Производные кумарина, тиокумарина и хинолинона, обладающие противосудорожной активностью Российский патент 2020 года по МПК C07D215/42 C07D311/12 C07D311/14 C07D335/06 A61K31/37 A61K31/382 A61K31/4704 A61P25/28 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии и фармации, к области биологически активных соединений, конкретно к новым группам замещенных (кумарин-4-ил)аминокарбоновых кислот, (тиокумарин-4-ил)аминокарбоновых кислот, (2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)аминокарбоновых кислот и их производных общей формулы (1.1-1.3):

где R может быть атомом водорода или нитро-группой; n может принимать значения от 3 до 6; X может быть О (1.1), S (1.2), NH (1.3); Y может быть О и NH; Z может быть атомом водорода или низкомолекулярной алкильной группой,

которые могут быть использованы для расширения арсенала препаратов, применяемых для лечения эпилепсии и пароксизмальной активности, появляющейся при различных патологиях. Изобретение относится также к способам получения новых групп замещенных (кумарин-4-ил)аминокарбоновых кислот, (тиокумарин-4-ил)аминокарбоновых кислот, (2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)аминокарбоновых кислот и их производных.

Уровень техники

Эпилепсия представляет собой хроническое заболевание, характеризующееся повторными непроизвольными приступами нарушений двигательных, чувствительных, вегетативных, мыслительных или психических функций, возникающих вследствие чрезмерных нейронных разрядов в группе клеток различных областей головного мозга. Приступы могут варьироваться от короткой потери внимания или мышечных рывков до тяжелых и продолжительных судорог. Эпилептические припадки зависят от развившейся эпилептической системы, включающей образование доминантного очага и области вовлеченных структур мозга в патологический цикл. Классификация эпилептических симптомов разнообразна и включает дихотомию как по продолжительности приступов, так и по форме. Выделяют фокальные и генерализованные приступы, которые могут включать большое многообразие клинических признаков. Лечение эпилепсии заключается в снижении возбудимости нейронов эпилептогенного очага, к которому могут принципиально приводить либо торможение активирующих нейронов, либо активация ингибирующих нервных клеток [Gennaro, A.R. (1995) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th Ed., Vol. II, Easton, PA, Mack Publishing Co., pp. 1164-1165]. Современные противоэпилептические препараты включают вещества различных классов химических соединений и механизма действия, многие из которых известны довольно давно, но ни один из этих препаратов не является универсальным, одинаково успешно применяемым при любых формах эпилептических приступов. Так, например, карбамазепин высоко эффективен при судорожных приступах, но не помогает при абсансах.

Среди известных производных кумарина, тиокумарина и хинолина, наиболее близких по структуре к заявляемым соединениям, имеются вещества, обладающие различной фармакологической активностью. Известны производные кумарина проявляющие антимикробную и фунгицидную активность по отношению к таким микроорганизмам, как Staphylococcus aureus, Salmonella enterica, Sarcina Lutea, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Bacillus subtilis, Aspergillus niger, Candida albicans [N.S. . Could X-Ray Analysis Explain for the Differing Antimicrobial and Antioxidant Activity of Two 2-Arylamino-3-Nitro-Coumarins? // J. Chem. Crystallogr. - 2011. - Vol. 41, №4. - P. 545-451]. Установлена способность N-замещенных 4-аминохинолин-2-онов связываться с NMDA рецептором и ингибировать нейротоксичность [Jung J. Synthesis and biological properties of 4-substituted quinolin-2(1H)-one analogues // J. Heterocycl. Chem. - 2003. - Vol. 40, №4. - P. 617-623]. Описаны некоторые 4,7-дизамещенные кумарины, которые являются ингибиторами моноаминоксидазы Б (МАО-Б) [L. Pisani. Fine molecular tuning at position 4 of 2H-chromen-2-one derivatives in the search of potent and selective monoamine oxidase В inhibitors // Eur. J. Med. Chem. - 2013, - Vol. 70. - P. 723-739]. Ряд производных 3-нитро-4-аминокумаринов обладает нейротропной активностью [Savel'ev V.L. Investigations of pyrans and related compounds. Synthesis of 4-amino-3-nitrocoumarins // Chem. Heterocycl. Compd. - 1973. - Vol. 9. - P. 44-47]. N-замещенные 4-амино-1-тиокумарины и 4-аминокумарины оказывают влияние на центральную нервную систему (ЦНС), потенцируя наркотический эффект тиопентала натрия, проявляют антагонизм с амфетамином на модели амфетаминовой гиперактивности на мышах (AHA) и противосудорожное действие в тесте антагонизма с коразолом [Pryanishnikova N.Т. Synthesis and study of the pharmacological properties of 3,4-diaminocoumarins and 3-substituted 4-aminothiocoumarins // Pharm. Chem. J. - 1978. - Vol. 12, №12. - P. 1590-1593]. Описаны производные кумарина обладающие обезболивающим, противовоспалительным и жаропонижающим действием [Пат. ВЕ-610413-А1. Amino-substituted coumarins and processes for their preparation // A. Geigy, заявл. 19.10.1961, опубл. 16.05.1962].

В основу настоящего изобретения положена задача создания соединений с высокой противоэпилептической активностью в ряду N-замещенных 4-аминокумаринов, 4-амино-1-тиокумаринов и 4-аминохинолин-2-онов. На основании этого предлагается фармакофорная модель, включающая следующие фрагменты: кумариновый, тиокумариновый или хинолиновый гетероцикл с электроноакцепторным заместителем в 3 положении и, возможно, в 5 положении, и ω-аминокислота или ее производные в 4 положении. Цель может быть достигнута получением соединений, относящихися к группам замещенных (кумарин-4-ил)аминокарбоновых кислот, (тиокумарин-4-ил)аминокарбоновых кислот, (2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)аминокарбоновых кислот и их производных общей формулы (1.1-1.3).

Соединения общей формулы (1.1-1.3), их свойства и способ получения в специальной и патентной литературе не описаны.

В качестве примеров соединений формулы (1.1-1.3) настоящего изобретения следует назвать:

N-(3-нитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляная кислота (1.1а),

N-(3-нитрокумарин-4-ил)-6-аминогексановая кислота (1.1б),

N-(3,6-динитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляная кислота (1.1в),

метиловый эфир N-(3-нитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.1г),

метиловый эфир N-(3,6-динитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.1д),

N-(3-нитро-1-тиокумарин-4-ил)-4-аминомасляная кислота (1.2а),

метиловый эфир N-(3-нитротиокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.2б),

метиловый эфир N-(3-нитро-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.3а)

N-(3-нитро-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)-4-аминомасляная кислота (1.3б)

В соответствии с настоящим изобретением замещенные (кумарин-4-ил)аминокарбоновые кислоты и их производные общей формулы (1.1) можно получить по следующей общей схеме.

3-Нитро-4-хлоркумарины общей формулы (2), где R имеют вышеуказанные значения, вводят во взаимодействие с аминокарбоновыми кислотами или их производными общей формулы (3), где n, Y и Z и имеют вышеуказанные значения, в различных растворителях, таких как: бензол, толуол, этилацетат, диоксан, этанол, или подобных. Реакции могут проводиться как при избытке соединений (3), так и в присутствии оснований, таких как органические третичные амины, например, триэтиламин, или пиридин.

3-Нитро-4-хлоркумарин (2а, R=Н) является коммерчески доступным реагентом. 3,6-Динитро-4-хлоркумарин (2b, R=NO₂) получают из 4-гидроксикумарина в соответствии с методикой, описанной в литературе [, М., Trkovnik, М, , А., 1984, Syntheses and testing of 4-chloro-3,6-dinitrocoumarin, a new derivatizing agent useful in thin layer chromatography of amines and amino acids, Acta Pharm. Jugosl., 34: 81].

Строение веществ общей формулы (1.1) подтверждено данными спектров ЯМР ¹Н, а их чистота - данными элементного анализа.

В соответствии с настоящим изобретением замещенные (тиокумарин-4-ил)аминокарбоновые кислоты и их производные общей формулы (1.2) можно получить по следующей общей схеме.

3-Нитро-4-хлортиокумарин (4), вводят во взаимодействие с аминокарбоновыми кислотами или их производными общей формулы (3), где n, Y и Z имеют вышеуказанные значения, в различных растворителях, таких как: бензол, толуол, этилацетат, диоксан, этанол, или подобных. Реакции могут проводиться как при избытке соединений (3), так и в присутствии оснований, таких как органические третичные амины, например, триэтиламин, или пиридин.

3-Нитро-4-хлортиокумарин (4) получают по схеме:

При взаимодействии избытка тиофенола (5) с малоновой кислотой (6) при нагревании в среде фосфорилхлорида или тионилхлорида образуется дитиофениловый эфир малоновой кислоты (7). При нагревании соединения 7 в присутствии кислот Льюиса, таких как, например, галогениды алюминия и галогениды цинка, и в присутствии хлорида натрия, происходит образование 4-гидрокситиокумарина (8). Нитрование 4-гидрокситиокумарина (8) действием азотной кислоты или смесью азотной кислоты с другими кислотами, такими как, например, серная и уксусная кислоты, приводит к образованию 4-гидрокси-3-нитротиокумарина (9). Под действием хлорирующих агентов, таких как, например, фосфорилхлорид или тионилхлорид, в полярных апротонных растворителях соединение (9) превращается в 3-нитро-4-хлортиокумарин (4). В качестве полярных апротонных растворителей пригодны диметилформамид или диметилсульфоксид.

Строение веществ общей формулы (1.2) подтверждено данными спектров ЯМР ¹Н, а их чистота - данными элементного анализа.

В соответствии с настоящим изобретением замещенные (2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)аминокарбоновые кислоты и их производные общей формулы (1.3) можно получить по следующей общей схеме.

3-Нитро-4-хлорхинолин-2(1H)-он (10), вводят во взаимодействие с аминокарбоновыми кислотами или их производными общей формулы (3), где n, Y и Z имеют вышеуказанные значения, в различных растворителях, таких как: бензол, толуол, этилацетат, диоксан, этанол, или подобных. Реакции могут проводиться как при избытке соединений (3), так и в присутствии оснований, таких как органические третичные амины, например, триэтиламин, или пиридин. Также взаимодействие соединений 3 и 10 может производиться с использованием в качестве растворителя пиридина.

3-Нитро-4-хлорхинолин-2(1H)-он (10) получают по схеме:

При взаимодействии избытка анилина (11) с диэтиловым эфиром малоновой кислотой (12) при нагревании при температуре 100-230°С образуется бис-анилид малоновой кислоты (13). При нагревании соединения 13 в присутствии кислот Льюиса, таких как, например, галогениды алюминия и галогениды цинка, или в присутствии полифосфорной кислоты происходит образование 4-гидроксихинолин-2(1H)-она (14). Нитрование 4-гидроксихинолин-2(1H)-она (14) действием азотной кислоты или смесью азотной кислоты с другими кислотами, такими как, например, серная и уксусная кислоты, приводит к образованию 4-гидрокси-3-нитрохинолин-2(1H)-она (15). Под действием хлорирующих агентов, таких как, например, фосфорилхлорид или тионилхлорид, в присутствии избытка четвертичных аммонийных солей в полярных апротонных растворителях соединение (15) превращается в 3-нитро-4-хлорхинолин-2(1H)-он (10). В качестве полярных апротонных растворителей пригодны ацетонитрил, диметилформамид или диметилсульфоксид. В качестве четвертичных аммонийных солей пригодны галогениды тетраалкиламмония, например, бромид тетрабутиламмония, галогениды триалкилбензиламмония, например, бромид трибутилбензиламмония.

В соответствии с настоящим изобретением замещенные (2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)аминокарбоновые кислоты общей формулы (1.3'') можно получить по следующей общей схеме.

Алкиловые эфиры (2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)аминокарбоновых кислот общей формулы (1.3'), где n имеет вышеуказанные значения, a Q может быть ОСН₃ и ОС₂Н₅ группами вводят во взаимодействие с гидроксидами щелочных или щелочноземельных металлов при нагревании в смеси воды с алкиловыми спиртами, в результате чего образуются соединения 1.3''.

Строение веществ общей формулы (1.3) подтверждено данными спектров ЯМР ¹Н, а их чистота - данными элементного анализа.

Экспериментальная химическая часть.

Пример 1.

N-(3-нитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляная кислота (1.1а).

К раствору 10 ммоль (2.25 г) 3-нитро-4-хлоркумарина (2а) в 20 мл диоксана добавляют 22 ммоль (2.34 г) 4-аминомасляной кислоты (3а). Реакционную массу кипятят в течение двух часов, после чего охлаждают. Получившийся осадок отфильтровывают, промывают 10 мл диоксана, трижды дистиллированной водой по 10 мл. Полученное вещество перекристаллизовывают из 80 мл этанола, получая 2.41 г желтого кристаллического вещества (выход 83%). Т.пл. 210-211°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 1.90 (т.т, 2Н, NHCH₂CH₂, ³J₁=³J₂=7.1); 2.30 (т, 2Н, СН₂СООН, ³J=7.1); 3.18 (т.т, 2H, NHCH₂, ³J=7.1); 7.43 (м, 2Н, НС(5), НС(6)); 7.73 (д.д, 1Н, НС(7), ³J=8.1); 8.33 (д, 1Н, НС(8), ²J=8.1); 8.43 (уш. с, 1Н, NH). Найдено (%): С, 53.46; Н, 4.24; N, 9.61. C₁₃H₁₃N₂O₆. Вычислено (%): С, 53.63; Н, 4.14; N, 9.59.

Пример 2.

N-(3-нитрокумарин-4-ил)-6-аминогексановая кислота (1.1б).

Получают в соответствии с Примером 1 из 3-нитро-4-хлоркумарина (2а) и 6-аминогексановой кислоты (3б). Выход 63% (желтые кристаллы). Т.пл. 163-165°С. Спектр ЯМР ¹H (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 1.30 (м, 2Н, СН₂СН₂СН₂СООН); 1.49 (м, 2Н, СН₂СН₂СООН); 1.65 (м, 2Н, NHCH₂CH₂); 2.19 (т, 2Н, СН₂СООН, ³J=7.1); 3.15 (м, 2Н, NHCH₂); 7.42 (м, 2Н, НС(5), НС(6)); 7.73 (т, 1Н, НС(7), ³J=7.6); 8.31 (д, 1Н, НС(8), ²J=7.6); 8.51 (уш. с, 1Н, NH). Найдено (%): С, 56.21; Н, 5.11; N, 8.72. C₁₅H₁₅N₂O₆. Вычислено (%): С, 56.25; Н, 5.04; N, 8.75.

Пример 3.

N-(3,6-динитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляная кислота (1.1в).

Получают в соответствии с Примером 1 из 3,6-динитро-4-хлоркумарина (2б) и 4-аминомасляной кислоты (3а). Выход 74% (бледно-желтые кристаллы). Т.пл. 183-185°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 1.91 (т.т, 2Н, NHCH₂CH₂, ³J₁=7.2,³J₂=6.8); 2.30 (т, 2Н, СН₂СО, ³J=7.2); 3.17 (д.т, 2Н, NHCH₂, ³J₁=6.8, ³J₂=5.0); 7.62 (д, 1Н, Н(8), ³J=9.1); 8.50 (д.д, 1Н, Н(7), ³J=9.1, ⁴J=2.3); 8.85 (уш. с, 1Н, NH); 9.41 (д, 1Н, Н(5), ⁴J=2.3), 12.18 (уш.с, 1Н, ОН). Найдено (%): С, 46.21; Н, 3.50; N, 12.62. C₁₃H₁₁N₃O₈. Вычислено (%): С, 46.30; Н, 3.29; N, 12.46.

Пример 4.

Метиловый эфир N-(3-нитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.1г).

К раствору 10 ммоль (2.25 г) 3-нитро-4-хлоркумарина (2а) в 80 мл толуола при перемешивании добавляют тщательно перемещенную двухфазную смесь 10 ммоль (1.54 г) хлоргидрата метилового эфира 4-аминомасляной кислоты (3в) в минимальном объеме воды (8 мл) и 20 моль (2.02 г) триэтиламина. Смесь перемешивают при комнатной температуре 30 минут. Отфильтровывают выпавший осадок, промывают 50 мл 1% HCl и 100 мл дистиллированной воды, просушивают на фильтре, получая 2.30 г бледно-желтого кристаллического вещества (выход 74%). Т.пл. 125-126°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 1.92 (т.т, 2Н, NHCH₂CH₂, ³J₁=³J₂=7.1); 2.38 (т, 2H, СН₂СООН, ³J=7.1); 3.19 (м, 2Н, NHCH₂); 3.55 (с, 3Н, ОСН₃); 7.43 (м, 2Н, НС(5), НС(6)); 7.74 (т, 1Н, НС(7), ³J=8.3); 8.33 (д, 1Н, НС(8), ²J=8.3); 8.42 (уш. с, 1Н, NH). Найдено (%): С, 54.78; Н, 4.72; N, 9.06. C₁₅H₁₅N₂O₆. Вычислено (%): С, 54.90; Н, 4.61; N, 9.15.

Пример 5.

Метиловый эфир N-(3,6-динитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.1д).

Получают в соответствии с Примером 4 из 3,6-динитро-4-хлоркумарина (2б) и гидрохлорида метилового эфира 4-аминомасляной кислоты (3в). Выход 79% (бледно-желтые кристаллы). Т.пл. 130-131°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 1.94 (т.т, 2Н, NHCH₂CH₂, ³J₁=7.3, ³J₂=6.8); 2.40 (т, 2Н, СН₂СО, ³J=7.3); 3.17 (д.т, 2Н, NHCH₂, ³J₁=6.8, ³J₂=5.0); 3.57 (с, 3Н, ОСН₃); 7.64 (д, 1Н, Н(8), ³J=9.1); 8.51 (д.д, 1Н, Н(7), ³J=9.1, ⁴J=2.5); 8.83 (т, 1Н, NH, ³J=5.0); 9.4 (д, 1Н, Н(5), ⁴J=2.5). Найдено (%): С, 48.08; Н, 3.62; N, 12.11. C₁₄H₁₃N₃O₈. Вычислено (%): С, 47.87; Н, 3.73; N, 11.96.

Пример 6.

N-(3-нитро-1-тиокумарин-4-ил)-4-аминомасляная кислота (1.2а).

6.1. Дитиофениловый эфир малоновой кислоты (7).

Смешивают 75 ммоль (7.81 г) малоновой кислоты, 80 ммоль (12.27 г) фосфорилхлорида и 150 моль (16.52 г) тиофенола. Полученный раствор кипятят на масляной бане 40 минут. Охлаждают раствор и добавляют 80 мл этанола. Образующийся осадок отфильтровывают и промывают 50 мл этанола, получая кристаллы бледно-голубого цвета. После перекристаллизации из 30 мл этанола получают 17.90 г белого кристаллического вещества (выход 82%). Т. пл. 94-95°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д.): 4.33 (с, 2Н, СН₂); 7.36-7.54 (м, 10Н, 2Ph).

6.2. 4-Гидрокси-1-тиокумарин (8).

К 40 ммоль (11.52 г) дитиофенилового эфира малоновой кислоты (7) добавляют 120 ммоль (16.00 г) хлорида алюминия и 80 ммоль (4.68 г) хлорида натрия и перемешивают. Смесь нагревают до 195°С и поддерживают температуру в течение 25 минут. После охлаждения в реакционную массу вливают 200 мл 1%-ной соляной кислоты и 200 мл этилацетата, смесь перемешивают. Органический слой отделяют, добавляют к нему 200 мл 10% раствора гидроксида натрия, смесь перемешивают. Водный слой отделяют и подкисляют его до рН=4, выпавший осадок отфильтровывают, дважды промывают 40 мл дистиллированной воды. Получают 3.56 г серо-оранжевого кристаллического вещества (выход 62%). Т.пл. 210-211°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 3.61 (уш. с, 1Н, ОН). 6.14 (с, 1Н, НС(3)); 7.48 (м, 2Н, НС(5), НС(6)); 7.59 (т, 1Н, НС(7), ³J=8.0); 8.15 (д, 1Н, НС(8), ²J=8.0).

6.3. 4-Гидрокси-3-нитро-1-тиокумарин (9).

К суспензии 18 ммоль (3.21 г) 4-гидрокситиокумарина (8) в 80 мл ледяной уксусной кислоты добавляют смесь 20 ммоль (1.40 мл) 65%-ной азотной кислоты и 20 ммоль (1.14 мл) 96%-ной серной кислоты. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Выпавший осадок отфильтровывают, дважды промывают 10 мл дистиллированной воды, растворяют в кипящем толуоле. Горячий раствор пропускают через активированный уголь и упаривают под досуха, получая 3.78 г желтого порошка (выход 92%). Т.пл. 149-152°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 7.38 (м, 2Н, НС(5), НС(6)); 7.44 (т, 1Н, НС(7), ³J=8.1); 8.17 (д, 1Н, НС(8), ³J=8.1).

6.4. 3-Нитро-4-хлор-1-тиокумарин (4).

Растворяют 4 ммоль (0.373 мл) фосфорилхлорида в 2.5 мл диметилформамида и перемешивают в течение 30 минут. К раствору добавляют 4 ммоль (0.89 г) 4-гидрокси-3-нитротиокумарина (9) в 9.6 мл диметилформамида, и полученную смесь перемешивают 2 часа. К реакционной смеси добавляют 40 мл холодной воды, выпавший осадок отфильтровывают, трижды промывают 10 мл дистиллированной воды и перекристаллизовывают из 10 мл этанола. Получают 0.85 г темно-желтых кристаллов (выход 88%). Т.пл. 171-173°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 7.77 (м, 1Н, НС(5)); 7.89 (м, 1Н, НС(6)); 7.94 (м, 1Н, НС(7)), 8.38 (д, 1Н, НС(8), ²J=8.1).

6.5. N-(3-нитро-1-тиокумарин-4-ил)-4-аминомасляная кислота (1.2а).

Получают в соответствии с Примером 1 из 3-нитро-4-хлор-1-тиокумарина (4) и 4-аминомасляной кислоты (3а). Выход 59% (желтые кристаллы). Т.пл. 215-216°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 1.90 (м, 2Н, NHCH₂CH₂); 2.30 (т, 2Н, СН₂СООН, ³J=7.1); 3.18 (м, 2Н, NHCH₂); 7.43 (м, 2Н, НС(5), НС(6)); 7.73 (т, 1Н, НС(7), ³J=8.1); 8.33 (д, 1Н, НС(8), ³J=8.1); 8.43 (уш. с, 1Н, NH). Найдено (%): С, 50.64; Н, 3.69; N, 9.33; S, 10.41. C₁₃H₁₁N₂O₅S. Вычислено (%): С, 50.65; Н, 3.92; N, 9.09; S, 10.40.

Пример 7.

Метиловый эфир N-(3-нитротиокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.2б).

Получают в соответствии с Примером 4 из 3-нитро-4-хлор-1-тиокумарина (4) и хлоргидрата метилового эфира 4-аминомасляной кислоты (3в). Выход 77% (бледно-желтые кристаллы). Т.пл. 125-126°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 1.92 (т.т, 2Н, NHCH₂CH₂, ³J₁=³J₂=7.1); 2.38 (т, 2Н, СН₂СООН, ³J=7.1); 3.19 (м, 2Н, NHCH₂); 3.55 (с, 3Н, ОСН₃); 7.43 (м, 2Н, НС(5), НС(6)); 7.74 (т, 1Н, НС(7), ³J=8.3); 8.33 (д, 1Н, НС(8), ³J=8.3); 8.42 (уш. с, 1Н, NH). Найдено (%): С, 52.06; Н, 4.22; N, 8.87; S, 9.87. C₁₄H₁₄N₂O₅S. Вычислено (%): С, 52.17; Н, 4.38; N, 8,69; S, 9,95.

Пример 8.

Метиловый эфир N-(3-нитро-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.3а).

8.1. Бис-анилид малоновой кислоты (13).

Смесь 200 ммоль (18.64 г) анилина (11) и 100 ммоль (16.02 г) диэтилового эфира малоновой кислоты (12) нагревают при температуре 200°С в течение 8 часов. После охлаждения реакционной смеси образующийся осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из этанола, получая 19.3 г белого порошка (выход 76%). Т.пл. 228-230°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 3.48 (с, 2Н, СН₂); 7.07 (д.д, 2Н, 2 Н(4), ³J₁=7.6, ³J₂=7.4); 7.32 (д.д, 4H, 2 Н(3), 2 Н(5), ³J₁=7.6, ³J₂=8.1); 7.60 (д, 4Н, 2Н (2), 2Н (6), ³J=8.1), 10.17 (c, 2H, 2NH).

8.2. 4-Гидроксихинолин-2(1H)-он (14).

Смесь 50 ммоль (12.72 г) бис-анилида малоновой кислоты (13) и 80 г полифосфорной кислоты нагревают при температуре 215°С в течение 5 часов и выливают в 400 г льда. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой до нейтральной реакции и высушивают, получая 5.88 г бледно-желтого порошка (выход 73%). Т.пл. >300°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 5.74 (с, 1Н, НС(3)); 7.13 (д.д, 1Н, Н(6), ³J₁=8.0, ³J₂=7.1); 7.27 (д, 1Н, Н(5), ³J=8.0); 7.48 (д.д, 1Н, Н(7), ³J₁=8.0, ³J₂=7.1); 7.77 (д, 1Н, Н(8), ³J=8.0); 11.96 (с, 1Н, NH).

8.3. 4-Гидрокси-3-нитрохинолин-2(1H)-он (15).

Суспензию 20 ммоль (3.22 г) 4-гидроксихинолин-2(1H)-она (14) в 30 мл азотной кислоты (d=1.33 г/мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 10 минут и при температуре 75°С в течение 20 минут. Полученный раствор выливают в 150 мл ледяной воды. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой до нейтральной среды и высушивают, получая 3.83 г оранжевого порошка (выход 93%). Т.пл. 243-245°С. Спектр ЯМР ¹H (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 7.27 (м, 2Н, Н(5), Н(6)); 7.65 (м, 1Н, Н(7)); 8.02 (д, 1Н, Н(8), ³J=7.6); 11.96 (с, 1Н, NH).

8.4. 3-Нитро-4-хлорхинолин-2(1H)-он (10).

К раствору 60 ммоль (21.38 г) бромида три-н-бутилбензиламмония в 60 мл ацетонитрила добавляют 15 ммоль (3.09 г) 4-гидрокси-3-нитрохинолин-2(1H)-она (15) и 36 ммоль (5.52 г) фосфорилхлорида. Смесь перемешивают при температуре 40°С в течение 30 минут, после чего кипятят с обратным холодильником в течение 22 минут и упаривают досуха. К остатку приливают 60 мл воды и перемешивают смесь при комнатной температуре в течение 3 часов. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают водой до нейтральной реакции и перекристаллизовывают из 20 мл ацетона, получая 2.02 г желтого порошка (выход 60%). Т.пл. 231-233°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 7.46 (м, 2Н, Н(5), Н(6)); 7.80 (м, 1Н, Н(7)); 8.01 (д, 1Н, Н(8), ³J=7.9); 11.03 (с, 1Н, NH).

8.5. Метиловый эфир N-(3-нитро-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.3а).

К раствору 1.25 ммоль (0.28 г) 3-нитро-4-хлорхинолин-2(1H)-она (10) в 10 мл пиридина добавляют 5 ммоль (0.77 г) хлоргидрата метилового эфира 4-аминомасляной кислоты (3в). Реакционную массу кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов. Растворитель упаривают досуха, к остатку добавляют 15 мл воды, и продукт дважды экстрагируют 15 мл дихлорметана. Органический слой упаривают досуха, и остаток перекристаллизовывают из этанола, получая 0.20 г темно-желтого порошка (выход 63%). Т.пл. 208-210°С. Спектр ЯМР ¹H (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 1.98 (м, 2Н, NHCH₂CH₂); 2.36 (т, 2Н, СН₂СООН, ³J=7.1); 3.11 (м, 2Н, NHCH₂); 3.55 (с, 3Н, ОСН₃); 7.26 (м, 2Н, НС(5), НС(6)); 7.42 (с, 1Н, NH(Ar)); (7.58 (м, 1Н, НС(7)); 8.21 (д, 1Н, НС(8), ³J=8.1); 11.53 (уш. с, 1Н, NH).

Пример 9.

N-(3-нитро-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)-4-аминомасляная кислота (1.3б).

Смесь 0.66 ммоль (0.2 г) метилового эфира N-(3-нитро-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.3а), 1.3 ммоль (52 мг) гидроксида натрия, 20 мл воды и 20 мл метанола кипятят с обратным холодильником в течение 40 минут, охлаждают до комнатной температуры, подкисляют 1%-ной соляной кислотой до кислой реакции, выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат, получая 0.12 г темно-желтого порошка (выход 64%). Т.пл. 119-120°С. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 1.85 (м, 2H, NHCH₂CH₂); 2.28 (т, 2Н, СН₂СООСН₃, ³J=7.2); 3.08 (м, 2Н, NHCH₂); 7.24 (м, 1Н, НС(6)); 7.27 (д, 1Н, Н(8), ³J=7.6); 7.43 (м, 1Н, NHCH₂); 7.58 (м, 1Н, НС(7)); 8.21 (д, 1Н, НС(5), ³J=8.2); 11.53 (уш. с, 1Н, NH(хинолина)), 12.16 (уш. с, 1Н, СООН). Найдено (%): С, 53.58; Н, 4.45; N, 14.40. C₁₃H₁₃N₃O₅. Вычислено (%): С, 53.61; Н, 4.50; N, 14.43.

Экспериментальная фармакологическая часть.

Противосудорожную активность новых соединений изучали на общепринятых моделях первично-генерализованных судорог в экспериментах на мышах и крысах.

Экспериментальных животных получали из питомника «Столбовая» ГУ НЦБМТ (Московская область). Содержание животных соответствовало правилам лабораторной практики (GLP) и нормативным документам «Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию вивариев», утвержденным Главным Государственным санитарным врачом 06.04.1973 г. №1045-73 и Приказом МЗ и социального развития РФ от 23 августа 2010 г. №708н «Об утверждении Правил лабораторной практики».

Статистическую обработку результатов проводили с помощью MS Excel 2010 и BioStat 2009 (Analyst Soft Inc.). Нормальность распределения данных определяли по критерию Шапиро-Уилка. Достоверность различий значений между группами определяли с помощью непараметрических критериев: Крускала-Уолиса и точного критерия Фишера.

Пример 1.

Противосудорожное действие производных кумарина, тиокумарина и хинолинона на модели первично-генерализованных судорог, вызванных максимальным электрошоком.

Эксперименты проводили на белых беспородных мышах-самцах, массой 20-26 г. Каждая доза соединения исследовалась на 8-10 животных. Методика максимального электрошока (МЭШ) моделирует первично-генерализованные судороги - так называемые «большие» (Grantmal) судорожные припадки и является базисным тестом при оценке действия веществ с противосудорожной активностью (Воронина Т.А., Неробкова Л.Н. Методические указания по изучению противосудорожной активности фармакологических веществ. «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств» Часть. 1. ФГБУ «НЦЭМСП». Москва, Изд-во ГрифиК, 2012, Глава 14, с 235-250; Loscher et al., The role of technical, biological and pharmacological factors in the laboratory evaluation of anticonvulsant drugs. II. Maximal electroshock seizure models, Epilepsy Res., 1991, v. 8, p. 79-94; Swinyard E.A.- Laboratory evaluation of antiepileptic drugs. Reviewof laboratory methods, Epilepsia, 1969, v. 10, pp. 107-119).

Максимальный электросудорожный припадок (МЭШ) создавали с использованием сертифицированной установки «Rodent Shocker RS», type 221 (Harvard Apparatus, GmbH, Германия). Животные через специальные корнеальные электроды получали электрические стимулы (режим 500/300 V/mA: 144 mA, длительностью 0,3 с). Регистрировали следующие показатели: тоническую экстензию задних и передних конечностей и гибель животных. Противосудорожный эффект заявляемых соединений оценивали по способности предупреждать развитие тонической экстензии и гибель животных. Соединения вводили внутрибрюшинно за 40 минут до проведения МЭШ.

Установлено, что проведение МЭШ вызывало тоническую экстензию и гибель 75-90% мышей. Соединение 1.1а в диапазоне доз 20-40 мг/кг не оказывало достоверного влияния на судороги и показатель выживаемости в тесте антагонизма с МЭШ, а в дозах от 60 до 80 мг/кг уменьшало число животных с тонической экстензией и увеличило количество выживших животных по сравнению с контролем (Таблица 1).

Соединение 1.1 г в дозах от 1 до 60 мг/кг не оказывало выраженного действия на судороги мышей, вызванные МЭШ. Только в дозах 10 и 30 мг/кг под влиянием соединения 1.1 г наблюдалось увеличение показателя выживаемости по сравнению с контролем до 38% (Таблица 1). Соединение 1,2а изменяло кривую выживаемости в зависимости от дозы, и эти изменения носили куполообразный характер. Так, в дозах 20 и 40 мг/кг соединение 1.2а способствовало устранению тонической экстензии и увеличивало выживаемость мышей до 50 и 63%, соответственно, тогда как в диапазоне доз от 60 до 120 мг/кг эффективность соединения 1.2а снижалась по показателю выживаемость до 38% (Таблица 1). Соединения 1.1в, 1.1д в дозах от 10 до 40 мг/кг и соединение 1.2б в дозах от 10 до 60 мг/кг не оказывали достоверного влияния на судороги и показатель выживаемости в тесте антагонизма с МЭШ. Соединение 1.3а в дозе 12,5 мг/кг увеличивало показатель выживаемости по отношению к контролю до 63%, но с повышением дозы до 25 и 50 мг/кг его противосудорожный эффект не регистрировался (Таблица 1).

Примечание: * - значимость отличий от контрольной группы, при р≤0,05 (точный критерий Фишера).

Таким образом, установлено, что в тесте антагонизма с МЭШ соединение 1.1а в диапазоне доз от 60 до 80 мг/кг способствует увеличению количества выживших животных до 60% по сравнению с контрольной группой, выживаемость которой составила 10%. Соединения 1.2а и 1.3а продемонстрировали активность в тесте антагонизма с МЭШ в дозах 40 мг/кг и 12,5 мг/кг, соответственно, на уровне тенденции.

Пример 2.

Противосудорожное действие производных кумарина, тиокумарина и хинолинона на модели первично-генерализованных судорог, вызванных коразолом.

Эксперименты проводили на белых беспородных мышах-самцах, массой 20-26 г. Каждая доза соединения исследовалась на 8-10 животных. Тест антагонизма с коразолом (пентилентетразол, Sigma-Aldrich, США) - антагонистом ГАМК_А рецепторов является базисной методикой при оценке действия веществ с противосудорожной активностью (Воронина Т.А., Неробкова Л.Н. Методические указания по изучению противосудорожной активности фармакологических веществ. «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств» Часть. 1. ФГБУ «НЦЭМСП». Москва, Изд-во ГрифиК, 2012, Глава 14, с 235-250; Loscher et al., The role of technical, biological and pharmacological factors in the laboratory evaluation of anticonvulsant drugs. III. Pentylenetetrazolseizuremodels. EpilepsyRes., 1991, v. 8, p. 171-189). В этой методике судороги вызываются химическим воздействием и моделируют первично-генерализованные судороги при так называемых «малых» (Petit mal) судорожных припадках. Опытным группам животных внутрибрюшинно вводили исследуемые вещества, растворенные в физиологическом растворе, за 40 минут до коразола. Контрольным животным внутрибрюшинно вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме. Для получения судорожного припадка животным подкожно в область шейного отдела спины вводился коразол в дозе 100 мг/кг, вызывающей судороги у 97% мышей. Животные наблюдались в течение 30-60 мин. после инъекции коразола. Регистрировали число погибших животных.

Установлено, что у контрольных животных после введения коразола в дозе 100 мг/кг судорожные проявления развивались в следующей последовательности. 1. Одно или более миоклонических подергиваний всего тела - 100% мышей. 2. Повторяющиеся клонические судороги передних и/или задних конечностей длительностью более чем 3 секунды без потери рефлекса переворачивания - 100% мышей. 3. Генерализованные клонические судороги передних и задних конечностей с утратой рефлекса переворачивания - 90% мышей. 4. Гибель животных - 100% мышей.

Установлено, что соединения 1.1а в диапазоне доз от 20 до 80 мг/кг и 1.1в в диапазоне доз от 10 до 40 мг/кг не предотвращали развитие вызванных коразолом судорог и гибель животных (Таблица 2). Соединение 1.1 г в дозе 40 мг/кг способствовало устранению судорожных проявлений, вызванные коразолом, и гибель у 38% мышей (Таблица 2). Соединение 1.1д оказывало наиболее выраженное защитное действие во всех исследуемых дозах от 10 до 40 мг/кг, предотвращая гибель у 50-63% животных. Соединения 1.2а и 1.2б также проявили противосудорожное действие в дозах от 10 до 40 мг/кг, увеличивая выживаемость мышей максимально до 50%. Соединение 1.3а проявило противосудорожную активность в дозе 12,5 мг/кг, увеличивая выживаемость мышей до 56% (Таблица 2).

Таким образом, можно отметить, что наиболее выраженным противосудорожным эффектом в данном эксперименте обладают соединение 1.1д в дозах 10, 20 и 40 мг/кг, соединения 1.2а, 1.2б в дозе 10 мг/кг и 1.3а в дозе 12,5 мг/кг, которые не только увеличивают латентный период возникновения первого судорожного приступа, но и предотвращают развитие вызванных коразолом судорог и гибель животных.

Примечание: * - значимость отличий от контрольной группы, при р≤0,05 (точный критерий Фишера); # - тенденция к достоверности отличий от контрольной группы, при р≤0,1 (точный критерий Фишера).

Таким образом, проведенные исследования показали, что среди изученных соединений наибольшей противосудорожной активностью обладает соединение 1.1д в дозах 20 и 40 мг/кг, предупреждая гибель у 63% животных. Соединения 1.2а, 1.2б в дозе 10 мг/кг и 1.3а в дозе 12,5 мг/кг статистически достоверно предотвращают развитие вызванных коразолом генерализованных судорог и гибель 50-56% животных.

Пример 3.

Противосудорожное действие N-(3-нитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.1а), на первично-генерализованные судороги, вызванные бемегридом у крыс с хронически вживленными электродами в различные структуры мозга.

Первично генерализованная эпилептиформная активность (ЭпА) у крыс с хронически вживленными электродами вызвали путем внутримышечного введения 0.5% раствора бемегрида в дозе 10 мг/кг. Операцию по вживлению хронических электродов проводили под нембуталовым наркозом (45 мг/кг) за 5 дней до проведения эксперимента. Электроды вживляли в сенсомоторную кору, дорзальный гиппокамп (поле СА3) хвостатое ядро и латеральный гипоталамус. Регистрация биопотенциалов мозга осуществлялась на 21-канальном нейрографе «Нейросенсор», работающем на базе IBM-РС 586 с установленными фильтрами на 32 Гц, с постоянной времени (0,03 с) и с записью цифровой компьютерной ЭЭГ для последующей обработки данных электрограмм исследуемых структур. Соединение 1.1а вводили за 30 минут до введения бемегрида, так чтобы пик его действия приходился на пик активности бемегрида.

Бемегрид в дозе 10 мг/кг вызывал отчетливую ЭпА в электрограммах всех исследуемых структур (сенсомоторная кора, дорзальный гиппокамп, хвостатое ядро и латеральный гипоталамус). Эпилептифармная активность появлялась у всех животных уже через 5 минут после введения эпилептогена и через 15 минут достигала максимальных значений.

Предварительное введение соединения 1.1а в дозе 50 мг/кг вызывало значительное угнетение ЭпА, вызванное бемегридом, в сенсомоторной коре, хвостатом ядре, дорзальном гиппокампе и гипоталамусе. Достоверное снижении числа разрядов ЭпА в сенсомоторной коре и хвостатом ядре наблюдалось уже через 5 минут после введения бемегрида, достигая максимального эффекта через 30 минут, что выражалось в сокращении (в 2-2,7 раза) числа разрядов ЭпА во всех исследуемых структурах (Таблица 3).

* - отличие от фоновых показателей, при р≤0,05** при р≤0,01 (критерий Крускала-Уолиса)

Таким образом, предварительное введение соединения 1.1а в дозе 50 мг/кг уменьшает выраженность эпилептифармной активности, вызванной введением бемегрида, с максимальным эффектом в гиппокампе, что наблюдалось по сокращению числа разрядов в 2,7 раза.

Пример 4.

Противосудорожное действие N-(3-нитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.1а), на парциальные (фокальные) вторично-генерализованные судороги в хроническом эксперименте у крыс с хроническим кобальт-индуцированным эпилептогенным очагом.

Исследования выполнены на самцах аутбредных половозрелых белых крыс массой 220-250 г.Исследование проведено с использованием методики создания хронического эпилептогенного очага, вызванного аппликацией кобальта, которая моделирует парциальные (фокальные) и вторично-генерализованные судороги в хроническом эксперименте. Методика широко используется для изучения механизмов действия противосудорожных веществ в России и за рубежом (Авакян Г.Н., Неробкова Л.Н., Воронина Т.А., Маркина Н.В. Митрофанов А.А. Влияние карбамазепина на структурно-функциональные связи в развитии эпилептической системы // Экспериментальная и клиническая фармакология, 2002, №2, с 7-10; Bregman, F. Le Saux, S. Trottier 1, P. Chauvel 1, and Y. Maurin. Chronic Cobalt-induced Epilepsy: Noradrenaline Ionophoresis and Adrenoceptor Binding Studies in the Rat Cerebral Cortex. J. Neural Transmission, 1985, v. 63, p. 109-118) и рекомендована «Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств, ФБГУ «НЦЭСМП» Минздравсоцразвития России» (Воронина Т.А., Неробкова Л.Н. Методические указания по изучению противосудорожной активности фармакологических веществ. «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств», М., изд ФБГУ «НЦЭСМП» Минздравсоцразвития России, 2012, часть 1, глава 14, с 235-250).

Операции по вживлению долгосрочных электродов в структуры мозга крыс (в двигательную зону коры левого и правого полушарий, дорзальный отдел гиппокампа, латеральные ядра гипоталамуса, хвостатое ядро) осуществляли с помощью стереотаксического прибора по координатам атласа мозга крыс (Bures et al.. 1960). Операции по вживлению электродов проводились под хлорал гидратным наркозом (300 мг/кг). Индифферентный электрод, используемый при монополярной записи, помещался в носовой кости черепа. Запись биоэлектрической активности производилась в условиях свободного передвижения животного по экспериментальной камере. Для того, чтобы избежать артефактов от движения штырьков, использовались специальные пружинные контакты. Регистрация биопотенциалов мозга осуществлялась на 21-канальном нейрографе «Нейросенсор», работающем на базе IBM-PC 586 с установленными фильтрами на 32 Гц, с постоянной времени (0,03 с) и с записью цифровой компьютерной ЭЭГ для последующей обработки данных.

Эпилептогенный очаг создавался аппликацией порошка металлического кобальта на поверхность двигательной области коры левого полушария мозга крыс. С этой целью в кости черепа просверливалось трепанационное отверстие, в которое вводилась стеклянная канюля с порошком кобальта (диаметр канюли соответствовал диаметру отверстия и не превышал 1 мм). Канюля опускалась на поверхность коры (твердая мозговая оболочка предварительно вскрывалась тонкой инъекционной иглой). Аппликация кобальта на кору головного мозга крысы вызывает гиперактивность нейронов, локализованных в месте введения, что выражается в появлении эпилептиформных пароксизмальных разрядов на ЭЭГ. Формирующийся эпилептогенный очаг является началом развития динамической постоянно усложняющейся структурно-функциональной системы. Функциональная организация этой системы характеризуется наличием детерминантного и зависимого очагов; детерминантный очаг усиливает и синхронизирует активность других очагов, объединяя их в единый комплекс. В развитии эпилептической системы, вызванной аппликацией кобальта на сенсомоторную кору мозга, выделяют несколько стадий. Основными из них являются стадия формирования первичного и вторичного эпилептогенных очагов через 24-48 часов после операции и стадия генерализованной эпилептиформной активности (ЭпА) в различных структурах мозга со стабильным уровнем синхронизированных пароксизмальных разрядов на 5-6 день после аппликации кобальта (вторая стадия развития ЭпА).

У всех крыс эпилептогенный очаг локализовался в сенсомоторной области коры левого полушария по следующим координатам: 1 мм вперед от брегмы и 1 мм в сторону от сагиттального шва. Динамика ЭпА у крыс с кобальтовым эпилептогенным очагом изучалась на протяжении 7-8 суток после аппликации кобальта на сенсомоторную зону коры. Регистрацию ЭЭГ начинали через 48 часов после аппликации кобальта (первая стадия развития эпилептической системы и проводили на 5-6 сутки (стадия генерализации ЭпА). Влияние соединения 1.1а в дозе 50 мг/кг на эпилептиформную активность мозга крыс изучали при однократном внутрибрюшинном введении в различные стадии формирования эпилептической системы после фоновой записи. После введения вещества регистрация ЭЭГ проводилась в течение 120 минут.

Регистрация фоновой ЭЭГ животных через 48 часов после операции (1-я стадия) выявила образование очагов эпилептической активности (ЭпА) во всех исследуемых структурах с наибольшим числом и продолжительностью разрядов в ипсилатеральной коре, хвостатом ядре и контрлатеральном гиппокампе (Таблица 4).

Изучение влияния соединения 1.1а в дозе 50 мг/кг на эпилептиформную активность мозга крыс показало, что на 1-й стадии формирования эпилептической системы через 1 час после однократного введения число разрядов ЭпА (в среднем за минуту) статистически достоверно снижалось в электрокортикограммах ипси- и контрлатеральной коры, хвостатого ядра, гипоталамуса и контрлатерального гиппокампа. При этом, наибольшая выраженность эффекта (по числу разрядов) определялась в ипси- и контрлатеральной коре, а также наблюдалось укорочение средней длительности разрядов в этих структурах (Таблица 4).

* - отличие от фоновых показателей, при р≤0,05 (критерий Крускала-Уолиса)

На 2-й стадии развития ЭпА (5-6 день), при стойко сформированной генерализованной ЭпА, однократное введение соединения 1.1а в дозе 50 мг/кг вызывало достоверное уменьшение числа и длительности разрядов в электрограммах ипсилатеральной коры, но не изменяло эти показатели относительно фоновых значений в контрлатеральной коре, латеральном гипоталамусе, ипси-, контрлатеральном гиппокампе и хвостатом ядре. (Таблица 5).

Таким образом, в условиях методики парциальной (фокальной) эпилепсии, моделирующей вторично-генерализованные судороги в хроническом эксперименте у крыс с хроническим кобальт-индуцированным эпилептогенным очагом, производное кумарина - соединение 1.1а в дозе 50 мг/кг оказывает выраженный противосудорожный эффект на первичные эпилептические очаги в ипси-, контрлатеральной коре, гипоталамусе, контрлатеральном гиппокампе и хвостатом ядре, статистически достоверно уменьшая как число судорожных разрядов, так и их длительность на 1-й стадии развития ЭС. Соединение 1.1а не оказывает влияния на вторичные эпилептические очаги, развившиеся во 2-ю стадию генерализации ЭпА, в таких структурах, как гипоталамус, ипси- и контрлатеральный гиппокамп, хвостатое ядро, контрлатеральная кора. Статистически достоверный эффект соединения 1.1а выявляется только в ипсилатеральной коре, что регистрируется по снижению числа и продолжительности разрядов в данной структуре.

* - отличие от фоновых показателей, при р≤0,05 (критерий Крускала-Уолиса)

Таким образом, установлено, что производные кумарина, тиокумарина и хинолинона обладают широким спектром противосудорожных эффектов, устраняя первично-генерализованные судороги в тестах антагонизма с максимальным электрошоком (МЭШ), коразолом. Противосудорожный эффект заявляемых соединений наблюдается в широком диапазоне доз (от 10 до 80 мг/кг). Производное кумарина - соединение 1.1а в дозе 50 мг/кг уменьшает выраженность эпилептифармной активности, вызванной введением бемегрида, с максимальным эффектом в гиппокампе. В условиях методики парциальной (фокальной) эпилепсии, моделирующей вторично-генерализованные судороги в хроническом эксперименте у крыс с хроническим кобальт-индуцированным эпилептогенным очагом, производное кумарина - соединение 1.1а в дозе 50 мг/кг оказывает выраженный противосудорожный эффект на эпилептические очаги в ипси-, контрлатеральной коре, гипоталамусе, контрлатеральном гиппокампе и хвостатом ядре на первой стадии развития ЭС, тогда как во вторую стадию генерализации ЭпА статистически достоверный эффект выявляется в ипсилатеральной коре.

Изобретение относится к производным (кумарин-4-ил)аминокарбоновых кислот, (тиокумарин-4-ил)аминокарбоновых кислот и (2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)аминокарбоновых кислот, которые могут найти применение в лечении эпилепсии и пароксизмальных состояний. В формулах 1.1-1.3 R представляет собой водород или нитрогруппу; X представляет собой O, S или NH; Y представляет собой OH, OCH₃, OC₂H₅, NH₂ или NHCH₃. Изобретение относится также к способам получения указанных соединений и методу лечения эпилепсии и пароксизмальных состояний с их использованием. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 5 табл., 13 пр.

1. Замещенные (кумарин-4-ил)аминокарбоновые кислоты, (тиокумарин-4-ил)аминокарбоновые кислоты, (2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)аминокарбоновые кислоты и их производные общей формулы (1.1-1.3)

,

где R может быть атомом водорода или нитрогруппой; n может принимать значения от 3 до 6; X может быть О (1.1), S (1.2), NH (1.3); Y может быть ОН, ОСН₃, ОС₂Н₅, NH₂, NHCH₃-группами.

2. Соединение по п. 1, представляющее собой N-(3-нитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляную кислоту (1.1а).

3. Соединение по п. 1, представляющее собой N-(3,6-динитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляную кислоту (1.1в).

4. Соединение по п. 1, представляющее собой метиловый эфир N-(3-нитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.1г).

5. Соединение по п. 1, представляющее собой метиловый эфир N-(3,6-динитрокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.1д).

6. Соединение по п. 1, представляющее собой N-(3-нитро-1-тиокумарин-4-ил)-4-аминомасляную кислоту (1.2а).

7. Соединение по п. 1, представляющее собой метиловый эфир N-(3-нитротиокумарин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.2б).

8. Соединение по п. 1, представляющее собой метиловый эфир N-(3-нитро-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)-4-аминомасляной кислоты (1.3а).

9. Соединение по п. 1, представляющее собой N-(3-нитро-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)-4-аминомасляную кислоту (1.3б).

10. Способ получения (кумарин-4-ил)аминокарбоновых кислот и их производных общей формулы (1.1), где R, n и Y имеют вышеуказанные значения по п. 1, заключающийся в том, что 3-нитро-4-хлоркумарины общей формулы (2)

,

где R имеют вышеуказанные значения, вводят во взаимодействие с аминокарбоновыми кислотами или их производными общей формулы (3)

,

где n и Y имеют вышеуказанные значения в различных растворителях, таких как бензол, толуол, этилацетат, диоксан, этанол, или подобных, при этом реакции могут проводиться как при избытке соединений (3), так и в присутствии оснований, таких как органические третичные амины, например триэтиламин, или пиридин.

11. Способ получения (тиокумарин-4-ил)аминокарбоновых кислот и их производных общей формулы (1.2), где R является атомом водорода, n и Y имеют вышеуказанные значения по п. 1, заключающийся в том, что 3-нитро-4-хлортиокумарин (4)

вводят во взаимодействие с аминокарбоновыми кислотами или их производными общей формулы (3) ,

где n и Y имеют вышеуказанные значения в различных растворителях, таких как бензол, толуол, этилацетат, диоксан, этанол, или подобных, при этом реакции могут проводиться как при избытке соединений (3), так и в присутствии оснований, таких как органические третичные амины, например триэтиламин, или пиридин.

12. Способ получения (2-оксо-1,2-дигидрохинолин-4-ил)аминокарбоновых кислот и их производных общей формулы (1.3), где R является атомом водорода, n и Y имеют вышеуказанные значения по п. 1, заключающийся в том, что 3-нитро-4-хлорхинолин-2(1H)-он (10)

вводят во взаимодействие с аминокарбоновыми кислотами или их производными общей формулы (3)

,

где n и Y имеют вышеуказанные значения в различных растворителях, таких как бензол, толуол, этилацетат, диоксан, этанол, или подобных, при этом реакции могут проводиться как при избытке соединений (3), так и в присутствии оснований, таких как органические третичные амины, например триэтиламин, или пиридин, также взаимодействие соединений 3 и 10 может производиться с использованием в качестве растворителя пиридина.

13. Метод лечения эпилепсии и пароксизмальных состояний путем введения эффективных количеств соединений по пп. 1-9.