ЛЕКАРСТВЕННАЯ ФОРМА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ЯЗВЕННОГО КОЛИТА, СОДЕРЖАЩАЯ ПЭГИЛИРОВАННУЮ ЛИПОСОМАЛЬНУЮ ФОРМУ ЭРИТРОПОЭТИНА В ФОРМЕ СУППОЗИТОРИЕВ, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2020 года по МПК A61K9/02 A61K31/00 A61K38/18 A61K47/10 A61P1/04 

Изобретение относится к медицине и фармации, а именно к способу получения лекарственного средства для лечения язвенного колита (ЯК), представляющего ПЭГилированную липосомальную форму эритропоэтина (ЭПО) и содержащего в качестве вспомогательных веществ ПЭГ 4000, ПЭГ 1500, ПЭГ 400, Эмульгатор Т2, Кремофор СО, Колифор для получения лекарственной формы в виде ректальных суппозиториев для местного лечения язв толстого и тонкого кишечника. При осуществлении способа готовят массу, содержащую ПЭГилированную липосомальную форму ЭПО, эквивалентную 2000 ME, равномерно распределенную в смеси ПЭГ 1500, ПЭГ 400, Т2, Кремофор СО, Колифор при определенном соотношении компонентов и дозированную по массе при получении суппозиториев методом выливания. Технический результат - новый способ лечения язвенного колита за счет терапевтического плейотропного эффекта ЭПО.

Обсуждение

Изобретение относится к медицине, в частности к фармации, касается разработки средства с липосомальной лекарственной формой с ПЭГилированным ЭПО, и может быть использовано для местного лечения язв толстого и тонкого кишечника при ЯК.

В настоящее время для лечения ЯК в стадии обострения применяются схемы противовоспалительной и/или иммуносупрессивной терапии, включающие кортикостероидные гормоны, препараты 5-аминосалициловой кислоты (5-АСК), иммуносупрессанты, препараты биологической терапии, рассматриваемые в качестве альтернативной терапии прирезистентных к стандартному лечению и стероидозависимых формах ЯК. Препараты 5-АСК применяются в основном для индукции и поддержания ремиссии легких и среднетяжелых форм ЯК и БК, в то время как глюкокортикостероиды (ГКС) были и остаются основными средствами для лечения пациентов при среднетяжелом и тяжелом течении заболевания или в случае неэффективности 5-АСК. Метод введения, дозы препарата зависят от тяжести течения заболевания и локализации воспалительного процесса. Применяют гидрокортизон, метилпреднизолон или преднизолон.

Известен способ лечения ЯК с помощью стероидных гормонов, оказывающих активное влияние на водно-солевой, белковый, углеводный и жировой обмен. Фармакотерапевтическое действие стероидных препаратов при ЯК основано также на их антиаллергических и противовоспалительных свойствах. Чаще применяют стероидные гормоны для лечения тяжелых и среднетяжелых форм ЯК и назначают дробными приемами до 30 мг в сутки (преднизолон).

Известен способ лечения ЯК противовоспалительными средствами нестероидного ряда - салазосульфаниламидными препаратами (сульфасал азин, салазопиридазин, салазодиметоксин), азопроизводными сульфапиридина и 5-аминосалициловой кислоты (5-ASA). Известный способ лечения ЯК пр именим при легком течении обострения, дистальном расположении процесса, отсутствии вторичной инфекции. В этом случае лечение ограничивают одним из салазосульфаниламидных препаратов, например салазопиридазином,по 0,5 г 6 раз в день в течение 2-х недель, а потом 4 раза в день до стойкого эффекта (Абдулхаков С.Р. Неспецифический язвенный колит: современные подходы к диагностике и лечения/ Абдулхаков С.Р., Абдулхаков Р.А. - cyberleninka.2009). Недостатками известного способа лечения являются неэффективность его применения при средних и тяжелых формах ЯК, а также токсичность салазосульфаниламидных препаратов, обусловленная присутствием в их составе сульфапиридина.

Известен способ лечения ЯК противовоспалительными средствами нестероидного ряда, которые состоят из одного активного вещества - 5-ASA (месалазин). Такие препараты (салофальк, мезакол, салозинал и др.) не содержат сульфапиридина и, следовательно, лишены его побочных свойств. Для лечения среднетяжелых форм ЯК применяют салофальк и его аналоги в виде таблеток по 0,5 г 4 раза в сутки. При дистальных формах (проктит и проктосигмоидит) используют свечи и клизмы (Абдулхаков С.Р. Неспецифический язвенный колит: современные подходы к диагностике и лечения/Абдулхаков С.Р., Абдулхаков P.A.- cyberleninka.2009). Недостатками известного способа лечения являются снижение свертываемости крови и повышение кровоточивости, что при наличии значительной эрозированной поверхности в кишечнике нежелательно, угнетение резистентности к инфекциям, токсическое действие на печень и почки. Однако основным недостатком известного способа лечения является отсутствие влияния применяемых препаратов на энергетический метаболизм пораженных колоноцитов, что замедляет процессы регенерации изъязвленных участков слизистой кишечника.

В роли активных веществ в составе свечей для локальной терапии могут применяться различные соединения: антибиотики, антиоксиданты, иммуномодуляторы, лекарственные средства и витамины. Предметом пристального изучения являются эндогенные регуляторы гомеостаза, в частности ЭПО. Его широкий спектр плейотропных эффектов вызывает большой интерес у многих исследователей в последние годы. ЭПО и его биотехнологические производные оказываются высокопригодными при местном и системном применении для специфичной инициации и регенерации пораженной слизистой оболочки толстого и тонкого кишечника при язвенном колите и могут способствовать ускорению заживления. Через ингибирование GSK-3β ЭПО препятствует гибели клеток и способствует ангиогенезу, что приводит к быстрой регенерации раны. Так же доказано что он препятствует высвобождению провоспалительных цитокинов ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИФН-γ, TNF-α, ингибируя лейкоцитарную и моноцитарно-макрофагальную инфильтрацию в очаге повреждения. Кроме того, привлекают внимание обнаруженные его антиоксидантные свойства, которые при язвенном колите могут способствовать ограничению зоны вторичной альтерации (KimY J, 2010; LawlerPR, 2010; McPhersonRJ, 2010; DangJ, 2010; Осиков M.B. и др., 2012, 2012, 2013, 2015, 2017).

Наиболее близким аналогом представленного изобретения на сегодняшний день являются ректальные суппозитории Салофальк для комплексного лечения неспецифического ЯК и болезни Крона, содержащие действующее вещество Месалазин и основу суппозиторную-твердый жир. Препарат оказывает местное противовоспалительное, антибактериальное и антиоксидантное действие. Основным недостатком свечей Салофальк является ряд побочных эффектов таких как головные боли, головокружения, панкреатит, почечная и печеночная недостаточность, аллергические и фиброзные реакции со стороны легких. Задачей изобретения является расширение арсенала средств для лечения язв тонкого и толстого кишечника в современной гастоэнтерологии при заболеваниях язвенного колита.

Технический результат - получение нового лекарственного средства отечественного производства для лечения язвенного колита, представляющего ПЭГилированную липосомальную форму ЭПО и содержащего в качестве вспомогательных веществ ПЭГ 4000, ПЭГ 1500, ПЭГ 400, Т2, Кремофор СО, Колифор для получения лекарственной формы в виде ректальных суппозиториев для местного лечения язв толстого и тонкого кишечника, отличающегося удобством применения, а также наличием противовоспалительного и иммуномодулирующего действия.

Указанная задача решается тем, что свечи с ЭПО для терапии язв толстого и тонкого кишечника, содержащие в качестве активного вещества ЭПО в форме липосом, а в качестве формообразователя смесь полиэтиленоксидов молекулярной массы 400, 1500 и 4000, Т2, Кремофор СО и Колифор, при следующем соотношении компонентов массы, г, для получения массы:

Липосомальная эмульсия, эквивалентная ЭПО в концентрации 2000ME

ПЭГ 1500 0,5 ПЭГ 400 0,5 Эмульгатор Т2 0,1 Колифор 0,55 Кремофор СО 0,5 Лецитин 0,05 ПЭГ 4000 0,75 ПЭГ 2000 0,25

Все компоненты, входящие в состав средства, разрешены для медицинского применения.

Основа была подобрана экспериментальным путем в процессе изучения высвобождения субстанции из основ с предварительным выявлением совместимости эритропоэтина с предлагаемыми основами. Установлено, что хорошим антиоксидантным и репаративным действием обладают суппозитории на основе из смеси полиэтиленоксидов молекулярной массы 4000, 1500 и 400. Лецитин яичный по ТУ 6-09-0001-87 Д. Относится к сложным эфирам аминоспирта холина и диглицеридфосфорных кислот, за счет чего позволяет получать устойчивые эмульсии в системах масло-вода. Так же является пищевой добавкой (код Е322) и находит широкое применение в пищевой промышленности.

Полиоксиэтиленгликоль(ПЭГ) 4000 ТУ 2483-166-05757587-2000. Используется как вспомогательное вещество при производстве лекарственных средств в фармацевтической промышленности. Чаще всего применяется в качестве смягчителя, загустителя, связующего и облегчающего отлив агента. Не имеет эмульгирующего эффекта.

Полиоксиэтиленгликоль (ПЭГ) 2000. Воскообразное вещество. Растворим во многих органических растворителях: бензоле четыреххлористом углероде, ацетонитриле. Применяется как растворители, стабилизаторы, регуляторы влажностии вязкости, а так же в качестве стабилизаторов эмульсий и эмульгаторов - они помогают соединить вещества, в нормальном состоянии несоединяющиеся. В пищепроме зарегестрирован в качестве пищевой добавки Входит в состав слабительных средств, идет в качестве наполнителя и связующего ингредиента для свечей, таблеток, мазей, пен. Полиоксиэтиленгликоль (ПЭГ) 1500 ТУ 2483 -167-05757587-2000. Представляет собой воскообразные чешуйки или плотную массу белого или слегка серого цвета. Он получил широкое распространение в косметической промышленности и фармации в качестве связующего вещества, а также входит в состав многих смазочно-охлаждающих и гидравлических жидкостей. ПЭГ 1500 применяется в качестве эмульгатора, диспергатора, детергента, антистатика - в текстильной промышленности. Часто используется в производстве пенополиуретанов, порошковой металлургии, в керамике, а также в качестве ингредиента основы при разработке лекарственных средств, таких как гидрофильная основа для зубных паст, кремов, компонент лосьонов, дезодорантов, шампуней.

Полиоксиэтиленгликоль (ПЭГ) 400 ТУ 2483-007-71150986-2006. Используется в фармацевтической промышленности, как вспомогательное вещество при производстве лекарственных средств. Применяется в качестве смягчителя, загустителя, связующего, скользящего и облегчающего отлив агента. Может использоваться в качестве солюбилизатора, не имеет эмульгирующего эффекта.

Эмульгатор Т-2 (Россия) ТУ 18-17-05-76. Используется в качестве стабилизатора, пластификатора и эмульгатора, придает массе достаточную упругость.

Колифор (Германия) 9003-11-6. Lutrol® F 68. Выпускается в гранулированном виде со средним размером частиц около 1000 микрон, является гидрофильным полимером, блок-сополимеромполиоксиэтиленполиоксипропилена. Одним из физических способов повышения растворимости активного ингредиента является увеличение площади его поверхности путем микронизации. Другим способом служит использование солюбилизаторов, таких как поверхностно-активные полимеры - полоксамеры.

Кремофор СО-40 BASF (Германия). Представляет собой неионогенное поверхностно-активное вещество и является сырьем для производства косметической продукции. Также может применяяться как солюбилизатор, который обладает способностью усиливать фармакологическое действие лекарственных средств, что позволяет снижать их дозы, устраняет несовместимость ингредиентов в композициях. Имеет абсолютную стойкость в жесткой воде и обладает солюбилизирующей способностью, а также имеет относительно низкую токсичность.

Придание лекарственному средству формы ректальных суппозиториев обеспечивает стойкость при хранении и удобство применения. Помимо проявления известных свойств, каждый компонент заявляемого состава в совокупности усиливает свое воздействие, что объясняется эффектом их синергизма. В результате проведенных экспериментальных исследований было установлено, что предлагаемые суппозитории обладают целым рядом преимуществ и высокой биодоступностью, являются однородными и имеют удовлетворительный внешний вид. Лечебный эффект действующих веществ проявляется через 6 минут после введения; полное растворение через 12 минут. На сегодняшний день суппозитории являются весьма перспективными для применения в гастроэнтерологии при лечении язв тонкого и толстого кишечника.

Пример 1. Состав на 1 суппозиторий, массой 3 г: ЭПО 2000 ME; ПЭГ 4000 - 0,75 г; ПЭГ 2000 - 0,25 г; ПЭГ 1500 - 0,5 г; ПЭГ 400 - 0,5 г; Эмульгатор Т-2 - 0,1 г; Колифор - 0,75 г; Кремофор СО 40 - 1,25 г; Лецитин - 0,05 г.

Получение липосом. Точную навеску (около 0,05 г) лецитина смешивали с ПЭГ 2000, растворяли в 7 мл хлороформа. Затем полученный раствор липидов переносили в круглодонную колбу вместимостью 150 мл и упаривали органический растворитель на роторном испарителе под вакуумом (0,7 мбар) и температуре не выше 35±20С до образования тонкой липидной пленки, которую затем сушили под вакуумом в течение часа (отсутствие органического растворителя контролировали методом ГЖХ в соответствии с ОФС. 1.1.0008.15 «Остаточные органические растворители»). Далее липидную пленку гидратировали 3 мл 125 мМ раствора сульфата аммония при постоянном перемешивании до полного исчезновения пленки со стенок колбы и образования белой эмульсии (дисперсия больших многослойных липосом). ЭПО растворяли в 5 мл изотонического раствора натрия хлорида и вводили в липидную пленку при постоянном перемешивании со скоростью 120 об/мин в течение 1 часа.

Получение суппозиториев. В химическом стакане расплавляют ПЭГ 4000, эмульгатор Т-2, колифор и кремофор СО на водяной бане пр и темпер атуре не более 70°С. В расплавленную смесь вводят ПЭГ 1500 и 400 и перемешивают. В полуостывшую основу вводят липосомальную эмульсию ЭПО, непрерывно помешивая стеклянной палочкой. Металлические суппозиторные формы протирают марлевым тампоном, смоченным вазелиновым маслом, охлаждают в холодильнике при температуре 3-5°С в течение 5-6 минут и разливают приготовленную суппозиторную массу при температуре 38-40°С. Формы помещают в холодильник на 7-10 минут, после чего застывшие суппозитории вынимают.

Пример 2. Состав на 1 суппозиторий, массой 4 г: ЭПО 2000 ME; ПЭГ 2000-0,40 г; ПЭГ 4000-0,90 г; ПЭГ 1500-0,7; ПЭГ 400-0,7; Эмульгатор Т-2 - 0,1 г; Колифор - 0,90 г; КремофорСО 40 -1,40 г; Лецитин - 0,05 г. Получение липосом. См пример 1.

Получение суппозиториев. В химическом стакане расплавляют ПЭГ 1500, эмульгатор Т-2, лутрол F68 и кремофор СО на водяной бане при температуре не более 70°С. В расплавленную смесь вводят ПЭГ 4000 и 400 и перемешивают. В полуостывшую основу вводят липосомальную эмульсию ЭПО, непрерывно помешивая стеклянной палочкой. Металлические суппозиторные формы протирают марлевым тампоном, смоченным вазелиновым маслом, охлаждают в холодильнике при температуре 3-5°С в течение 5-6 минут и разливают приготовленную суппозиторную массу при температуре 38-40°С. Формы помещаютв холодильник на 7-10 минут, после чего застывшие суппозитории вынимают. Полученные суппозитории правильной формы, твердые и однородные.

Пример 3. Состав на 1 суппозиторий, массой 4 г: ЭПО 2000 ME, ПЭГ 1500 - 0,3 г; ПЭГ 4000 - 0,7 г; Эмульгатор Т-2 - 0,1 г; Колифор - 0,70 г; Лецитин - 0,05; Кремофор СО-40 - 1,25 г.

Получение липосом. См пример 1.

Получение суппозиториев. В химическом стакане расплавляют ПЭГ 1500, ПЭГ 4000, эмульгатор Т-2, лутрол F68, и кремофор СО-40 на водяной бане при температуре не более 70°С. Для удаления воздуха без перемешивания выдерживают 30 минут при температуре 45°С. ЭПО вводят в суппозиторную массу, непрерывно помешивая стеклянной палочкой. Металлические суппозиторные формы протирают марлевым тампоном, смоченным вазелиновым маслом, охлаждают в холодильнике при температуре 3-5°С в течение 5-6 минут и разливают приготовленную суппозиторную массу при температуре 38-40°С на 1-2 сек. Формы помещают в холодильник на 7-10 минут, после чего застывшие суппозитории вынимают. Качество суппозиториев оценивают по внешнему виду, упругости, однородности, растворимости. Полученные суппозитории правильной формы, твердые и однородные.

Пример 4. Состав на 1 суппозиторий, массой 4 г: ЭПО 2000 ME; ПЭГ 4000 - 0,6 г; ПЭГ 1500 - 0,4 г; Эмульгатор Т-2 - 0,1 г; Колифор - 0,75 г; Кремофор СО - 40 - 1,20 г; Лецитин - 0,05 г.

Липосомы и медицинские суппозитории изготавливают аналогичным образом. Полученные суппозитории однородные, правильной формы.

Пример 5. Состав на 1 суппозиторий, массой 4 г: ЭПО 200 ME, ПЭГ 1500 - 0,65 г; ПЭГ4000 - 0,3 г; ЭмульгаторТ - 2 - 0,1 г; Лецитин - 0,05 г, Лутрол F68 - 0,75 г; Колифор-40 - 1,25 г.

Липосомы и медицинские суппозитории изготавливают аналогичным образом. Полученные суппозитории однородные, правильной формы. Оценку высвобождения ЭПО из суппозиториев оценивали в тесте «Растворение» в буферный раствор с рН 6,8. Установлено, что наиболее равномерное высвобождение ЭПО наблюдалось из состава, описанного в примере 1 (Фиг 1).

Эффективность лекарственной формы оценивали в условиях моделирования экспериментального ЯК. Моделирование проводили двухэтапно с использованием 3% раствора оксазолона (SigmaAldrich, USA). Работа выполнена на 49 крысах линии Wistar массой 210-230 г разделенных на 3 группы: I (n=7) - интактные животные; II (n=21) - животные с ЯК; III (n=21) -животные с ЯК в условиях применения ректальных суппозиториев содержащих ПЭГилированную липосомальную форму ЭПО. Ректальные суппозитории по 0,3 г содержащие ПЭГилированную липосомальную форму ЭПО в дозе 200 ME лекарственного средства применяли 2 разав сутки. Disease activity index (DAI) (индекс Беста- 1976 г) оценивали по изменению массы тела, консистенции стула и наличию ректального кровотечения на 3, 5 и 7 сутки.

Статистическую обработку данных проводили с помощью программы «Statistica 10.0 for Windows». Гематологические показатели определяли с помощью гематологического анализатора для ветеринарии «BC-2800Vet» (Mindray, Китай).

Выявлено, что у животных с ЯК, начиная с 3 суток наблюдалось увеличение частоты дефекаций, неоформленная, кашицеобразная консистенция стула, а также появление крови в каловых массах. На 5 и 7 сутки к указанным признакам добавилось снижение массы тела, которое в среднем составило 10%. Все это привело к статистически значимому увеличению индекса disease activity index (DAI) на 3, 5 и 7 сутки эксперимента (р<0,05). К 7 суткам отмечалось увеличение выраженности симптомов (Фиг 2). В крови повышается количество лейкоцитов и лимфоцитов, а объемное содержание гемоглобина снижается (Фиг 3, 4, 5).

В условиях применения ректальных суппозиториев, содержащих ПЭГилированную липосомальную форму ЭПО при экспериментальном ЯК отмечалось снижение частоты дефекаций, восстановление консистенции стула и уменьшение примеси крови в каловых массах, что привело к уменьшению потери массы тела, которая составила 5%. Все это нашло отражение в статистически значимом снижении индекса DAI на 3,5 и 7 сутки эксперимента (р<0,05)(Фиг 2).

В крови отмечалось снижение количества лейкоцитов, лимфоцитов на 3 и 7 сутки и увеличение объемного содержания гемоглобина на все сутки эксперимента (Фиг 3, 4, 5).

Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения лекарственного средства для лечения и профилактики язвенного колита в форме суппозиториев, содержащих ПЭГилированную липосомальную форму эритропоэтина (ЭПО), характеризующемуся тем, что готовят суппозиторную основу путем расплавления Полиоксиэтиленгликоля 4000, эмульгатора Т-2, колифора и кремофора СО 40 при температуре не более 70°С, добавления Полиоксиэтиленгликоля 1500 и Полиоксиэтиленгликоля 400 и перемешивания полученной основы, введения в нее липосомальной эмульсии, содержащей ЭПО и липидную пленку из смеси лецитина с Полиоксиэтиленгликолем 2000, и из суппозиторной массы методом выливания готовят суппозитории, включающие: Эритропоэтин - 2000 ME, Полиоксиэтиленгликоль 4000 - 0,75 г, Полиоксиэтиленгликоль 1500 - 0,5 г, Полиоксиэтиленгликоль 400 - 0,5 г, Полиоксиэтиленгликоль 2000 - 0,25 г, Лецитин - 0,05 г, Эмульгатор Т2 - 0,1 г, Кремофор СО 40 - 1,25 г, Колифор - 0,75 г. Настоящее изобретение обеспечивает получение нового лекарственного средства отечественного производства для лечения язвенного колита, представляющего ПЭГилированную липосомальную форму ЭПО и содержащего в качестве вспомогательных веществ ПЭГ 4000, ПЭГ 1500, ПЭГ 400, Т2, Кремофор СО, Колифор для получения лекарственной формы в виде ректальных суппозиториев для местного лечения язв толстого и тонкого кишечника, отличающегося удобством применения, а также наличием противовоспалительного и иммуномодулирующего действия. 5 пр., 5 ил.

Способ получения лекарственного средства для лечения и профилактики язвенного колита в форме суппозиториев, содержащих ПЭГилированную липосомальную форму эритропоэтина (ЭПО), характеризующийся тем, что готовят суппозиторную основу путем расплавления Полиоксиэтиленгликоля 4000, эмульгатора Т-2, колифора и кремофора СО 40 при температуре не более 70°С, добавления Полиоксиэтиленгликоля 1500 и Полиоксиэтиленгликоля 400 и перемешивания полученной основы, введения в нее липосомальной эмульсии, содержащей ЭПО и липидную пленку из смеси лецитина с Полиоксиэтиленгликолем 2000, и из суппозиторной массы методом выливания готовят суппозитории, включающие:

Эритропоэтин - 2000 ME

Полиоксиэтиленгликоль 4000 - 0,75 г

Полиоксиэтиленгликоль 1500 - 0,5 г

Полиоксиэтиленгликоль 400 - 0,5 г

Полиоксиэтиленгликоль 2000 - 0,25 г

Лецитин - 0,05 г

Эмульгатор Т2 - 0,1 г

Кремофор СО 40 - 1,25 г

Колифор - 0,75 г.