Штаммы Lactobacillus или Bifidobacterium для поддержания гомеостаза Российский патент 2020 года по МПК A61K35/745 A61K35/747 A61P37/00 

Настоящее изобретение относится к выбранным штаммам бактерий, принадлежащих родам Lactobacillus и Bifidobacteria, обладающим способностью поддерживать долговременное состояние гомеостаза в организме человека. Кроме того, настоящее изобретение относится к композиции, например пищевой композиции, пищевой добавке, композиции для медицинского устройства или фармацевтической композиции, для применения в поддержании долговременного состояния гомеостаза в организме человека, или для применения в лечении почечной недостаточности, предпочтительно острой или хронической, или для применения в уменьшении количества уремических токсинов, предпочтительно бактериального происхождения, таких как индол и/или крезол.

Гомеостаз представляет собой свойство живых существ поддерживать около определенного уровня значения некоторых внутренних параметров, которые постоянно изменяются под воздействием различных внешних и внутренних факторов. Сеть контролирующих систем предназначена для упорядоченного набора подсистем, образующих организм человека, одновременное действие которых регулирует поток энергии и метаболитов, для поддержания внутренней среды в неизмененном или почти неизмененном состоянии независимо от изменений во внешнем окружении.

Саморегуляция живых организмов представляет собой главную концепцию современной биологии. Все системы организма делают вклад в поддержание гомеостаза, но главным контролирующим центром является центральная нервная система, которая определяет наиболее подходящий тип ответа (эндокринный, иммунный и так далее). Среди систем организма очень важную систему представляет собой иммунная система, которая, наряду с эндокринной системой, играет ключевую роль в защите организма против внешних стимулов, представленных изменениями во внешнем окружении.

Известно, что старение представляет собой процесс, характеризуемый ремоделированием иммунной системы и уменьшением функциональности иммунного ответа, и связано с повышенной восприимчивостью к инфекциям дыхательных путей и повышенному риску гибели.

Эти возрастные изменения следует отнести на счет феномена "старения" иммунной системы (Immunosenescence), явления, вызываемого главным образом постоянным контактом на протяжении жизни с антигенами и стрессовыми факторами, такими как, например, окислительный стресс.

Это приводит к полному "истощению" иммунной системы, при котором увеличение провоспалительных цитокинов играет ключевую роль: это, фактически, относится к процессу "Inflammaging", под которым понимают явление хронического воспаления, приводящего к старению организма.

Кроме того, процесс старения характеризуется изменениями в окислительно-восстановительном гомеостазе и прогрессивным усилением окислительного стресса. Это вовлечено в передачу клеточных сигналов, воспалительный ответ и повреждение тканей, вызывая метаболические и энергетические изменения, которые модифицируют некоторые функции клетки, такие как пролиферация, программируемая гибель клеток (апоптоз) и гомеостаз.

Активные формы кислорода (ROS) также вовлечены в патогенез нескольких возрастных заболеваний, таких как атеросклероз, диабет II типа, нейродегенерация, остеопороз, все из которых включают сильный воспалительный и иммунологический компонент. Кроме того, окислительный стресс и ROS являются активными индукторами апоптоза, изменения в котором в процессе старения могут отвечать за некоторые из наиболее важных аспектов "старения" иммунной системы, такие как создание расширенных мегаклонов клеток памяти, сокращение репертуара Т-лимфоцитов и усиление аутоиммунных проявлений.

Клеточные и молекулярные механизмы, относящиеся к способности организма подходящим образом реагировать на окислительный и воспалительный стресс, таким образом, вероятно, играют центральную роль в увеличении продолжительности жизни человека и избежании/отсрочке начала возрастных заболеваний. Кроме того, во время старения наблюдается общее снижение уровней цинка в плазме, что приводит к серьезным последствиям для иммунной системы. Следовательно, остается таким образом важным избегать дефицита цинка в пожилом возрасте и, следовательно, необходимо употреблять его в подходящих дозах и, главным образом, принимать его в форме, обеспечивающей его наилучшую биодоступность, принимая во внимание, что пожилое население часто страдает от проблем нарушенного всасывания в желудочно-кишечном тракте. Следовательно, сохраняется необходимость получить решение вышеизложенных проблем, которое позволит противостоять истощению иммунной системы, задерживая процесс старения и поддерживая условия долговременного гомеостаза.

Хорошее функционирование почек также способствует поддержанию долговременного состояния гомеостаза. Многие факторы участвуют в создании угрозы для функционирования почек, среди них накопление в крови азотсодержащих соединений, особенно мочевины, вследствие неспособности почек экскретировать их. Эти накопления приводят к уремии, которая представляет собой конечную стадию почечной недостаточности (острой или хронической).

Когда почки больше не способны выполнять свои функции, возникает стадия почечной недостаточности, которая, в зависимости от степени недостаточности, может быть острой или хронической. При большинстве почечных заболеваний функция почек прогрессивно ухудшается. Безуспешное устранение продуктов выделения (уремических токсинов, таких как индол и крезол, которые представляют собой бактериальные уремические токсины из микрофлоры, например из бактерий Е. coli), задержавшиеся в организме, оказывают токсическое действие почти на все органы организма. Основные субъективные проявления состояния уремии представляют собой тошноту, слабость, сонливость, трудности в питании и выполнении нормальных ежедневных действий.

Следовательно, принципиально важно иметь возможность вмешиваться в этот процесс и уменьшать количество уремических токсинов для поддержания хорошей функциональности почек, а также хороших условий гомеостаза.

Авторы изобретения обнаружили, что для поддержания долговременного состояния гомеостаза важно стимулировать иммунную систему таким образом, чтобы имела место контролируемая и умеренная эндогенная продукция или секреция, которая способствует поддержанию определенных и хорошо известных цитокинов в определенных диапазонах значений.

В результате интенсивных и широкомасштабных исследований и опытных разработок авторы изобретения выполнили вышеизложенную задачу путем отбора определенных штаммов бактерий, принадлежащих родам Lactobacillus и Bifidobacteria, обладающих способностью действовать "на двух фронтах": против "старения" иммунной системы и против феномена "Inflammaging" (хроническое воспаление, приводящее к старению организма).

Авторы изобретения впервые обнаружили, что определенные штаммы бактерий, выбранные из тех, которые принадлежат родам Lactobacillus и Bifidobacteria, которые для определенного набора цитокинов, измеряемых в определенных линиях клеток человека, имеют значения в пределах определенных диапазонов, способны противодействовать истощению иммунной системы, задерживая процесс старения и поддерживая долговременное состояние гомеостаза путем модулирования продукции цитокинов, обладающих как противовоспалительной активностью, так и провоспалительной активностью (IFN-гамма).

Объект настоящего изобретения представляет собой штамм бактерий, принадлежащих роду Lactobacillus или Bifidobacteria, характеризующийся наличием следующих свойств:

1) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции противовоспалительного цитокина, такого как интерлейкин-4 (IL-4), до величины, измененной в 2,5-4,5 раза относительно базового уровня, принятого за 1, предпочтительно в 3-4 раза относительно базового уровня, принятого за 1; и

2) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции провоспалительного цитокина, такого как IL-12p70, до величины, измененной в 0,85-1,05 раза относительно базового уровня, принятого за 1, предпочтительно в 0,90-1 раз относительно базового уровня, принятого за 1; и

3) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции провоспалительного цитокина, такого как интерферон-гамма (IFN-гамма), до величины, измененной в 7-19,5 раза относительно базового уровня, принятого за 1, предпочтительно 8-18 раз относительно базового уровня, принятого за 1; и

4) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции провоспалительных цитокинов, таких как IL-17, до величины, измененной в 0,90-1,40 раза относительно базового уровня, принятого за 1, предпочтительно в 0,95-1,30 раза относительно базового уровня, принятого за 1;и

5) общей способностью модулировать соотношение провоспалительных/противовоспалительных цитокинов с получением значения соотношения Th1/Th2 от 2,90 до 4,50, предпочтительно значения от 3 до 4.

Другие предпочтительные воплощения настоящего изобретения будут изложены и проиллюстрированы здесь и далее в следующем подробном описании без намерения ограничить каким-либо образом объем настоящего изобретения.

В результате проведенной авторами изобретения интенсивной научно-исследовательской деятельности они обнаружили, выбрали, выделили и охарактеризовали следующие бактериальные штаммы, которые являются объектами настоящего изобретения.

Авторы изобретения обнаружили, что бактериальные штаммы, принадлежащие роду Lactobacillus или Bifidobacteria, которые удовлетворяют всем вышеизложенным условиям (1)-(5), при введении в организм в течение периода времени по меньшей мере 2 недели, предпочтительно от 4 до 8 недель, способны стимулировать иммунную систему с контролируемой и умеренной эндогенной продукцией или секрецией, что способствует поддержанию определенных и хорошо известных цитокинов в пределах предопределенных диапазонов значений.

Предпочтительно композиции по настоящему изобретению, содержащие по меньшей мере один штамм бактерий, принадлежащих роду Lactobacillus или Bifidobacteria, который удовлетворяет всем вышеизложенным условиям (1)-(5), эффективно применяют для модулирования иммунной системы, замедления процесса старения и поддержания долговременного состояния гомеостаза, таким образом обеспечивая преимущества для здоровья организма.

В одном воплощении штаммы бактерий, принадлежащих роду Bifidobacteria, которые удовлетворяют всем вышеизложенным условиям (1)-(5), были выделены и выбраны из каловых масс человека от субъектов, возраст которых превышает сто лет. Эти бактериальные штаммы принадлежат виду Bifidobacterium longum.

Предпочтительно штаммы бактерий, принадлежащих виду Bifidobacterium longum, выбраны из группы, включающей или, альтернативно, состоящей из Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672, Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673 или их смесей.

Указанные штаммы бактерий были депонированы 16.02.2012 компанией Probiotical SpA Via Mattei, 3 -28100 Novara (NO) Italy в соответствии с Будапештским договором в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ GmbH, Germany).

Вышеуказанные штаммы бактерий эффективно используют для изготовления фармацевтической композиции, или медицинского устройства, или пищевой добавки, или пищевой композиции (кратко здесь и далее "композиции по настоящему изобретению"), как описано и заявлено ниже.

Первое воплощение представлено композицией для перорального медицинского устройства, где указанная композиция содержит или, альтернативно, состоит из:

(а) по меньшей мере одного штамма бактерий, принадлежащих роду Lactobacillus или Bifidobacteria, который удовлетворяет всем вышеизложенным условиям (1)-(5), для применения в модулировании иммунной системы, замедлении процесса старения, поддержании долговременного состояния гомеостаза, таким образом обеспечивая преимущества для здоровья организма и стимулируя усиленную функциональность желудочно-кишечного тракта. Предпочтительно компонент (а) композиции содержит или, альтернативно, состоит из Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672 и Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673.

Другое воплощение представлено композицией для перорального медицинского устройства, где указанная композиция содержит или, альтернативно, состоит из:

(а) по меньшей мере одного штамма бактерий, принадлежащих роду Lactobacillus или Bifidobacteria, который удовлетворяет всем вышеизложенным условиям (1)-(5); и

(б) специфического мукоадгезивного желирующего комплекса, состоящего из экзополисахаридов (EPS) бактериального происхождения, продуцируемых in situ штаммом бактерий Streptococcus thermophilus ST10 DSM25246, и полисахарида растительного происхождения, предпочтительно камеди тары, для применения в модулировании иммунной системы, замедлении процесса старения, поддержании долговременного состояния гомеостаза, таким образом обеспечивая преимущества для здоровья организма и стимулируя усиленную функциональность желудочно-кишечного тракта. Предпочтительно, компонент (а) композиции содержит или, альтернативно, состоит из Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672 и Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673.

Указанная композиция для перорального медицинского устройства способна модулировать иммунную систему, замедлять процесс старения, поддерживать долговременное состояние гомеостаза, таким образом обеспечивая преимущества для здоровья организма и стимулируя усиленную функциональность желудочно-кишечного тракта.

Указанный компонент (а) может представлять собой один или более чем один из штаммов бактерий, принадлежащих виду Bifidobacterium longum, выбранный из группы, содержащей или, альтернативно, состоящей из: Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672, Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673 или их смесей (компонент (а)).

Композиция содержит специфический мукоадгезивный желирующий комплекс (компонент (б)), состоящий из EPS, экзополисахаридов и камеди тары, обладающий способностью формировать гидрогель в течение нескольких минут после проглатывания благодаря его тиксотропным свойствам, и тем самым создавать механический барьерный эффект против метаболитов с провоспалительной активностью и следовательно способных усиливать окислительный стресс в организме, стимулируя процессы старения как на макромолекулярном, так и на клеточном уровне.

В предпочтительном воплощении композиция содержит смесь, содержащую или, альтернативно, состоящую из пяти микроорганизмов (компонент (а)), которые удовлетворяют условиям (1)-(5): Bifidobacterium longum DLBL 07 (DSM 25669), Bifidobacterium longum DLBL 08 (DSM 25670), Bifidobacterium longum DLBL 09 (DSM 25671), Bifidobacterium longum DLBL 10 (DSM 25672) и Bifidobacterium longum DLBL 11 (DSM 25673), полученным от субъектов, возраст которых превышает сто лет, и обладающих способностью усиливать барьерный эффект против кишечных микроорганизмов и метаболитов, имеющих отношение к старению, воздействуя непосредственно на качественный и количественный состав кишечной микрофлоры.

Кроме того, также присутствует микроорганизм Streptococcus thermophilus ST10 (в ассоциации с камедью тары), который, напротив, обладает способностью синтезировать in situ экзополисахариды (EPS) и тем самым увеличивать вязкость окружающей среды. Потребление вышеупомянутой бактерии ST10 обеспечивает в кишечнике человека источник молекул с желирующей активностью, таким образом осуществляя синергическое действие с камедью тары и тем самым усиливая действие механического барьера против метаболитов с провоспалительной активностью и таким образом способных увеличивать окислительный стресс организма, стимулируя процессы старения как на макромолекулярном, так и на клеточном уровне.

В другом воплощении композиция может дополнительно содержать, в дополнение к штаммам бактерий (а) и мукоадгезивному желирующему комплексу (б), штаммы Lactobacillus buchneri Lb 26 (DSM 16341) и/или Bifidobacterium lactis Bb1 (DSM 17850) (ProbioSel® и ProbioZinc®, соответственно), которые обеспечивают селен и цинк в легкоусвояемой для организма форме, таким образом усиливая защитные механизмы против окислительного стресса. Указанные бактериальные штаммы были депонированы в институте DSMZ в Германии компанией Bioman S.r.l., Via Alfieri 18, 10100 Torino (Italy). Предпочтительно компонент (а) композиции содержит или, альтернативно, состоит из: Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672 и Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673.

В другом воплощении композиция может дополнительно содержать, в дополнение к штаммам бактерий (а), мукоадгезивному желирующему комплексу (б) и штаммам Lactobacillus buchneri Lb 26 (DSM 16341) и/или Bifidobacterium lactis Bb1 (DSM 17850), штамм Bifidobacterium lactis BA05 (DSM 18352), обладающий способностью синтезировать фолаты и уравновешивая таким образом прогрессирующий дефицит этого метаболита при старении. Предпочтительно компонент (а) композиции содержит или, альтернативно, состоит из: Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672 и Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673.

В свете их общего механизма действия композиции, представляющие собой объект настоящего изобретения, синергически объединяют первый эффект, получаемый от поддержания определенных и хорошо известных цитокинов и их субпопуляций, таких как IL-4, IL-12, IFN-гамма, IL-17 и соотношения Th1/Th2 провоспалительных/противоспалительных цитокинов, в пределах предопределенных диапазонов значений, как определено выше в пунктах (1)-(5), наряду со вторым эффектом, получаемым от установления и поддержания эффективного действия механического барьера против микроорганизмов кишечника и метаболитов, имеющих более или менее существенное отношение к сильному окислительному стрессу и старению.

Камедь тары, присутствующая в мукоадгезивном желирующем комплексе, прогрессивно разрушается во время ее продвижения по желудочно-кишечному тракту резидентной микрофлорой, таким образом прогрессивно уменьшая ее желирующую способность механического препятствия. Постепенное уменьшение действия растительной камеди эффективно уравновешивается постепенным увеличением высвобождения экзополисахарида (EPS) в просвет желудочно-кишечного тракта бактериальным штаммом ST10, который проявляет свое действие главным образом в подвздошной кишке и толстой кишке.

Синергическая комбинация камеди тары и экзополисахаридов (EPS), продуцируемых in situ, обеспечивает таким образом наличие желирующих молекул на протяжении желудочно-кишечного тракта, максимально увеличивая и оптимизируя действие механического барьера, специфичного для данного продукта. Присутствие, продукцию и поддержание гидрофильного геля в просвете органа таким образом можно считать впервые действительно полным, с первой областью, где действие растительной камеди является максимальным, и второй областью, где действие экзополисахаридов (EPS) является максимальным.

В отношении вышесказанного известно, что старение представляет собой процесс, характеризующийся ремоделированием иммунной системы и снижением функциональности иммунного ответа. Эти возрастные изменения следует относить на счет феномена "старения" иммунной системы, явления, вызываемого главным образом постоянным контактом на протяжении жизни с антигенами и стрессовыми факторами, такими как, например, окислительный стресс.

Это приводит к общему "истощению" иммунной системы, в котором увеличение провоспалительных цикинов играет ключевую роль: фактически они способствуют процессу "Inflammaging", под которым понимают явление хронического воспаления, приводящего к старению организма.

Кроме того, процесс старения характеризуется изменениями в окислительно-восстановительном гомеостазе и прогрессивным усилением окислительного стресса. Таким образом, клеточные и молекулярные механизмы, связанные со способностью организма подходящим образом реагировать как на окислительный, так и на воспалительный стресс, по-видимому играют ключевую роль в увеличении продолжительности жизни человека и избежании или отсрочке начала основных возрастных дисфункций.

Другой важный аспект представляет собой свойство кишечной микрофлоры качественно и количественно варьировать при старении. Популяция кишечных бактерий фактически может претерпевать изменения в своем составе вследствие модификаций иммунологического барьера и барьера слизистой. Такое изменение микрофлоры у пожилых субъектов особенно важно в том отношении, что усиленный рост некоторых бактериальных видов может приводить к дефициту кальция, железа и фолатов, которые представляют собой элементы, необходимые бактериальным видам для их роста.

На основании вышеизложенного можно сделать заключение о том, что при рассмотрении процесса старения важно учитывать правильное и подходящее равновесие кишечной микрофлоры, главным образом в отношении прогрессирующей и, в большинстве случаев, необратимой потери функции нормального барьерного эффекта слизистой против метаболитов с провоспалительной и прооксидантной активностью.

Смесь из пяти микроорганизмов: Bifidobacterium longum DLBL 07 (DSM 25669), Bifidobacterium longum DLBL 08 (DSM 25670), Bifidobacterium longum DLBL 09 (DSM 25671), Bifidobacterium longum DLBL 10 (DSM 25672) и Bifidobacterium longum DLBL 11 (DSM 25673) - компонент (а), выделенный от субъектов, возраст которых превышает сто лет, обладает способностью усиливать барьерный эффект против кишечных микроорганизмов и метаболитов, имеющих отношение к старению, опосредованной мукоадгезивным желирующим комплексом, состоящим из камеди тары и экзополисахаридов (EPS), путем прямого действия на качественный и количественный состав кишечной микрофлоры. При старении наблюдается общее снижение способности всасывать цинк на уровне кишечника, что таким образом приводит к состоянию дефицита с серьезными последствиями для тимуса и иммунной системы.

Фактически цинк представляет собой элемент, необходимый для нормального функционирования иммунной системы, поскольку он выполняет многоаспектное действие, воздействуя на любое проявление иммунного ответа. В организме человека цинк, в количестве примерно 2 грамм, распределен по тканям, но в основном сконцентрирован в поперечнополосатой мускулатуре (60%), костях (30%) и коже (4-6%). Только цинк печени может быть частично мобилизован в случае ограниченного по времени дефицита, но никакого специального резервуара цинка не существует, следовательно требуется регулярное потребление с пищей. Приблизительно 10-40% цинка, поступившего с пищей, всасывается на уровне проксимальных отделов кишечника. Абсорбированное количество варьирует в зависимости от его химической формы, его концентрации в крови, одновременного присутствия в просвете желудочно-кишечного тракта микроэлементов, конкурирующих за транспорт, хелатирующих агентов и концентрации металлотионеина, синтезируемого клетками слизистой.

Однако, на основании вышеизложенного остается важным избегать в пожилом возрасте дефицита цинка и, следовательно, необходимо потреблять его в подходящих дозах и главным образом потреблять его в форме, обеспечивающей его наилучшую биодоступность, учитывая то, что популяция пожилых людей часто страдает от проблем, связанных с проблемами нарушения всасывания в кишечнике.

Добавка селена в рацион также является фундаментальной для обеспечения высвобождения цинка из внутриклеточных компартментов, где он изолирован, как часто происходит в популяции пожилых людей, и синергически действует с самим цинком по обеспечению антиоксидантной активности. Селен действительно представляет собой компонент глутатионпероксидазы, фермента с антиоксидантной активностью, ключевого для противодействия окислительному стрессу.

В одном воплощении штаммы Lactobacillus buchneri Lb26 (DSM 16341) и Bifidobacterium lactis Bb1 (DSM 17850) (ProbioSel® и ProbioZinc®, соответственно) находятся в композиции, представляющей собой объект настоящего изобретения, в тиндализованной форме; в этой форме указанные штаммы способны обеспечивать селен и цинк в легкодоступной для организма форме, полезной для компенсации дефицита, возникшего в процессе старения, усиливая дополнительным образом защитные механизмы против окислительного стресса, что особенно важно для людей старше 40-50 лет. Такие тиндализованные бактерии при достижении слизистой кишечника высвобождают, вблизи энтероцитов, цинк и селен в органической форме, которые таким образом непосредственно абсорбируются через слизистую кишечника и готовы для вхождения в системный кровоток и выполнения их действия в организме.

Штамм бактерий Bifidobacterium lactis Bb1 (DSM 17850) обладает способностью накапливать цинк внутри клетки во время своего роста в жидкой среде. Цинк из рациона, накопленный внутри клетки микроорганизма, имеет усвояемость более чем в 16 раз выше чем глюконат цинка и в 31,5 раз выше чем сульфат цинка, как показано в исследовании in vitro, проведенном на клетках Сасо-2, которые имитируют кишечный эпителий в системе Трансвелл.

Штамм бактерий Lactobacillus buchneri Lb26 (DSM 16341) обладает способностью аккумулировать селен внутри клетки. Указанный селен имеет усвояемость в 5,9 раз выше чем селенит натрия, в 9,4 раз выше чем селенометионин и даже в 65 раз выше чем селеноцистеин.

Высокая усвояемость двух микроэлементов, цинка и селена, позволяет противодействовать дефициту очень эффективным образом даже в очень низких дозах.

Возможность иметь цинк в прямой доступности на системном уровне позволяет избежать всех проблем, относящихся к его потреблению у пожилого субъекта с трудностями всасывания из кишечника, уравновешивая дефицит этого микроэлемента.

Кроме того, комбинация также с селеном позволяет преодолеть вышеизложенную проблему, связанную с типичным связыванием цинка металлотионеинами на внутриклеточном уровне в пожилом возрасте; селен, фактически, стимулирует его высвобождение из клеток.

Дополнительное присутствие Bifidobacterium lactis ВА05 (DSM 18352) в композиции по настоящему изобретению усиливает эффект механического барьера, описанный выше, и дополнительно обладает природной способностью к синтезу фолатов in situ (витамина В9) и уравновешивая таким образом прогрессирующий дефицит этого антиоксидантного метаболита при старении. В частности, известно, что фолаты проявляют барьерное действие против гомоцистеина, молекулы, имеющей происхождение от серосодержащей аминокислоты, обладающей способностью индуцировать сильную продукцию свободных радикалов и последующий окислительный стресс.

В свете ее общего механизма действия композиция по настоящему изобретению является активной против "Inflammaging" (хроническое воспаление, приводящее к старению организма), действуя прежде всего путем установления и поддержания эффективного механического барьерного действия против метаболитов, которые имеют более или менее значительное отношение к окислительному стрессу и старению, и уравновешивая дефицит определенных питательных микроэлементов и фолатов, обладающих ключевой активностью у взрослых старше 50 лет для обеспечения здорового приближения к старости.

Следовательно, можно утверждать, что композиция по настоящему изобретению устанавливает и поддерживает барьерный эффект, главным образом механического типа, против "Inflammaging" (хроническое воспаление, приводящее к старению организма), что таким образом способствует обеспечению лучшего состояния здоровья при старении.

В контексте настоящего изобретения штаммы бактерий, принадлежащих роду Lactobacillus или Bifidobacteria, которые удовлетворяют условиям (1)-(5), такие как штаммы бактерий, принадлежащие виду Bifidobacterium longum, могут находиться в указанных композициях по настоящему изобретению в форме живых клеток, и/или мертвых клеток, и/или в форме их метаболитов, и/или в форме их клеточных производных, и/или в форме их клеточного или ферментативного компонента.

Композиции по настоящему изобретению могут быть введены всем категориям людей без ограничений для поддержания долговременного состояния гомеостаза, способствования в увеличении продолжительности жизни субъекта; задержки и/или противодействия и/или уменьшения биологических процессов старения, например старения организма и/или кожи; уменьшения процессов старения, приводящих к потере памяти или зрительной памяти и/или способности концентрироваться; ингибирования продукции бактериодов путем неспецифического (продукция метаболитов) и/или специфического (продукция бактериоцинов) механизма ингибирования; стимулирования продукции бутират-продуцирующих клостридий, обладающих способностью продуцировать бутират, который способен ингибировать явление, приводящее к началу колита, язвенного колита, IBD (воспалительной болезни кишечника) и болезни Крона; ингибирования и/или уменьшения продукции энтеробактерий, принадлежащих семейству Enterobacteriaceae, в частности уменьшения нагрузки энтеробактерий, обычно существующих в составе микрофлоры; модифицирования равновесия кишечной микрофлоры для того, чтобы обеспечить преобладание вида Bifidobacterium longum; положительного воздействия на антиоксидантную активность, иммуномодуляторную активность с продукцией цитокинов.

Штаммы бактерий, принадлежащие виду Bifidobacterium longum, которые удовлетворяют всем вышеизложенным условиям (1)-(5), представляющие собой объект настоящего изобретения, могут способствовать увеличению продолжительности жизни человека, поскольку указанные штаммы могут принимать существенное участие благодаря их протеасоме (UPS = система убиквитин-протеасома). Действие протеасомы позволяет противодействовать биологическому явлению, приводящему к старению, таким образом сохраняя физическое и/или психическое состояние человека.

Предпочтительно композиции по настоящему изобретению могут содержать N-ацетилцистеин (NAC) как таковой, или вещество на основе N-ацетилцистеина (NAC), или его производное в комбинации с по меньшей мере одним штаммом бактерий, который удовлетворяет условиям (1)-(5).

Следовательно, в настоящем изобретении предусмотрено применение N-ацетилцистеина как в свободной форме, так и в микроинкапсулированной форме, защищенной от действия желудочного сока (от 10 до 1000 мг/сутки), обладающего действием механического барьера для противодействия способности E. coli к адгезии к стенке кишечника. Кроме того, N-ацетилцистеин стимулирует продукцию глутатиона и, таким образом, он обладает антиоксидантной активностью. Композиции по настоящему изобретению способны сохранять активность протеасомы. По этой причине их можно эффективно вводить людям для способствования увеличению продолжительности их жизни.

Штаммы бактерий, принадлежащих роду Lactobacillus или Bifidobacteria, которые удовлетворяют всем условиям (1)-(5), присутствуют в количествах от 0,1 до 65% по массе, предпочтительно от 0,5 до 15% по массе, еще более предпочтительно от 1 до 10% по массе, относительно общей массы композиции. Однако указанное процентное содержание относительно общей массы композиции зависит от категории продукта композиции, которую изготавливают. Например, количество указанных бактерий в капсуле предпочтительно составляет более чем 40%.

Композиции по настоящему изобретению содержат бактериальную нагрузку, имеющую концентрацию от 1×10⁶ до 1×10¹¹ КОЕ/г, предпочтительно от 1×10⁸ до 1×10¹⁰ КОЕ/г.

Композиции могут содержать бактерии в концентрации от 1×10⁶ до 1×10¹¹ КОЕ/доза, предпочтительно от 1×10⁸ до 1×10¹⁰ КОЕ/доза. Доза может составлять от 0,2 до 10 г, например 0,25 г, 1 г, 3 г, 5 г или 7 г.

Бактерии, используемые в настоящем изобретении, могут находиться в твердой форме, в частности в форме порошка, в обезвоженной форме, форме спрея или лиофилизированного порошка.

Пищевая композиция, или пищевая добавка, или медицинское устройство, или фармацевтическая композиция могут дополнительно содержать также несколько пребиотических волокон и углеводов с бифидогенной активностью, например, таких как инулин, фруктоолигосахариды (FOS), галакто- и транс-галактоолигосахариды (GOS и TOS), глюкоолигосахариды (GOSα), ксилоолигосахариды, (XOS), хитозан-олигосахариды (COS), соя-олигосахариды (SOS), изомальто-олигосахариды (IMOS), резистентный крахмал, пектины, псиллиум, арабиногалактаны, глюкоманнаны, галактоманнаны, ксиланы, лактоза, сахароза, лактулоза, лактит и многие другие типы камедей, предпочтительно камедь тары, акации, робинии, овса, бамбуковое волокно, волокна цитрусовых фруктов и вообще волокна, содержащие растворимую и нерастворимую часть в варьирующих соотношениях одной к другой.

Предпочтительно указанное волокно выбрано из группы, включающей FOS, инулин и волокна цитрусовых фруктов, предпочтительно в массовом соотношении от 1:3 до 3:1.

Количество пребиотических волокон и/или углеводов с бифидогенной активностью, если они присутствуют, составляет от 0,5 до 75% по массе, предпочтительно от 1% до 40% и еще более предпочтительно от 2 до 20% относительно общей массы композиции. В этом случае композиция или пищевая добавка обладает симбиотической активностью.

Композиции по настоящему изобретению могут дополнительно содержать одну или более чем одну физиологически приемлемую добавку или эксципиент, а также дополнительно содержать другие ингредиенты и/или активные компоненты, такие как витамины, минералы, биологически активные пептиды, вещества с антиоксидантной, гипохолестеринемической, гипогликемической, противовоспалительной активностью, подсластители в количестве по массе, обычно составляющем от 0,001% до 10% по массе, предпочтительно от 0,5 до 5% по массе, в любом случае в зависимости от типа активного компонента и какой-либо их рекомендованной ежесуточной дозы относительно общей массы композиции.

Композиции по настоящему изобретению изготавливают методиками, известными и доступными для специалиста в данной области техники, способного применять известное оборудование и устройства и подходящие способы получения.

Таблица А относится к штаммам, протестированным авторами изобретения в контексте настоящего изобретения.

Авторы изобретения протестировали штаммы из Таблицы А для того, чтобы проанализировать молекулы, характеризующие отдельные клеточные субпопуляции и провести определение цитокинов методом E.L.I.S.A (твердофазный иммуноферментный анализ). Используемые способы раскрыты ниже.

Анализ молекул, характеризующих отдельные клеточные субпопуляции

Для иммунофенотипической характеристики образцы 0,1×106 РВМС (мононуклеарные клетки периферической крови)/100 мкл 1% BSA (альбумин бычьей сыворотки)-РВS (забуференный фосфатом физиологический раствор) инкубировали в течение 30 минут в темноте с различными комбинациями моноклональных антител (mAb), коньюгированных с флуоресцеинизотиоцианатом (FITC), фикоэритрином (РЕ) или перидинин-хлорофиллпротеином (РеrСР). Соответствующие контроли изотипа также включали в определение. В таблице Б ниже подробно описаны комбинации антител, которые использовали.

Линия дифференцировки = CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56

После инкубации образцы промывали 1,5 мл 1% BSA-PBS для удаления каких-либо следов избытка антител (центрифугирование при 1600 об/мин в течение 5 минут). Клетки фиксировали путем добавления 200 мкл 1% PFA (параформальдегид)-РВS и хранили при 4°C. Не позднее чем через 24 часа после получения образцы анализировали с помощью цитофлюориметра FACScalibur, отбирая клетки таким образом, чтобы исключить из анализа загрязнение клеточными остатками.

Анализ цитокинов методом E.L.I.S.A.

Настоящий метод позволяет определить концентрацию интерлейкинов человека, присутствующих в супернатантах культивируемых клеток, сыворотке, плазме и моче путем твердофазного иммуноферментного анализа (E.L.I.S.A.). Что касается исследования цитокинов, в настоящем способе использовали набор Human ELISA Ready-SET-Go® от eBioscience Company.

Принцип метода

Твердофазный иммуноферментный анализ (E.L.I.S.A.) представляет собой иммуноферментный тест, предназначенный для проверки присутствия специфического антигена (Аg) в данном образце. В частности, метод E.L.I.S.A., к которому относится настоящий метод, относится к прямому или сэндвич-типу. Моноклональные антитела (иммобилизованные Аb), способные специфически распознавать исследуемый цитокин, использовали для покрытия лунок микропланшета. Образцы распределяли по разным микролункам так, чтобы все исследуемые цитокины, которые присутствуют, могли связываться с иммобилизованными Аb. Таким образом, конъюгированные с биотином антитела (детекторные Аb), способные выявлять исследуемый цитокин и связываться с ним, и фермент пероксидаза (HRP), конъюгированный со стрептавидином, способный связываться с биотином и заякоривающий сам фермент на комплексе, таким образом последовательно добавляли. Наконец, добавляли бесцветный хромогенный субстрат, который в присутствии фермента окислялся, что приводило к развитию голубой окраски с интенсивностью, пропорциональной количеству иммобилизованного цитокина. Реакцию останавливали добавлением серной кислоты, что приводило к изменению цвета с голубого на желтый.

Процедура

Следует отметить, что все образцы и реагенты, используемые для проведения этого метода, перед их использованием нужно довести до комнатной температуры. Все описанные этапы следует проводить при комнатной температуре.

Возьмите нужное количество 96-луночных планшетов с плоским дном, специфических для анализов E.L.I.S.A. (Corming Costar 9018 ELISA, включены в набор), так чтобы имелась лунка для каждого тестируемого образца и подходящее число лунок для получения стандартной калибровочной кривой (всего 16 лунок).

Разведите исходный раствор первичных антител (иммобилизованные Аb; конечная концентрация 10 мкг/мл) в 250 раз в растворе для покрытия 1Х (исходный раствор 10Х, включенный в набор, следует развести 1:10 стерильной дистиллированной водой).

Внесите по 100 мкл такого раствора во все лунки, покройте планшет клейкой лентой и инкубируйте в течение ночи (O.N.) при 4°С (в холодильнике).

Промойте каждую лунку 5 раз 200 мкл промывочного раствора (0,05% Твин 20 в PBS). С помощью вакуумного насоса отберите жидкость от последней промывки из всех лунок и переверните планшет на лист фильтровальной бумаги для удаления каких-либо остатков раствора.

Добавьте по 200 мкл аналитического буфера 1Х (исходный раствор 5Х, включенный в набор, следует развести 1:5 стерильной дистиллированной водой) во все лунки и инкубируйте в течение 1 часа при комнатной температуре (RT).

Промойте каждую лунку 5 раз 200 мкл промывочного раствора. С помощью вакуумного насоса отберите жидкость от последней промывки из всех лунок и переверните планшет на лист фильтровальной бумаги для удаления каких-либо остатков раствора.

Приготовьте раствор, содержащий рекомбинантный цитокин человека, требуемый для построения стандартной калибровочной кривой, в соответствии с таблицей ниже, центрифугируя все пробирки перед тем как открыть их:

Согласно следующей схеме, внесите по 100 мкл аналитического буфера 1Х в лунки от С2 до С8. Внесите 200 мкл ИСХОДНОГО РАСТВОРА (приготовленного согласно таблице выше) в лунку С1 и продолжите серию разведений 1:2 как указано в схеме. Разведения можно выполнять прямо в лунках или в пробирках Эппендорф.

Кривая должна быть получена в двух повторах.

Добавьте 100 мкл каждого тестируемого образца (S, в двух повторах) в определенную лунку согласно схеме планшета. Накройте планшет клеящей пленкой и инкубируйте в течение ночи (O.N.) при 4°С (в холодильнике).

Приготовьте раствор, содержащий вторичные биотинилированные антитела (детекторные Аb), путем разведения исходного раствора в 250 раз аналитическим буфером 1Х, как изложено в рекомендациях производителя.

Промойте каждую лунку 5 раз 200 мкл промывочного раствора. С помощью вакуумного насоса отберите жидкость от последней промывки из всех лунок и переверните планшет на лист фильтровальной бумаги для удаления каких-либо остатков раствора.

Внесите по 100 мкл раствора, содержащего вторичные Аb, во все лунки, накройте планшет клеящей пленкой и инкубируйте в течение 1 часа при RT.

Приготовьте раствор, содержащий фермент авидин-HRP (пероксидаза хрена), путем разведения исходного раствора аналитическим буфером 1Х в 250 раз, как изложено в рекомендациях производителя.

Промойте каждую лунку 5 раз 200 мкл промывочного раствора. С помощью вакуумного насоса отберите жидкость от последней промывки из всех лунок и переверните планшет на лист фильтровальной бумаги для удаления каких-либо остатков раствора.

Внесите по 100 мкл раствора с ферментом во все лунки, накройте планшет клеящей пленкой и инкубируйте в течение 30 мин при RT.

Промойте каждую лунку 7 раз 200 мкл промывочного раствора. С помощью вакуумного насоса отберите жидкость от последней промывки из всех лунок и переверните планшет на лист фильтровальной бумаги для удаления каких-либо остатков раствора.

Добавьте по 100 мкл Субстрата (1Х раствор тетраметилбензидина (ТМВ)) во все лунки и инкубируйте при RT в течение 10 минут в темноте (накройте планшет алюминиевой фольгой).

Остановите реакцию путем добавления в каждую лунку 50 мкл 2 н. серной кислоты (цвет изменится с голубого на желтый).

Проанализируйте планшет на спектрофотометрическом считывателе для 96-луночных планшетов не позднее чем через 30 мин от развития окраски при длине волны 450 нм.

Расчет/Выражение результатов

Используя калькулятор-таблицу Excell или любое программное обеспечение, предоставленное в используемом считывателе, вставьте все полученные на спектрофотометре значения поглощения. Рассчитайте среднее значение поглощения для каждого двойного повтора (стандарта и проб).

Только для стандартной кривой сопоставьте значения поглощения с известными концентрациями рекомбинантного цитокина в разных разведениях.

Путем использования значений стандартной кривой постройте график со средними значениями поглощения по оси x и известными концентрациями цитокина по оси y.

Постройте стандартную калибровочную кривую, которая лучше соответствует точкам на графике (R=1 представляет собой идеальный случай). Рекомендуется построить 5-параметрическую кривую (подбор пятипараметрической логистической 5-PL кривой).

Подставьте в график уравнение построенной кривой и значение R.

Затем определите концентрацию цитокинов в каждом отдельном образце путем экстраполяции уравнения построенной стандартной кривой (см. следующий пример).

Пример: Таблица значений поглощения в зависимости от концентраций для построения стандартной калибровочной кривой, полученная по результатам анализа цитокина IL-4.

Для каждого образца с помощью экстраполяции возможно получить неизвестную концентрацию присутствующего там IL-4 путем замены значения X в уравнении кривой на прочитанное значение OD.

Интерпретация результатов

Когда методика выполнена точно, количества тестируемых цикотинов в каждом тестируемом образце должны находиться в диапазоне значений стандартной калибровочной кривой. Концентрации цитокинов, выходящие за пределы диапазона стандартной калибровочной кривой, следует рассматривать как неточные. Особенно для более высоких значений рекомендуется дополнительно развести тестируемый образец аналитическим буфером.

Результаты представлены в Таблице Д.

В отношении композиции из 5 штаммов: Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672 и Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673 получены следующие результаты: IL-12p70=1,02±0,02; IL-4=3,19±0,41; IFN-g=16,17±4,84; IL-17A=1,11±0,04. Варьирование соотношения Th1/Th2 относительно базового уровня составляет 3,10±1,06.

Тесты по биоконверсии индола штаммами, принадлежащими виду Bifidobacterium longum.

В этом исследовании изучали возможность и способность смеси на основе 5 штаммов бактерий (коротко, "смесь пяти штаммов"), принадлежащих виду В. longum: Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672 и Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673, в массовом соотношении 1:1:1:1:1 (10⁹ КОЕ/г для каждого бактериального штамма), осуществлять биоконверсию уремического токсина индола. Тесты по биоконверсии выполняли в условиях роста клеток.

Материалы и методы

Приготавливали 1М исходный раствор индола в DMSO (диметилсульфоксид). Лиофилизованную смесь пяти штаммов бифидобактерий как описано выше активировали в агаре MRS (Ман, Рогоза, Шарп) (BD Difco, Sparks, USA) путем добавления L-цистеин-НСl и инкубировали в анаэробных условиях (N₂ 85%, СО₂ 10%, Н₂5%) при температуре 37°С и в течение 48 ч.

Для оценки конверсии индола активированную культуру бифидобактерий инокулировали таким образом (10% об./об.) в 10 мл MRS, содержащего 1 мМ индола, и инкубировали в анаэробных условиях (N₂ 85%, СО₂ 10%, Н₂ 5%) при температуре 37°С и в течение 48 ч.

Через 48 ч отбирали аликвоты и центрифугировали (13000 × g в течение 5 мин при 4°С), затем полученный супернатант фильтровали (целлюлозно-ацетатный фильтр 0,22 мкм). Затем 10 мкл профильтрованного супернатанта анализировали посредством ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) (Agilent 1100, Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA, USA), оснащенной детектором на различные длины волн и колонкой ZORBAX Eclipse XDB-C18 (быстрое разрешение, размер частиц 1,8 мкм, 4,6×50 мм, Agilent). Подвижная фаза состояла из 40 мМ водного раствора ацетата аммония (Растворитель А) и ацетонитрила (Растворитель Б). Устанавливали скорость потока 0,8 мл/мин. Таким образом, для анализа ВЭЖХ применяли следующий градиент: 0-10 минут, линейный от 10% до 50% Растворителя Б; 10-11 мин, линейный, вплоть до 90%; 11-16 мин, изократический 90%; 16-17 мин, линейный 10%; 17-20 мин, изократический 10%. Аналит индол определяли на длине волны 275 нм и количественно оценивали с использованием внешнего стандарта.

Результаты

Смесь из пяти штаммов Bifidobacterium longum, как описано выше, анализировали на ее способность превращать уремический токсин индол, таким образом снижая его концентрацию в культуральной среде.

Эксперимент выполняли в условиях активного роста бактерий в культуральной среде. В отсутствие смеси Bifidobacterium longum концентрация индола в культуральной среде оставалась неизменной. В присутствии активированной смеси Bifidobacterium longum концентрация индола (1 мМ) снижалась на 24% ± 2% через 48 ч инкубации в анаэробных условиях (N₂ 85%, СО₂ 10%, Н₂ 5%) и при температуре 37°С. Присутствие уремического токсина индола в культуральной среде не ограничивало рост бактерий смеси Bifidobacterium longum (Р>0,05).

Воплощения (En) настоящего изобретения приведены ниже:

Е1. Штамм бактерий рода Lactobacillus или Bifidobacteria, выбранный из тех, которые обладают:

(1) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции противовоспалительного цитокина, такого как IL-4, до величины, измененной в 2,5-4,5 раза относительно базового уровня, принятого за 1; и

(2) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции провоспалительного цитокина, такого как IL-12p70, до величины, измененной в 0,85-1,05 раза относительно базового уровня, принятого за 1; и

(3) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции провоспалительного цитокина, такого как IFN-гамма, до величины, измененной в 7-19,5 раза относительно базового уровня, принятого за 1; и

(4) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции провоспалительных цитокинов, таких как IL-17, до величины, измененной в 0,90-1,40 раза относительно базового уровня, принятого за 1; и

(5) общей способностью модулировать соотношение провоспалительных/противовоспалительных цитокинов до достижения значения соотношения Th1/Th2 от 2,90 до 4,50;

для применения в модулировании иммунной системы, замедлении процесса старения, поддержании долговременного состояния гомеостаза.

Е2. Штамм бактерий для применения согласно Е1, обладающий:

(1) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции противовоспалительного цитокина, такого как IL-4, до величины, измененной в 3-4 раза относительно базового уровня, принятого за 1; и

(2) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции провоспалительного цитокина, такого как IL-12p70, до величины, измененной в 0,9-1 раз относительно базового уровня, принятого за 1; и

(3) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции провоспалительного цитокина, такого как IFN-гамма, до величины, измененной в 8-18 раз относительно базового уровня, принятого за 1; и

(4) способностью модулировать иммунную систему путем модулирования продукции провоспалительных цитокинов, таких как IL-17, до величины, измененной в 0,95-1,3 раза относительно базового уровня, принятого за 1; и

(5) общей способностью модулировать соотношение провоспалительных/противовоспалительных цитокинов с получением значения соотношения Th1/Th2 от 3 до 4.

ЕЗ. Штамм бактерий для применения согласно Е1 или Е2, принадлежащий виду Bifidobacterium longum, где указанный штамм предпочтительно выбран из группы, включающей или, альтернативно, состоящей из: Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672, Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673 или их смесей.

E4. Композиция для перорального применения, включающая или, альтернативно, состоящая из: а) по меньшей мере одного штамма бактерий рода Lactobacillus или Bifidobacteria, которые удовлетворяют всем условиям (1)-(5), как заявлено в Е1, или Е2, или Е3; для применения в модулировании иммунной системы, замедлении процесса старения, поддержании долговременного состояния гомеостаза.

Е5. Композиция для применения согласно Е4, где указанная композиция предназначена для применения в лечении почечной недостаточности, предпочтительно острой или хронической, для поддержания долговременного состояния гомеостаза.

Е6. Композиция для применения согласно Е4 или Е5, где указанная композиция предназначена для применения в уменьшении количества уремических токсинов, для поддержания долговременного состояния гомеостаза.

Е7. Композиция для применения согласно Е4, или Е5, или Е6, где указанные уремические токсины имеют бактериальное происхождение и предпочтительно выбраны из индола и/или крезола.

Е8. Композиция для применения согласно любому из Е4-Е7, где указанная композиция содержит или, альтернативно, состоит из:

а) по меньшей мере одного штамма бактерий, принадлежащих роду Lactobacillus или Bifidobacteria, который удовлетворяет условиям (1)-(5), как заявлено в Е1, или Е2, или E3; и

б) специфического мукоадгезивного желирующего комплекса, состоящего из экзополисахаридов (EPS) бактериального происхождения, продуцируемых in situ штаммом бактерий Streptococcus thermophilus ST10 DSM25246, и полисахарида растительного происхождения; предпочтительно камеди тары.

Е9. Композиция для применения согласно любому из Е4-Е8, где указанная композиция дополнительно содержит штаммы Lactobacillus buchneri Lb 26 (DSM 16341) и/или Bifidobacterium lactis Bb1 (DSM 17850), которые, соответственно, обеспечивают селен и цинк в легкоусвояемой организмом форме; предпочтительно указанные штаммы находятся в тиндаллизованной форме.

Е10. Композиция для применения согласно любому из Е4-Е9, где указанная композиция дополнительно содержит штамм Bifidobacterium lactis ВА05 (DSM 18352), который способен синтезировать фолаты.

Е11. Композиция для применения согласно любому из Е4-Е10, где указанная композиция дополнительно содержит несколько пребиотических волокон и углеводов с бифидогенной активностью, выбранных из инулина, фруктоолигосахаридов (FOS), галакто- и транс-галактоолигосахаридов (GOS и TOS), глюкоолигосахаридов (GOSα), ксилоолигосахаридов (XOS), хитозан-олигосахаридов (COS), соя-олигосахаридов (SOS), изомальто-олигосахаридов (IMOS), резистентного крахмала, пектинов, псиллиума, арабиногалактанов, глюкоманнанов, галактоманнанов, ксиланов, лактозы, лактулозы, лактита и многих других типов камедей, предпочтительно камеди тары, акации, робинии, овса, бамбукового волокна, волокна цитрусовых фруктов и в общем волокон, содержащих растворимую и нерастворимую часть в соотношениях, варьирующих одна к другой.

Е12. Композиция для применения согласно любому из Е4-Е11, где указанная композиция имеет бактериальную нагрузку, составляющую от 1×10⁶ до 1×10¹¹ КОЕ/г, предпочтительно от 1×10⁸ до 1×10¹⁰ КОЕ/г.

Е13. Композиция для применения согласно любому из Е4-Е12, где указанная композиция содержит штаммы бактерий рода Lactobacillus или Bifidobacteria, которые удовлетворяют всем условиям (1)-(5) согласно Е1, Е2 или Е3, в количестве от 0,1 до 65% по массе, предпочтительно от 0,5 до 15% по массе; еще более предпочтительно от 1 до 10% по массе относительно общей массы композиции.

(*) степень индукции бактериями (раз):

N>1 увеличение тестируемого цитокина, N<1 уменьшение тестируемого цитокина, N=1 отсутствует изменение тестируемого цитокина; числа, выделенные жирным шрифтом = статистически значимое отклонение

(*) степень индукции бактериями (раз):

N>1 увеличение тестируемого цитокина, N<1 уменьшение тестируемого цитокина, N=1 отсутствует изменение тестируемого цитокина; числа, выделенные жирным шрифтом статистически значимое отклонение

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для поддержания гомеостаза путем поддерживания соотношения провоспалительных/противовоспалительных цитокинов Th1/Th2. Применяют смеси штаммов бактерий, состоящей из: Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672 и Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673, для поддержания гомеостаза путем поддерживания соотношения провоспалительных/противовоспалительных цитокинов Th1/Th2 в диапазоне от 2,90 до 4,50 и путем уменьшения количества уремических токсинов. Группа изобретений относится также к применению композиции, содержащей указанные штаммы для поддержания гомеостаза. Использование данной группы изобретений позволяет поддерживать долговременно состояние гомеостаза в организме человека при лечении почечной недостаточности путем уменьшении количества уремических токсинов, предпочтительно бактериального происхождения, таких как индол и/или крезол. 2 н. и 14 з.п. ф-лы, 5 табл.

1. Применение смеси штаммов бактерий, состоящей из: Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672 и Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673, для поддержания гомеостаза путем поддерживания соотношения провоспалительных/противовоспалительных цитокинов Th1/Th2 в диапазоне от 2,90 до 4,50 и путем уменьшения количества уремических токсинов.

2. Применение смеси штаммов бактерий по п. 1, где указанное соотношение провоспалительных/противовоспалительных цитокинов Th1/Th2 поддерживают при значении от 3 до 4.

3. Применение смеси штаммов бактерий по п. 1 или 2, где указанные провоспалительные и противовоспалительные цитокины представляют собой интерлейкин-4 (IL-4), IL-12p70, интерферон-гамма (IFN-гамма) и IL-17.

4. Применение смеси штаммов бактерий по любому из пп. 1-3, где штаммы бактерий смеси присутствуют в массовом соотношении 1:1:1:1:1.

5. Применение смеси штаммов бактерий по любому из пп. 1-4, где указанные уремические токсины имеют бактериальное происхождение и предпочтительно выбраны из индола и/или крезола.

6. Применение композиции для перорального приема, включающей смесь штаммов бактерий, состоящую из: Bifidobacterium longum DLBL 07 DSM 25669, Bifidobacterium longum DLBL 08 DSM 25670, Bifidobacterium longum DLBL 09 DSM 25671, Bifidobacterium longum DLBL 10 DSM 25672 и Bifidobacterium longum DLBL 11 DSM 25673, для поддержания гомеостаза путем поддерживания соотношения провоспалительных/противовоспалительных цитокинов Th1/Th2 в диапазоне от 2,90 до 4,50 и путем уменьшения количества уремических токсинов.

7. Применение композиции по п. 6, где указанное соотношение провоспалительных/противовоспалительных цитокинов Th1/Th2 поддерживают при значении от 3 до 4.

8. Применение композиции по п. 6 или 7, где указанные провоспалительные и противовоспалительные цитокины представляют собой IL-4, IL-12p70, IFN-гамма и IL-17.

9. Применение композиции по любому из пп. 6-8, где штаммы бактерий смеси присутствуют в массовом соотношении 1:1:1:1:1.

10. Применение композиции по любому из пп. 6-9, где указанные уремические токсины имеют бактериальное происхождение и предпочтительно выбраны из индола и/или крезола.

11. Применение композиции по любому из пп. 6-10, где указанная композиция дополнительно содержит специфический мукоадгезивный желирующий комплекс, состоящий из экзополисахаридов (EPS) бактериального происхождения, продуцируемых in situ штаммом бактерий Streptococcus thermophilus ST10 DSM25246, и полисахарида растительного происхождения, предпочтительно камеди тары.

12. Применение композиции по любому из пп. 6-11, где указанная композиция дополнительно содержит штаммы Lactobacillus buchneri Lb 26 (DSM 16341) и/или Bifidobacterium lactis Bb1 (DSM 17850), которые, соответственно, обеспечивают селен и цинк в легкоусвояемой для организма форме, причем указанные штаммы предпочтительно находятся в тиндаллизованной форме.

13. Применение композиции по любому из пп. 6-12, где указанная композиция дополнительно содержит штамм Bifidobacterium animalis subsp. lactis BA05 (DSM 18352), который обладает способностью синтезировать фолаты.

14. Применение композиции по любому из пп. 6-13, где указанная композиция дополнительно содержит несколько пребиотических волокон и углеводов с бифидогенной активностью, выбранных из инулина, фруктоолигосахаридов (FOS), галакто- и транс-галактоолигосахаридов (GOS и TOS), глюкоолигосахаридов (GOSα), ксилоолигосахаридов (XOS), хитозан-олигосахаридов (COS), соя-олигосахаридов (SOS), изомальто-олигосахаридов (IMOS), резистентного крахмала, пектинов, псиллиума, арабиногалактанов, глюкоманнанов, галактоманнанов, ксиланов, лактозы, лактулозы, лактита и многих других типов камедей, предпочтительно камеди тары, акации, робинии, овса, бамбукового волокна, волокон цитрусовых фруктов.

15. Применение композиции по любому из пп. 6-14, где указанная композиция имеет бактериальную нагрузку, составляющую от 1×10⁶ до 1×10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ)/г для каждого бактериального штамма, предпочтительно от 1×10⁸ до 1×10¹⁰ КОЕ/г, более предпочтительно около 1×10⁹ КОЕ/г.

16. Применение композиции по любому из пп. 6-15, где указанная композиция содержит указанную смесь штаммов бактерий в количестве от 0,1 до 65% по массе, предпочтительно от 0,5 до 15% по массе, еще более предпочтительно от 1 до 10% по массе относительно общей массы композиции.