КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ФЛУДИОКСОНИЛ И СМЕСЬ, СОДЕРЖАЩУЮ ШТАММЫ AUREOBASIDIUM PULLULANS Российский патент 2020 года по МПК A01P3/00 A01N63/30 A01N43/54 C12R1/645 

Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей по меньшей мере один химический фунгицид, а также к применению композиции и способу профилактики или ограничения распространения по меньшей мере одного заболевания растений, вызываемого микопатогенами.

Чтобы иметь возможность увеличивать в максимально возможной степени урожайность в сельском хозяйстве, необходимо в максимально возможной степени защищать сельскохозяйственную продукцию от поражения вредителями. Это обстоятельство имеет большое значение в случае всех сельскохозяйственных культур, особенно в случае выращивания фруктов и овощей, и обычно для защиты культивируемых растений от поражения патогенами осуществляют их опрыскивание или обработку химическими фунгицидами, чтобы предотвратить фитопатогенную инфекцию или уменьшить ее распространение. Химические фунгициды такого рода обычно имеют очень широкий спектр применения и против некоторых патогенов действуют неизбирательно, так что их применение очень широко распространено. Подобно тому, что известно в случае антибиотиков, патогены с течением времени вырабатывают резистентность и пониженную чувствительность к такого рода химическим веществам, обладающим фунгицидным действием, и действие химических фунгицидов, применяемых при обработке или профилактике от поражения патогенами, становится все менее значительным, вплоть до того, что патогенные агенты к средствам для опрыскивания становятся резистентными в такой степени, что требуется осуществлять поиск новых веществ.

Химические фунгициды наряду с проблемой, состоящей в том, что с течением времени развивается резистентность и пониженная чувствительность к ним, характеризуются также проблемой, состоящей в том, что они после нанесения на обрабатываемые растения по меньшей мере частично попадают на почву, вследствие чего может происходить загрязнение, а другие микроорганизмы, в отношении которых обработка или профилактика в данном случае совсем не предусматривалась, вследствие загрязнения также могут становиться резистентными к этим химическим фунгицидам. Таким образом, проявляется нежелательный эффект, состоящий в том, что резистентными могут становиться не только целевые организмы (патогены), но и нецелевые организмы, обработка которых при применении соответствующего химического фунгицида первоначально не предусматривалась. Это обстоятельство может иметь следствием то, что эти нецелевые организмы в свою очередь приобретают совершенно неизвестную резистентность и пониженную чувствительность, так что затем в необходимом случае не сможет быть осуществлена обработка традиционными химическими фунгицидами или обработка не даст требуемого результата.

Обработанные таким образом растения, фрукты или овощи попадают в дальнейшем в пищевой цикл сельскохозяйственных животных и людей и вследствие неизвестной нагрузки по фунгицидам могут наносить значительный вред, например, за счет того, что формируется вторичная резистентность.

Кроме того, общественное мнение относится к применению химических фунгицидов все более отрицательно, так как люди вследствие своих все более увеличивающихся знаний о принципах действия и последствиях чрезмерного применения химических фунгицидов отвергают их применение и желают отказаться от них в возможно большей степени, что делает необходимым осуществлять поиски альтернативных решений.

Наряду с применением химических фунгицидов с некоторых пор известно о применении биологических фунгицидов, которые обладают преимуществом, состоящим в том, что патогены не могут формировать резистентность к этим биологическим фунгицидам. Может ли быть приравнено действие биологических агентов действию химических фунгицидов и в какой мере, зависит от конкретного применяемого биологического средства или биологической смеси и конкретного патогена, против которого должно быть направлено действие, так что для каждого конкретного случая требуется осуществление множества испытаний и исследований.

Из DE 69919762 T2 известны фунгицидные композиции для борьбы с фитопатогенными заболеваниями технических культур, в случае которых комбинацию из двух веществ, обладающих фунгицидным действием, применяли для того, чтобы таким образом обеспечить синергическое фунгицидное действие и благодаря этому иметь возможность снизить общее количество применяемых веществ, обладающих фунгицидным действием.

В EP 0930824 B1 представлены сведения о смеси, которая по существу состоит из препарата из растения Reynoutria sachalinensis, а также азотного удобрения, смесь которых является приемлемой для применения для предотвращения поражения фитопатогенными грибами и для борьбы с фитопатогенными грибами. В случае этой смеси также должно уменьшаться общее количество внесенного активного вещества.

В WO 99/62341 представлена информация о композиции, обладающей защитными и лечебными свойствами, а также о соответствующих композициях, которые должны биологически действовать на заболевания растений, причем композиции предпочтительно предназначены для применения после сбора урожая. Композиция такого рода содержит при этом по меньшей мере один антагонистически действующий микроорганизм и предпочтительно биологическое антимикотическое средство, такое как, например, фермент.

В "R. Castoria et al., Postharvest Biology and Technology 22, pages 7-17, 2001" описано действие штаммов Aureobasidium pullulans (LS-30) в качестве антагонистов патогенным агентам на фруктах, которые поражают их после сбора урожая, и установлено, что штаммы Aureobasidium pullulans проявляют значительную антагонистическую эффективность против Botrytis cinerea, Penicillium expansum, Rhizopus stolonifer и Aspergillus niger в случае различных растений. Так, в частности, раны на яблоках обрабатывали штаммами Aureobasidium pullulans (LS-30) и для сравнения раны обрабатывали только водой. Полученные результаты показали, что штаммы Aureobasidium pullulans обладают хорошей антагонистической эффективностью против грибкового возбудителя опадания яблок.

В WO 2008/114304 описано применение штаммов Aureobasidium pullulans совместно с адъювантами в виде пропионата кальция и пропионата кальция с соевым маслом или с фунгицидом процимидоном для борьбы с Botrytis cinerea в случае винограда. При этом была испытана как комбинация из отдельных штаммов Aureobasidium pullulans, так и из штаммов Aureobasidium pullulans с фунгицидом флудиоксонилом или смесью ципродинила и флудиоксонила.

На интернет-странице компании BIOFA [http://www.biofa-profi.de/de/b/blossomprotecttm.html?file=files/content/Prdukte/BlossomProtectTM/blossomprotect produkthandbuch 2012.pd] была рекомендована комбинация из ципродинила и штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941. В перечне совместимости, приведенном в указанном документе, представлено также множество химических фунгицидов, которые вследствие своей несовместимости с содержащими штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 продуктами "Blossom Protect™" или "Boni Protect™" в композициях, описанных в указанном документе, не могут быть применены.

Несмотря на эти знания, все же существует потребность в разработке других эффективных фунгицидов или фунгицидных смесей, в случае которых применяемое количество химических фунгицидов может быть четко уменьшено и, кроме того, может быть обеспечено заметно улучшенное действие по сравнению с применением ингредиентов как в случае по меньшей мере одного химического фунгицида, так и в случае биологического активного вещества.

С целью решения этой задачи композиция по настоящему изобретению по существу отличается тем, что она дополнительно по меньшей мере к одному химическому фунгициду содержит смесь, содержащую по меньшей мере штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941, причем по меньшей мере один химический фунгицид, а также смесь штаммов Aureobasidium pullulans содержатся в композиции в синергически действующих количествах, и по меньшей мере один химический фунгицид выбирают из флудиоксонила или комбинации, содержащей флудиоксонил и ципродинил. За счет того‚ что композиция дополнительно по меньшей мере к одному химическому фунгициду содержит смесь, содержащую по меньшей мере штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 в синергически действующих количествах, удается обеспечить более хорошее фунгицидное действие, чем в случае применения ингредиентов индивидуально или по отдельности. При этом в случае действий таким образом резистентность, обнаруженную ранее при индивидуальном применении фунгицидов, в случае химических фунгицидов, состоящих из флудиоксонила или комбинации, содержащей флудиоксонил и ципродинил, удается устранить или блокировать и неожиданно в заметной степени улучшить эффективность фунгицидов. Особенно активной оказалась композиция, в случае которой профилактика микопатогенов выявила по меньшей мере резистентность и низкую чувствительность по меньшей мере к одному из химических фунгицидов в композиции. Характеристика "особенно активная" означает, что коэффициент синергизма композиции по сравнению с ингредиентами составляет больше 1,1.

Более предпочтительной является комбинация из флудиоксонила и ципродинила. В частности, ципродинил или флудиоксонил в настоящее время показывают довольно значительно ограниченную эффективность по отношению к микопатогенам, так как они уже проявляют резистентность к этим активным веществам. Неожиданно удалось показать, что, когда комбинация химических фунгицидов флудиоксонила и ципродинила содержится в композиции по настоящему изобретению, резистентность может быть подавлена, а вещества, собственно когда они содержатся в композиции в низких концентрациях, могут проявлять свое полное действие против микопатогенов.

Под термином "композиция" понимают готовый раствор или суспензию, которые содержат все ингредиенты, а именно по меньшей мере один химический фунгицид и оба штамма Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941, и наносятся непосредственно на растения. Как правило, под композицией понимают водные растворы или суспензии, называемые также баковыми смесями, которые обычно готовят смешиванием перед нанесением на растения. При этом ингредиенты или компоненты в жидкой или твердой концентрированной форме смешивают в резервуаре с водой и растворяют или суспендируют. При этом не имеет значения то обстоятельство, что в резервуар вносят ингредиенты или компоненты по отдельности или в виде концентрированного премикса, состоящего по меньшей мере из одного химического фунгицида и обоих штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941, затем к ним прибавляют воду и растворяют или суспендируют. Последовательность внесения в воду и внесения ингредиентов или компонентов или премикса в резервуар при этом не имеет значения. При этом ингредиенты или компоненты или концентрированные премиксы разбавляли в резервуаре, например, с разведением 1:10, 1:100, 1:1000 или 1:10000 для достижения в композиции эффективной концентрации. Неожиданно, благодаря предложенной композиции, в настоящее время удалось получить смесь из флудиоксонила или из флудиоксонила и ципродинила с обоими штаммами Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941, хотя известные продукты, содержащие эти штаммы и эти химические фунгициды, были описаны в литературе как несовместимые (см. перечень совместимости в приложении к сайту [http://www.biofa-profi.de/de/b/blossomprotecttm.html?file=files/content/Prdukte/BlossomProtectTM/blossomprotect produkthandbuch 2012.pd]).

Под термином "химический фунгицид" понимают химическое вещество, обладающее фунгицидным действием, в частности ципродинил (№ CAS 121552-61-2), флудиоксонил (№ CAS 131341-86-1), причем композиция в обязательном порядке содержит по меньшей мере флудиоксонил в качестве по меньшей мере одного химического фунгицида.

Под термином "микопатоген" в данном случае понимают микроорганизм, который вызывает болезнь в организме своего "хозяина". При этом микопатогены преимущественно представляют собой микроорганизмы Neofabraea spp., в частности Pezicula malicorticis (DSMZ 62715) и Botrytis spp., в частности Botrytis cinerea, которые вызывают болезни фруктовых, виноградных и овощных культур, в частности яблонь, винограда, земляники и тыквенных культур, таких как цукини и пищевые тыквенные культуры.

Особенно хорошее синергическое действие достигается благодаря тому, что композиция содержит по меньшей мере один химический фунгицид, а также смесь, содержащую по меньшей мере штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 в синергически действующих количествах. Неожиданно оказалось, что применение или использование химического фунгицида, содержащего по меньшей мере флудиоксонил и смесь, содержащую по меньшей мере два отличающихся друг от друга штамма Aureobasidium pullulans, а именно DSM 14940 и DSM 14941, показывает отчетливо лучшее, в частности синергическое, действие в противоположность применению только одного из двух штаммов Aureobasidium pullulans и химического фунгицида. При этом соотношение количеств клеток двух штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 по отношению друг к другу выбирают в интервале от 2:1 до 1:2 и предпочтительно 1:1, так что соответствующая смесь также может быть получена просто.

Особо надежное, в частности синергическое, действие композиции достигается тогда, когда штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 соответственно содержатся в композиции с концентрацией в интервале от 1⋅10⁵ до 1⋅10⁸ клеток/мл. За счет того‚ что штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 соответственно содержатся в композиции с концентрацией в интервале от 1⋅10⁵ до 1⋅10⁸ клеток/мл, преимущественно от 1⋅10⁶ до 2⋅10⁷ клеток/мл, предпочтительно от 1,67⋅10⁶ до 3,33⋅10⁶ клеток/мл и более предпочтительно от 2,5⋅10⁶ клеток/мл, при применении этой композиции удается безопасно и надежно подавлять гниль, вызываемую различными микопатогенами, выбранными из группы Neofabraea spp., в частности Pezicula malicorticis (DSMZ 62715) и Botrytis spp., в частности Botrytis cinerea, Monilinia spp., Penicillium spp., Coletotrichum spp. и т.п., в частности задерживать увеличение пятен гнили, которой способствует внешнее повреждение плодов.

При этом согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения композицию составляют так, что при синергически действующих количествах ципродинил содержится в композиции с концентрацией в интервале от 0,00375 до 5 г/л, преимущественно от 0,02 до 1,0 г/л и предпочтительно от 0,1875 до 0,375 г/л, а флудиоксонил содержится в композиции с концентрацией в интервале от 0,0025 г/л до 5 г/л, преимущественно от 0,01 г/л до 1,0 г/л и предпочтительно от 0,125 г/л до 0,25 г/л. Применяемое количество химических фунгицидов зависит прежде всего от того, обладает ли уже микопатоген резистентностью и уменьшенной восприимчивостью или чувствительностью по меньшей мере к одному химическому фунгициду. Когда химические фунгициды ципродинил или флудиоксонил содержатся в композиции в указанных количествах, они могут, несмотря на свое низкое содержание, полностью проявлять действие против микопатогенов, и микопатогены по отношению к этим известным химическим фунгицидам в комбинации со штаммами Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 неожиданно показывают пониженную резистентность и чувствительность или не показывают совсем. Кроме того, композиция по настоящему изобретению, содержащая смесь штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941, показала синергическое действие, так что была выявлена достаточность применяемого количества, которое заметно меньше суммы применяемых количеств соответствующих ингредиентов или компонентов, которые потребовались бы для достижения такого же действия.

Под синергическим действием в данном случае понимают сверхпропорциональное повышение фунгицидного действия комбинации по меньшей мере одного химического фунгицида со смесью обоих штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 по сравнению: a) с индивидуальным применением по меньшей мере одного химического фунгицида или b) с индивидуальным применением смеси обоих штаммов A. pullulans DSM 14940 и DSM 14941, или c) с применением по меньшей мере одного химического фунгицида совместно только с одним из двух штаммов A. pullulans DSM 14940 или DSM 14941. Применение штаммов A. pullulans DSM 14940 и DSM 14941 по отдельности в комбинации с химическими фунгицидами и применение смесей традиционных штаммов A. pullulans (AP 241 и AP 298) друг с другом или с одним из двух штаммов A. pullulans DSM 14940 и DSM 14941 в комбинации с химическими фунгицидами неожиданно не показало синергического действия. Математический расчет синергического действия осуществляли согласно "Colby et al., Weeds 15, pages 20-22, 1967", причем коэффициент синергизма, превышающий 1, рассматривался в качестве подтверждения наличия синергического действия.

Лучшего действия удалось достигнуть благодаря тому, что композиция по настоящему изобретению по существу отличается тем, что ципродинил и флудиоксонил содержатся в композиции с массовым соотношением в интервале от 2:1 до 1:2, преимущественно от 2:1 до 1:1 и предпочтительно 1,5:1. За счет того‚ что в композиции наряду с двумя биологическими фунгицидами (= штаммы A. pullulans DSM 14940 и DSM 14941) применяются также два химических фунгицида, достигается не только действие широкого спектра против микопатогенов, но и неожиданно оказалось, что применяемое количество ингредиентов могло быть заметно снижено, так что было подтверждено синергическое действие любого компонента.

Изобретение относится также к применению композиции по настоящему изобретению, применяемой для профилактики и/или ограничения распространения заболеваний растений, вызываемых микопатогенами.

Благодаря применению такого рода удается ограничить или полностью остановить возникновение и/или распространение заболеваний растений на пораженных плодах, вследствие чего может быть обеспечено более длительное время хранения урожая и, в частности, может быть подавлено распространение микопатогенов.

Более предпочтительно композицию применяют при заболеваниях растений, вызываемых микопатогенами, выбранными из группы Neofabraea spp., в частности Neofabraea malicorticis и Pezicula malicorticis, Botrytis spp., в частности Botrytis cinerea, Monilinia spp., Penicillium spp., Coletotrichum spp. В случае этих микопатогенов, в частности в случае N. malicorticis и B. cinerea, могут достигаться лучшие результаты и, в частности, может почти полностью подавляться распространение заболевания растений на пораженных растениях, а также осуществляться хорошая профилактика против возникновения заболеваний растений.

Наибольшие синергические эффекты достигаются тогда, когда соответственно другому варианту осуществления настоящего изобретения композицию составляют так, что штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 соответственно содержатся в композиции с соотношением количеств клеток в интервале от 1⋅10⁶ до 2⋅10⁷ клеток/мл, предпочтительно от 1,67⋅10⁶ до 3,33⋅10⁶ клеток/мл и более предпочтительно 2,5⋅10⁶ клеток/мл, а химические фунгициды флудиоксонил и ципродинил содержатся в композиции с концентрацией преимущественно в интервале от 0,0025 до 1,0 г/л и предпочтительно от 0,125 до 0,25 г/л в случае флудиоксонила и в интервале от 0,00375 до 1,0 г/л и предпочтительно от 0,1875 до 0,375 г/л в случае ципродинила. В случае композиции такого рода могут быть достигнуты значения коэффициентов синергизма до 1,5.

Особенно предпочтительное применение по настоящему изобретению отличается тем, что микопатогены, в частности Botrytis cinerea, а также Neofabraea malicorticis (Pezicula malicorticis), обладают резистентностью и/или пониженной восприимчивостью или чувствительностью по меньшей мере к одному химическому фунгициду, а именно к флудиоксонилу. Когда микопатогены обладают резистентностью или пониженной восприимчивостью по меньшей мере к одному химическому фунгициду, то может применяться композиция по настоящему изобретению, так как микопатогены являются чувствительными к применяемой композиции и патогены успешно обезвреживаются. При этом, в частности, неожиданно удалось использовать также один химический фунгицид, к которому четко выработалась резистентность. Это основано на том, что патогены для поддержания резистентности должны использовать энергию, которую они благодаря применению штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 и их антагонистическому действию в качестве пищевых конкурентов не могут получить, и таким образом по меньшей мере один химический фунгицид может вновь неограниченно использоваться.

При этом предпочтительно по меньшей мере один химический фунгицид, а также по меньшей мере одну смесь, содержащую штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 применяют в синергически действующих количествах. Благодаря применению такого рода количество применяемых веществ с фунгицидным действием, как биологических, так и химических, может быть заметно уменьшено по сравнению с ингредиентами при этом без уменьшения фунгицидного действия. Таким образом, с одной стороны, удается заметно уменьшить загрязнение окружающей среды неприемлемыми химическими фунгицидами, такими как флудиоксонил, и, кроме того, обеспечить безопасную и надежную защиту плодов, в частности защиту от микопатогенов, таких как N. malicorticis, B. cinerea, Monilinia spp., Penicillium spp., Coletotrichum spp.

При этом по меньшей мере один химический фунгицид выбирают из флудиоксонила и по меньшей мере одного второго химического фунгицида, выбранного из группы, в которую входят ципродинил, фенгексамид, фенпиразамин и пириметанил, или из смеси ципродинила и флудиоксонила с массовым соотношением в интервале от 2:1 до 1:2, преимущественно от 2:1 до 1:1 и предпочтительно 1,5:1. За счет того‚ что химический фунгицид применяют в виде смеси из ципродинила и флудиоксонила с массовым соотношением в интервале от 2:1 до 1:2 и предпочтительно 1,5:1, может быть обеспечена особенно широкая защита от большинства микопатогенов.

При этом применяемое количество химических фунгицидов может быть еще больше уменьшено, если штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 применяются с соотношением количеств клеток в интервале от 2:1 до 1:2 и предпочтительно 1:1. Соотношение количеств клеток относится, в частности, к числу применяемых клеток.

В последнем аспекте изобретение относится к способу профилактики или ограничения распространения по меньшей мере одного заболевания растений, вызываемого микопатогенами, причем способ по существу отличается тем, что:

a) по меньшей мере один химический фунгицид, выбранный из флудиоксонила или комбинации, содержащей флудиоксонил и ципродинил, и

b) смесь, содержащую по меньшей мере штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941,

наносят совместно по меньшей мере один раз на культивируемое растение, причем компоненты a) и b) наносят на культивируемое растение в синергически действующих количествах, в частности, опрыскиванием, распылением или орошением.

Благодаря способу такого типа удается обезвредить микопатогены, их жизненное пространство или затронутые ими фруктовые, виноградные и овощные культуры, в частности яблони, виноград, землянику и тыквенные культуры, такие как цукини и пищевые тыквенные культуры, нанесением по меньшей мере одного химического фунгицида, выбранного из флудиоксонила или комбинации, содержащей флудиоксонил и ципродинил, и обоих штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941. При осуществлении способа композицию предпочтительно наносят опрыскиванием, распылением или орошением. Благодаря способу такого типа удается, несмотря на использование малых количеств химических и биологических фунгицидов, наносить на обрабатываемые растения, фруктовые или овощные культуры, в частности на яблони, активную композицию, которая безопасно и надежно уничтожает микопатогены, такие как Neofabraea spp., Botrytis spp., Monilinia spp., Penicillium spp., Coletotrichum spp., в частности N. malicorticis (Pezicula malicorticis) и B. cinerea, и ограничивает их распространение. Для проявления синергического действия важно, чтобы компоненты a) и b) находились на культивируемом растении совместно и одновременно. Теоретически можно компоненты a) и b) наносить отдельно друг от друга или также наносить оба штамма Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 компонента b) отдельно друг от друга, пока они находятся на культивируемом растении и действуют в одно и то же время. Компоненты a) и b) или отдельные штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 можно регулировать в отдельных баковых смесях до требуемого количества или концентрации и соответственно количество, требуемое для внесения на гектар (га), наносить на культивируемые растения одновременно или почти последовательно во времени. Ради простоты и прежде всего потому, что в этом случае может быть обеспечено совместное нахождение компонентов композиции, а также исходя из затрат, совместное нанесение компонентов a) и b), т.е. когда компоненты a) и b) содержатся в одной и той же баковой смеси или композиции, является предпочтительным.

При этом способ преимущественно осуществляют так, что компоненты a) и b) в одной композиции вместе смешивают, растворяют или суспендируют и композицию наносят на культивируемое растение. Благодаря осуществлению способа таким образом удается непосредственно получать готовые к применению растворы, суспензии или смеси, которые могут быть нанесены непосредственно на обрабатываемые культивируемые растения.

Благодаря этому особенно хорошие результаты могут быть получены тогда, когда способ осуществляют так, что при применении композицию наносят с дозой в интервале от 1⋅10¹¹ до 1⋅10¹⁴ клеток/га, преимущественно от 1⋅10¹² до 2⋅10¹³ клеток/га, предпочтительно от 1,67⋅10¹² до 3,33⋅10¹² клеток/га и более предпочтительно 2,5⋅10¹² клеток/га штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 по отдельности. Благодаря нанесению такого числа клеток штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 удается обеспечить эффективную профилактику или заметное ограничение распространения заболеваний растений, вызываемых микопатогенами. Равным образом удается обеспечить эффективную профилактику или заметное ограничение распространения заболеваний растений, вызываемых микопатогенами, когда, соответственно другому варианту осуществления настоящего изобретения, способ осуществляют так, что в качестве химического фунгицида применяют флудиоксонил, причем его наносят предпочтительно с дозой в интервале от 2,5 до 5000 г/га, преимущественно от 10 до 1000 г/га и предпочтительно от 125 до 250 г/га, или применяют смесь из флудиоксонила и ципродинила, причем ее наносят предпочтительно с дозой ципродинила в интервале от 3,75 до 5000 г/га, преимущественно от 20 до 1000 г/га и предпочтительно от 187,5 до 375 г/га.

Особенно эффективным является вариант, когда способ осуществляют так, что по меньшей мере одно нанесение по меньшей мере одного химического фунгицида и по меньшей мере обоих штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941, в частности определенной ранее композиции, осуществляют во время фазы цветения культивируемого растения. Благодаря нанесению композиции во время фазы цветения культивируемого растения обеспечивается особенно эффективная профилактика или ограничение распространения заболеваний растений, вызываемых микопатогенами. Для определения фаз цветения культивируемого растения принимаются стадии развития по общепринятой международной кодировке BBCH, причем фазы цветения виноградной лозы в данном случае соответствуют кодам BBCH 53, 55, 57 и также кодам 60-69 (Lorenz et al., Phänologische Entwicklungsstadien der Weinrebe. Vitic. Enol. Sci. 49, 66–70, 1994), а в случае земляники соответствуют кодам BBCH 55–59, 60, 61, 65 и также 67 (Meier et al., Phänologische Entwicklungsstadien des Kernobstes, des Steinobstes, der Johannisbeere und der Erdbeere. Nachrichtenbl. Deut. Pflanzenschutz, 46, 141-153, 1994). Многократное одновременное нанесение компонентов a) и b) во время фазы цветения или во время фазы цветения и следующих стадий развития, а именно во время фазы развития плода, а также созревания плода могут повышать синергическое действие в еще большей степени.

В дальнейшем описании настоящее изобретение более подробно поясняется примерами осуществления.

Пример 1. Штаммы Aureobasidium pullulans и химические фунгициды для борьбы с микофитопатогенами

Действие штаммов Aureobasidium pullulans AP 241 (DSM 32467), AP 268 (DSM 32468), DSM 14940 и DSM 14941 (по отдельности и в комбинации) совместно с химическими фунгицидами ципродинилом и флудиоксонилом (по отдельности и в комбинации) против микофитопатогенов Botrytis и Neofabraea определено в испытании на яблоках. Для обработки брали 12 необработанных яблок одного и того же сорта и одинаковой степени зрелости и размера. Перед испытанием яблоки в течение трех минут стерилизовали по поверхности в 70%-м этаноле и сушили в ламинарном боксе. На каждом яблоке на экваториальном уровне между чашечкой и черенком концом стерильной пипетки через равные промежутки наносили четыре раны диаметром 5 мм. На каждое яблоко непосредственно после нанесения четырех искусственных ран наносили по 10 мкл различных испытуемых растворов (композиций). Затем яблоки оставляют храниться. Вокруг ран образовывались загнившие места, диаметр которых представляет собой меру распространения инфекции патогена. Для оценки из диаметра загнившего места вычитали диаметры проколов размером 0,5 см.

В каждую из 4 ран на каждом яблоке вносили 4 испытуемых раствора:

1) патоген (негативный контроль);

2) патоген и штаммы Aureobasidium pullulans (по отдельности и в комбинации);

3) патоген и химический фунгицид (по отдельности и в комбинации);

4) патоген и штаммы Aureobasidium pullulans (по отдельности и в комбинации) и химический фунгицид (по отдельности и в комбинации).

Исходя из диаметров загнивших мест, измеренных в конце хранения, для испытуемых растворов 2-4 рассчитывали эффективность ингибирования патогена. Эта эффективность соответствует процентному уменьшению диаметра загнившего места по сравнению со значением для соответствующего отрицательного контроля. Если бы, например, диаметр загнившего места в случае испытуемого раствора 1 составил 5 см, а в случае испытуемых растворов 2, 3 или 4 соответственно составил бы 1 см, то эффективность испытуемых растворов 2-4 равнялась бы 80%. Эффективность отрицательного контроля по определению равна нулю.

Исходя из значений эффективности (WG) отдельных компонентов испытуемых растворов 2 и 3, по формуле Колби (S.R. Colby. Calculating synergistic and antagonistic responses of herbicide combinations. Weeds 15, pages 20-22, 1967), приведенной далее, рассчитывают ожидаемое значение (E) эффективности комбинации из ауреобазидиума и химического фунгицида (испытуемый раствор 4):

E=WG X + (WG Y/100)⋅(100 - WG X),

где:

E - ожидаемое значение;

WG X - эффективность отдельного компонента X;

WG X - эффективность отдельного компонента Y.

Если определенная эффективность комбинации штаммов Aureobasidium pullulans и химического фунгицида (испытуемый раствор 4) превышает расчетное ожидаемое значение (E), то говорят о синергическом действии (когда действие отдельных компонентов взаимно сверхпропорционально усиливается). Коэффициент синергизма представляет собой меру синергического действия и рассчитывается как отношение эффективности комбинации веществ или компонентов (испытуемый раствор 4) и расчетного ожидаемого значения (E). Если коэффициент синергизма превышает или равен 1,1, то эффективность комбинации является синергической по сравнению с действием отдельных компонентов. Когда в данном описании употребляются термины "синергизм", "синергически действующий" или "синергическое действие" или тому подобное, то это всегда относится к комбинациям с коэффициентом синергизма, превышающим или равным 1,1 по сравнению с отдельными компонентами комбинации. По схеме испытаний, включавшей растворы 1-4, исследование осуществляли в 12 повторах (на 12 яблоках).

Испытуемые микофитопатогены

Botrytis spp.:

Botrytis cinerea Bc97 (DSM 32469)

Этот штамм обладает резистентностью к химическим фунгицидам стробилурину, боскалиду и ципродинилу, а также пониженную чувствительность к флудиоксонилу.

Botrytis cinerea 12/4 (DSM 32486)

Этот штамм по сравнению с химическими фунгицидами не обладает изученной пониженной чувствительностью или резистентностью.

Neofabraea spp.: Pezicula malicorticis 160622 (DSM 62715)

Растворы патогенов

Для получения растворов патогенов с пластин, покрытых агаровой питательной средой с солодовым экстрактом ME (агар ME: 30 г солодового экстракта, 15 г агара, 5 г пептонного раствора на 1000 мл дистиллированной воды) с выращенным на ней при 20°C патогеном, снимали конидиоспоры с площади размером около 1-2 см на 2 см и суспендировали гомогенизатором в 10 мл воды. Затем подсчетом под микроскопом определяли концентрацию конидиоспор в счетной камере Тома и водой доводили до требуемой концентрации.

Botrytis

Конечная концентрация конидиоспор в испытуемом растворе: 2⋅10⁵ конидиоспор/мл

Концентрация конидиоспор в растворе с 2–кратной концентрацей патогена: 4⋅10⁵ конидиоспор/мл

Neofabraea

Конечная концентрация конидиоспор в испытуемом растворе: 1⋅10⁶ конидиоспор/мл

Концентрация конидиоспор в растворе с 2-кратной концентрацией патогена: 2⋅10⁶ конидиоспор/мл

Штаммы Aureobasidium pullulans

DSM 14940

DSM 14941

AP 241 (DSM 32467), выделенный штамм Aureobasidium pullulans

AP 268 (DSM 32468), выделенный штамм Aureobasidium pullulans

Концентрации Aureobasidium pullulans

Штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940, DSM 14941, AP 241 и AP 268 культивировали при 27°C на пластинах с агаровой питательной средой (агар YM: 3 г дрожжевого экстракта, 3 г солодового экстракта, 5 г пептонного раствора, 10 г глюкозы и 20 г агара на 1000 мл дистиллированной воды) и клетки снимали 0,6%-м раствором NaCl. Затем подсчетом под микроскопом определяли концентрацию дрожжевых клеток в счетной камере Тома и водой доводили до требуемой концентрации. Исследование выживаемости клеток, а также определение числа колониеобразующих единиц показали, что > 99,9% клеток являются жизнеспособными и могут образовывать колонии. Таким образом, характеристики клеток, в частности в виде "клеток/мл", в данном случае синонимичны также характеристике "колониеобразующие единицы" (КОЕ), в частности "КОЕ/мл".

раствор с 2-кратной концентрацией ауреобазидиума: 1⋅10⁷ клеток/мл

раствор с 4-кратной концентрацией ауреобазидиума: 2⋅10⁷ клеток/мл

Конечные концентрации в испытуемом растворе (композиции):

DSM 14940, DSM 14941, AP 241 и AP 268: 5⋅10⁶ клеток/мл;

AP 1: смесь с соотношением 1:1 из DSM 14940 и DSM 14941: 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14940 и 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14941;

AP 2: смесь с соотношением 1:1 из DSM 14940 и AP 241: 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14940 и 2,5⋅10⁶ клеток/мл AP 241;

AP 3: смесь с соотношением 1:1 из DSM 14940 и AP 268: 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14940 и 2,5⋅10⁶ клеток/мл AP 268;

AP 4: смесь с соотношением 1:1 из DSM 14941 и AP 241: 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14941 и 2,5⋅10⁶ клеток/мл AP 241;

AP 5: смесь с соотношением 1:1 из DSM 14941 и AP 268: 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14941 и 2,5⋅10⁶ клеток/мл AP 268;

AP 6: смесь с соотношением 2:1 из DSM 14940 и DSM 14941 (3,33⋅10⁶ клеток/мл DSM 14940 и 1,67⋅10⁶ клеток/мл DSM 14941);

AP 7: смесь с соотношением 1:2 из DSM 14940 и DSM 14941 (1,67⋅10⁶ клеток/мл DSM 14940 и 3,33⋅10⁶ клеток/мл DSM 14941).

Химические фунгициды

Были использованы химические фунгициды с концентрациями, указанными в таблице.

# Концентрация активного вещества химического фунгицида в испытуемом растворе или композиции Раствор с 2-кратной концентрацией химического фунгицида Раствор с 4-кратной концентрацией химического фунгицида A 0,01875% (масс./об.) ципродинила
(= 0,1875 г/л композиции)
0,01250% (масс./об.) флудиоксонила
(= 0,125 г/л композиции) 0,0375% (масс./об.) ципродинила
0,0250% (масс./об.) флудиоксонила 0,075% (масс./об.) ципродинила
0,050% (масс./об.) флудиоксонила B 0,01250% (масс./об.) флудиоксонила
(= 0,125 г/л композиции) 0,0250% (масс./об.) флудиоксонила 0,050% (масс./об.) флудиоксонила C 0,01875% (масс./об.) ципродинила
(= 0,1875 г/л композиции) 0,0375% (масс./об.) ципродинила 0,075% (масс./об.) ципродинила

Испытуемые растворы для ран

Рана/испытуемый раствор Компоненты Состав испытуемого раствора, нанесенного на рану яблока 1 Контрольный патоген 5 мкл раствора с 2-кратной концентрацией патогена
5 мкл воды 2 Патоген+ауреобазидиум 5 мкл раствора с 2-кратной концентрацией патогена
5 мкл раствора с 2-кратной концентрацией ауреобазидиума 3 Патоген+химический фунгицид 5 мкл раствора с 2-кратной концентрацией патогена
5 мкл раствора с 2-кратной концентрацией химического фунгицида 4 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 5 мкл раствора с 2-кратной концентрацией патогена
2,5 мкл раствора с 4-кратной концентрацией ауреобазидиума
2,5 мкл раствора с 4-кратной концентрацией химического фунгицида

Результаты

Botrytis cinerea Bc97

Испытуемая система: яблоки сорта Jonagold Honsel

Температура хранения: 20°C; длительность хранения: 6 дней

Патоген: Botrytis cinerea Bc97

Штаммы Aureobasidium pullulans: DSM 14940, DSM 14941, AP 241, AP 268

Химические фунгициды: флудиоксонил, ципродинил

Штамм ауреобазидиума DSM 14940 DSM 14941 AP 241 AP 268 Химический фунгицид (масс./об.) 0,125 г/л флудиоксонила Средний диаметр загнивших мест, см Контрольный патоген 3,18 3,44 3,03 2,62 Патоген+ауреобазидиум 3,03 2,65 2,80 2,45 Патоген+химический фунгицид 0,68 0,28 0,48 0,53 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 0,78 0,40 0,42 0,45 Эффективность Контрольный патоген 0,0 0,0 0,0 0,0 Патоген+ауреобазидиум 4,7 23,0 7,7 6,4 Патоген+химический фунгицид 78,8 91,8 84,3 79,9 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 75,7 88,4 86,3 82,8 Ожидаемое значение, E Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 79,8 93,7 85,5 81,2 Коэффициент синергизма 1,0 0,9 1,0 1,0 Штамм ауреобазидиума DSM 14940 DSM 14941 AP 241 AP 268 Химический фунгицид (масс./об.) 0,1875 г/л ципродинила Средний диаметр загнивших мест, см Контрольный патоген 3,41 3,56 2,95 3,13 Патоген+ауреобазидиум 3,30 3,45 2,88 2,96 Патоген+химический фунгицид 2,80 3,14 2,21 2,52 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 2,73 3,04 2,18 2,49 Эффективность Контрольный патоген 0,0 0,0 0,0 0,0 Патоген+ауреобазидиум 3,2 3,1 2,4 5,4 Патоген+химический фунгицид 17,9 11,8 25,1 19,5 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 19,9 14,6 26,1 20,4 Ожидаемое значение, E Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 20,5 14,5 26,9 23,9 Коэффициент синергизма 1,0 1,0 1,0 0,9 Штамм ауреобазидиума DSM 14940 DSM 14941 AP 241 AP 268 Химический фунгицид (масс./об.) 0,1875 г/л ципродинила
0,125 г/л флудиоксонила Средний диаметр загнивших мест, см Контрольный патоген 3,65 3,56 2,95 3,13 Патоген+ауреобазидиум 1,45 1,77 1,65 1,57 Патоген+химический фунгицид 1,73 1,93 1,64 1,82 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 1,54 1,38 1,26 1,25 Эффективность Контрольный патоген 0,0 0,0 0,0 0,0 Патоген+ауреобазидиум 60,3 50,3 44,1 49,8 Патоген+химический фунгицид 52,6 45,8 44,4 41,9 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 57,8 61,2 57,3 60,1 Ожидаемое значение, E Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 81,2 73,0 68,9 70,8 Коэффициент синергизма 0,7 0,8 0,8 0,8

Из представленной выше таблицы ясно следует, что применение по отдельности обоих штаммов ауреобазидиума DSM 14940 и DSM 14941 как совместно с химическими фунгицидами флудиоксонилом и ципродинилом, так и совместно со смесью флудиоксонила и ципродинила характеризуется отсутствием синергического эффекта.

Штамм ауреобазидиума AP 1: DSM 14940+DSM 14941 Химический фунгицид (масс./об.) 0,1875 г/л ципродинила
0,125 г/л флудиоксонила 0,125 г/л флудиоксонила 0,1875 г/л ципродинила Средний диаметр загнивших мест, см Контрольный патоген 4,17 4,21 4,17 Патоген+ауреобазидиум 1,42 1,50 2,33 Патоген+химический фунгицид 1,83 1,17 3,63 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 0,33 0,08 1,83 Эффективность Контрольный патоген 0,0 0,0 0,0 Патоген+ауреобазидиум 66,0 64,4 44,0 Патоген+химический фунгицид 56,0 72,3 13,0 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 92,0 98,0 56,0 Ожидаемое значение, E Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 85,0 90,1 51,3 Коэффициент синергизма 1,1 1,1 1,1 Штамм ауреобазидиума AP 6: DSM 14940+DSM 14941 Химический фунгицид (масс./об.) 0,1875 г/л ципродинила
0,125 г/л флудиоксонила 0,125 г/л флудиоксонила 0,1875 г/л ципродинила Средний диаметр загнивших мест, см Контрольный патоген 4,02 4,11 3,89 Патоген+ауреобазидиум 1,64 1,83 2,29 Патоген+химический фунгицид 1,74 1,62 3,51 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 0,41 0,05 1,67 Эффективность Контрольный патоген 0,0 0,0 0,0 Патоген+ауреобазидиум 59,2 55,5 41,1 Патоген+химический фунгицид 56,7 60,6 9,8 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 89,8 98,8 57,1 Ожидаемое значение, E Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 82,3 82,4 46,9 Коэффициент синергизма 1,1 1,2 1,2 Штамм ауреобазидиума AP 7: DSM 14940+DSM 14941 Химический фунгицид (масс./об.) 0,1875 г/л ципродинила
0,125 г/л флудиоксонила 0,125 г/л флудиоксонила 0,1875 г/л ципродинила Средний диаметр загнивших мест, см Контрольный патоген 3,68 3,74 4,00 Патоген+ауреобазидиум 1,78 1,96 2,51 Патоген+химический фунгицид 1,83 2,04 3,38 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 0,32 0,54 1,78 Эффективность Контрольный патоген 0,0 0,0 0,0 Патоген+ауреобазидиум 51,6 47,6 37,3 Патоген+химический фунгицид 50,3 45,5 15,5 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 91,3 85,6 55,5 Ожидаемое значение, E Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 75,9 71,4 47,0 Коэффициент синергизма 1,2 1,2 1,2

Из представленной выше таблицы ясно следует, что применение смеси обоих штаммов ауреобазидиума DSM 14940 и DSM 14941 как совместно с химическими фунгицидами ципродинилом или флудиоксонилом, так и совместно со смесью ципродинила и флудиоксонила обеспечивает заметный синергический эффект. Эффективность композиции из DSM 14940 и DSM 14941 с одним или несколькими химическими фунгицидами (испытуемые группы 4) заметно превышает расчетное ожидаемое значение (E). Коэффициент синергизма превышает или равен 1,1.

В случае группы AP 1, а также в случае группы AP 6 совместно с флудиоксонилом почти не происходило образование гнили (диаметры загнивших мест составили 0,08 см и 0,05 см соответственно), что подтверждает очень хорошее профилактическое действие композиций по настоящему изобретению. В случае остальных испытаний в группах AP 1, AP 6 и AP 7 выявилось заметное уменьшение образования гнили, что указывает на ограничение распространения грибкового заболевания благодаря композициям по настоящему изобретению.

Штамм ауреобазидиума AP 2: DSM 14940+AP 241 AP 3: DSM 14940+AP 268 AP 4: DSM 14941+AP 241 AP 5: DSM 14941+AP 268 Химический фунгицид (масс./об.) 0,125 г/л флудиоксонила Средний диаметр загнивших мест, см Контрольный патоген 3,13 3,18 2,99 2,98 Патоген+ауреобазидиум 2,97 2,83 2,73 2,70 Патоген+химический фунгицид 1,61 1,53 1,53 1,34 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 1,54 1,47 1,62 1,52 Эффективность Контрольный патоген 0,0 0,0 0,0 0,0 Патоген+ауреобазидиум 5,1 11,0 8,9 9,5 Патоген+химический фунгицид 48,5 51,8 48,9 55,1 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 50,7 53,7 45,8 49,1 Ожидаемое значение, E Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 51,1 57,1 53,4 59,3 Коэффициент синергизма 1,0 0,9 0,9 0,8

Синергическое действие смесей AP 1, AP 6 и AP 7 с обоими химическими фунгицидами ципродинилом и флудиоксонилом по отношению к патогену Botrytis cinerea Bc97 было также подтверждено аналогично описанным ранее испытаниям с различными концентрациями химического фунгицида.

Для ципродинила в случае всех концентраций, а именно при значениях 0,02, 0,06, 0,125, 0,375, 0,5 и 1,0 г/л, удалось подтвердить синергическое действие композиции (коэффициент синергизма превышает или равен 1,1), причем в случае концентраций 0,125 и 0,375 г/л был определен наиболее высокий коэффициент синергизма.

Для флудиоксонила в случае всех концентраций, а именно при значениях 0,01, 0,05, 0,125, 0,25, 0,5 и 1,0 г/л, удалось подтвердить синергическое действие композиции (коэффициент синергизма превышает или равен 1,1), причем в случае концентраций 0,125 и 0,25 г/л был определен наиболее высокий коэффициент синергизма.

Botrytis cinerea 12/4

Испытуемая система: яблоки сорта Jonagold Honsel

Температура хранения: 20°C; длительность хранения: 7 дней

Патоген: Botrytis cinerea 12/4 (чувствительность и резистентность к флудиоксонилу и/или ципродинилу отсутствует)

Ауреобазидиум: DSM 14940, DSM 14941 и AP 1

Химические фунгициды: флудиоксонил, ципродинил; была применена только 1/50 часть указанного ранее количества химического фунгицида.

Штамм ауреобазидиума DSM 14940 DSM 14941 AP 1:
DSM 14940+DSM 14941 Химический фунгицид (масс./об.) 0,000375% ципродинила
(= 0,00375 г/л композиции)
0,00025% флудиоксонила
(= 0,0025 г/л композиции) Средний диаметр загнивших мест, см Контрольный патоген 3,60 3,57 3,63 Патоген+ауреобазидиум 1,88 2,22 1,64 Патоген+химический фунгицид 1,45 1,67 1,38 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 1,53 1,58 0,03 Эффективность Контрольный патоген 0,0 0,0 0,0 Патоген+ауреобазидиум 47,8 37,8 54,8 Патоген+химический фунгицид 59,7 53,2 62,0 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 57,5 55,7 99,1 Ожидаемое значение, E Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 79,0 70,9 82,8 Коэффициент синергизма 0,7 0,8 1,2

Из представленной выше таблицы ясно следует, что только применение смеси обоих штаммов ауреобазидиума DSM 14940 и DSM 14941 совместно с химическими фунгицидами ципродинилом и флудиоксонилом (группа AP 1) обеспечивает синергический эффект. Эффективность испытуемой группы 4 (смесь штаммов ауреобазидиум+химический фунгицид) заметно превышает расчетное ожидаемое значение (E). Коэффициент синергизма превышает или равен 1,1. Почти не происходило образования гнили (диаметры загнивших мест 0,03 см), что подтверждает очень хорошее профилактическое действие композиции по настоящему изобретению.

Синергическое действие смесей AP 1, AP 6 и AP 7 с обоими химическими фунгицидами ципродинилом и флудиоксонилом по отношению к патогену Botrytis cinerea 12/4 было также подтверждено аналогично описанным ранее испытаниям с различными концентрациями химического фунгицида.

Для ципродинила в случае всех концентраций, а именно при значениях 0,001, 0,00375, 0,005, 0,01, 0,05, 0,1 и 0,1875 г/л, удалось подтвердить синергическое действие композиции (коэффициент синергизма превышает или равен 1,1).

Для флудиоксонила в случае всех концентраций, а именно при значениях 0,001, 0,0025, 0,005, 0,01, 0,05, 0,1 и 0,125 г/л, удалось подтвердить синергическое действие композиции (коэффициент синергизма превышает или равен 1,1).

Так как применяемые количества химических фунгицидов зависят от собственно патогена, но в особенности от его резистентности и пониженной чувствительности по отношению к отдельным химическим фунгицидам, следует исходить из того, что в случае многих патогенов также достаточно более высокого или более низкого применяемого количества химического фунгицида для того, чтобы со смесью штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 воздействовать с синергическим эффектом.

Neofabraea spp.

Испытуемая система: яблоки сорта Elstar Fuchshof

Температура хранения: 20°C; длительность хранения: 16 дней

Патоген: Pezicula malicorticis 160622 (DSM 62715)

Ауреобазидиум: DSM 14940, DSM 14941 и AP 1 (в отличие от указанного ранее в данном случае общая концентрация применяемых штаммов Aureobasidium pullulans была равна 1⋅10⁷ клеток/мл)

Химические фунгициды: флудиоксонил, ципродинил

Штамм ауреобазидиума AP 1 (DSM 14940+DSM 14941) Химический фунгицид (масс./об.) 0,1875 г/л ципродинила
0,125 г/л флудиоксонила 0,125 г/л флудиоксонила 0,1875 г/л ципродинила Средний диаметр загнивших мест, см Контрольный патоген 1,90 1,84 1,94 Патоген+ауреобазидиум 1,30 1,23 1,44 Патоген+химический фунгицид 0,94 1,91 1,61 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 0,33 1,09 0,83 Эффективность Контрольный патоген 0,0 0,0 0,0 Патоген+ауреобазидиум 31,6 33,2 25,8 Патоген+химический фунгицид 50,5 -3,8 17,0 Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 82,6 40,8 57,2 Ожидаемое значение, E Патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид 66,8 30,6 38,4 Коэффициент синергизма 1,1 1,3 1,5

Из представленной выше таблицы ясно следует, что применение смеси обоих штаммов ауреобазидиума DSM 14940 и DSM 14941 совместно с химическими фунгицидами ципродинилом и флудиоксонилом обеспечивает заметный синергический эффект. Эффективность системы "патоген+ауреобазидиум+химический фунгицид (испытуемая группа 4)" заметно превышает расчетное ожидаемое значение (E). Коэффициент синергизма превышает или равен 1,1.

Далее были также испытаны отдельные штаммы с концентрацией 1⋅10⁷ клеток/мл в испытуемом растворе с химическими фунгицидами ципродинилом (0,01875% (масс./об.) = 0,1875 г ципродинила на 1 л композиции) и флудиоксонилом (0,01250% (масс./об.) = 0,125 г флудиоксонила на 1 л композиции) по отдельности и в комбинации (0,01875% (масс./об.) ципродинила; 0,01250% (масс./об.) флудиоксонила). При этом коэффициент синергизма был меньше или равен 1,0 и, таким образом, применение химических фунгицидов только с одним штаммом Aureobasidium pullulans не обеспечивает синергический эффект.

Синергическое действие смесей AP 1, AP 6 и AP 7 с обоими химическими фунгицидами ципродинилом и флудиоксонилом по отношению к патогену Pezicula malicorticis 160622 было также подтверждено аналогично описанным ранее испытаниям с различными концентрациями химического фунгицида.

Для ципродинила в случае всех концентраций, а именно при значениях 0,02, 0,06, 0,125, 0,375, 0,5 и 1,0 г/л, удалось подтвердить синергическое действие композиции (коэффициент синергизма превышает или равен 1,1), причем в случае концентраций 0,125 и 0,375 г/л был определен наиболее высокий коэффициент синергизма.

Для флудиоксонила в случае всех концентраций, а именно при значениях 0,01, 0,05, 0,125, 0,25, 0,5 и 1,0 г/л, удалось подтвердить синергическое действие композиции (коэффициент синергизма превышает или равен 1,1), причем в случае концентраций 0,125 и 0,25 г/л был определен наиболее высокий коэффициент синергизма.

Пример 2. Полевые испытания

В испытаниях в открытом поле (полевые испытания) при борьбе с Botrytis spp., по существу с Botrytis cinerea, в случае винограда (столовый виноград) и в случае земляники удалось показать, что баковая смесь для опрыскивания (композиция) со штаммами Aureobasidium pullulans DSM 14941 и DSM 14940 совместно с химическими активными веществами ципродинилом и флудиоксонилом позволила с синергическим эффектом повысить степень воздействия на патоген.

Испытуемая система A: столовый виноград (Vitis vinifera)

Место: Италия

Продолжительность: с 11 сентября до 11 ноября 2014 года

Число/вид обработок баковыми смесями для опрыскивания: 5 идентичных обработок с дозой 1000 л/га. Баковые смеси наносили опрыскиванием. Опрыскивание осуществляли соответственно кодировке BBCH фенологических стадий развития виноградной лозы (Lorenz et al., Phänologische Entwicklungsstadien der Weinrebe. Vitic. Enol. Sci. 49, 66-70, 1994) на следующих стадиях развития:

BBCH 53: можно четко видеть "завязи" (соцветия).

Испытуемая система B: земляника (Fragaria ananassa)

Место: Австрия

Продолжительность: с 9 мая до 10 июня 2016 года

Число/вид обработок баковыми смесями: 6 идентичных обработок с дозой 1000 л/га. Баковые смеси наносили опрыскиванием.

Опрыскивание осуществляли соответственно кодировке BBCH фенологических стадий развития земляники (Meier et al., Phänologische Entwicklungsstadien des Kernobstes, des Steinobstes, der Johannisbeere und der Erdbeere. Nachrichtenbl. Deut. Pflanzenschutz., 46, 141-153, 1994) на следующих стадиях развития:

BBCH 55: на основании розетки можно четко видеть первые цветочные почки.

В испытуемых группах смесь для опрыскивания наносили непосредственно на полевые культуры:

группа 1: необработанная контрольная группа;

группа 2: обработка ципродинилом и флудиоксонилом; концентрации в баковой смеси: 0,1875 г/л ципродинила и 0,125 г/л флудиоксонила. Таким образом, на растительные культуры в расчете на гектар (га) наносили 187,5 г ципродинила и 125 г флудиоксонила;

группа 3: обработка штаммом AP 1; концентрации штамма Aureobasidium pullulans в баковой смеси: 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14940 и 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14941. Таким образом, в расчете на гектар (га) наносили 2,5⋅10¹² клеток DSM 14940 и 2,5⋅10¹² клеток DSM 14941;

группа 4: обработка ципродинилом и флудиоксонилом, а также штаммом AP 1; концентрации в баковой смеси (= композиция): 0,1875 г/л ципродинила и 0,125 г/л флудиоксонила, а также 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14940 и 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14941. Таким образом, в расчете на гектар (га) на растительные культуры наносили 187,5 г ципродинила и 125 г флудиоксонила, а также 2,5⋅10¹² клеток DSM 14940 и 2,5⋅10¹² клеток DSM 14941.

Синергия композиции "AP 1+смесь ципродинила и флудиоксонила" Полевая культура Столовый виноград Земляника Доля плодов‚ пораженных патогеном, % Группа 1 27,30 62,30 Группа 2 9,80 27,60 Группа 3 15,10 45,80 Группа 4 2,30 10,10 Эффективность Группа 1 0,0 0,0 Группа 2 64,1 55,7 Группа 3 44,7 26,5 Группа 4 91,6 83,8 Ожидаемое значение, E Группа 4 80,1 67,4 Коэффициент синергизма 1,1 1,2

Расчет эффективности: например, для группы 4:

эффективность = [1 - (2,30/27,30)]⋅100

Из приведенной ранее таблицы четко следует синергически обусловленное ограничение распространения патогена благодаря совместному применению смеси AP 1 с химическими фунгицидами. Коэффициент синергизма превышает или равен 1,1.

Аналогично структуре приведенной ранее таблицы в полевых испытаниях (на столовом винограде и землянике) были испытаны также другие группы:

группа 5: обработка ципродинилом; концентрация ципродинила в баковой смеси: 0,1875 г/л; доза: 1000 л/га;

группа 6: обработка флудиоксонилом; концентрация флудиоксонила в баковой смеси: 0,125 г/л; доза: 1000 л/га;

группа 7: обработка ципродинилом, а также штаммом AP 1; концентрации в баковой смеси: 0,1875 г/л ципродинила, а также 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14940 и 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14941; доза: 1000 л/га;

группа 8: обработка флудиоксонилом, а также штаммом AP 1; концентрации в баковой смеси: 0,125 г/л флудиоксонила, а также 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14940 и 2,5⋅10⁶ клеток/мл DSM 14941; доза: 1000 л/га.

При аналогичной оценке групп 1, 3 и 5-8 также в случае применения смеси AP 1 совместно только с одним из двух химических фунгицидов по сравнению с применением по отдельности (химического фунгицида или смеси AP 1) выявлено синергическое действие, т.е. коэффициент синергизма достигает значений, превышающих или равных 1,1.

Синергическое действие смесей AP 1 с обоими химическими фунгицидами ципродинилом и флудиоксонилом по отношению к патогенам было также подтверждено аналогично описанным ранее полевым испытаниям с различными концентрациями химического фунгицида.

Для ципродинила в случае всех наносимых доз, а именно при значениях 20, 100, 187,5, 375, 500 и 1000 г/га, удалось подтвердить синергическое действие (коэффициент синергизма превышает или равен 1,1), причем в случае доз 187,5 и 375 г/га был определен наиболее высокий коэффициент синергизма.

Для флудиоксонила в случае всех наносимых доз, а именно при значениях 10, 50, 125, 250, 500 и 1000 г/га, удалось подтвердить синергическое действие (коэффициент синергизма превышает или равен 1,1), причем в случае доз 125 и 250 г/га был определен наиболее высокий коэффициент синергизма.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены композиция, её применение для профилактики или ограничения распространения заболеваний растений, вызываемых микопатогенами, и способ профилактики или ограничения распространения заболеваний растений, вызываемых микопатогенами. Композиция содержит в синергически действующих количествах флудиоксонил или смесь флудиоксонил и ципродинил, и смесь по меньшей мере штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и Aureobasidium pullulans DSM 14941 с концентрацией от 1·10⁵ до 1·10⁸ клеток/мл при соотношении количеств клеток от 2:1 до 1:2. Способ включает одновременное нанесение на культивируемое растение в синергически действующих количествах флудиоксонила или смеси флудиоксонила и ципродинила и смеси по меньшей мере штаммов Aureobasidium pullulans DSM 14940 и Aureobasidium pullulans DSM 14941. Изобретения обеспечивают защиту сельскохозяйственной продукции от поражения микопатогенами, в том числе при длительном хранении урожая. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 2 пр.

1. Композиция для профилактики или ограничения распространения заболеваний растений, вызываемых микопатогенами, содержащая по меньшей мере один химический фунгицид, отличающаяся тем, что она дополнительно по меньшей мере к одному химическому фунгициду содержит смесь, содержащую по меньшей мере штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 с соотношением количеств клеток в интервале от 2:1 до 1:2, соответственно, причем по меньшей мере один химический фунгицид, а также смесь штаммов Aureobasidium pullulans содержатся в композиции в синергически действующих количествах, причем штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 содержатся с концентрацией в интервале от 1·10⁵ до 1·10⁸ клеток/мл, и по меньшей мере один химический фунгицид выбран из флудиоксонила или комбинации, содержащей флудиоксонил и ципродинил.

2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что при синергически действующем количестве ципродинил содержится в композиции с концентрацией в интервале от 0,00375 до 5 г/л.

3. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что при синергически действующем количестве флудиоксонил содержится в композиции с концентрацией в интервале от 0,0025 до 5 г/л.

4. Композиция по любому из пп. 1–3, отличающаяся тем, что ципродинил и флудиоксонил содержатся в композиции с массовым соотношением в интервале от 2:1 до 1:2.

5. Композиция по любому из пп. 1–4, отличающаяся тем, что штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 содержатся в композиции с соотношением количеств клеток в интервале от 1·10⁶ до 2·10⁷ клеток/мл, а химические фунгициды флудиоксонил и ципродинил содержатся в композиции с концентрацией в интервале от 0,0025 до 1,0 г/л в случае флудиоксонила и в интервале от 0,00375 до 1,0 г/л в случае ципродинила.

6. Применение композиции по любому из пп. 1–5 для профилактики или для уменьшения распространения заболеваний растений, вызываемых микопатогенами.

7. Применение по п. 6, отличающееся тем, что микопатогены выбраны из Neofabraea spp. и Botrytis spp.

8. Применение по п. 6 или 7, отличающееся тем, что микопатогены обладают резистентностью и/или пониженной чувствительностью по меньшей мере к одному химическому фунгициду.

9. Способ профилактики или уменьшения распространения по меньшей мере одного заболевания растений, вызываемого микопатогенами, отличающийся тем, что:

a) по меньшей мере один химический фунгицид, выбранный из флудиоксонила или комбинации, содержащей флудиоксонил и ципродинил, и

b) смесь, содержащую по меньшей мере штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941,

наносят совместно по меньшей мере один раз на культивируемое растение, причем компоненты a) и b) наносят на культивируемое растение в синергически действующих количествах.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что компоненты a) и b) вместе смешивают, растворяют или суспендируют в одной композиции, и композицию наносят на культивируемое растение.

11. Способ по п. 9 или 10, отличающийся тем, что применяют композицию по любому из пп. 1–7.

12. Способ по любому из пп. 9, 10 или 11, отличающийся тем, что при применении в синергически действующем количестве штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941 наносят с дозой в интервале от 1·10¹¹ до 1·10¹⁴ клеток/га.

13. Способ по любому из пп. 9-12, отличающийся тем, что в качестве по меньшей мере одного химического фунгицида применяют флудиоксонил, причем при синергически действующем количестве его наносят с дозой в интервале от 2,5 до 5000 г/га.

14. Способ по любому из пп. 9-13, отличающийся тем, что в качестве второго химического фунгицида применяют ципродинил, причем при синергически действующем количестве его наносят с дозой в интервале от 3,75 до 5000 г/га.

15. Способ по любому из пп. 9-14, отличающийся тем, что по меньшей мере одно нанесение по меньшей мере одного химического фунгицида и смеси, содержащей по меньшей мере штаммы Aureobasidium pullulans DSM 14940 и DSM 14941, осуществляют во время фазы цветения культивируемого растения.