ШТАММ BACILLUS CEREUS RCAM04578, ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОБИОТИЧЕСКИМИ СВОЙСТВАМИ Российский патент 2020 года по МПК C12N1/20 C12P19/04 C12N9/14 A61K35/742 C12R1/85 

Изобретение относится к биотехнологии, фармакологии, косметологии, нутрициологии, микробиологии, сельскому хозяйству, аквакультуре, ветеринарии и медицине. Штамм бактерий Bacillus cereus, депонированный в Ведомственной коллекции полезных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения (RCAM) под регистрационным номером RCAM04578, представляет собой новый непатогенный штамм спорообразующих бацилл, продуцент полисахаридов, комплекса антиоксидантных ферментов (каталазы, супероксиддисмутазы), пищеварительных ферментов (амилаз, протеаз, липаз), резистентный к антибиотикам группы бета-лактамов и цефалоспоринов. Штамм можно использовать как производственный для получения пробиотических препаратов для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, дисбактериозов, которые можно использовать совместно с антибиотиками.

Выявлен штамм микроорганизмов с полезными свойствами. Непатогенный авирулентный штамм Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17) выделен из коровьего молока. Штамм культивируют на питательных средах: питательный и мясопептонный бульон и его различные модификации. Штамм можно использовать для ферментации молока и сырья для получения ферментированных препаратов, пробиотических препаратов и биологически активных добавок. Изобретение обеспечивает получение ферментированных лечебных, профилактических, пробиотических и других препаратов. Пробиотические свойства данного штамма заключаются в подавлении роста патогенных энтеробактерий, в том числе, энтеротоксигенной кишечной палочки и увеличении количества лактобактерий и бифидобактерий - представителей здоровой резидентной кишечной микрофлоры, а также в иммуномодулирующем эффекте и увеличении прироста у сельскохозяйственных животных.

Технический результат заключается в расширении арсенала средств специального назначения (создания ферментированных препаратов и продуктов, иммуностимулирующих препаратов, пищевых добавок, косметических средств, кормовых добавок, пробиотических препаратов), в повышении биологической ценности полученного продукта, а также в расширении ассортимента продуктов для диетического и лечебно-профилактического питания, в том числе продуктов используемых как корма, кормовые добавки, лакомства или ветеринарные препараты для домашних и сельскохозяйственных животных (скот, птицы), аквакультуры (рыбы и ракообразные).

Кишечная бактериальная флора домашних животных играет важную роль в пищеварении и усвоении корма животным. Она принимает участие в метаболизме питательных веществ, таких как углеводы, белки, липиды и минералы, а также в биосинтезе витаминов. Помимо этих физиологических эффектов на питание, бактериальная микрофлора, обеспечивает защиту от определенных заболеваний и инфекции, путем подавления роста патогенных организмов в кишечнике.

Энтеробактерии, тесно связаны с развитием таких состояний, как колибактериоз, сальмонеллез и клостридиальный энтерит домашних животных и птиц. Здоровая кишечная микрофлора обеспечивает животным синтез витаминов, помощь в усвоении и поглощении питательных веществ, устойчивость к инфекциям и антагонизм по отношению к вредным микроорганизмам. С другой стороны, патогенная микрофлора кишечника, вырабатывает токсичные метаболиты, вызывает процессы гниения, образование газов и токсиногенез, которые подавляют рост животного, репродуктивную способность, снижают питательную ценность кормов из-за недостаточного усвоения, а также уменьшают способность животных противостоять инфекции. Когда баланс кишечной бактериальной флоры нарушен в результате стрессовых состояний, начинается аномальный рост патогенных микроорганизмов, которые в нормальной микрофлоре редки, и это вызывает диарею и энтерит. Такие болезненные состояния приводят к инфекциям с пагубным воздействием на домашних питомцев, у сельскохозяйственных животных падает производительность и качество продукции.

В свете взаимосвязи между бактериальной флорой кишечника и животным-хозяином, поддержание нормального баланса кишечной флоры имеет важное значение для здоровья домашних животных и птиц, будь то домашние питомцы (кошки, собаки) или сельскохозяйственные животные.

В животноводстве в последние годы животные и птицы часто разводятся и поддерживаются в плотных колониях или стадах, чтобы повысить экономическую эффективность. Но это часто приводит к ухудшению условий кормления, недостаточному питанию и плохому управлению гигиеной из-за нехватки рабочей силы. В добавок это сочетается со многими другими стрессовыми факторами, что и приводит в итоге к дисбалансу в кишечной бактериальной флоре. Этим обусловлено в настоящее время применение большого количества антимикробных кормовых добавок, таких как антибиотики и синтетические антимикробные средства для подавления или устранения вредных микроорганизмов.

Но в результате возникли проблемы в области общественного здравоохранения в связи с наличием применяемых антибактериальных препаратов в мясе и т.д., а также появилась проблема мультирезистентных к антибиотикам патогенных штаммов бактерий. Кроме того, известно, что длительное введение антибиотика создает уникальную микрофлору, в которых доля бактерий, устойчивых к антибиотикам увеличивается, и такая микрофлора вызывает новые болезни. В свете этих обстоятельств, использование антибиотиков для улучшения роста животных было запрещено полностью, начиная с января 2006 года в Европе. Другие страны также стремятся запретить или ограничить использование антибиотиков и в связи с этим ведется разработка безопасных препаратов, которые могут заменить антибиотики или позволят уменьшить их использование.

В некоторых странах Европы и Америки, а также в Японии пробиотики (препараты содержащие живые бактерии) в течение многих лет использовались в качестве лекарственных средств для нормализации работы кишечника и для лечения диареи и энтерита у человека. Принимая во внимание их эффективность, были созданы пробиотики для профилактики и лечения диареи и энтерита у домашних животных. Несколько препаратов, первоначально предназначенных для людей были официально утверждены и стали коммерчески доступными в качестве ветеринарных препаратов.

Активными ингредиентами пробиотиков являются новые бактериальные штаммы, которые выделены в природе и выбраны из-за их позитивного влияния на рост и здоровье домашних животных. Помимо молочнокислых бактерий существует группа споровых пробиотических бактерий, которые в природе живут в почве, на влажной траве, и на корнях растений, защищая их от заражения патогенными микроорганизмами - например, Bacillus subtilis и Bacillus cereus. Аналогичную функцию они способны выполнять в организме человека и животных, вырабатывая в желудочно-кишечном тракте вещества, угнетающие рост патогенной микрофлоры.

Преимуществами бактериальных спор, которые образуют эти бактерии, являются их устойчивость к нагреванию, позволяя хранить при комнатной температуре и в сухом виде. Кроме того, эти бактерии способны достигать кишечника, так как они выживают при низкий рН желудка. Применение пробиотических бактериальных спор варьируется от пищевых добавок до стимуляторов роста и используется в аквакультуре (например, для креветок). Пробиотические препараты с участием некоторых видов Bacillus рекомендуются для использования с антибиотиками, поскольку эти штаммы резистентных к ним (например, В. cereus). Bacillus coagulans использовались в качестве вспомогательной терапии для облегчения ревматоидного артрита. В. subtilis ассоциируется с японским продуктом, известным как Натто. Потребление этого продукта может оказывает стимулирующее действие на иммунную систему и способствует снижению свертываемости крови. Секреция противомикробных препаратов, таких как коагулин, амикоумацин и субтилизин, так же обнаружена у бактерий рода Bacillus. Механизмы пробиотических эффектов бактерий рода Bacillus основаны в том числе на иммуномодуляции, которая происходит путем стимуляции, связанной с кишечником лимфоидной ткани, путем продуцирования цитокинов, конкурентного исключения желудочно-кишечных патогенов (например, конкуренция за сайты адгезии) и секрецию антимикробных веществ. Было проведено несколько исследований для безопасности видов Bacillus с использованием моделей животных и vitro для оценки токсичности или побочных эффектов штаммов. Использование В. subtilis одобрено для использования в качестве пищевой добавки в Италии и Великобритании (Olmos 2014).

К этому можно добавить, что споровые бактерии, относящиеся к роду Bacillus, такие как Bacillus cereus или Bacillus subtilis являются наиболее мощными продуцентами пищеварительных ферментов (амилолитических, липолитических, протиолитических), бактериоцинов и других веществ, угнетающих рост патогенных энтеробактерий и грибов, благодаря чему, ферментированный продукт, полученный с их участием, будет способствовать более эффективному перевариванию пищи, нормализации микрофлоры желудочно-кишечного тракта и элиминации представителей патогенной микрофлоры, защите от кишечных токсикоинфекций, нормализации пищеварения и стула (Kozasa 1989; Soccol 2010; Olmos 2014).

В Японии самым широко распространенным среди пробиотиков для сельскохозяйственных животных и птицы является споровый пробиотик Тойоцерин (Toyocerin, Toyo Jozo, Japan), содержащий споры непатогенных бактерий Bacillus cereus. Данный микроорганизм согласно данным литературы относят к транзиторной микрофлоре и способен эффективно предотвращать и лечить энтероколиты и стимулировать рост сельскохозяйственных животных. Одна доза бактерий Bacillus cereus вызывает значительное снижение числа энтеротоксигенных штаммов Е. coli кишечнике свиней, страдающих диареей. При этом увеличивает количество здоровой резидентной микрофлоры, такой как представители рода Lactobacillus, при одновременном увеличении массы тела и эффективности кормления. У кроликов Bacillus cereus подавляет пролиферацию патогенных вариантов Е. coli в кишечнике, предотвращая диарею, улучает набор веса и улучшает выживаемость. В эксперименте, где у кур вызывали тепловой стресс, наблюдалось значительное снижение количества лактобактерий в желудочно-кишечном тракте и как следствие дисбактериоз кишечника. Оральное применение в качестве пробиотика бактерий Bacillus cereus предотвращало снижение количества лактобактерий и стабильно поддерживало микрофлору кишечника в нормальном состоянии даже в условиях теплового стресса. Кроме того, показано, что Bacillus cereus продуцирует различные пищеварительные ферменты, такие как амилазы и протеазы, а также способны синтезировать витамины группы В. Так же, Bacillus cereus приводили к уменьшению концентрации аммония в кишечнике и крови. Bacillus cereus при применении в качестве пробиотика для сельскохозяйственных животных увеличивали содержание волатильных жирных кислот, таких как пропионовая кислота в руминальном соке, поддерживали нормальный рН желудочного сока, способствовали нормализацию руминальной функции (Kozasa 1989).

Bacillus cereus так же предложен в качестве пробиотика для рыб, в том числе нильской тиляпии (Garcia-Marengoni et al 2015). Bacillus cereus улучшил ростовые параметры и уменьшил смертность по причине инфекций, вызванных Vibrio vulnificus и V. parahaemolyticus у рыб Т. trichopterus (Subharanjani et al. 2015).

Известен штамм Bacillus subtilis 534, который резистентен к полимиксину и используется для получения препарата "Споробактерин" для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, дисбактериозов (Патент СССР 1723116, 1988 г.).

Однако этот штамм чувствителен к бета-лактамам. Это ограничивает сферу применения препарата при тяжелых формах гнойно-воспалительных заболеваний, лечение которых требует совместного введения бактериального препарата и антибиотика.

Известен штамм Bacillus subtilis 3Н (ГИСК 248), несущий свойство антибиотикорезистентности к полимиксину и рифампицину и используемый для получения пробиотического препарата "Бактиспорин", который применяют совместно с антибиотиками для лечения и профилактики дисбактериоза, ферментной недостаточности органов пищеварения, гнойных инфекций, пищевой аллергии (RU 2067616).

Недостатком данного штамма является отсутствие резистентности к бета-лактамам и цефалоспоринам, как одними из наиболее часто назначаемых групп антибиотиков.

В предлагаемом изобретении, выделенный штамм бактерий Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17), является природным и не патогенным, не нуждается в генной модификации. Он является безопасным для животных, что демонстрируют проведенные на мышах и цыплятах испытания. Данный штамм может быть использован в качестве оральной пробиотической добавки, которая нормализует микрофлору кишечника (сокращает число энтеропатогенной микрофлоры и увеличивает числе представителей здоровой микрофлоры - бифидобактерий и лактобактерий). Обладает иммуномодулирующим эффектом. Благодаря резистентности штамма к антибиотикам группы бета-лактамов, цефалоспоринов и карбапенемов данный штамм может использоваться в качестве пробиотической добавки во время антибиотикотерапии для профилактики или лечения дисбактериоза.

Задача заявляемого изобретения - получение непатогенного штамма бактерий Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17) с полезными свойствами, который устойчив к бета-лактамам и цефалоспоринам и продуцирует в питательную среду комплекс биологически активных соединений и предназначенный для создания различных лечебных, профилактических препаратов или добавок (иммуностимулирующих, пробиотических и других препаратов) и ферментированных продуктов.

Идентификацию штамма проводили при помощи секвенирования 16S rDNA на автоматическом секвенаторе АЕ3000, сравнение секвенсов и построение деревьев родства на базе ФГБУ «ГосНИИгенетика». При секвенировании вариабельных участков 16S rDNA получена следующая собранная нуклеотидная последовательность для исследуемого штамма:

Первичный скрининг по базе данных GenBank и RDP-II показал, что исследуемый штамм принадлежит к следующим систематическим группам Bacteria; Firmicutes; Bacilli; Bacillales; Bacillaceae; Bacillus, причем гомология с некоторыми видами рода Bacillus составляет 99%. Последовательности были выровнены с соответствующими последовательностями ближайших видов бактерий, доступными из базы данных GenBank.

Результаты обработки секвенсов при помощи компьютерной программы, находящейся на сайте RDB II (Ribosomal Database Project II), предназначенной для определения родства микроорганизмов и построения филогенетических деревьев, представляются в графическом виде. Дальнейший анализ по RDP II 16S рРНК базе данных показал гомологию с теми же видами бактерий.

По данным анализа было построено филогенетическое дерево (смотри Фиг. 1) с гомологичными штаммами.

S000005079 0.984 0.980 1395 Bacillus thuringiensis; WS 2617; Z84585 S002291145 0.985 0.984 1465 Bacillus cereus (T); ATCC 14579; AE016877 S004061999 0.985 0.963 1465 Bacillus toyonensis (T); BCT-7112; CP006863 S000006577 0.985 0.981 1395 Bacillus thuringiensis; WS 2626; Z84588 S000008663 0.985 0.978 1397 Bacillus anthracis; Sterne; AF290552 S000012518 0.985 0.981 1397 Bacillus anthracis; Vollum; AF290553 S000015508 0.984 0.980 1404 Bacillus cereus; ATCC14579; AF290547

Где unknown - исследуемый штамм

Критерием отнесения микроорганизма к тому или иному виду считается гомология не менее 97%. По этому критерию исследуемый штамм можно отнести к видам: Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis и Bacillus anthracis.

Анализ филогенетического родства, построенный с использованием типовых штаммов близкородственных бактерий показал, что наиболее близким к исследуемому штамму является вид Bacillus cereus.

Дополнительно идентификация проведена при помощи секвенирования последовательности ITS региона (Lasseter et al., 2009; Pelucchi et al., 2012), а также биохимических и морфологических показателей (Yoshino et al., 2010; Lancefield, 1934).

По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК, тестируемый штамм наиболее близок к виду Bacillus cereus (99%).

Секвенированная нуклеотидная последовательность ITS региона:

Результат сравнения полученной нуклеотидной последовательности с ITS регионом типовых штаммов (для видов В. thuringiensis и В. cereus):

В. thuringiensis type strain АТСС 10792Т

Query cover - 98%

Identity - 99.7%

В. cereus type strain АТСС 14579T

Query cover - 98%

Identity - 99.3%

При культивировании штамма RCAM04578 (DPRK-17) на МПА в течение 24 часов отмечено образование серовато-беловатых, плоских, мелкобугристых, восковидных колоний с волнистым краем, диаметром 1,5-5 мм. Световая микроскопия показала присутствие в культуре палочковидных клеток (1-1,5×3-4 мкм), одиночных или располагающихся в парах и цепочках, подвижных, образующих эндоспоры, расположенные в центре клеток. Морфологические особенности клеток и колоний штамма RCAM04578 (DPRK-17) свидетельствуют о его принадлежности к видам В. thuringiensis или В. cereus. Сравнение ITS региона штамма RCAM04578 (DPRK-17) с гомологичными последовательностями типовых штаммов В. thuringiensis и В. cereus (99,7 и 99,3% сходства соответственно) позволил предположить, что исследуемый штамм более близок к виду В. thuringiensis. Однако, принимая во внимание результаты изучения гена 16S рРНК и отсутствие в цитоплазме кристаллов эндотоксинов, которые характерны для В. thuringiensis, можно обозначать штамм RCAM04578 (DPRK-17) как Bacillus cereus.

Штамм Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17) имеет следующие характеристики:

1. Культурально-морфологические:

- факультативный анаэроб;

- грамположительные палочки;

- длинна 600-800 нм;

- подвижные;

- одиночные или расположенные цепочками;

- образуют эндоспору, расположенную по центру клетки;

Изучение культуральных или морфологических свойств отобранного штамма проводили на плотной питательной среде - питательном агаре. На поверхности плотных питательных сред через 24 часов при температуре 37°С образуют: колонии серовато-беловатого цвета, плоские, мелкобугристые, восковидных с волнистым краем, диаметром 1,5-5 мм.

2. Физиолого-биохимические:

- штамм сбраживает глюкозу.

- растет при температуре 37°С;

- растет в мясопептонном бульоне при рН 7,3;

- штамм резистентен к оксациллину (резистентность к бета-лактамам, цефалоспоринам, карбопенемам). Чувствителен к ципрофлоксацину, тетрациклину, эритромицину, азитромицину, ванкомицину, клиндамицину, амикацину, нитрофурантоину. Чувствителен к группам антибиотиков тетрациклинам, макролидам, фтрорхионолам, линкозамидам, аминогликозидам, нитрофуранам.

- вырабатывает ферменты антиоксидантной системы: каталазу, супероксиддисмутазу, пероксидазы, восстановленный глутатион;

- вырабатывает протеолитические, амилолитические, липолитические ферменты;

- вырабатывает липополисахариды (ЛПС).

Способ, условия и состав сред для длительного хранения штамма - лиофилизация; в пробирках с питательным бульоном при температуре от -15 до -200°С для долговременного хранения; пробирки с культурой хранят при температуре +4-8°С в течение 3 месяцев.

Способ, условия и состав сред для размножения штамма - при температуре 37°С; среды: различные варианты питательного бульона.

Предлагаемый новый штамм, прост в культивировании и хранении, не патогенен для человека, животных и растений.

Пример 1. Пассаж культуры: штамма Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17) вносят в пробирки с питательным бульоном и помещают в термостат при 37 гр. на 24 ч. до образования осадка. По окончании процесса ферментации питательная среда насыщенна биологически активными продуктами метаболизма и спорами данного штамма бактерий. Количественное определение фермента антиоксидантных ферментов (каталазы и супероксиддисмутазы) проводили по методам (Morozov et al., 2018).

Пример 2. Определение параметров ЛД50, острой и хронической токсичности: Определение показателя ЛД50 для штамма Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17) проводилось по методу Рида-Менча на 200 белых мышах. ЛД50 при оральном введении белым мышам составляет 8,95*10¹⁵ КОЕ/кг, что говорит о безопасности данного штамма для человека и животных при пероральном введении на уровне безопасности пробиотических штаммов лактобактерий и бифидобактерий. Для изучения острой и хронической токсичности использовали препарат, содержащий штамм Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17). Для изучения острой токсичности использовали препарат с концентрацией микробных тел в 1 мл -1,7×10⁶ КОЕ. вводили белым мышам перорально с помощью желудочного зонда в объеме 0,3- ,0 мл.

В эксперименте по определению острой токсичности готовый препарат вводили внутрижелудочно с учетом максимального объема единичного введения. Максимально достижимая доза при однократном равнялась 1,7*10⁷ КОЕ/кг, а при дробном трехкратном - 5,1*10⁷ КОЕ/кг. Для экспериментального определения острой токсичности использовались нелинейные мыши, самцы, начальным весом 24-30 г, всего в эксперименте использовано 130 лабораторных животных. Лабораторных животных поделили на 7 групп, по десять животных в каждой группе, и 50 голов использовали для предварительного подбора доз. И 10 голов контрольная группа.

Хроническую токсичность препарата, содержащего штамма Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17) изучали на белых беспородных мышах, самцах, начальным весом 13-16 г, общее количество животных в этой серии 40. Введение препарата внутрижелудочное, длительность введения препаратов 3 месяца или 90 суток.

В ходе экспериментов следили за их поведением, внешним видом, двигательной активностью, реакцией на внешние раздражители. Клиническую картину «острого» отравления лабораторных животных регистрировали при введении исследуемых препаратов в максимально достижимых дозах.

Ежедневно регистрировались следующие параметры функционального состояния лабораторных животных: Активность - вялость, нормальная активность, повышенная активность. Передвижение - нарушения координации, мышечный тонус, тремор.

Внешний вид: Состояние - ожирение, норма, истощение, кахексия. Шерсть - блестящая, тусклая, гладкая, торчащая, выпадение шерсти. Глаза - слезотечение, воспаление, помутнение роговицы, адгезия. Уши - цвет - норма, бледность, покраснение; воспаление, выделение секрета, образование струпа, подергивание. Зубы - цвет, поломка, потеря. Конечности - цвет, отек.

Физиологические функции: Дыхание - учащенное, нормальное замедленное, свистящее, хрипящее, затрудненное. Слюноотделение - недостаточное или избыточное. Слюна - водянистая или липкая. Моча - цвет. Экскрет - цвет, качество.

Производили взвешивание животных, что позволило определить динамику массы тела лабораторных животных в процессе эксперимента. Так же определяли гематологические и биохимические показатели.

При пероральном применении исследуемых образцов в течение 24, 48 часов, 14 суток гибели животных во всех группах не отмечалось. При невозможности определить LD50 животным вводится максимальная доза испытуемого препарата в наших исследованиях 112000 мг/кг. Согласно табуляции токсичности, при одноразовом использовании по Hodge и Sterner, 1943 г. этот показатель соответствует классу VI - относительно безвредно.

В соответствии с ГОСТом 12.1.007-76 при подкожном и внутрибрюшинном способе относится к 4 классу опасности - малотоксично.

Учитывая, что пороговая доза (порог однократного действия) - наименьшее количество вещества, вызывающее при однократном воздействии такие изменения в организме, которые обнаруживаются с помощью биохимических или физиологических тестов в отсутствие внешних признаков отравления, в наших исследованиях составила 45000 мг/кг - препарат, согласно приведенной классификации можно отнести к VI классу - относительно безвредным.

Пример 3. Влияние на микрофлору кишечника. Применение препарата «Стрептосубтил», содержащего Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17) положительно сказывается на микробиоценозе кишечника цыплят бройлеров, повышая количество полезной микрофлоры и снижая уровень условно патогенной. При применении препарата с кормом увеличивается количество представителей рода Bifidobacterium в 144 раза по сравнению с контролем. При выпаивании препарата через систему поения количество представителей рода Bifidobacterium увеличилось в 9,5 раза, а микроорганизмов рода Lactobacillus - в 4,3 раза по сравнению с контролем. Также в опытных группах отмечено снижение уровня условно-патогенной микрофлоры, принадлежащей к группе кишечной палочки (БГКП) - в первой опытной (с кормом) в 1,84 раза, во второй (через систему поения) - в 3,72 раза по сравнению с контролем.

Пример 4. Влияние на прирост веса животных. Применение препарата «Стрептосубтил», содержащего Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17) в дозе 10 мл/кг живого веса в течение 40 суток, положительно сказывается на приросте живой массы цыплят бройлеров. При применении данного препарата с кормом среднесуточный прирост живой массы при применении с кормом составил 58,57 гр., что на 5,68% выше аналогичного показателя в контроле. При введении препарата в систему поения с первого дня жизни цыплят данный показатель составил 57,94 гр. (на 2,85% выше контроля). Таким образом, применение препарата, содержащего Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17), положительно сказывается на приросте живой массы цыплят бройлеров. Положительный эффект наблюдается как при применении данного препарата с кормом, так и при введении его в систему поения с первого дня жизни цыплят.

Пример 5. Иммуностимулирующий эффект: У животных получавших препарат «Стрептосубтил», содержащий Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17), в дозе от 28000 до 112000 мг/кг однократно, на 14 сутки количество лейкоцитов в циркулирующей крови выше, чем в контрольной группе, за счет лимфоцитарной фракции, что говорит о стимулирующем влиянии на лейкопоэз, лимфопоэз.

Литература:

1. Патент СССР 1723116, 1988 г.

2. RU 2067616. ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SUBTILIS, НЕСУЩИЙ СВОЙСТВО АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА "БАКТИСПОРИН"

3. Garcia-Marengoni N., et al. Use of probiotic Bacillus cereus var. toyoi and Bacillus subtilis C-3102 in the diet of juvenile Nile tilapia cultured in cages \\ Lat. Am. J. Aquat. Res. 2015. 43(3). Pp. 601-606.

4. Kozasa Probiotics for animal use in Japan \\ Rev. sci. tech. Off. int. Epiz., 1989, 8 (2), 517-531.

5. Subharanjani S. Supplementation of B. cereus as probiotic in fish feed of Trichogaster trichopterus (Blue Gourami) and calculating its growth and survival \\ Int.j.Curr.Microbiol.App.Sci. 2015. 4(12). Pp. 744-751.

6. Carlos Ricardo Soccol, Luciana Porto de Souza Vandenberghe, Michele Rigon Spier, Adriane Bianchi Pedroni Medeiros, Caroline Tiemi Yamaguishi, Juliano De Dea Lindner, Ashok Pandey and Vanete Thomaz-Soccol The Potential of Probiotics: A Review \\ C.R. SOCCOL et al.: The Potential of Probiotics, Food Technol. Biotechnol. 48 (4) 413-434 (2010)

7. Jorge Olmos and J Paniagua-Michel Bacillus subtilis A Potential Probiotic Bacterium to Formulate Functional Feeds for Aquaculture \\ J Microb Biochem Technol 6:361-365. doi: 10.4172/1948-5948.1000169

8. Morozov, A.A., Chuiko, G.M., Yurchenko, V.V. Annual variations in hepatic antioxidant defenses and lipid peroxidation in a temperate fish, common bream Abramis brama (L.) \\ International Aquatic Research Volume 9, Issue 3, 1 September 2017, Pages 249-257

9. Отчет: Идентификация штамма DPRK-17 до вида с помощью анализа 16S РНК. Дата: 04.05.2017. Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов ФГБУ «ГосНИИгенетика» Минобр Науки. Директор БРЦ ВКПМ, профессор Синеокий С.П.

10. Отчет об идентификации штамма микроорганизмов Bacillus sp. с помощью метода секвенирования ITS региона по договору №27/2017/10н от 19.06.2017. ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО НАУЧНЫХ ОРГАНИЗАЦИЙ Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии» (ФГБНУ ВНИИСХМ). Ответственный исполнитель работ: Заведующая лабораторией №10, к.б.н. В.И. Сафронова.

11. Отчет по второму этапу научно-исследовательской работы по договору №10-779/17-Н по теме: Изучить патогенные свойства Bacillus cereus DPRK-17. ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ СИБИРИ И ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР АГРОБИОТЕХНОЛОГИЙ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК. Ответственный исполнитель: с.н.с. лаборатории болезней молодняка, кандидат ветеринарных наук В.Ю. Коптев. Новосибирск 2017 г.

12. Отчет по научно-исследовательской работе по договору №10-779/17-Н по теме: Провести доклинические испытания и изучить влияние препарата «Стрептокваша» на организм цыплят. ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ СИБИРИ И ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР АГРОБИОТЕХНОЛОГИЙ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК. Ответственный исполнитель: с.н.с. лаборатории болезней молодняка, кандидат ветеринарных наук В.Ю. Коптев. Новосибирск 2018 г.

Изобретение относится к штамму бактерий Bacillus cereus, предназначенному для получения пробиотического препарата. Штамм бактерий Bacillus cereus (DPRK-17) депонирован в Ведомственной коллекции полезных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения (RCAM) под номером RCAM04578. Изобретение может быть использовано для получения пробиотических препаратов для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, дисбактериозов, которые можно использовать совместно с антибиотиками. 1 ил., 5 пр.

Штамм бактерий Bacillus cereus RCAM04578 (DPRK-17), депонированный в «Ведомственной коллекции полезных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения» (RCAM) - предназначенный для получения пробиотического препарата.