Способ клонального микроразмножения шпажника болотного (Gladiolus palustris Gaudin) Российский патент 2020 года по МПК A01H4/00 

Описание патента на изобретение RU2729828C1

Изобретение относится к области биотехнологии растений и может быть использовано для массового получения качественного посадочного материала шпажника болотного (Gladiolus palustris Gaudin), растения, занесенного в Красную Книгу РФ и находящегося под угрозой исчезновения (статус редкости - 0) [1]. Полученные растения могут использоваться для ландшафтного озеленения и пополнения интродукционных коллекций ботанических садов, а также для возвращения в природные места обитания. Изобретение позволяет получить большое количество выровненного экологически чистого посадочного материала.

Предлагаемое изобретение является новым, так как в патентной и научно-технической литературе не найдено решения с заявленной совокупностью отличительных признаков.

Шпажник болотный - многолетнее травянистое растение высотой 30-60 см, имеющее яйцевидный клубень. Соцветие - колос. Цветки розоватые или ярко розовые. Цветет с мая по июнь. Плод - сухая коробочка. Лимитирующими факторами являлись нарушение гидрологического режима в местах исчезновения вида и сбор цветущих растений в декоративных целях [1]. Bce это делает необходимым проведение исследований по разработке методики клонального размножения и определяет актуальность данной работы [2, 3, 4].

Применение клонального микроразмножения позволяет получить однородный посадочный материал, сократить период размножения культуры, а также предоставляет возможность проведения работ в течение года и экономию площадей, необходимых для выращивания посадочного материала Gl. palustris [5, 6, 7].

В настоящее время в культуру in vitro введены некоторые представители рода Gladiolus L. - виды Gladiolus dalenii, Gl. tristis, Gl. flanaganii и различные сорта этого таксона [8, 9].

Наиболее близким способом является клональное микроразмножение сортов гладиолуса из одной апикальной почки путем пролиферации экспланта, образования побегов и боковых почек (коэффициент размножения (Кр) равен 9) [10].

Шпажник болотный является редким растением, что не позволяет использовать в качестве экспланта клубнелуковицу, так как это приведет к уменьшению популяции, поэтому предпочтительно использовать в качестве первичного экспланта семена.

Помимо этого, разработана методика получения растений-регенерантов через каллусную культуру (Кр равен от 14 до 19) [7]. Так как регенерация через каллус часто приводит к сомаклональной изменчивости, этот способ не желательно применять для размножения шпажника болотного.

Однако до настоящего времени так и не определен оптимальный состав питательной среды, обеспечивающей интенсивное формирование клубнелуковиц Gl. palustris [8, 9, 10].

Изобретение представляет собой способ размножения растений шпажника болотного Gl. palustris методом культуры in vitro, включающий стерилизацию семян, высаживание на питательные среды, собственно размножение (Кр до 12), последующее укоренение и адаптацию клубнелуковиц к условиям ex vitro. После адаптации к нестерильным условиям и доращивания получают стандартные саженцы шпажника болотного с закрытой корневой системой. Результатом изобретения является получение выровненного и оздоровленного посадочного материала - 150000 штук в течение года.

Ход работы

В ходе исследований разработана методика клонального микроразмножения шпажника болотного.

Способ реализуют следующим образом.

В качестве первичных эксплантов использовали семена.

Оптимальная система стерилизации: 1.) фунгицид - 30 минут; 2.) 70% этанол - 2 минуты; 3.) 7% гипохлорит кальция - 20 минут.

На этапе собственно микроразмножения исследовали влияние регуляторов роста и их концентраций на коэффициент размножения. Наибольшие значения морфометрических показателей были получены на питательных средах, содержащих 10 мг/л 6-БАП с добавлением 0,1 мг/л НУК. Дальнейшее увеличение концентрации регуляторов роста не дало положительного эффекта (фиг. 1). Максимальный коэффициент размножения Gl. palustris, равный 7.25±1.33, достигается при культивировании на питательной среде, содержащей 6-БАП (10 мг/л) и НУК (0,1 мг/л) (фиг. 2).

В условиях лаборатории микропобеги Gl. palustris выращивали при искусственном освещении (3000 лк) и фотопериоде 16/8 ч., температуре 23-25°С и влажности 70%.

Максимальный процент укореняемости (76,5±1,2) был получен на питательной среде, содержащей MS, 0,3 мг/л НУК и 20 г/л сахарозы, при температуре 16-18°С и освещенности 500 лк. Уменьшение концентрации солей до MS приводило к снижению укореняемости (фиг. 3)

Растения-регенеранты при адаптации высаживали в почвенный субстрат, предварительно простерилизованный при 85-90°С в течение 1-2 ч. Субстрат состоял из смеси верхового торфа, песка и перлита (1:1:1).

Различные стадии клонального микроразмножения шпажника болотного показаны на фиг. 4-6: фиг. 4 - стадия инициации, фиг. 5 - стадия собственно микроразмножения, фиг. 6 - стадия укоренения.

Источники информации

1. Красная книга Российской Федерации (растения и грибы). - М.: Товарищество научных изданий КМК. - 2008. - 855 с.

2. De Bruyn, М.Н., and Ferreira, D.I. In vitro corm production of Gladiolus dalenii and G. tristis // Plant Cell Tissue Organ Cult. - 1992. - V. 31. - P. 123-128.

3. Dickens, Ch., Kelley, K., Manning, J.C., and Van Staden, J. In vitro propagation of Gladiolus flanaganii. South African J. of Bot. - 1986. - V. 55. - P. 485-487.

4. Ruffoni B. Gladiolus micropropagation in temporary immersion system // Propagation of Ornamental Plants. - 2008. - V. 8. - P. 102-104.

5. Kamo K. Effect of phytohormones on plant regeneration from callus of Gladiolus cultivar ‘Jenny Lee’/ J. In vitro plants. - 1994. - V. 30. - P. 26-31.

6. Molkanova O.I., Shirnina, I.V., and Mitrofanova, I.V. Conservation and micropropagation of rare and endemic species in genepool collections of the Russian Federation. J. of Biotechnology. - 2018. - P. 83-84.

7. Prasad V. S. S., Dutta Gupta E. S. In vitro shoot regeneration of gladiolus in semi-solid agar versus liquid cultures with support systems // Plant Cell Tiss Organ Cult. - 2006. -V. 8. - P. 263-271.

8. Ахмед А.К. Создание высокоэффективной системы микроклонального размножения генетически стабильных растений гладиолуса: автореф. дис. канд. биол. наук. М., 2000. 16 с.

9. Мокшин Е.В. Морфо-физиологические особенности клонального микроразмножения in vitro различных сортов лилий и гладиолусов: автореф. дис. канд. биол. наук. Саранск, 2005. 20 с.

10. Пат. 2180165 Российская Федерация МПК. А01Н 4/00. Способ микроклонального размножения гладиолуса / А.К. Гапоненко, А.А. Абукамель, С.Г. Бабаева; заявитель и патентообладатель А.К. Гапоненко, А.А. Абукамель, С.Г. Бабаева. - заявл. 31.01.2000, опубл. 10.03.2002.

Похожие патенты RU2729828C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ГЛАДИОЛУСА 2000
  • Гапоненко А.К.
  • Абукамель А.А.
  • Бабаева Сима Ага Гусейн
RU2180165C2
Способ получения оздоровленного посадочного материала гладиолуса гибридного (Gladiolus hybridus Hort.) 2021
  • Федяева Анна Валерьевна
  • Кондакова Марина Александровна
RU2764188C1
Способ клонального микроразмножения бельвалии сарматской (Bellevalia sarmatica (Pall. ex Georgi) Woronow) 2021
  • Ширнина Ирина Васильевна
  • Молканова Ольга Ивановна
  • Егорова Дарья Александровна
RU2762417C1
Способ получения растительного сырья ириса сибирского (Iris sibirica L.) методами биотехнологии 2017
  • Тихомирова Людмила Ивановна
  • Базарнова Наталья Григорьевна
  • Ильичева Татьяна Ивановна
RU2677921C1
Способ клонального микроразмножения сортов ирги ольхолистной (Amelanchier alnifolia (Nutt.) Nutt. Ex M.Roem.) 2019
  • Раева-Богословская Екатерина Николаевна
  • Молканова Ольга Ивановна
RU2732450C1
Способ выращивания морошки приземистой (Rubus chamaemorus L.) 2024
  • Макаров Сергей Сергеевич
  • Чудецкий Антон Игоревич
  • Тяк Галина Вячеславовна
  • Антонов Александр Михайлович
  • Куликова Елена Ивановна
RU2824883C1
Способ клонального микроразмножения секвойи вечнозеленой (Sequoia sempervirens L.) 2023
  • Зайцева Светлана Михайловна
  • Калашникова Елена Анатольевна
  • Киракосян Рима Нориковна
  • Болотина Елизавета Алексеевна
RU2815450C1
Способ клонального микроразмножения флокса метельчатого 2020
  • Мазаева Анна Сергеевна
  • Акимова Светлана Владимировна
  • Ковалева Ирина Сергеевна
  • Мацнева Анна Евгеньевна
  • Ханбабаева Ольга Евгеньевна
RU2743966C1
Способ выращивания растительного сырья ириса сибирского (Iris sibirica L.) с заданным содержанием экстрактивных веществ 2021
  • Тихомирова Людмила Ивановна
  • Карпицкий Дмитрий Алексеевич
RU2773523C1
Способ выращивания княженики арктической (Rubus arcticus L.) 2023
  • Макаров Сергей Сергеевич
  • Чудецкий Антон Игоревич
  • Зубик Инна Николаевна
  • Орлова Елена Евгеньевна
  • Козлова Елена Анатольевна
RU2811144C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 729 828 C1

Реферат патента 2020 года Способ клонального микроразмножения шпажника болотного (Gladiolus palustris Gaudin)

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения растений шпажника болотного Gl. palustris методом культуры in vitro, включающий стерилизацию семян, высаживание на питательные среды, размножение микролуковиц, их последующее укоренение, адаптацию растений-регенерантов к условиям ex vitro. После адаптации к нестерильным условиям и доращивания получают стандартные саженцы шпажника болотного с закрытой корневой системой. Изобретение позволяет получить большое количество выровненного экологически чистого посадочного материала шпажника болотного. 6 ил.

Формула изобретения RU 2 729 828 C1

Способ клонального микроразмножения шпажника болотного (Gladiolus palustris Gaudin) включает стерилизацию семян 7%-ным гипохлоритом кальция (экспозиция 20 минут), инициацию культуры на питательной среде MS, содержащей до 5 мг/л 6-БАП и 0.1 мг/л НУК, собственно размножение на питательных средах MS, содержащих 10 мг/л 6-БАП и 0,1 мг/л НУК, их последующее укоренение на среде 1/4 MS, 0,3 мг/л НУК и 20 г/л сахарозы при температуре 16-18°С и освещенности 500 лк, адаптацию растений-регенерантов к условиям ex vitro.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2020 года RU2729828C1

СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ГЛАДИОЛУСА 2000
  • Гапоненко А.К.
  • Абукамель А.А.
  • Бабаева Сима Ага Гусейн
RU2180165C2
МОКШИН Е.В., Морфо-физиологические особенности клонального микроращмножения in vitro различных сортов лилий и гладиолусов, автореферат диссертации, Москва, 2016, 16 с
DICKENS, et al, In vitro propagation of Gladiolus flanaganii, South African J
of Bot., 1986, V
Устройство двукратного усилителя с катодными лампами 1920
  • Шенфер К.И.
SU55A1
p
Прибор для автоматического контроля скорости поездов 1923
  • Навяжский Г.Л.
SU485A1

RU 2 729 828 C1

Авторы

Молканова Ольга Ивановна

Ширнина Ирина Васильевна

Коновалова Татьяна Юрьевна

Горбунов Юрий Николаевич

Даты

2020-08-12Публикация

2019-11-29Подача