумесяца, например, на 6 частей при использовании режущего устройства, такого как соломорезка. После этого технологический процесс черновой резки может быть реализован в результате перепускания геля, разделенного так, как это описывалось выше, (предпочтительно два и более раза) при использовании режущего устройства, характеризующегося постоянным интервалом между лезвиями.
Получение можно провести в соответствии с известными способами получения буферных растворов, используемыми на стадии (d). В дополнение к этому, в буферном растворе, кроме того, может дополнительно содержаться анестетик. Буферный раствор может быть использован без ограничений до тех пор, пока его используют для получения гидрогеля из гиалуроновой кислоты. В рамках примера данного предпочтительного буферного раствора используют буферный раствор, содержащий один или несколько типов вариантов, выбираемых из группы, состоящей из лимонной кислоты, моногидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия, диэтилбарбитуровой кислоты, ацетата натрия, TAPS (трис(гидроксиметил)метиламино)пропансульфоната), бицина (2-бис(2-гидроксиэтил)амино)ацетата), Tris (трис(гидроксиметил)аммонийметана), трицина (N-(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил)глицина), HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоната), TES (2-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]метансульфоната) и PIPES (пиперазин-N, N’-бис(2-этансульфоната)), но без ограничения только этим.
В дополнение к этому, промывание и набухание могут быть повторены один или два раза. При завершении промывания и набухания промывочный раствор может быть удален.
Стадия (е) является стадией измельчения в порошок промытого и набухшего гидрогеля, и это измельчение в порошок может быть проведено по различным способам измельчения в порошок, но предпочтительно это экструзионное измельчение в порошок.
В рамках одного дополнительного аспекта филлер на основе сшитого гидрогеля, полученный после стадии (е), может проходить через технологический процесс стерилизации и/или пеноудаления и тому подобного, и он может быть заправлен, герметизирован и стерилизован в большом количестве в надлежащей емкости, например, предварительно заправленном шприце.
[ПРИНЦИП ИЗОБРЕТЕНИЯ]
Ниже в настоящем документе для содействия пониманию настоящего изобретения оно будет описано подробно при использовании примеров. Однако, следующие далее примеры предназначены только для иллюстрации содержания настоящего изобретения, но объем настоящего изобретения следующими далее примерами не ограничивается. Примеры настоящего изобретения представлены для более полного разъяснения настоящего изобретения специалистам в соответствующей области техники.
[Примеры]
Пример 1-1: Получение гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании маннита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением (1)
В целях получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании маннита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением, реализовали следующий далее технологический процесс.
Говоря конкретно, отвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, имеющую среднюю молекулярную массу 3 миллиона Да, гидроксид натрия, BDDE (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир) в качестве сшивателя и маннит, соответственно.
Отвешивали 1 г гиалуроновой кислоты и отвешивали 10% (моль.) маннита при расчете на массу гиалуроновой кислоты, а после этого их помещали в емкость смесителя и смешивали. В отдельную емкость (ампулу на 50 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (NaOH) при концентрации 0,25 н., так чтобы совокупная концентрация в реакции составляла 10% (масс./масс.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты, и добавляли и смешивали 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир (BDDE) в количестве 100% (моль.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты. Смесь, содержащуюся в данной емкости, помещали в емкость смесителя, в которой смешивали гиалуроновую кислоту и маннит и смешивали при использовании смесителя, а после этого емкость смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой и завершали сшивание при одновременном выдерживании 50°С на протяжении 2 часов. Вслед за этим гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после завершения реакции, подвергали черновой резке до определенного размера и при использовании буферного раствора (буферного раствора, полученного в результате растворения 1,26 г/л гидрата (додекагидрата) моногидрофосфата натрия, 0,46 г/л гидрата (моногидрата) дигидрофосфата натрия, 7 г/л хлорида натрия и 3 г/л лидокаингидрохлорида в емкости колбы на 500 мл, содержащей воду для инъекций) его промывали и набухали 6 раз на протяжении 1 часа в каждом случае. После измельчения в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывание и набухание, его перемещали в емкость колбы на 250 мл и измеряли массу и добавляли буферный раствор, так чтобы масса геля достигала целевой массы, и, тем самым, проводили первичную коррекцию содержимого. При завершении первичной коррекции содержимого гидрогель из гиалуроновой кислоты экструдировали из емкости колбы на 250 мл и измельчали в порошок при использовании ячеистой сетки. После этого измельченный в порошок гидрогель из гиалуроновой кислоты переводили в емкость колбы на 250 мл и гомогенизировали, а вслед за этим измеряли содержимое и добавляли буферный раствор и, тем самым, проводили вторичную коррекцию содержимого. Гидрогель из гиалуроновой кислоты, для которого завершили коррекцию содержимого, стерилизовали тепловой обработкой при температуре, составляющей 121°С и более, на протяжении 10 минут и более для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению.
Пример 1-2: Получение гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании маннита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением (2)
В целях получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании маннита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением, реализовали следующий далее технологический процесс.
Говоря конкретно, отвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, имеющую среднюю молекулярную массу 3 миллиона Да, гидроксид натрия, BDDE (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир) в качестве сшивателя и маннит, соответственно.
Отвешивали 2 г гиалуроновой кислоты и отвешивали 10% (моль.) маннита при расчете на массу гиалуроновой кислоты, а после этого их помещали в емкость смесителя и смешивали. В отдельную емкость (ампулу на 50 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (NaOH) при концентрации 0,25 н., так чтобы совокупная концентрация в реакции составляла 15% (масс./масс.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты, и добавляли и смешивали 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир (BDDE) в количестве 5% (моль.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты. Смесь, содержащуюся в данной емкости, помещали в емкость смесителя, в которой смешивали гиалуроновую кислоту и маннит и смешивали при использовании смесителя, а после этого емкость смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой и завершали сшивание при одновременном выдерживании 30°С на протяжении 19 часов. Вслед за этим гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после завершения реакции, подвергали черновой резке до определенного размера и при использовании буферного раствора (буферного раствора, полученного в результате растворения 1,26 г/л гидрата (додекагидрата) моногидрофосфата натрия, 0,46 г/л гидрата (моногидрата) дигидрофосфата натрия, 7 г/л хлорида натрия и 3 г/л лидокаингидрохлорида в емкости колбы на 500 мл, содержащей воду для инъекций) его промывали и набухали один раз на протяжении 2 часов и два раза на протяжении 1 часа. После измельчения в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывание и набухание, его перемещали в емкость колбы на 150 мл и измеряли массу и добавляли буферный раствор, так чтобы масса геля достигала целевой массы, и, тем самым, проводили первичную коррекцию содержимого. При завершении первичной коррекции содержимого гидрогель из гиалуроновой кислоты экструдировали из емкости колбы на 150 мл и измельчали в порошок при использовании ячеистой сетки. После этого измельченный в порошок гидрогель из гиалуроновой кислоты переводили в емкость колбы на 150 мл и гомогенизировали, а вслед за этим измеряли содержимое и добавляли буферный раствор и, тем самым, проводили вторичную коррекцию содержимого. Гидрогель из гиалуроновой кислоты, для которого завершили коррекцию содержимого, стерилизовали тепловой обработкой при температуре, составляющей 121°С и более, на протяжении 10 минут и более для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению.
Пример 2: Получение гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сорбита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением
В целях получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сорбита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением, реализовали следующий далее технологический процесс.
Говоря конкретно, отвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, имеющую среднюю молекулярную массу 3 миллиона Да, гидроксид натрия, BDDE (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир) в качестве сшивателя и сорбит, соответственно.
Отвешивали 2 г гиалуроновой кислоты и отвешивали 10% (моль.) сорбита при расчете на массу гиалуроновой кислоты, а после этого их помещали в емкость смесителя и смешивали. В отдельную емкость (ампулу на 50 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (NaOH) при концентрации 0,25 н., так чтобы совокупная концентрация в реакции составляла 15% (масс./масс.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты, и добавляли и смешивали 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир (BDDE) в количестве 5% (моль.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты. Смесь, содержащуюся в данной емкости, помещали в емкость смесителя, в которой смешивали гиалуроновую кислоту и сорбит и смешивали при использовании смесителя, а после этого емкость смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой и завершали сшивание при одновременном выдерживании 30°С на протяжении 19 часов. Вслед за этим гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после завершения реакции, подвергали черновой резке до определенного размера и при использовании буферного раствора (буферного раствора, полученного в результате растворения 1,26 г/л гидрата (додекагидрата) моногидрофосфата натрия, 0,46 г/л гидрата (моногидрата) дигидрофосфата натрия, 7 г/л хлорида натрия и 3 г/л лидокаингидрохлорида в емкости колбы на 500 мл, содержащей воду для инъекций) его промывали и набухали один раз на протяжении 2 часов и два раза на протяжении 1 часа. После измельчения в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывание и набухание, его перемещали в емкость колбы на 150 мл и измеряли массу и добавляли буферный раствор, так чтобы масса геля достигала целевой массы, и, тем самым, проводили первичную коррекцию содержимого. При завершении первичной коррекции содержимого гидрогель из гиалуроновой кислоты экструдировали из емкости колбы на 150 мл и измельчали в порошок при использовании ячеистой сетки. После этого измельченный в порошок гидрогель из гиалуроновой кислоты переводили в емкость колбы на 150 мл и гомогенизировали, а вслед за этим измеряли содержимое и добавляли буферный раствор и, тем самым, проводили вторичную коррекцию содержимого. Гидрогель из гиалуроновой кислоты, для которого завершили коррекцию содержимого, стерилизовали тепловой обработкой при температуре, составляющей 121°С и более, на протяжении 10 минут и более для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению.
Пример 3: Получение гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании ксилита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением
В целях получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании ксилита и сшивателя в соответствии с настоящим изобретением, реализовали следующий далее технологический процесс.
Говоря конкретно, отвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, имеющую среднюю молекулярную массу 3 миллиона Да, гидроксид натрия, BDDE (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир) в качестве сшивателя и ксилит, соответственно.
Отвешивали 2 г гиалуроновой кислоты и отвешивали 10% (моль.) ксилита при расчете на массу гиалуроновой кислоты, а после этого их помещали в емкость смесителя и смешивали. В отдельную емкость (ампулу на 50 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (NaOH) при концентрации 0,25 н., так чтобы совокупная концентрация в реакции составляла 15% (масс./масс.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты, и добавляли и смешивали 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир (BDDE) в количестве 5% (моль.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты. Смесь, содержащуюся в данной емкости, помещали в емкость смесителя, в которой смешивали гиалуроновую кислоту и ксилит и смешивали при использовании смесителя, а после этого емкость смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой и завершали сшивание при одновременном выдерживании 30°С на протяжении 19 часов. Вслед за этим гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после завершения реакции, подвергали черновой резке до определенного размера и при использовании буферного раствора (буферного раствора, полученного в результате растворения 1,26 г/л гидрата (додекагидрата) моногидрофосфата натрия, 0,46 г/л гидрата (моногидрата) дигидрофосфата натрия, 7 г/л хлорида натрия и 3 г/л лидокаингидрохлорида в емкости колбы на 500 мл, содержащей воду для инъекций) его промывали и набухали один раз на протяжении 2 часов и два раза на протяжении 1 часа. После измельчения в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывание и набухание, его перемещали в емкость колбы на 150 мл и измеряли массу и добавляли буферный раствор, так чтобы масса геля достигала целевой массы, и, тем самым, проводили первичную коррекцию содержимого. При завершении первичной коррекции содержимого гидрогель из гиалуроновой кислоты экструдировали из емкости колбы на 150 мл и измельчали в порошок при использовании ячеистой сетки. После этого измельченный в порошок гидрогель из гиалуроновой кислоты переводили в емкость колбы на 150 мл и гомогенизировали, а вслед за этим измеряли содержимое и добавляли буферный раствор и, тем самым, проводили вторичную коррекцию содержимого. Гидрогель из гиалуроновой кислоты, для которого завершили коррекцию содержимого, стерилизовали тепловой обработкой при температуре, составляющей 121°С и более, на протяжении 10 минут и более для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению.
Сравнительный пример 1: Получение гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя в соответствии с обычным способом
В целях получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, сшитого при использовании сшивателя в соответствии с обычным способом, реализовали следующий далее технологический процесс.
Говоря конкретно, отвешивали натриевую соль гиалуроновой кислоты, имеющую среднюю молекулярную массу 3 миллиона Да, гидроксид натрия и BDDE (1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир) в качестве сшивателя, соответственно.
Отвешивали 2 г гиалуроновой кислоты и в отдельную емкость (ампулу на 50 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (NaOH) при концентрации 0,25 н., так чтобы совокупная концентрация в реакции составляла 15% (масс./масс.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты, и добавляли и смешивали 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир (BDDE) в количестве 5% (моль.) при расчете на массу гиалуроновой кислоты. Смесь, содержащуюся в данной емкости, помещали в емкость смесителя, в которой смешивали гиалуроновую кислоту и смешивали при использовании смесителя, а после этого емкость смесителя помещали в водяную баню с постоянной температурой и завершали сшивание при одновременном выдерживании 30°С на протяжении 19 часов. Вслед за этим гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный после завершения реакции, подвергали черновой резке до определенного размера и при использовании буферного раствора (буферного раствора, полученного в результате растворения 1,26 г/л гидрата (додекагидрата) моногидрофосфата натрия, 0,46 г/л гидрата (моногидрата) дигидрофосфата натрия, 7 г/л хлорида натрия и 3 г/л лидокаингидрохлорида в емкости колбы на 500 мл, содержащей воду для инъекций) его промывали и набухали один раз на протяжении 2 часов и два раза на протяжении 1 часа. После измельчения в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, для которого завершили промывание и набухание, его перемещали в емкость колбы на 150 мл и измеряли массу и добавляли буферный раствор, так чтобы масса геля достигала целевой массы, и, тем самым, проводили первичную коррекцию содержимого. При завершении первичной коррекции содержимого гидрогель из гиалуроновой кислоты экструдировали из емкости колбы на 150 мл и измельчали в порошок при использовании ячеистой сетки. После этого измельченный в порошок гидрогель из гиалуроновой кислоты переводили в емкость колбы на 150 мл и гомогенизировали, а вслед за этим измеряли содержимое и добавляли буферный раствор и, тем самым, проводили вторичную коррекцию содержимого. Гидрогель из гиалуроновой кислоты, для которого завершили коррекцию содержимого, стерилизовали тепловой обработкой при температуре, составляющей 121°С и более, на протяжении 10 минут и более для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению.
Сравнительные примеры 2, 3, 4, 5, 6 и 7
Доступные на коммерческих условиях кожные филлеры А, В, С, D, E и F подвергали испытаниям в качестве сравнительных примеров от 2 до 7, соответственно.
[Филлеры из сравнительных примеров 2-7]
A: Juvederm voluma lidocaine, Allergan
B: Restylane lidocaine, Galderma
C: YVOIRE volume s, LG Chem
D: Ellanse, Sinclair
E: Cleviel, Pharma Research Products
F: YVOIRE classic plus, LG Chem
Экспериментальный пример 1: Исследование вязкоэластических свойств гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, полученного в соответствии с настоящим изобретением
Для исследования реологических свойств в полученных примерах 1-2, 2 и 3 и сравнительном примере 1 их анализировали при использовании реометра. Условия анализа представляют собой нижеследующее.
<Условия анализа>
Условия анализа для вибрационного и ротационного реометра
В случае испытания на комплексную вязкость (ƞ*)
(1) Оборудование для испытаний: реометр (Anton Paar Ltd., MCR301)
(2) Частота: 1 Гц
(3) Температура: 25°С
(4) Деформация: 4%
(5) Геометрия измерений: Пластина на 25 мм
(9) Измерительный зазор: 1,0 мм
Результат анализа продемонстрирован в таблице 1.
[Таблица 1]
Как результат анализа комплексной вязкости каждого образца было подтверждено то, что комплексная вязкость из примеров 1-2, 2 и 3, которые представляли собой гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный при использовании маннита, сорбита и ксилита, которые являлись сахарными спиртами, была большей, чем в сравнительном примере 1, полученном при использовании только сшивателя.
Экспериментальный пример 2-1: Исследование стойкости к действию фермента in vitro (1)
При инъекции в организм гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты (НА) данный гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты подвергается прямому разложению, будучи атакованным гиалуронидазой для разложения. В результате прямой инъекции гиалуронидазы в образец возможными являются проверка тенденции к разложению и измерение стойкости к действию фермента. Говоря конкретно, при использовании реометра проводили испытание на стойкость к действию фермента in situ в соответствии со следующим далее методом.
После измельчения в порошок гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, полученного в примерах 1-2, 2 и 3, и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительного примера 1, соответственно, и после этого, в заключение, стерилизации 1 г стерилизованного образца отвешивали в ампулу на 50 мл, а вслед за этим добавляли и смешивали 200 мкл гиалуронидазы, полученной при 500 ед./мл. Образец, смешанный с ферментом, загружали в реометр и выставляли температуру на 37°С, а после этого в режиме реального времени измеряли комплексную вязкость образца. Чем выше будет стойкость к действию гиалуронидазы, тем выше будет остаточный уровень комплексной вязкости в сравнении с первоначальным значением комплексной вязкости. Это означает то, что чем выше будет остаточный уровень комплексной вязкости, тем выше будет стойкость к действию фермента. Исходя из измеренного результата рассчитывали значение %50 Hase (гиалуронидаза) (мин), и результат продемонстрирован в таблице 2. %50 Hase (мин) обозначает время, которое требуется для уменьшения комплексной вязкости гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты до 50% от его первоначальных физических свойств вследствие разложения под действием фермента. Говоря другими словами, это значит, что чем большим будет значение %50 Hase (мин), тем большей будет стойкость гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты.
[Таблица 2]
Как это подтверждено в таблице 2, значения %50 Hase (мин) из примеров от 1 до 3 для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, содержащего сахарный спирт и соответствующего настоящему изобретению, составляли 42 минуты, 45 минут и 41 минуту, соответственно, в то время как сравнительный пример 1, который представлял собой гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный по обычному способу, продемонстрировал значение %50 Hase (мин) 33 минуты, подтверждая, тем самым, демонстрацию гидрогелем из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующим настоящему изобретению, относительно высокой стойкости к действию фермента.
Экспериментальный пример 2-2: Исследование стойкости к действию фермента in vitro (2)
При использовании реометра проводили испытание на стойкость к действию фермента in situ в соответствии со следующим далее методом.
После измельчения в порошок гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, полученного в примере 1-1, и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительных примеров от 2 до 4, соответственно, и после этого, в заключение, стерилизации 1 г стерилизованного образца отвешивали в ампулу на 50 мл, а вслед за этим добавляли и смешивали 10 мкл гиалуронидазы, полученной при 500 ед./мл. Образец, смешанный с ферментом, загружали в реометр и выставляли температуру на 37°С, а после этого в режиме реального времени измеряли комплексную вязкость образца. Исходя из измеренного результата рассчитывали значение %50 Hase (мин), и результат продемонстрирован на ФИГУРЕ 1.
Как это подтверждено на ФИГУРЕ 1, значение %50 Hase (мин) из примера 1-1 для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению, составляло 32 минуты, в то время как сравнительные примеры от 2 до 4, которые представляли собой гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный по обычному способу, продемонстрировал значения %50 Hase (мин) 10, 4 и 6 минут, соответственно, подтверждая, тем самым, демонстрацию гидрогелем из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующим настоящему изобретению, в три и более раза более высокой стойкости к действию фермента.
Экспериментальный пример 3-1: Исследование стойкости к действию радикалов in vitro (1)
В целях измерения стойкости к индуцированному перокси-радикалами разложению гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, полученного в примере 1-1, и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительных примеров от 2 до 4 так же, как и в эксперименте на стойкость к действию фермента, при использовании реометра проводили измерения в режиме реального времени в соответствии со следующим далее методом.
После отвешивания 1 г стерилизованного образца в ампулу на 50 мл добавляли и смешивали 10 мкл 1-молярной перекиси водорода (Н2О2) и 10 мкл 1-молярной аскорбиновой кислоты. Смешанный образец загружали в реометр и температуру выставляли на 37°С, а после этого в режиме реального времени измеряли комплексную вязкость образца на протяжении 6 часов. Исходя из результата рассчитывали значение %50 Н2О2 (мин), что продемонстрировано на ФИГУРЕ 2. %50 H2О2 (мин) обозначает время, которое требуется для уменьшения комплексной вязкости гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты до 50% от его первоначальных физических свойств (комплексной вязкости) вследствие разложения под действием активных форм кислорода (радикалов). Говоря другими словами, это значит, что чем большим будет значение %50 H2О2 (мин), тем большей будет стойкость гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты к действию активных форм кислорода (радикалов).
Как это подтверждено на ФИГУРЕ 2, значение %50 H2О2 (мин) из примера 1 для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующего настоящему изобретению, составляло приблизительно 32 минуты, в то время как сравнительные примеры от 2 до 4, которые представляли собой доступный на коммерческих условиях гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, продемонстрировали значение %50 H2О2 (мин) 5, 7,5 и 18 минут, соответственно, подтверждая, тем самым, демонстрацию гидрогелем из сшитой гиалуроновой кислоты из примера 1-1, соответствующим настоящему изобретению, в три и более раза более высокой стойкости к действию фермента.
Экспериментальный пример 3-2: Исследование стойкости к действию радикалов in vitro (2)
В целях измерения стойкости к индуцированному перокси-радикалами разложению гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, содержащего сахарные спирты и полученного в примерах 1-2, 2 и 3, и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительного примера 1 так же, как и в эксперименте на стойкость к действию фермента, при использовании реометра проводили измерения в режиме реального времени в соответствии со следующим далее методом.
После отвешивания 1 г стерилизованного образца в ампулу на 50 мл добавляли и смешивали 10 мкл 1-молярной перекиси водорода (Н2О2) и 10 мкл 1-молярной аскорбиновой кислоты. Смешанный образец загружали в реометр и температуру выставляли на 37°С, а после этого в режиме реального времени измеряли комплексную вязкость образца на протяжении 6 часов. Исходя из результата рассчитывали значение %50 Н2О2 (мин), что продемонстрировано в таблице 3. %50 H2О2 (мин) обозначает время, которое требуется для уменьшения комплексной вязкости гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты до 50% от его первоначальных физических свойств (комплексной вязкости) вследствие разложения под действием активных форм кислорода (радикалов). Говоря другими словами, это значит, что чем большим будет значение %50 H2О2 (мин), тем большей будет стойкость гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты к действию активных форм кислорода (радикалов).
[Таблица 3]
Как это подтверждено в таблице 3, значение %50 H2О2 (мин) из примеров 1-2, 2 и 3 для гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, содержащего сахарный спирт и соответствующего настоящему изобретению, составляло 16,5 минуты, 18,4 минуты и 17,6 минуты, соответственно, в то время как сравнительный пример 1, который представлял собой гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный по обычному способу, продемонстрировал значение %50 H2О2 (мин) 14,6 минуты, подтверждая, тем самым, демонстрацию гидрогелем из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующим настоящему изобретению, относительно высокой стойкости к действию радикалов.
Экспериментальный пример 4: Исследование стойкости к действию тепла in vitro
Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, полученный в примере 1-1, и гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительных примеров от 2 до 4 хранили в суровых условиях (55°С±2°С, 75% ОВ±5% ОВ) на протяжении 4 часов и при использовании реометра измеряли комплексную вязкость при 0,02 Гц и рассчитывали остаточный уровень (%) комплексной вязкости, а результат продемонстрирован на ФИГУРЕ 3 (единица измерения: сПз). Остаточный уровень комплексной вязкости (%) представляет собой соотношение между текущей комплексной вязкостью и первоначальной комплексной вязкостью, и это означает, что чем большим будет данное значение, тем лучшей будет стабильность физических свойств (комплексной вязкости).
Как это продемонстрировано на ФИГУРЕ 3, у гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из примера 1-1, соответствующего настоящему изобретению, сохраняется (выдерживается) остаточный уровень комплексной вязкости, составляющий приблизительно 93% и более, в сопоставлении со сшитой гиалуроновой кислотой из сравнительных примеров от 1 до 3, в то время как сравнительные примеры от 2 до 4 демонстрируют низкий остаточный уровень комплексной вязкости, и поэтому может быть подтверждено, что гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий настоящему изобретению, демонстрирует исключительно превосходную стабильность к действию тепла.
Экспериментальный пример 5: Исследование биосовместимости in vivo
В целях подтверждения биосовместимости гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты, полученного в примере 1-1, и гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты из сравнительных примеров от 5 до 7 проводили испытание следующим образом.
При использовании кроликов-самцов (New Zealand White rabbit, Orient Bio) 6 грызунам на одну группу подкожно вводили 0,3 мл образца и по истечении 4 недель проводили гистопатологическое исследование. Эксперимент проводили в соответствии с документом ISO10993-6 Annex E (Examples of evaluation of local biological effects after implantation). Результат по кожной реакции оценивали при использовании индекса раздражения. Индекс раздражения представляет собой оценочное значение реакции ткани на вещество при введении вещества животному, и означает, что чем большим будет данное значение, тем меньшей будет биосовместимость, и отсутствие раздражения оценивали как 0,0~2,9, а слабое раздражение составляло 3,0~8,9, и умеренное раздражение составляло 9,0~15,0, а серьезное раздражение составляло > 15,0, и результат продемонстрирован на ФИГУРЕ 4. Как это продемонстрировано на ФИГУРЕ 4, индекс раздражения из сравнительных примеров 5 и 6 составляет приблизительно 18 и 8, соответственно, в то время как индекс раздражения из примера 1 демонстрирует значение индекса раздражения, составляющее приблизительно 5, и поэтому он обнаруживает низкий или подобный уровень в сопоставлении с доступными на коммерческих условиях филлерами для улучшения состояния кожи при морщинах, и, таким образом, можно было подтвердить то, что обнаруживается надлежащая биосовместимость в качестве филлера для инъекций в организм.
Группа изобретений относится к химии и косметологии, а именно: к гидрогелю из сшитой гиалуроновой кислоты для приготовления филлера для инъекции в мягкие ткани; к способу получения гидрогеля; к филлеру для инъекции в мягкие ткани, содержащему указанный гидрогель; к способу получения филлера; а также к способу улучшения состояния кожи при морщинах, способу восстановления объема мягкой ткани, способу увеличения объема мягкой ткани и способу контурной пластики, согласно которым осуществляют инъекцию указанного филлера. Предложенный гидрогель содержит гиалуроновую кислоту или ее соль, которые являются сшитыми при использовании сшивателя и полиола, где соль гиалуроновой кислоты выбрана из гиалуроната натрия, гиалуроната калия, гиалуроната кальция, гиалуроната магния, гиалуроната цинка, гиалуроната кобальта и гиалуроната тетрабутиламмония; сшиватель представляет собой бутандиолдиглицидиловый простой эфир; полиол представляет собой один или несколько полиолов, выбранных из сорбита, маннита и ксилита. Группа изобретений обеспечивает увеличение стойкости гидрогеля к действию гиалуронидазы, активных форм кислорода в организме и температуры хранения, улучшение стабильности филлера и уменьшение его токсичности в течение хранения. 8 н. и 13 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 табл., 11 пр.
1. Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты для приготовления филлера для инъекции в мягкие ткани,
содержащий гиалуроновую кислоту или ее соль, сшиватель и полиол,
где гиалуроновая кислота или ее соль являются сшитыми при использовании сшивателя и полиола,
где соль гиалуроновой кислоты выбирают из группы, состоящей из гиалуроната натрия, гиалуроната калия, гиалуроната кальция, гиалуроната магния, гиалуроната цинка, гиалуроната кобальта и гиалуроната тетрабутиламмония,
где сшиватель представляет собой бутандиолдиглицидиловый простой эфир,
где полиол представляет собой один или несколько полиолов, выбираемых из группы, состоящей из сорбита, маннита и ксилита.
2. Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты по п. 1, где гиалуроновая кислота или ее соль имеют среднюю молекулярную массу в диапазоне от 1000000 до 4000000 Да.
3. Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты по п. 1, характеризующийся степенью модифицирования в диапазоне от 3 до 100, где степень модифицирования (MoD) относится к молярному соотношению между количеством молей сшивателя, соединенного с гиалуроновой кислотой, и количеством молей единичной гиалуроновой кислоты, и это можно выразить так, как в представленном ниже уравнении 1
[Уравнение 1]
Степень модифицирования (MoD)=Количество молей сшивателя, соединенного с гиалуроновой кислотой/количество молей единичной гиалуроновой кислоты.
4. Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты по п. 1, содержащий гиалуроновую кислоту в количестве в диапазоне от 10 мг/г до 35 мг/г при расчете на общую массу гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты.
5. Гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты по п. 1, где сшиватель представляет собой 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир.
6. Способ получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты по п. 1, включающий
(i) смешивание гиалуроновой кислоты или ее соли с полиолом;
и
(ii) добавление смешанного раствора сшивателя и водного щелочного раствора к смеси гиалуроновой кислоты или ее соли и полиола.
7. Способ получения по п. 6, где полиол характеризуется концентрацией в диапазоне от 5 до 100 мол.% при расчете на гиалуроновую кислоту или ее соль.
8. Способ получения по п. 6, где сшиватель характеризуется концентрацией в диапазоне от 5 до 100 мол.% при расчете на гиалуроновую кислоту или ее соль.
9. Способ получения по п. 6, где водный щелочной раствор характеризуется концентрацией в диапазоне от 0,1 до 0,5 н.
10. Способ получения по п. 6, где водный щелочной раствор представляет собой водный раствор NaOH, KOH, NaHCO3, LiOH или их комбинацию.
11. Филлер для инъекции в мягкие ткани, содержащий гидрогель из сшитой гиалуроновой кислоты по п. 1.
12. Филлер по п. 11, где филлер предназначен для кожной инъекции.
13. Филлер по п. 11, где филлер предназначен для улучшения состояния кожи при морщинах, восстановления или увеличения объема мягкой ткани или контурной пластики.
14. Филлер по п. 11, содержащий, кроме того, анестетик.
15. Филлер по п. 14, где анестетик выбирают из группы, состоящей из амбукаина, амоланона, амилокаина, беноксината, бензокаина, бетоксикаина, бифенамина, бупивакаина, бутакаина, бутамбена, бутаниликаина, бутетамина, бутоксикаина, картикаина, хлорпрокаина, кокаэтилена, кокаина, циклометикаина, дибукаина, диметизохина, диметокаина, диперодона, дициклонина, экгонидина, экгонина, этилхлорида, этидокаина, бета-эукаина, эупроцина, феналкомина, формокаина, гексилкаина, гидрокситетракаина, изобутил-п-аминобензоата, лейцинокаинмезилата, левоксадрола, лидокаина, мепивакаина, меприлкаина, метабутоксикаина, метилхлорида, миртекаина, наэпаина, октакаина, ортокаина, оксетазаина, паретоксикаина, фенакаина, фенола, пиперокаина, пиридокаина, полидоканола, прамоксина, прилокаина, прокаина, пропанокаина, пропаракаина, пропипокаина, пропоксикаина, псевдококаина, пиррокаина, ропивакаина, салицилового спирта, тетракаина, толикаина, тримекаина, золамина и их солей.
16. Филлер по п. 11, содержащий, кроме того, буферный раствор и изотонический агент.
17. Способ получения филлера по п. 11, включающий следующие далее стадии:
(а) смешивание гиалуроновой кислоты или ее соли с полиолом;
(b) добавление смешанного раствора сшивателя и водного щелочного раствора к смеси гиалуроновой кислоты или ее соли и полиола для получения гидрогеля из сшитой гиалуроновой кислоты;
(с) черновая резка гидрогеля из гиалуроновой кислоты, полученного на стадии (b);
(d) промывание и набухание подвергнутого черновой резке гидрогеля из гиалуроновой кислоты, полученного на стадии (c), при использовании буферного раствора; и
(е) измельчение в порошок гидрогеля из гиалуроновой кислоты, подвергнутого промыванию и набуханию на стадии (d).
18. Способ улучшения состояния кожи при морщинах, включающий инъекцию филлера по п. 11.
19. Способ восстановления объема мягкой ткани, включающий инъекцию филлера по п. 11.
20. Способ увеличения объема мягкой ткани, включающий инъекцию филлера по п. 11.
21. Способ контурной пластики, включающий инъекцию филлера по п. 11.
| СТЕРИЛИЗУЕМАЯ ПУТЕМ НАГРЕВА ИНЪЕЦИРУЕМАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ГИАЛУРОНОВУЮ КИСЛОТУ ИЛИ ОДНУ ИЗ ЕЕ СОЛЕЙ, ПОЛИОЛЫ И ЛИДОКАИН | 2009 |
|
RU2493815C2 |
| WO 2020009555 A1, 09.01.2020 | |||
| ДЕРМАЛЬНАЯ ИНЪЕЦИРУЕМАЯ СТЕРИЛЬНАЯ КОМПОЗИЦИЯ | 2013 |
|
RU2653729C2 |
| US 20110171310 A1, 14.07.2011 | |||
| WO 2017001056 A1, 05.01.2017 | |||
| US 8574629 B2, 05.11.2013. | |||
