КОРМОВАЯ ДОБАВКА ПРОБИОТИЧЕСКАЯ Российский патент 2025 года по МПК C12N1/20 A23K10/16 A61K35/74 C12R1/125 C12R1/23 

Область техники

Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности, к кормовым добавкам для сельскохозяйственных животных и птиц. Кормовая добавка (коммерческое наименование «ЭкоПроБио») направлена на профилактику острых инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных, вызванных бактериями родов Klebsiella, Citrobacter, Aeromonas, Escherichia, Alcaligenes, Bacillus, Micrococcus, Staphylococcus, Bordetella, Pseudomonas, Serratia.

Уровень техники

Известны штаммы Bacillus licheniformis № 31 и Bacillus subtilis № 3, предложенные в качестве основы препарата биоспорин, предназначенного для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний. Однако описанные выше микроорганизмы не оказывают ингибирующего действия на бактерии родов Kbebsiella, Citrobacter, Aeromonas, Escherichia, Alcaligenes, Bacillus, Micrococcus, Bordetella, Pseudomonas, Serratia.

Известен штамм Bacillus subtilis ВКПМ NsB-5225 (патент Штамм бактерий Bacillus subtilis - антагонист возбудителей клебсиеллезов) обладающий антагонистическими свойствами по отношению к бактериям рода Kbebsiella, но основным недостатком данного штамма является узкая специфичность подавляемых тест-культур, а также отсутствие достоверной информации о возможных антагонистических свойствах штамма в отношении бактерий Citrobacter, Aeromonas, Escherichia, Alcaligenes, Bacillus, Micrococcus, Bordetella, Pseudomonas, Serratia.

Известен штамм бактерий Bacillus amyloliquefaciens OPS-32 для получения биопрепарата комплексного действия для защиты сельскохозяйственных растений от фитопатогенных грибов, стимуляции их роста и повышения урожайности, однако предельная температура роста и сохранения жизнеспособности клеток данного штамма до + 47°C, что делает невозможным его применение в качестве основы для пробиотических кормовых добавок. Другим существенным недостатком данного штамма является отсутствие антагонизма к бактериям родов Citrobacter, Aeromonas, Escherichia, Alcaligenes, Bacillus, Micrococcus, Bordetella, Pseudomonas, Serratia.

Известен штамм бактерий-энтероккоков Enterococcus faecium L-3 ND-79 ВНИИСХМ, предназначенный для изготовления продуктов питания лечебно-профилактического назначения (патент РФ на изобретение №2220199 С1, кл. МПК C12N 1/20, A23C 9/12, A61K 35/74, опубл. 27.12.2003), а также способ стимулирования роста домашней птицы и препарат на основе пробиотика (патент РФ на изобретение №2093571 С1, кл. МПК C12N 1/20, A23K 1/18, C12R 1/465, опубл. 20.10.1997).

Основным недостатком данного штамма относится его невысокая антибиотическая активность, а также наличие жирно-кислотных микросфер жизнеспособных бактерий штаммов Enterococcus faecium 301, АТСС N 55519, сформированных с помощью роторного диска.

Также известен способ получения кормовой добавки к основному рациону кормления цыплят-бройлеров с использованием штаммов лактобактерий селекции НИИ биотехнологии Горского ГАУ. Для получения пробиотической добавки используется сухое обезжиренное коровье молоко ГОСТ 10970-87 и закваска, состоящая из штаммов молочнокислых микроорганизмов селекции НИИ биотехнологии Горского ГАУ Enterococcus hirae ВПКМ В-9069, Enterococcus faecium ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium ВКПМ В-9071.

Недостатком данной кормовой добавки является использование сухого молока, которое необходимо восстанавливать с помощью добавления воды, что приводит к потере времени и определенным энергозатратам, так как молоко необходимо бывает подогреть и простерилизовать.

Известен пробиотик, используемый для выращивания и откорма бройлерной птицы, содержащий несколько штаммов микроорганизмов бактерий Lactobacillus amylovorus БТ-24/88 (ВКПМ, В-6253) и Escherichia coli S 5/98 (ВКПМ, В-8564) (патент РФ на изобретение №2268925 С2, C12N 1/20, A61K 35/74, C12R 1/19, опубл. 27.01.2006 г.).

Недостатком данного пробиотика является недостаточная эффективность в отношении повышения резистентности организма к неблагоприятным условиям внешней среды; низкая термоустойчивость. Кроме того, данный пробиотик используется для профилактики заболеваний ЖКТ только у птиц и не обладает антагонистической активностью к бактериям, вызывающим респираторные инфекционные заболевания.

Известен пробиотик на основе штамма бактерий Bacillus subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 (патент РФ на изобретение №2663720 C1, A61K 35/74, C12N 1/20, C12R 1/125, опубл. 08.08.2018 г.].

Недостаток препарата: обладает общим антибактериальным воздействием, не способен к направленному воздействию на определенные виды патогенных микроорганизмов.

Раскрытие изобретения

Техническим результатом изобретения является повышение эффективности подавления патогенной микрофлоры за счет направленного воздействия на определенные виды патогенных микроорганизмов, а именно, бактерий родов Klebsiella, Citrobacter, Aeromonas, Escherichia, Alcaligenes, Bacillus, Micrococcus, Staphylococcus, Bordetella, Pseudomonas, Serratia. Также обеспечивается повышение пищевой ценности добавки, расширение области и вариантов ее использования, в том числе, в качестве основы для кормовых добавок, подвергающихся обработке паром перед включением в рацион животных.

Указанный технический результат достигается тем, что кормовая добавка пробиотическая содержит комплекс живых штаммов пробиотических бактерий Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D, Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D , полученных при раздельном культивировании штаммов на жидких питательных средах и дальнейшем смешивании их в соотношении: Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D - 40%, Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D - 40%, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D - 20%, а также компоненты питательной среды и воду, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

- компоненты питательной среды - 0,03-0,04;

- вода - 97-98;

- комплекс штаммов бактерий - остальное,

при общей концентрации клеток пробиотических бактерий 5×КОЕ/мл, где Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D не менее 2,5× КОЕ/мл, Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D не менее 2,49× КОЕ/мл, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D не менее 1× КОЕ/мл,

при этом жидкая питательная среда имеет следующий состав: панкреатический гидролизат рыбной муки - 12 г/л, пептон ферментативный - 12 г/л, натрия хлорид - 6 г/л.

Кормовая добавка пробиотическая в виде сухого порошка содержит комплекс лиофильно высушенных штаммов пробиотических бактерий в соотношении: Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D - 40%, Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D - 40%, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D - 20%, а также компоненты питательной среды и лактозу, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

- комплекс штаммов бактерий - 1,96-2,97;

- компоненты питательной среды - 0,01-0,02;

- лактоза - остальное,

при общей концентрации клеток пробиотических бактерий 2×КОЕ/г, где Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D не менее 10× КОЕ/мл, Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D не менее 9,9× КОЕ/мл, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D не менее 1× КОЕ/мл.

Осуществление изобретения

Морфологические и культуральные свойства бактерий

Идентификация штаммов на уровне видов была проведена на основе секвенирования гена 16S рРНК.

Для идентификации штаммы Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D и Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D выращивали аэробно при 30-37°C в течение 24-48 ч на твердой питательной среде следующего состава, г/л:

ГРМ-бульон (панкреатический гидролизат рыбной муки - 12 г/л,

пептон ферментативный - 12 г/л,

натрия хлорид - 6 г/л, рН - 6,5-7,5.

Стерилизация при 1 атм. (121°С) - 20 мин.

Клетки штамма: Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D представляют собой грамположительные, аэробные, подвижные палочки (2-4 × 0,4-0,6 мкм), имеют жгутик. Споры овальные, не превышающие размер клетки, расположены центрально. Через 24 ч роста образуют сухие, мелкоморщинистые, бархатистые розовато-кремовые колонии с волнистым краем на агаре LB. Оптимальный рост происходит при 30-40°C и pH 6,5-7,5. Способны к росту при температуре до + 55°C.

Клетки штамма Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D представляют собой грамположительные, аэробные, подвижные палочки (1,5-2 мкм), имеют жгутик. Характеризуются образованием эндоспор, не превышающих размер клетки. Через 24 ч роста образуют небольшие, сухие, белые колонии с неровным краем на агаре LB. Оптимальный рост происходит при 30-40°C и pH 6,5-7,5. Способны к росту при температуре + 55°C.

Способ хранения штаммов: в стеклянных пробирках на скошенной агаризованной питательной среде МПА/ГРМ-агар при температуре +4-6°C или в лиофилизированном состоянии в ампулах. Частота пересева 2 раза в год.

Штаммы обладают высокой антагонистической активностью (Таблица №1).

Антагонистические свойства штаммов определяли следующим образом:

Пример1. Культуры штаммов Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D культивировали в пробирках со стерильной питательной средой ГРМ-бульон (панкреатический гидролизат рыбной муки - 12 г/л, пептон ферментативный - 12 г/л, натрия хлорид - 6 г/л) в течении 24 часов. Суспензии тест-культур патогенных бактерий наносили на чашки в объеме 0,1 мл и тщательно растирали шпателем. Далее на засеянные тест-культурами чашки раскладывали стерильные диски из фильтровальной бумаги. На каждый диск наносили 10 мкл суспензии клеток штаммов Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D. Чашки инкубировали в термостате при температуре +30°C. Результаты фиксировали на 2-4 сутки путем измерения зоны ингибирования тест-культур.

Таблица №1 Антагонистические свойства штаммов Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D в отношении бактерий родов Klebsiella, Citrobacter, Aeromonas, Escherichia, Alcaligenes, Bacillus, Micrococcus, Staphylococcus, Bordetella, Pseudomonas, Serratia

№ Штамм Зона ингибирования патогена, мм Заболевания В-3567D В-3568D 1 Aeromonas veronii 18 19 Диарея, сепсис крови 2 Alcaligenes faecalis 10 16 Сепсис крови 3 Escherichia coli 15 16,5 Дисбактериоз, пищевые отравления 4 Pseudomonas aeruginosa 10 13 Воспалительные процессы 5 Bacillus cereus GAST 10 10 Токсикоинфекции 6 Bacillus weihenstephanensis 13 18 Пищевые отравления 7 Micrococcus luteus 18 21 Абсцесс 8 Micrococcus roseus 10 10 Оппортунистические инфекции 9 Staphylococcus aureus 8 15 Инфекции кожи, пневмония 10 Bordetella sp. 20 12 Коклюш 11 Serratia marcescens 10 10 Сепсис, инфекции мочевыводящих путей, кожные инфекции, заболевания кровотока и дыхательных путей, а также глазные инфекции 12 Klebsiella pneumoniae 11 12 Конъюнктивиты, острые кишечные инфекции 13 Citrobakter sp. 12 15 Цитробактериоз

Антибиотикочувствительность штаммов

Пример 2. Для определения антибиотикочувствительности штаммов, культуры клеток Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D культивировали в пробирках со стерильной питательной средой ГРМ-бульон (панкреатический гидролизат рыбной муки - 12 г/л, пептон ферментативный - 12 г/л, натрия хлорид - 6 г/л) в течении 24 часов при температуре +30°C. Полученную суспензию клеток (0,1 мл) наносили на чашки Петри с плотной питательной средой ГРМ-агар (панкреатический гидролизат рыбной муки - 12 г/л, пептон ферментативный - 12 г/л, натрия хлорид - 6 г/л, агар микробиологический - 10 г/л) и тщательно растирали стерильным шпателем. На засеянные таким образом чашки раскладывали стерильные диски с антибиотиками. Чашки инкубировали в термостате при температуре +30°C. Результаты фиксировали на 2-4 сутки путем измерения зоны ингибирования изучаемых культур вокруг дисков. При учете результатов штамм считали антибиотика чувствительным при зоне ингибирования роста не менее 5 мм.

Полученные в ходе исследования результаты представлены в Таблице №2.

Таблица №2. Антибиотикочувствительность штаммов Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D

Антибиотик Концентрация антибиотика, мкг Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ
В-3567D, мм Bacillus subtilis В2 ВКМ
В-3568D, мм Азлоцилин 75 5 10 Амоскициллин/клавулановая кислота 20/10 21 18 Амоскициллин 20 11 11 Амфотерицин В 40 - - Ампициллин 10 10 12 Амикацин 30 12 15 Азтреонам 30 - - Бацитрацин 10 ед - - Бацитрацин 0,04 ед - - Ванкомицин 30 10 10 Гентамицин 120 22 20 Доксициклин 30 10 9 Желчь 3 - - Итраконазол 10 10 - Имипенем 10 15 17 Канамицин 30 - 5 Карбенициллин 25 10 10 Карбеницилин 100 14 11 Кетоконазол 20 - 12 Клиндамицин 2 - 11 Клотримазол 10 - 5 Кларитромицин 15 13 11 Левомицитин 30 10 15 Линезолид 30 15 16 Линкомицин 15 - 8 Ломефлоксацин 10 - 11 Моксифлокацин 5 17 12 Меропенем 10 21 18 Новобиоцин 5 5 - Неомицин 30 15 12 Нистатин 80 ед - 12 Норфлоксацин 10 10 7 Оксациллин 1 - 7 Олеандомицин 15 13 15 Оптохин 6 - - Офлоксацин 5 13 14 Пиперациллин 100 - 12 Рифампицин 5 - 6 Полимиксин 300 ед 8 5 Рокситромицин 30 15 20 Сизомицин 10 12 11 Спарфлоксацин 5 20 20 Сапонин 750 - - Стрептомицин 300 15 15 Сульфаниламид 300 - 11 Тетрациклин 30 5 - Тилозин 30 13 10 Тобрамицин 10 11 17 Триметоприм/сульфаметоксазол 1,25/23,75 12 16 Фурагин 300 10 12 Фурадонин 300 7 8 Флуконазол 40 6 10 Пефлоксацин 5 10 10 Фосфомицин 200 6 12 Фуразолидон 300 - 10 Фузидиевая кислота 10 9 6 Цефтазидим 30 10 9 Цефаклор 30 - 6 Цефазолин 30 25 25 Ципрофлоксацин 5 15 15 Цефуроксим 30 - 5 Цефокситин 30 мкн 12 10 Цефепим 30 - 7 Цефоперазон/сульбактам 50/50 11 15 Цефотаксим 30 - 10 Цефалексин 30 15 13 Цефалотин 30 22 - Энтрофлоксацин 5 17 20 Эритромицин 15 12 13 Эртапенем 10 14 19

На основании полученных в ходе исследования результатов можно заключить, что штаммы Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D обладают высокой антагонистической активностью в отношении бактерий родов Klebsiella, Citrobacter, Aeromonas, Escherichia, Alcaligenes, Bacillus, Micrococcus, Staphylococcus, Bordetella, Pseudomonas, Serratia и могут быть применены в качестве основы биопрепаратов для профилактики инфекционных заболеваний, вызванных бактериями вышеуказанных родов. На основании исследования на антибиотикочувствительность было также определено, что штаммы Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D являются чувствительными к 47 и 59 антибиотикам из 70 протестированных соответственно.

Штаммы бактерий Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D способны к росту при температуре +55°C, что обеспечивает возможность их применений в качестве основы для кормовых добавок, подвергающихся обработке паром перед включением в рацион животных.

Кормовая добавка пробиотическая «ЭкоПроБио» предназначена для профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта и подавления действия патогенной и условно патогенной микрофлоры, а также для нормализации обмена веществ у сельскохозяйственных животных, в том числе птиц, на основе консорциума пробиотических штаммов Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Lactobacillus acidophilus с общим титром не менее 5 млрд. КОЕ/ мл для жидкой суспензии и не 2 млрд. КОЕ/ г для сухого порошка.

Состав: В 1000 мл жидкой суспензии содержатся действующие вещества: комплекс живых штаммов пробиотических бактерий Bacillus subtilis не менее 2,5×10⁹ КОЕ/мл, Bacillus amyloliquefaciens не менее 2,49×10⁹ КОЕ/мл, Lactobacillus acidophilus не менее 1×10⁷ КОЕ/мл, вспомогательные вещества: компоненты питательной среды, вода питьевая до 1000 мл.

Сухой порошок - Лиофильно высушенные бактерии Bacillus subtilis не менее 10×10⁸ КОЕ/г, Bacillus amyloliquefaciens не менее 9,9×10⁸ КОЕ/г, Lactobacillus acidophilus не менее 1×10⁷ КОЕ/г, вспомогательное вещество (наполнитель): лактоза до 100 %.

Бактерии, входящие в состав кормовой добавки «ЭкоПроБио»:

- способствуют нормализации пищеварения путем конкуренции за питательные вещества с патогенами;

- изменяют pH для создания неблагоприятной местной окружающей среды для патогенов;

- конкурируют с патогенами за адгезию.

Бациллы в процессе деления синтезируют амилазу, протеазу, липазу, гемицеллюлазу, регуляторные пептиды, за счет чего желудочный секрет дополнительно обогащается ферментами.

Подавление патогенной микрофлоры также происходит за счет того, что штамм Lactobacillus acidophilus вырабатывает молочную кислоту (максимум кислотообразования 320°Т за 24 ч культивирования), а кислая среда препятствует росту большинства патогенных бактерий и грибов. Уникальность данной кормовой добавки заключается в том, что введение ее в рацион животных (КРС, МРС и птиц) заменяет прием как минимум двух разносоставных кормовых добавок.

Кроме того, высокая резистентность лактобацил к разрушающему действию желудочного сока, желчных кислот и панкреатических ферментов позволяет сохранять жизнеспособность в кислой среде желудка более 3 часов.

Также в состав кормовой добавки в качестве наполнителя включена лактоза. Лактоза является природным пребиотиком, участвующим в обмене кальция, способствующего сохранению микрофлоры кишечника за счет избирательного стимулирования роста числа лактобактерий, предотвращающих развитие гнилостных процессов.

Для идентификации штамм Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D культивировали микроаэрофильно при температуре 37°C в течение 48 часов в жидкой питательной среде следующего состава:

Пептон, г 5,0 Лактоза, г 10,0 Глюкоза, г 10,0 Экстракт дрожжевой, г 10,0 Кальций углекислый, г 5,0 Агар от 12 до 18,0 Вода, см 1000

Клетки штамма Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D представляют собой грамположительные, неподвижные палочки (1,5-2 мкм). Спор не образуют. Характеризуются микроаэрофильными условиями роста. Образуют чечевидные колонии бежевого цвета в толще плотной питательной среды Бликфельдта. Растет при рН 2-5. При температуре +37°C.

Для определения активности кормовой добавки в отношении патогенных бактерий, тест-культуры бактерий переносили с помощью пипетки на агаризованную питательную среду (ГРМ-агар) в объеме 0,1 мл, тщательно растирали шпателем, далее не позже 15 мин на поверхность засеянных чашек раскладывали стерильные диски фильтровальной бумаги, на которые раскапывали суспензию кормовой добавки «ЭкоПроБио». Чашки инкубировали в течении 24-48 ч при температуре +37°C. Результаты фиксировали по наличию зоны ингибирования тест культур.

Полученные результаты представлены в Таблице №3.

Таблица № 3. Характеристика антагонистической активности кормовой добавки «ЭкоПроБио» в отношении штаммов патогенов

№ Штамм Зона ингибирования патогена, мм Заболевания Жидкая суспензия Сухая форма 1 Aeromonas veronii 12 13 Диарея, сепсис крови 2 Escherichia coli 11 10 Дисбактериоз, пищевые отравления 3 Pseudomonas aeruginosa 15 17 Воспалительные процессы 4 Bacillus cereus GAST 16 12 токсикоинфекции 5 Bacillus weihenstephanensis 15 19 Пищевые отравления 6 Staphylococcus aureus 14 17 Инфекции кожи, пневмония 7 Bordetella sp. 11 10 Коклюш 8 Serratia marcescens 22 14 Сепсис, инфекции мочевыводящих путей, кожные инфекции, заболевания кровотока и дыхательных путей, а также глазные инфекции 9 Klebsiella pneumoniae 16 14 Конъюнктивиты, острые кишечные инфекции 10 Proteus spp. 7 12 гастроэнтерит 11 Citrobakter sp. 11 13 Цитробактериоз 12 Salmonella spp. 10 6 Сальмонеллез

Кормовая добавка «ЭкоПроБио» была протестирована на сельскохозяйственных животных, в частности козах. Кормовую добавку включили в рацион по следующей схеме:

Для МРС (мл / на голову 1 раз в день)

- козлятам и ягнятам от 10 до 30 дней - 5,0;

- козлятам и ягнятам старше 30 дней до 6 месяцев - 10,0;

Взрослым животным - 12-15 мл на голову один раз в сутки.

Сухой порошок

Для МРС (г / на голову 1 раз в день)

- козлятам и ягнятам от 10 до 30 дней - 5,0;

- козлятам и ягнятам старше 30 дней до 6 месяцев - 10,0;

Кормовую добавку применяли в течение 10 дней.

Благодаря введению в рацион кормовой добавки «ЭкоПроБио» повысилась резистентность испытуемых животных к инфекционных заболеваниям желудочно-кишечного тракта и респираторным инфекциям верхних дыхательных путей, что привело к полному исключению использования антибиотиков в тестовой группе животных.

Таким образом, заявленная кормовая добавка имеет высокую эффективность подавления патогенной микрофлоры за счет направленного воздействия на определенные виды патогенных микроорганизмов, добавка является комплексной, имеет повышенную пищевую ценность и расширенную область использования.

Сопоставительный анализ заявленного препарата показывает, что совокупность его существенных признаков неизвестна из уровня техники, а значит соответствует условию патентоспособности «Новизна».

В уровне техники не было выявлено кормовых добавок, совпадающих с отличительными признаками заявленного добавки и влияющих на достижение заявленного технического результата, поэтому заявленное изобретение соответствует условию патентоспособности «Изобретательский уровень».

Приведенные сведения подтверждают возможность применения заявленной кормовой добавки в микробиологии, биотехнологии и в сельском хозяйстве для подкормки сельскохозяйственных животных и птиц, и поэтому заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «Промышленная применимость».

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены кормовая добавка пробиотическая, содержащая комплекс живых штаммов пробиотических бактерий при общей концентрации клеток пробиотических бактерий 5×10⁹ КОЕ/мл, полученных при раздельном культивировании на жидких питательных средах и дальнейшем смешивании их в соотношении: Bacillus subtilis ВКМ В-3568D – 40%, Bacillus amyloliquefaciens ВКМ В-3567D – 40%, Lactobacillus acidophilus ВКМ B-3832D – 20%, компоненты питательной среды и воду при заданном соотношении; и кормовая добавка пробиотическая, содержащая комплекс лиофильно высушенных штаммов пробиотических бактерий в соотношении: Bacillus subtilis ВКМ В-3568D – 40%, Bacillus amyloliquefaciens ВКМ В-3567D – 40%, Lactobacillus acidophilus ВКМ B-3832D – 20%, а также компоненты питательной среды и лактозу в заданном соотношении, при общей концентрации клеток пробиотических бактерий 2×10⁹ КОЕ/г (варианты). Изобретения обеспечивают расширение арсенала средств для профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта, вызванных патогенной и условно патогенной микрофлорой, у сельскохозяйственных животных. 2 н.п. ф-лы, 3 табл., 2 пр.

1. Кормовая добавка пробиотическая, содержащая комплекс живых штаммов пробиотических бактерий Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D, Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D, полученных при раздельном культивировании штаммов на жидких питательных средах и дальнейшем смешивании их в соотношении: Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D – 40%, Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D – 40%, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D – 20%, а также компоненты питательной среды и воду, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

- компоненты питательной среды – 0,03-0,04;

- вода – 97-98;

- комплекс штаммов бактерий – остальное,

при общей концентрации клеток пробиотических бактерий 5×10⁹ КОЕ/мл, где Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D не менее 2,5×10⁹ КОЕ/мл, Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D не менее 2,49×10⁹ КОЕ/мл, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D не менее 1×10⁷ КОЕ/мл,

при этом жидкая питательная среда имеет следующий состав: панкреатический гидролизат рыбной муки – 12 г/л, пептон ферментативный – 12 г/л, натрия хлорид – 6 г/л.

2. Кормовая добавка пробиотическая, содержащая комплекс лиофильно высушенных штаммов пробиотических бактерий в соотношении: Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D – 40%, Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D – 40%, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D – 20%, а также компоненты питательной среды и лактозу, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

- комплекс штаммов бактерий – 1,96-2,97;

- компоненты питательной среды – 0,01-0,02;

- лактоза – остальное,

при общей концентрации клеток пробиотических бактерий 2×10⁹ КОЕ/г, где Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D не менее 10×10⁸ КОЕ/мл, Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D не менее 9,9×10⁸ КОЕ/мл, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D не менее 1×10⁷ КОЕ/мл.